有机化学实验2-柱色谱
请你总结柱色谱的操作步骤及注意事项
请你总结柱色谱的操作步骤及注意事项
柱色谱是常用的分离和分析技术之一，通常有以下操作步骤及注意事项：
操作步骤：
1. 样品制备：将需要分离的混合物溶解或悬浮在合适的溶剂中，经过过滤或离心等处理，得到样品溶液。
2. 填充柱料：将柱料填充到柱中，常用的柱料有硅胶、脱脂棉、高效液相色谱柱等。
3. 平衡柱料：用适当的溶剂通过柱料进行平衡，以保证柱料内部的平衡状态。
4. 装样：将样品溶液使用适当的方法（如注射器）装载到柱中。
5. 洗脱：通过柱料添加适当的洗脱剂，将混合物中的目标成分逐一洗脱出来。
6. 收集洗脱液：将洗脱液逐一收集到相应的集样器中，可以根据需要选择收集不同时间段或体积段的洗脱液。
7. 分析：对收集的洗脱液进行后续的分析，如测量吸光度、进行色谱质谱分析等。
注意事项：
1. 柱料的选择：根据样品特性选择合适的柱料，以保证分离效果。
2. 柱料的平衡：进行柱色谱操作前，要确保柱内的柱料处于平衡状态，以获得稳定的分离结果。
3. 柱色谱条件的控制：调整洗脱剂的流速、浓度等条件，可以影响分离效果和分离时间。
4. 样品的预处理：对样品进行合适的预处理，如过滤、离心、
浓缩等，以避免堵塞柱料。
5. 柱的保养与维护：定期对柱进行保养和维护，如洗涤、再生、更换等，以保证柱的使用寿命和分离效果。
6. 操作的环境控制：在操作过程中，注意保持干净的工作台和无尘环境，以避免杂质的干扰。
有机化学实验(二)_洛阳师范学院中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年
有机化学实验（二）_洛阳师范学院中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年1.柱色谱不需要用哪种仪器答案:分水器2.由正丁醇合成正丁醚的实验是通过什么关键装置来提高产品产率的？答案:分水器3.在正丁醚的精制过程中，先后用水、50%硫酸、水洗涤，最后用氯化钙干燥，各步的目的论述错误的是：答案:最后水洗是为了除去正丁醇4.关于减压蒸馏，下列说法错误的是答案:减压蒸馏完毕，应先通大气，再停止加热，然后关真空泵、冷却水5.用邻苯二甲酸酐和正丁醇反应制备邻苯二甲酸二丁酯的实验中，反应结束后，用5%碳酸钠溶液洗涤的作用是答案:除去反应体系中的酸6.用高锰酸钾氧化环己醇为己二酸时，产生的棕色沉淀是答案:二氧化锰7.安息香缩合反应中NaCN或VB1催化反应的本质是催化剂具有答案:亲核性8.乙酰乙酸乙酯制备实验中，反应启动快慢主要与什么有关答案:乙酸乙酯中乙醇的含量9.促使呋喃甲醛歧化反应发生的条件是答案:浓碱10.使用乙醚萃取分离呋喃甲醇与呋喃甲酸盐时，下列说法错误的是答案:萃取完毕，醚层可用无水氯化钙、硫酸镁、硫酸钠等干燥11.色谱法可用来做以下哪些工作？答案:分离混合物鉴定化合物跟踪反应提纯化合物12.由环己醇制备环己酮的实验中，反应结束后用水蒸气蒸馏提取产物环己酮，这是因为答案:环己酮在100°C左右有一定的蒸气压环己酮不与水反应环己酮几乎不溶于水13.减压蒸馏适用于下列哪些情况？答案:在常压蒸馏时未达沸点即已受热分解、氧化或聚合的物质沸点较高（150 ℃以上）的物质14.在邻苯二甲酸二丁酯的制备实验中用到了过量的正丁醇，其作用是答案:反应原料溶剂带水剂15.使用VB1作催化剂催化安息香缩合反应时，哪些因素影响反应的产率？答案:加料和反应过程的温度VB1的质量反应的pH值苯甲醛的质量16.乙酰乙酸乙酯的制备实验中，要求答案:装置干燥回流时加干燥管试剂无水17.使用金属钠时应当注意答案:要戴手套操作，不可用手接触切钠完毕，用具要放入乙醇中以除去残留的钠切钠的用具无水切下不用的钠放回原瓶中18.用乙酸酐和水杨酸制备阿司匹林的实验中，乙酸酐的作用是答案:酰化试剂溶剂19.适合重结晶用的溶剂应符合以下哪些条件答案:被提纯的有机物应易溶于热溶剂中，而在冷溶剂中几乎不溶沸点适中与被提纯的有机物不起化学反应对杂质的溶解度应很大或很小20.有关色谱法的说法正确的是：答案:色谱法包括薄层色谱、柱色谱和纸色谱薄层色谱可以用来跟踪反应进程薄层色谱适用于分离少量样品21.浓硫酸是正丁醇脱水制备正丁醚的催化剂，所以加入的量越多越好。
大学柱色谱实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解柱色谱分离的基本原理和方法。
2. 掌握柱色谱实验的操作技能，包括样品的制备、色谱柱的填充、洗脱剂的选择和样品的收集。
3. 学习如何分析色谱分离的结果，并能够根据分离效果评估实验条件。
二、实验原理柱色谱是一种利用混合物中各组分在固定相和流动相之间分配系数的不同来实现分离的技术。
实验中，将含有目标组分的混合物通过填充有吸附剂的色谱柱，由于不同组分在固定相和流动相中的分配系数不同，它们在色谱柱中的移动速度也会不同，从而实现分离。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：- 柱色谱柱（玻璃或塑料）- 漏斗- 烧杯- 滴定管- 铁架台- 秒表2. 试剂：- 吸附剂（如硅胶、氧化铝等）- 混合样品（含目标组分）- 洗脱剂（根据目标组分的极性选择）- 标准样品（用于对照和定量分析）四、实验步骤1. 准备色谱柱：将吸附剂倒入漏斗中，用滴定管缓慢倒入色谱柱中，使其填充紧密。
2. 样品制备：准确称取一定量的混合样品，用适量的溶剂溶解。
3. 样品上样：将样品溶液缓慢滴加到色谱柱顶部，注意控制流速。
4. 洗脱：将洗脱剂滴加到色谱柱顶部，控制流速，收集流出液。
5. 收集分离组分：观察色谱柱中的分离情况，记录各组分对应的收集时间。
6. 样品分析：将收集到的各组分进行进一步的分析，如薄层色谱、红外光谱等。
五、实验结果与分析1. 分离效果：观察色谱柱中的分离情况，记录各组分对应的收集时间，分析分离效果。
2. 定量分析：根据收集到的各组分量，计算其含量，并与标准样品进行对照。
3. 优化实验条件：根据分离效果，分析实验条件对分离效果的影响，如吸附剂类型、洗脱剂类型、流速等，并对实验条件进行优化。
六、问题与讨论1. 实验中遇到的问题：- 色谱柱填充不均匀，导致分离效果不佳。
- 洗脱剂选择不当，导致分离效果不佳。
- 流速控制不当，导致分离效果不佳。
2. 解决方法：- 优化色谱柱填充方法，确保填充均匀。
- 根据目标组分的极性选择合适的洗脱剂。
色谱分析—柱色谱(分析化学课件)
柱色谱应用
（五）分子排斥色谱 （size- exclusion chromatography） 原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝
胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通 过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外 ，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。
全部在死体积前出峰； 可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按 质量分离。
柱色谱应用
（三）离子交换色谱（ion-exchange chromatography） 原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应； 固定相：阴离子或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子 交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 阳离子交换：R-SO3H+M+ =R-SO3 M+H + 阴离子交换：R-NR4OH+X-=R-NR4 X+OH应用：离子、可离解的化合物、氨基酸和核酸等。
柱色谱应用
1.吸附剂 吸附剂为多孔性微粒物质。常用的有硅胶、氧化铝、聚酰胺和大孔吸附树脂等。 需满足以下条件： ❖具有较大的吸附表面和吸附中心； ❖与样品、溶剂和洗脱剂均不发生化学反应； ❖不能被溶剂或洗脱剂溶解； ❖粒度均匀，且有一定的粒度。
柱色谱应用
（1）硅胶 适用于酸性或中性物质 （2）氧化铝 碱性氧化铝 pH 9.0～10.0 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4.0～5.0 适于分析酸性、中性物质 （3）聚酰胺 氢键作用，氢键能力↑强，组分越后出柱。 注：吸附剂含水量越大，活性级别越高，吸附活性越低，吸附能力越弱。
柱色谱应用
A
B
C
D
柱色谱应用
化学分析中的柱色谱法基础知识
化学分析中的柱色谱法基础知识柱色谱法是化学分析的基础技术之一，其广泛应用于分离、分析、净化、提纯等领域。
柱色谱法最早应用于有机化学中，主要用于分离各种有机物。
但随着仪器技术的不断升级，柱色谱法已经可以应用于各种领域，包括无机分析、生化分析、环境分析、食品分析等。
柱色谱法的基本原理柱色谱法主要利用物质分子在不同站点处所受的吸附作用差异，来完成分离、分析等任务。
通俗地说，柱色谱法就像是在不同人群中找到不同特征的一样，将不同的物质分开。
整个柱色谱法的过程主要包括三个步骤：样品进样、分离、检测。
其具体过程如下：1、样品进样：将待分离样品注入到柱子中，并通过色谱柱使样品分离。
2、分离：根据不同物质所受吸附作用的差异，在色谱柱中完成不同物质的分离。
3、检测：通过检测器，对分离出来的物质进行鉴定和定量。
柱色谱法的色谱柱柱色谱法的柱子是柱色谱法的核心部件，柱子的质量和种类对整个柱色谱法都至关重要。
目前常用的柱子有液相色谱柱（Liquid Chromatography Column）和气相色谱柱（Gas Chromatography Column）。
在柱子中，分离物质被分子筛分离，根据色谱柱的不同材料、填充物和分子筛分子的大小，可以分为多种柱子，如反相柱、离子柱、手性柱等等。
不同的柱子适用于不同的分离对象和条件，选用合适的柱子能够明显提高柱色谱法的分析效果。
柱色谱法的应用柱色谱法技术的应用领域十分广泛，可用于制药、食品、环境和生物等行业中的质量控制和检验检疫。
以下是柱色谱法的常见应用领域：1、制药工业中，利用反相柱对药物混合物进行消杂，提纯或分离开来。
2、食品工业中，用于检测食品中的添加剂、色素、香料等成分，以及检测食品中的农药残留。
3、环境监测领域，用于污染物检测和土壤分析等。
4、生物科学领域中，利用手性柱分离和分析手性化合物、蛋白质等。
总之，柱色谱法是化学分析领域中最为重要的技术之一，它能够通过选择合适的柱子，分离出不同的化合物和成分，进而实现分析和定量等任务。
柱色谱的原理及应用实验
柱色谱的原理及应用实验1. 柱色谱的概述柱色谱（Chromatography）是一种分离技术，通过样品在固定相和流动相的作用下，使得不同组分在柱上发生吸附和解吸附过程，从而实现分离和测定的方法。
柱色谱是分析化学中常见的实验方法之一，其原理及应用被广泛研究和应用。
2. 柱色谱的原理柱色谱的分离原理基于样品组分在固定相和流动相之间吸附和解吸附的差异。
当样品溶液通过填充在柱子内的固定相时，样品组分会以不同的速率被固定相吸附并解吸附，从而分离出不同的组分。
具体来说，柱色谱可分为液相色谱和气相色谱两种类型：2.1 液相色谱液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是利用液体作为流动相的柱色谱。
液相色谱中的固定相一般是具有大量微孔的固体颗粒，称为填充剂。
样品在流动相的作用下，通过填充剂与流动相之间的相互作用，进行组分分离。
常见的液相色谱包括高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）和毛细管电泳色谱（Capillary Electrophoresis，CE）等。
2.2 气相色谱气相色谱（Gas Chromatography，简称GC）是利用气体作为流动相的柱色谱。
气相色谱通过样品在气相状态下与固定相之间的相互作用，实现组分的分离。
在气相色谱中，固定相一般是高沸点、官能团化或载体型的吸附剂物质，如活性炭、分子筛等。
样品通过进样器进入气相色谱柱，在高温下通过柱子进行分离。
3. 柱色谱的应用实验柱色谱技术在多个领域中都有广泛的应用，可以用于物质的分离、纯化和分析等方面。
3.1 药物分析柱色谱在药物分析中有着重要的应用。
通过柱色谱技术，可以对药物的纯度、含量和成分进行分离和定量分析。
例如，药物研发过程中会使用高效液相色谱（HPLC）技术对新药品的质量进行评估，为药物研发提供支持。
3.2 食品安全检测柱色谱技术在食品安全检测中也起着重要的作用。
柱色谱分离实验
三、实实验验步 内骤:容 柱色谱操作：
•干法：10g 硅胶 +乙醇
•先用乙醇 后用水
•操作
•组分颜色
装柱
加样 洗脱
收集
鉴定
•1mL样品 •加样操作 •0.5mL×2乙醇洗涤
•组分颜色
三、实 验 内 容
装柱 干法装柱 湿法装柱
吸附剂装填紧密，排除 气泡。最终应使吸附剂的上 端平整，无凹凸面，无断层。
1/2） • （3）填吸附剂：称取10g 硅胶于小烧杯中 ,加入 15mL 蒸馏水 ,用玻
璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱, 使其逐渐沉入底 部。用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密，打开活塞，用小锥型 瓶承接, 控制滴速为1 滴／秒,装完后在上面加一层脱脂棉（ ，操作时要注意吸附剂始终不能露出液面）。
实验步骤（续）
二、实 验 原 理
液—固色谱法
固定相、流动相的物理状态
气—固色谱法 气—液色谱法
液—液色谱法
柱色谱法（column chromatography）
色 谱
纸色谱法（paper chromatography）
法
操作形式 薄层色谱法（TLC）
分
气相色谱（GC）
类
高效液相色谱（Hห้องสมุดไป่ตู้LC）
分离原理
吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法 排阻色谱
级的物质量。 几分钟或几十分钟内可以完成一个试
柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝
实验原理
甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂,它们的结构式如下所示:
甲基橙
亚甲基蓝
由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们 的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同,极性小、吸附能
柱色谱实验报告
柱色谱分离实验报告篇二：色谱实验报告色谱实验报告项目一：气相色谱流出曲线的研究一：实验目的1、 2、 3、掌握气相色谱仪的基本结构及工作原理理解色谱流出曲线中各参数的表示方法掌握气相色谱中定性、定量分析方法二、实验原理气相色谱的固定相是涂布在载体表面的固定液，试样气体由载气携带进入色谱柱，与固定液接触时，气相中各组分便溶解在固定液中。
随着载气的不断通入，被溶解的组分又从固定液中挥发出来，挥发出的组分随载气向前移动时又再次被固定液溶解。
由于各组分在固定液中的溶解能力不同，随着载气的流动，各组分在两相间经过反复的溶解-挥发过程，经过一段时间，最终实现彼此分离。
色谱图是指被测组分从进样开始，经色谱柱分离到组分全部流过检测器后，所产生的响应信号随时间分布的图像。
色谱图上有一组色谱峰，每每个峰代表试样中的一个组分。
色谱流出曲线是以组分流出色谱柱的时间或载气流出的体积为横坐标，以检测器对各组分的电信号响应值为纵坐标的一条曲线。
三、仪器与试剂 1、仪器气相色谱仪 2、试剂乙醇、正丁醇四、实验步骤 1、调试气相色谱仪 2、分别进行进样3、进乙醇和正丁醇的混合物样品，分别记录保留时间五、实验记录1、色谱条件:50m 柱经：320μm 固定液：聚乙二醇载气：氮气检测器类型：fid 检测器温度：150℃柱温：95℃气化室温度：165℃气体流量：载气30ml／min 2、色谱图参数六：实验结果分析从实验结果所占百分比可以看出该实验出峰效果较明显，乙醇先出峰，正丁醇后出峰。
在做实验时我们应注意一些问题，比如说乙醇和正丁醇要按一定的比例来混合，柱温要设置合理，最低要高于正丁醇的沸点，也不能过高，否则会使组分不易分开；过低封效果会不明显。
另外进样时要快、准、稳，避免出现拖尾现象。
项目二：白酒中甲醇含量的测定一、实验目的 1、 2、掌握用外标法进行色谱定量分析的方法。
了解氢火焰离子检测器的性能和操作方法。
二、实验原理气相色谱法是一种分离效果好，分离速度快，灵敏度高，操作简单，应用围广的分析方法，它是以气体为流动相，当气体携带着欲分离的混合物流经色谱柱中的固定相时，由于混合物中各组分的性质不同，它们与固定相的作用力大小不同，所以组分在流动相与固定相之间的分配系数不同，经过多次反复分配之后，各组分在固定相中滞留的时间不同，与固定相作用力小的先流出色谱柱，与固定相作用力大的后流出色谱柱，从而实现分离。
仪器分析实验柱色谱
仪器分析实验柱色谱柱色谱（Column Chromatography）是一种常用于分离和纯化物质的分析技术，广泛应用于化学、生物、制药和环境等领域。
它的原理基于不同物质在固定相和移动相之间的不同亲和力，使得混合物中的组分在柱状填充物上有不同的保留时间，从而被分离开来。
柱色谱实验通常包含以下几个步骤：1.准备样品：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，使其能够与移动相相互作用。
此外，还需要根据混合物的性质选择合适的柱填料和分离条件。
2.准备色谱柱：选择合适的柱子和填充物，将填充物充填到柱子中。
填充物的选择应考虑样品的性质、分离效果和分析时间等因素。
3.打磨柱子：打磨柱子用于调整填充物的均匀性和密实度，以确保柱子内部的液相流动均匀。
4.装样：将溶解好的样品注入柱子中，通常使用移液管或注射器进行装样。
样品的量应适当，以避免液相在柱子中过度膨胀或过度压缩。
5.注入移动相：通过柱子中的顶部或侧面注入适量的移动相，使其通过填充物。
6.收集分离组分：根据不同组分的保留时间，在移动相逐渐通过填充物的过程中，分离出不同的组分。
通常使用收集管或直接收集移动相中的色带来收集每个组分。
7.分析分离组分：对收集的分离组分进行性质分析，常用的方法有紫外-可见吸收光谱、质谱和红外光谱等。
8.优化和改进：根据分析结果，根据需要对实验条件进行优化和改进，以获得更好的分离结果。
柱色谱实验的优点包括：简单易操作、分离效果好、适用范围广等。
同时，柱色谱也存在一些局限性，例如对样品量要求较高、分离时间较长、柱填料的选择和调整较为困难等。
总之，柱色谱是一种常用的仪器分析实验技术，通过利用不同物质在固定相和移动相之间的亲和力差异，实现对混合物中组分的分离和纯化。
在一些特定条件下，柱色谱还能实现对不同组分的定量分析和结构表征。
柱色谱实验报告范文
柱色谱实验报告范文一、实验目的通过柱色谱法对混合溶液中的成分进行分离和检测。
二、实验原理柱色谱是一种基于溶质在固定相和流动相之间分配行为的物理分离方法。
实验中利用柱内填充有固定相的柱子，将要分离的混合溶液通过柱子，不同的成分会以不同的速率通过柱子，从而实现分离。
三、实验仪器与试剂1.柱色谱仪：包括柱子、流动相供给装置和检测系统。
2.流动相：根据分离的需要选择合适的流动相，实验中选择醇和水的混合溶液。
3.样品：混合待分离的溶液。
四、实验步骤1.准备好柱子并填充固定相：将柱子连接到流动相供给装置上，然后将固定相填充到柱子内，使其均匀分布。
2.将流动相泵至柱子中：开启流动相供给装置，将流动相缓慢泵入柱子中，保持流动相的稳定性。
3.样品处理：将待分离的混合溶液处理成适合柱色谱分离的样品，如加入适量的溶剂稀释。
4.样品注入：将处理后的样品注入到柱子中，并记录注入的时间。
5.取样：根据样品的注入时间，定期从柱子中取样，在检测系统中进行检测。
6.分析和记录：根据检测系统的输出结果，分析并记录各个组分的峰面积、保留时间等信息。
五、实验结果与讨论实验中，我们选择了水和醇的混合溶液作为流动相，将待分离的溶液注入到柱子中进行分离。
根据检测系统的输出结果，我们观察到了多个组分的峰，每个峰代表一个组分。
通过测量各个峰的保留时间和峰面积，我们可以确定各个组分的相对含量。
六、实验结论通过柱色谱的实验，我们成功地对混合溶液中的各个组分进行了分离和检测。
根据检测结果，我们得到了各个组分的相对含量。
柱色谱法是一种有效的分离和检测技术，能够广泛应用于物质分析领域。
七、实验总结柱色谱实验是一种重要的分离和检测技术，通过实验我们了解了柱色谱的基本原理和操作方法。
在实验过程中，我们需要注意保持流动相的稳定性，以及选择合适的固定相和流动相进行分离。
同时，还需要合理地处理样品，并根据输出结果进行数据分析。
通过这次实验，我们对柱色谱的原理和应用有了更深入的理解。
基础有机化学实验操作-柱色谱与纸色谱
柱色谱与纸色谱
目的和要求
➢初步掌层析，将混合物的溶液通过装有吸附剂 的层析柱，利用吸附剂对各组分吸附能力的不同，经过 洗脱剂的洗脱，将各组分分开的过程。
柱色谱的操作步骤： 装柱→ → 加样→ →洗脱和分离 → → 收集各组分
纸色谱示意图
(a)、(b)、(c)上行纸层展开；(d)下行纸层展开
本次纸色谱实验
➢样品：L-谷氨酸；L-异亮氨酸及其混合物 ➢展开剂（流动相）：乙醇 : 水 : 冰醋酸=50 : 10 : 1（体积比） ➢支持剂（固定相）：新华一号滤纸 ➢显色剂：2%茚三酮乙醇溶液
思考题
1. 层析柱中若有气泡或装填不均匀，将给分离造成什么样的结果？ 如何避免？
加样
待洗脱剂即将流干时，立即沿柱内壁加入约10滴已配好的混 合物。当此溶液即将全部浸入吸附剂时，再用少量洗脱剂冲洗下沾 在内壁和棉花上的有色物质，如此反复2~3次，至洗净为止。
洗脱与分离，样品收集
➢加样完毕后，即可小心加入洗脱剂（注意一定要待有色物质全部 吸附于吸附剂上之后才可以加入大量的洗脱剂）。 ➢保持流出速度约1滴/s，随着洗脱剂的洗脱，可以明显看到层析柱 上出现两个色带。 ➢待 第 一 各 色 带 快 流 出 时 ， 换 一 干 净 接 受 瓶 接 收 这 一 组 分 的 样 品 （哪一组分？）。
柱色谱分离示意图
本次柱色谱实验
➢样品：偶氮苯和对羟基偶氮苯的混合物 ➢洗脱剂（流动相）：石油醚 : 丙酮=8 : 2（体积比） ➢吸附剂（固定相）：中性层析氧化铝（200~300目）
装柱
➢取 15cm×1.5cm 色 谱 柱 一 根 或 用 25mL 酸 式 滴 定 管 作 色 谱 柱，垂直装置，用25mL锥形瓶作接收瓶。 ➢用玻棒将少许脱脂棉放置于干净的色谱柱底部 ，轻轻塞 紧。关闭活塞，向柱中倒入洗脱剂到约柱高的3/4处。打开活 塞，控制流速约1滴/s。 ➢通过一干燥的玻璃漏斗慢慢加入吸附剂，用木棒轻轻敲打 柱身下部，使其填装紧密，装至3/4时停止加吸附剂。 ➢待洗脱剂将干时，轻轻放少许脱脂棉到吸附剂的上方。
柱色谱法有机实验报告
柱色谱法有机实验报告柱色谱法有机实验报告一、引言柱色谱法是一种常用的分离和纯化有机化合物的方法，它基于物质在固定相和移动相之间的分配行为。
本实验旨在通过柱色谱法，对给定的有机混合物进行分离和纯化，并通过实验结果分析柱色谱法的应用。
二、实验材料与方法1. 实验材料：（1）柱色谱柱：选择合适的柱色谱柱，如硅胶柱、薄层硅胶柱等；（2）样品：有机混合物；（3）移动相：选择合适的溶剂，如乙酸乙酯、正己烷等；（4）固定相：根据实验需要选择合适的固定相。
2. 实验方法：（1）制备柱色谱柱：将固定相均匀填充至柱色谱柱中，保持柱床的均匀性；（2）样品预处理：将有机混合物溶解于适量的溶剂中，并进行必要的前处理，如过滤、浓缩等；（3）柱色谱分离：将样品溶液加入柱色谱柱上方，并使用移动相进行柱色谱分离；（4）收集分离物：根据柱上分离物的不同特性，及时收集目标化合物。
三、实验结果与分析在本实验中，我们选择了硅胶柱作为柱色谱柱，乙酸乙酯作为移动相，进行了柱色谱分离实验。
实验结果显示，有机混合物中的化合物A、B、C成功被分离，并得到了纯化的目标化合物。
通过对实验结果的分析，我们发现柱色谱法的分离效果与固定相的选择密切相关。
固定相的选择应根据目标化合物的性质和有机混合物的组成进行合理的考虑。
在本实验中，我们选择了硅胶作为固定相，由于硅胶对极性化合物有较好的亲和性，因此能够有效地分离出目标化合物。
此外，移动相的选择也对柱色谱分离的效果有着重要的影响。
移动相的极性应与固定相相匹配，以保证化合物在两相之间的分配行为。
在本实验中，我们选择了乙酸乙酯作为移动相，由于乙酸乙酯具有一定的极性，能够与硅胶发生相互作用，从而实现有效的分离。
四、实验总结与展望通过本次柱色谱法有机实验，我们深入了解了柱色谱法的原理和应用。
柱色谱法作为一种常用的分离和纯化方法，具有操作简便、分离效果好等优点，在有机化学领域得到了广泛的应用。
然而，柱色谱法仍然存在一些局限性，如对样品量要求较高、分离速度较慢等。
柱色谱实验报告
柱色谱分离实验报告篇二：色谱实验报告色谱实验报告项目一：气相色谱流出曲线地研究一：实验目地、、、掌握气相色谱仪地基本结构及工作原理理解色谱流出曲线中各参数地表示方法掌握气相色谱中定性、定量分析方法二、实验原理气相色谱地固定相是涂布在载体表面地固定液，试样气体由载气携带进入色谱柱，与固定液接触时，气相中各组分便溶解在固定液中.随着载气地不断通入，被溶解地组分又从固定液中挥发出来，挥发出地组分随载气向前移动时又再次被固定液溶解.由于各组分在固定液中地溶解能力不同，随着载气地流动，各组分在两相间经过反复地溶解挥发过程，经过一段时间，最终实现彼此分离.色谱图是指被测组分从进样开始，经色谱柱分离到组分全部流过检测器后，所产生地响应信号随时间分布地图像.色谱图上有一组色谱峰，每每个峰代表试样中地一个组分.色谱流出曲线是以组分流出色谱柱地时间或载气流出地体积为横坐标，以检测器对各组分地电信号响应值为纵坐标地一条曲线.三、仪器与试剂、仪器气相色谱仪、试剂乙醇、正丁醇四、实验步骤、调试气相色谱仪、分别进行进样、进乙醇和正丁醇地混合物样品，分别记录保留时间五、实验记录、色谱条件柱经：μ 固定液：聚乙二醇载气：氮气检测器类型：检测器温度：℃柱温：℃气化室温度：℃气体流量：载气／、色谱图参数六：实验结果分析从实验结果所占百分比可以看出该实验出峰效果较明显，乙醇先出峰，正丁醇后出峰.在做实验时我们应注意一些问题，比如说乙醇和正丁醇要按一定地比例来混合，柱温要设置合理，最低要高于正丁醇地沸点，也不能过高，否则会使组分不易分开；过低封效果会不明显.另外进样时要快、准、稳，避免出现拖尾现象.项目二：白酒中甲醇含量地测定一、实验目地、、掌握用外标法进行色谱定量分析地方法. 了解氢火焰离子检测器地性能和操作方法.二、实验原理气相色谱法是一种分离效果好，分离速度快，灵敏度高，操作简单，应用范围广地分析方法，它是以气体为流动相，当气体携带着欲分离地混合物流经色谱柱中地固定相时，由于混合物中各组分地性质不同，它们与固定相地作用力大小不同，所以组分在流动相与固定相之间地分配系数不同，经过多次反复分配之后，各组分在固定相中滞留地时间不同，与固定相作用力小地先流出色谱柱，与固定相作用力大地后流出色谱柱，从而实现分离.外标法是在一定地操作条件下，用纯组分或已知浓度地标准溶液配制一系列不同含量地标准溶液，准确进样，根据色谱图中组分地峰面积（或峰高）对组分含量作标准曲线.在相同操作条件下，依据样品说地峰面积（或峰高），从标准曲线上查出其相应含量. 白酒中甲醇含量地测定，以氢火焰离子化检测器利用醇类物质在氢火焰中地化学电离进行检测，根据甲醇地色谱峰高与标准曲线比较进行定量.三、仪器与试剂、仪器气相色谱仪，μ微量注射器支、试剂甲醇（色谱醇），乙醇水溶液（不含甲醇）. 四、实验步骤、色谱柱地准备将内径为、长为地玻璃或不锈钢色谱柱洗净，烘干.采用—（目）作为固定相制备色谱柱.、色谱操作条件：检测器；气化室温度℃；检测室温度℃；采用程序升温，初始柱温为℃，保持时间为，此后每升高℃直至升至℃. 、甲醇标准溶液地配制以乙醇水溶液为溶剂，配制浓度分别为、、、地甲醇高标准溶液. 、甲醇含量地色谱测定用微量注射器分别吸取μ各甲醇标准溶液及试样溶液注入色谱仪，获得色谱图，以保留时间作为对照定性，确定甲醇色谱峰. 五：仪器地关机与清洗六数据处理及计算结果、根据试样溶液色谱图中甲醇地峰面积（或峰高），查出试样溶液中甲醇地含量（μ）.篇三：实验柱色谱实验柱色谱分离实验报告亚甲基蓝与荧光黄地分离一实验目地? 学习并掌握色谱法地原理及其应用.? 学习并掌握柱色谱地实验操作技能.二实验原理色谱法亦称色层法，层析法等，是分离，纯化和鉴定有机化合物地重要方法之一. 色谱法地基本原理是利用混合物各组分在某一物质中地吸附或溶解性能（即分配）地不同，或其它亲和作用性能地差异，混合物地溶液流经该种物质，进行反复地吸附或分配等作用，从而将各组分分开.色谱分离法地分类（按操作条件地不同）色谱分离法地分类（按组分在固定相中地作用原理不同）色谱法地应用色谱法在有机化学中地应用主要包括以下几个方面：（）分离混合物（）精致提纯化合物（）利用比移值（）鉴定化合物()跟踪反应进程柱色谱常用地有吸附色谱和分配色谱两类.前者常用氧化铝或硅胶为吸附剂.后者以硅胶，硅藻土和纤维素为支持剂，以吸收大量地液体为固定相.当加入地洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，因而以不同地速度沿柱向下流动，继续洗脱时，吸附能力弱地组分随溶剂首先流出.在连续洗脱过程中，不同组分或不同色带就能分别收集，从而达到分离纯化地目地.1.吸附剂常用地吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭或纤维素粉. 选择吸附剂地首要条件：不与被分离物或展开剂发生化学反应.吸附能力与以下几点有关：（）吸附剂颗粒大小（）吸附剂含水量柱色谱2.溶剂通常根据被分离物中各组分地极性、溶解度和吸附活性等来考虑.先将带分离地样品溶于尽量少地非极性溶剂中，从柱顶流入柱中，依次增大溶剂地极性，将不同化合物依次洗脱.常用洗脱剂地极性：石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水＜乙酸三实验步骤及注意事项（）取一支色谱柱，在柱子地收缩部塞一小团脱脂棉花，注意松紧要适度.然后在棉花上铺一层粗硅胶或石英砂.（）将色谱柱垂直固定在铁架台上，往柱内加适量乙醇溶液，打开活塞，赶走气泡.（）再向柱中倒入适量乙醇溶液，打开活塞，控制滴速为滴／秒，用小锥型瓶承接，同时通过漏斗慢慢装入，使其逐渐沉入底部.【在装吸附剂地过程中，应用质软地物体如试管夹、吸耳球等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排除气泡.最终应使吸附剂地上端平整，无凹凸面.】（）加完吸附剂后，在吸附剂上再盖一张直径大小合适地小滤纸.（）当溶剂地液面刚好流至滤纸面时关闭二通活塞，立即用移液管加入亚甲基蓝和荧光黄地乙醇混合液，尽量免待分离混合液粘附在柱地内壁上.（）打开二通活塞，等柱内地溶剂恰好流到滤纸面时，关闭二通活塞，向柱内加入乙醇，打开二通活塞进行洗脱.（）用锥形瓶收集蓝色地亚甲基蓝溶液.【洗脱时切勿使溶剂流干！】（）当蓝色溶液收集完后，等柱内地乙醇溶液恰好流到滤纸面时，关闭二通活塞，加入适量氨水作为洗脱剂.打开二通活塞收集黄绿色地荧光黄溶液，直到其完全被洗出.（）用量筒分别量取所分离出来地亚甲基蓝和荧光黄溶液地体积后，倒入指定地回收瓶中.（）分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后倒置，用吸耳球从活塞口向管内挤压空气，将吸附剂从柱顶挤压出.使用过地吸附剂倒入垃圾桶里，切勿倒入水槽，以免堵塞水槽.四操作注意事项特别注意：有机溶剂对身体特有害别是心肺；肝脏等所有过柱操作都要在通风橱里进行！！！柱色谱是以硅胶或氧化铝作固定相地吸附柱.下面我就几年来过柱地体会写些心得，希望对大家能有所帮助.、柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂地流动速度，减少产品收集地时间，但是会减低柱子地塔板数.所以其他条件相同地时候，常压柱是效率最高地，但是时间也最长，比如天然化合物地分离，一个柱子几个月也是有地.减压柱能够减少硅胶地使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量地空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解地东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大地噪音，而且时间长）.以前曾经大量地过减压柱，对它有比较深厚地感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压地念头了.加压柱是一种比较好地方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走地快些.压力地提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气地就行）.特别是在容易分解地样品地分离中适用.压力不可过大，不然溶剂走地太快就会减低分离效果.个人觉得加压柱在普通地有机化合物地分离中是比较适用地.、关于柱子地尺寸，应该是粗长地最好柱子长了，相应地塔板数就高.柱子粗了，上样后样品地原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对地减小了分离地难度.试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离地难度可想而知，恐怕要用很低极性地溶剂慢慢冲了.而如果样品层只有厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了.当然采用粗大地柱子要牺牲比较多地硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保地说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）.现在见到地柱子径高比一般在：～，书中写硅胶量是样品量地～倍，具体地选择要具体分析.如果所需组分和杂质分地比较开（是指在所需组分在～，杂质相差以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如毫克地样品，用×地柱子）；如果相差不到，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子地直径，比如用地，也可以减小淋洗剂地极性等等.、关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解地产品可以湿柱，也可以干柱.不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶剂和硅胶饱和时放出地热量有可能是产品分解，毕竟要分离地是敏感地东东，小心不为过.这个我分离地次数很少，一般都是通过紫外灯查看地.、关于湿法、干法上样湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了.有地上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量地样品才会出现，是因为硅胶对样品地吸附饱和这就应该先重结晶，得到大部分地产品后再柱分，如果不能重结晶那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解地.有些样品溶解性差，能溶解地溶剂又不能上柱（比如等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长地脱尾），这时就必须用干法上柱了.样品和硅胶地量有一种说法是：，我觉得是越少越好，但是要保证在旋干后，不能看到明显地固体颗粒（那说明有地样品没有吸附在硅胶上）.溶剂地选择.当然是最便宜，最安全，最环保地了.所以大多选用石油醚，乙酸乙酯.文献中有写用正己烷地，太贵了.二氯甲烷也有用地，但是要知道，它和硅胶地吸附是一个放热过程，所以夏天地时候经常会在柱子里产生气泡，天气冷地时候会好一些.甲醇，据说能溶解部分地硅胶，所以产品如果想过元素分析地话要留神，应该经过后继处理，比如说重结晶等.其他地溶剂用地相对较少，要依个人地不同需要选择了.由于某些原因，用到地淋洗剂多是大包装地（便宜嘛），我们这里是用地塑料桶装地.另外溶剂在过柱子后最好也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，当然比较忙地时候我是不回收地，太费事了.这里要注意地是，一般在过柱同时进行地是减压旋蒸，石油醚和乙酸乙酯地比例由于挥发度地不同会导致极性地变化，一般会使得极性变大，在梯度淋洗时比较合适，正好极性越来越大了.在过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压，因为在减压旋蒸时会有部分低沸点地杂质一起出来，常压时就会减少这种现象，如果杂质和你下面要过地样品有反应那就惨了.、关于操作问题装柱.柱子下面地活塞可以采用四氟节门地.干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行.装完地柱子应该要适度地紧密（太密了淋洗剂走地太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）.书中写地都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大地影响，一加压气泡就全下来了.当然如果你装地柱子总是有气泡就说明需要多练习了.但是柱子更忌讳地是开裂，甭管竖地还是横地，都会影响分离效果，甚至作废！用少量地溶剂溶样品加样，加完后将下面地活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量地低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色地了.加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品地溶剂和样品层有一段距离（～就够了），再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行.淋洗剂地选择.感觉上要使所需点在在左右地比较好.不要认为在板上爬高了分地比较开，过柱子就用那种极性，如果在，即使相差也不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板地状态，可以通过公式地比较：一次地分离度，肯定不如（）地三次方或四次方大.另外，一般你地物质酸性地话淋洗剂里面要加入几滴乙酸，碱性地话通常使用氨水或是三乙胺等弱碱.样品地收集.用硅胶作固定相过柱子地原理是一个吸附与解吸地平衡.所以如果样品与硅胶地吸附比较强地话，就不容易流出.这样就会发生，后面地点先出，而前面地点后出.这时可以采用氧化铝作固定相.最后地处理.柱分后地产品，由于使用了大量地溶剂，其中地杂质也会累积到产品中，所以如果想送分析，最好用少量地溶剂洗涤一下，因为大部分地杂质是溶在溶剂里地，一洗基本就没了，必要时进行重结晶.另外，再过柱地时候，有时会出现气泡，一是和使用地溶剂有关，如果是易挥发地溶剂，如乙醚、二氯甲烷等，在室温稍高地情况下，很容易出现这种现象，因此，在室温高地时候，可以选择沸点较高，挥发相对小地溶剂.还有，使用混合溶剂时，使用地两种溶剂地沸点应该相差不大，如：乙酸乙酯和石油醚(),而乙醚却要选择－地石油醚.二是：不论是用带砂板地还是塞棉花地，在装柱之前，都要将空气用加压地方法将空气排干，这样就可避免柱中有空气！最后过柱子需要耐心，不要着急.篇四：柱色谱分离实验报告柱色谱分离实验报告篇五：柱色谱和薄层色谱预习报告预习报告一、实验名称:薄层色谱和柱色谱二、实验目地：、学习薄层色谱和柱色谱技术地原理和应用、掌握薄层色谱和柱色谱分离技术和操作要点.、掌握如何正确地配置展开剂三、实验原理：色谱法地基本原理，是利用混合物各组分在固定相和流动相中分配平衡常数地差异.简单地说就是，当流动相流经固定相时，由于固定相对各组分地吸附或溶解性能地不同，使吸附力较弱或溶解度较小地组分在固定相中移动地速度较快，在多次反复平衡过程中导致各组分在固定相中形成了分离地“色带”，从而得到分离.四、主要试剂规格及用量偶氮苯地甲苯溶液，苏丹ⅲ地甲苯溶液，地羧甲基纤维素钠（）水溶液，硅胶，立即比为地甲苯乙酸乙酯.五、实验装置图（见实验记录本）六、实验步骤（一）薄层色谱实验步骤：、薄层板地制备（此实验中不考虑，有直接地可用）、取两块薄层板，分别在距一端处用铅笔轻轻地画一条线，作为起始线.用分别两根毛细管，分别取偶氮苯、苏丹甲苯溶液和其混合液放在起始线上，取两个样点，且两样点相距到厘米，且样点地直径不超过毫米.如果样点颜色太浅，可以等其变干后在重复几次.、用上述地甲苯乙酸乙酯作为展开剂，待样点干燥后，小心放入已加入展开剂地广口瓶中，点样一端应进入展开剂，盖好瓶盖，观察实验现象，观察展开剂前沿上升至离板地上端处取出，尽快用铅笔在展开剂上升地前沿处划一记号，比较两者地值地大小.（二）柱色谱实验步骤、在色谱柱上端放一个干燥地漏斗，将吸附剂倒入其中，并轻轻地敲打色柱柱身使其填充均匀，然后加入洗脱剂湿润.、当溶剂下降到吸附剂表面时立即开始使用色谱柱，用滴管把样品溶液转移到上色谱柱中，并用少量溶剂分几次洗涤柱壁上所沾试液，直至无色.样品加完后，打开下旋塞，使样品进入石英砂层后，再加入洗脱剂进行洗脱.、在分有色物质是，直接观察到分离后地“色带”，然后用洗脱剂将分离后地“色带”依次自柱中洗脱出来，再用适宜地溶剂将溶质萃取出来.七、注意事项（）薄层色谱、吸附剂必须均匀地填在柱内，没有气泡、没有裂缝，否则将影响洗脱和分离.、加入沙子地目地是使加料时不致把吸附剂冲起，影响分高效果.若无沙子，也可用滤纸覆盖在吸附剂表面.、为了保持柱子地均一性，使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必要地.否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干裂，影响渗滤和显色地效果.（）柱色谱、制板时，硅胶用水调成刚好能流动地糊状物为佳，勿太浓或太稀，并即刻铺在层析板上.做好地层析板应均匀一致，否则会影响分离效果.、待溶剂前沿离层析板顶端仅时方能取出，否则色点分离不完全.但溶剂不能冲顶，否则色点会扩散而影响分离效果.。
(柱色谱法分离荧光黄和亚甲基蓝)
XXXX大学
实验报告
柱色谱法分离荧光黄和亚甲基蓝
姓名：
班级：环境XXX
开放性化学实验
课程名称
开放基蓝
1．吸附剂
常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙等。吸附剂应经过纯化和活性处理，颗粒大小均匀。对吸附剂来说粒子越小、表面积越大，吸附能力就越高，但是颗粒小时，溶剂的流速就太慢，因此应根据需要确定。
大多数吸附剂都能强烈地吸水，而且水分易被其它化合物置换，而使吸附剂的活性降低，通常用加热的方法使吸附剂活化。
化合物的吸附性与它们的极性成正比，即极性大吸附力强，后洗脱。
色谱柱的装填分为：干法和湿法两种
柱高和柱直径之比=7.5：1
实验效果如图：
六、注意事项
1.吸附剂的选择和活化
常用洗脱剂的极性：
石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水＜乙酸
2.洗脱剂的选择：对未知样品先用极性小的溶剂洗脱，再用极性大的溶剂洗脱
2．溶剂
色层的展开首先使用极性较小的溶剂，使最容易脱附的组分分离，然后加入不同比例的极性溶剂配成的洗脱剂，将极性较大的化合物洗脱下来。
三、仪器试剂
20cm×1cm层析柱；
吸附剂：中性氧化铝100-200目；石英砂；
荧光黄和亚甲基蓝的混合液；95％乙醇；
四、实验步骤
1.装柱（干法）：在色谱柱内添加厚1cm左右的石英砂，然后添加100-200目的氧化铝约18cm左右，再在上面加一层1cm厚的石英砂。
3.装柱的技术：松紧度
柱色谱实验报告苯甲酸
一、实验目的1. 掌握柱色谱的基本原理和操作方法。
2. 通过柱色谱实验，实现对苯甲酸的分离和鉴定。
3. 学习并应用化学分析方法，提高实验技能。
二、实验原理柱色谱是一种利用不同物质在固定相和流动相中的分配系数差异，实现混合物分离的方法。
本实验中，苯甲酸作为待分离物质，与固定相（如硅胶）和流动相（如正己烷-乙酸乙酯混合溶剂）相互作用。
由于苯甲酸在固定相和流动相中的分配系数不同，从而在柱上实现分离。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：苯甲酸、硅胶、正己烷、乙酸乙酯、蒸馏水、无水硫酸钠、硅胶G 薄层板、展开剂、显色剂等。
2. 实验仪器：柱色谱柱、柱塞、玻璃棒、烧杯、电子天平、移液管、滴定管、烘箱、紫外灯等。
四、实验步骤1. 准备柱色谱柱：将硅胶装入柱色谱柱中，填充高度约为10cm，用玻璃棒轻轻捣实。
2. 湿法装样：取苯甲酸样品，加入适量正己烷-乙酸乙酯混合溶剂，溶解后转移至柱色谱柱中，用玻璃棒轻轻捣实。
3. 上样：将溶解好的苯甲酸样品缓慢倒入柱色谱柱中，待样品流出后，加入适量的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂，使样品完全进入柱色谱柱。
4. 洗脱：用正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，收集流出液。
5. 检测与鉴定：将收集到的流出液滴加到硅胶G薄层板上，用紫外灯照射，观察苯甲酸斑点出现的位置，并与标准样品进行对比鉴定。
五、实验结果与分析1. 柱色谱分离效果：根据实验结果，苯甲酸在柱色谱柱上得到了较好的分离，出现了明显的分离带。
2. 鉴定结果：通过紫外灯照射，观察到苯甲酸斑点在硅胶G薄层板上呈现特征吸收峰，与标准样品一致，证明实验成功分离并鉴定了苯甲酸。
六、实验讨论1. 柱色谱分离效果的影响因素：柱色谱分离效果受多种因素影响，如硅胶的粒度、固定相和流动相的选择、洗脱剂的选择等。
在本实验中，通过优化实验条件，实现了苯甲酸的较好分离。
2. 柱色谱在有机合成中的应用：柱色谱是一种常用的分离纯化方法，在有机合成、药物分析等领域具有广泛的应用。
实验柱色谱 亚甲基蓝与荧光黄的分离
色谱分离法的分类 （按组分在固定相中的作用原理不同）
色谱法的应用
• 色谱法在有机化学中的应用主要包括以下 几个方面： • （1）分离混合物 • （2）精致提纯化合物 • （3）利用比移值（Rf）鉴定化合物 • (4)跟踪反应进程
三实பைடு நூலகம்步骤及注意事项
• （4）加完吸附剂后，在吸附剂上再盖一张直 径大小合适的小滤纸。 • （5）当溶剂的液面刚好流至滤纸面时关闭二 通活塞，立即用移液管加入1mL亚甲基蓝和荧 光黄的乙醇混合液，尽量免待分离混合液粘附 在柱的内壁上。
三实验步骤及注意事项
• （6）打开二通活塞，等柱内的溶剂恰好流 到滤纸面时，关闭二通活塞，向柱内加入 70%乙醇，打开二通活塞进行洗脱。 • （7）用锥形瓶收集蓝色的亚甲基蓝溶液。 【洗脱时切勿使溶剂流干！ 】
三实验步骤及注意事项
• （1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小 团脱脂棉花， • 注意松紧要适度。然后在棉花上铺一层粗硅 胶或石英砂。 • （2）将色谱柱垂直固定在铁架台上，往柱内 加适量70%乙 • 醇溶液，打开活塞，赶走气泡。
三实验步骤及注意事项
• （3）再向柱中倒入适量70%乙醇溶液，打开活塞， 控制滴 • 速为1滴／秒，用小锥型瓶承接，同时通过漏斗慢慢装 • 入5gAl2O3，使其逐渐沉入底部。 • 【在装吸附剂的过程中，应用质软的物体如试管夹、 • 吸耳球等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排除 • 气泡。最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面。】
柱色谱
• 柱色谱常用的有吸附 色谱和分配色谱类。 前者常用氧化铝或硅 胶为吸附剂。后者以 硅胶，硅藻土和纤维 素为支持剂，以吸收 大量的液体为固定相
实验_柱色谱
实验 10 柱色谱分离实验陈说之蔡仲巾千创作创作时间：二零二一年六月三十日--亚甲基蓝与荧光黄的分离一实验目的学习并掌握色谱法的原理及其应用.学习并掌握柱色谱的实验把持技能.二实验原理色谱法亦称色层法, 层析法等, 是分离, 纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一.色谱法的基来源根基理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的分歧, 或其它亲和作用性能的不同, 混合物的溶液流经该种物质, 进行反复的吸附或分配等作用, 从而将各组分分开.色谱分离法的分类（按把持条件的分歧）色谱分离法的分类（按组分在固定相中的作用原理分歧）色谱法的应用色谱法在有机化学中的应用主要包括以下几个方面：（1）分离混合物（2）精致提纯化合物（3）利用比移值（Rf）鉴定化合物(4)跟踪反应进程柱色谱经常使用的有吸附色谱和分配色谱两类.前者经常使用氧化铝或硅胶为吸附剂.后者以硅胶, 硅藻土和纤维素为支持剂, 以吸收年夜量的液体为固定相.当加入的洗脱剂流下时, 由于分歧化合物吸附能力分歧, 因而以分歧的速度沿柱向下流动, 继续洗脱时, 吸附能力弱的组分随溶剂首先流出.在连续洗脱过程中, 分歧组分或分歧色带就能分别收集, 从而到达分离纯化的目的.1 吸附剂经常使用的吸附剂：氧化铝, 硅胶, 氧化镁, 碳酸钙, 活性炭或纤维素粉.选择吸附剂的首要条件：不与被分离物或展开剂发生化学反应.吸附能力与以下几点有关：（1）吸附剂颗粒年夜小（2）吸附剂含水量柱色谱2 溶剂通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活性等来考虑.先将带分离的样品溶于尽量少的非极性溶剂中, 从柱顶流入柱中, 依次增年夜溶剂的极性, 将分歧化合物依次洗脱.经常使用洗脱剂的极性：石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水＜乙酸三实验步伐及注意事项（1）取一支色谱柱, 在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花, 注意松紧要适度.然后在棉花上铺一层粗硅胶或石英砂.（2）将色谱柱垂直固定在铁架台上, 往柱内加适量70%乙醇溶液, 翻开活塞, 赶走气泡.（3）再向柱中倒入适量70%乙醇溶液, 翻开活塞, 控制滴速为1滴／秒, 用小锥型瓶承接, 同时通过漏斗慢慢装入5gAl2O3, 使其逐渐沉入底部.【在装吸附剂的过程中, 应用质软的物体如试管夹、吸耳球等轻轻敲击柱身, 促使吸附剂装填紧密, 排除气泡.最终应使吸附剂的上端平整, 无凹凸面.】（4）加完吸附剂后, 在吸附剂上再盖一张直径年夜小合适的小滤纸.（5）当溶剂的液面刚好流至滤纸面时关闭二通活塞, 立即用移液管加入1mL亚甲基蓝和荧光黄的乙醇混合液, 尽量免待分离混合液粘附在柱的内壁上.（6）翻开二通活塞, 等柱内的溶剂恰好流到滤纸面时, 关闭二通活塞, 向柱内加入70%乙醇, 翻开二通活塞进行洗脱.（7）用锥形瓶收集蓝色的亚甲基蓝溶液.【洗脱时切勿使溶剂流干！】（8）当蓝色溶液收集完后, 等柱内的70%乙醇溶液恰好流到滤纸面时, 关闭二通活塞, 加入适量2%氨水作为洗脱剂.翻开二通活塞收集黄绿色的荧光黄溶液, 直到其完全被洗出.（9）用量筒分别量取所分离出来的亚甲基蓝和荧光黄溶液的体积后, 倒入指定的回收瓶中.（10）分离结束后, 应先让溶剂尽量流干, 然后颠倒, 用吸耳球从活塞口向管内挤压空气, 将吸附剂从柱顶挤压出.使用过的吸附剂倒入垃圾桶里, 切勿倒入水槽, 以免梗塞水槽.四把持注意事项特别注意：有机溶剂对身体特有害别是心肺；肝脏等所有过柱把持都要在通风橱里进行！！！柱色谱是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱.下面我就几年来过柱的体会写些心得, 希望对年夜家能有所帮手.1、柱子可以分为：加压, 常压, 减压压力可以增加淋洗剂的流动速度, 减少产物收集的时间, 可是会减低柱子的塔板数.所以其他条件相同的时候, 常压柱是效率最高的, 可是时间也最长, 比如天然化合物的分离, 一个柱子几个月也是有的.减压柱能够减少硅胶的使用量, 感觉能够节省一半甚至更多, 可是由于年夜量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结）, 以及有些比力易分解的工具可能得不到, 而且还必需同时使用水泵抽气（很年夜的噪音, 而且时间长）.以前曾年夜量的过减压柱, 对它有比力深厚的感情, 可是自从检验考试了加压后, 就几乎再也没动过减压的念头了.加压柱是一种比力好的方法, 与常压柱类似, 只不外外加压力使淋洗剂走的快些.压力的提供可以是压缩空气, 双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）.特别是在容易分解的样品的分离中适用.压力不成过年夜, 否则溶剂走的太快就会减低分离效果.个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比力适用的.2、关于柱子的尺寸, 应该是粗长的最好柱子长了, 相应的塔板数就高.柱子粗了, 上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比力薄）, 这样相对的减小了分离的难度.试想如果柱子十厘米, 而样品就有二厘米, 那么分离的难度可想而知, 恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了.而如果样品层只有0.5厘米, 那么各组分就比力容易获得完全分离了.固然采纳粗年夜的柱子要牺牲比力多的硅胶和溶剂了, 不外这些成秘闻对产物来说也许就不算什么了（有些不环保的说, 不外溶剂回收重蒸后也就减小了部份浪费）.现在见到的柱子径高比一般在1：5～10, 书中写硅胶量是样品量的30～40倍, 具体的选择要具体分析.如果所需组分和杂质分的比力开（是指在所需组分rf在0.2～0.4, 杂质相差0.1以上）, 就可以少用硅胶, 用小柱子（例如200毫克的样品, 用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1, 就要加年夜柱子, 我觉得可以增加柱子的直径, 比如用3cm的, 也可以减小淋洗剂的极性等等. 3、关于无水无氧柱, 适用于对氧, 水敏感, 易分解的产物可以湿柱, 也可以干柱.不外在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次, 因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产物分解, 究竟要分离的是敏感的东东, 小心不为过.这个我分离的次数很少, 一般都是通过紫外灯检查的.4、关于湿法、干法上样湿法省事, 一般用淋洗剂溶解样品, 也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等, 但溶剂越少越好, 否则溶剂就成了淋洗剂了.有的上样后在硅胶上又会析出, 这一般都是比力年夜量的样品才会呈现, 是因为硅胶对样品的吸附饱和这就应该先重结晶, 获得年夜部份的产物后再柱分, 如果不能重结晶那就不论它了, 直接过就是了, 样品随着淋洗剂流动会溶解的.有些样品溶解性差, 能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等, 会随着溶剂一起走, 显色是一个很长的脱尾）, 这时就必需用干法上柱了.样品和硅胶的量有一种说法是1：1, 我觉得是越少越好, 可是要保证在旋干后, 不能看到明显的固体颗粒（那说明有的样品没有吸附在硅胶上）.溶剂的选择.固然是最廉价, 最平安, 最环保的了.所以年夜多选用石油醚, 乙酸乙酯.文献中有写用正己烷的, 太贵了.二氯甲烷也有用的, 可是要知道, 它和硅胶的吸附是一个放热过程, 所以夏天的时候经常会在柱子里发生气泡, 天气冷的时候会好一些.甲醇, 据说能溶解部份的硅胶, 所以产物如果想过元素分析的话要留神, 应该经过后继处置, 比如说重结晶等.其他的溶剂用的相对较少, 要依个人的分歧需要选择了.由于某些原因, 用到的淋洗剂多是年夜包装的（廉价嘛）, 我们这里是用2.5 L的塑料桶装的.另外溶剂在过柱子后最好也回收使用, 一方面环保, 另一方面也能节省部份经费, 固然比力忙的时候我是不回收的, 太费事了.这里要注意的是, 一般在过柱同时进行的是减压旋蒸, 石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的分歧会招致极性的变动, 一般会使得极性变年夜, 在梯度淋洗时比力合适, 正好极性越来越年夜了.在过完柱子后, 溶剂最后回收要采纳常压, 因为在减压旋蒸时会有部份低沸点的杂质一起出来, 常压时就会减少这种现象, 如果杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了.5、关于把持问题 5.1 装柱. 柱子下面的活塞可以采纳四氟节门的.干法和湿法装柱觉得没什么区别, 只要能把柱子装实就行.装完的柱子应该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢）, 一定要均匀（否则样品就会从一侧斜着下来）.书中写的都是不能见到气泡, 我觉得在年夜大都情况下有些小气泡没太年夜的影响, 一加压气泡就全下来了.固然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了.可是柱子更忌讳的是开裂, 甭管竖的还是横的, 城市影响分离效果, 甚至作废！5.2 加样.用少量的溶剂溶样品加样, 加完后将下面的活塞翻开, 待溶剂层下降至石英砂面时, 再加少量的低极性溶剂, 然后再翻开活塞, 如此两三次, 一般石英砂就基本是白色的了.加入淋洗剂, 一开始不要加压, 等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm就够了）, 再加压, 这样防止了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行.5.3 淋洗剂的选择.感觉上要使所需点在rf在0.3左右的比力好.不要认为在板上爬高了分的比力开, 过柱子就用那种极性, 如果rf在0.6, 即使相差0.2也不容易在柱子上分开, 因为柱子是一个屡次爬板的状态, 可以通过公式的比力：0.6/0.8一次的分离度, 肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方年夜.另外, 一般你的物质酸性的话淋洗剂里面要加入几滴乙酸, 碱性的话通常使用氨水或是三乙胺等弱碱. 5.4 样品的收集.用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡.所以如果样品与硅胶的吸附比力强的话, 就不容易流出.这样就会发生, 后面的点先出, 而前面的点后出.这时可以采纳氧化铝作固定相. 5.5 最后的处置.柱分后的产物, 由于使用了年夜量的溶剂, 其中的杂质也会累积到产物中, 所以如果想送分析, 最好用少量的溶剂洗涤一下, 因为年夜部份的杂质是溶在溶剂里的, 一洗基本就没了, 需要时进行重结晶.另外, 再过柱的时候, 有时会呈现气泡, 一是和使用的溶剂有关, 如果是易挥发的溶剂, 如乙醚、二氯甲烷等, 在室温稍高的情况下, 很容易呈现这种现象, 因此, 在室温高的时候, 可以选择沸点较高, 挥发相对小的溶剂.还有, 使用混合溶剂时, 使用的两种溶剂的沸点应该相差不年夜, 如：乙酸乙酯和石油醚(60~90),而乙醚却要选择30－60的石油醚.二是：不论是用带砂板的还是塞棉花的, 在装柱之前, 都要将空气用加压的方法将空气排干, 这样就可防止柱中有空气！最后过柱子需要耐心, 不要着急.。
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分离效果最好。
荧光黄结构
亚甲基蓝结构
醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水＜乙酸
注意事项
• 2. 洗脱剂的选择：对未知样品先用极性小的溶剂洗脱，再用极性 大的溶剂洗脱；
• 3. 装柱的技术：松紧度； • 4. 吸附剂的用量； • 5. 柱高：柱子太高洗脱慢。
问题及讨论
• 洗脱剂极性的选择原则： • 1. 先极性小的，再极性大的，可以是单一溶剂，也可是混合溶剂； • 2. 溶剂纯度要高，并经干燥过的。溶剂的结构与吸附能力的关系： • 化合物的吸附性与它们的极性成正比，即极性大吸附力强，后
实验步骤
• 5. 清理：分离结束后，应先让溶 剂尽量流干，然后倒置，用吸耳 球从活塞口向管内挤压空气，将 吸附剂从柱顶挤压出。使用过的 吸附剂倒入垃圾桶里，切勿倒入 水槽，以免堵塞水槽。
注意事项
• 1. 吸附剂的选择和活化； • 常用洗脱剂的极性： • 石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙
柱色谱法
柱色谱-荧光黄和亚甲基蓝的分离
实验目的
• 1. 掌握色谱法的基本原理； • 2. 学会利用柱色谱分离提纯有机化合物的规范操作
实验原理
➢柱色谱利用吸附剂（硅胶、氧化铝等）对不同组分吸附 能力的差异从而达到分离目的。
➢常用的有吸附色谱和分配柱色谱两类 ➢吸附色谱常用氧化铝和硅胶做固定相 ➢分配柱色谱以硅胶、硅藻土和纤维素做支持剂，以吸收
实验步骤
• 1. 装柱（干法）：在色谱 柱收缩处塞一小团脱脂棉 后向柱内添加厚1cm左右的 石 英 砂 ， 然 后 添 加 100-200 目 的 氧 化 铝 约 18cm 左 右 ， 再在上面加一层1c附剂：向 柱中倒入一定量的 95%乙醇，打开活塞， 赶走气泡，注意控 制流出速度1滴/s左 右；用一大三角烧 瓶接取流出的乙醇；
实验步骤
• 3. 加样：当溶剂刚好流至上层石英 砂面时，立即用滴管沿壁加入1mL荧 光黄与亚甲基蓝的混合液，当溶液 流至石英砂面时，立即用少量的95% 乙醇清洗下管壁的有色物质，如此 连续2-3次，直至洗净为止；
实验步骤
• 4. 洗脱：用95%乙醇作洗脱剂 进行洗脱，当色谱柱内出现 明显谱带即可；
2．溶剂
色层的展开首先使用极性较小的 溶剂，使最容易脱附的组分分离， 然后加入不同比例的极性溶剂配 成的洗脱剂，将极性较大的化合 物洗脱下来。
实验用试剂
• 20cm×1cm层析柱； • 吸附剂：中性氧化铝100-200目；石英砂； • 荧光黄和亚甲基蓝的混合液；95％乙醇；
实验装置
当加入的洗脱剂流下 时，由于不同化合物 吸附能力不同，因而 以不同的速度沿柱向 下流动，继续洗脱时 ，吸附能力弱的组分 随溶剂首先流出。在 连续洗脱过程中，不 同组分或不同色带就 能分别收集，从而达 到分离纯化的目的
较大量的液体做固定相，而支持剂本身不起分离作用。
1．吸附剂
➢常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙等 ➢吸附剂应经过纯化和活化处理，颗粒大小均匀 ➢吸附剂粒子越小、表面积越大，吸附能力就越高，
但颗粒太小，溶剂的流速就太慢，应根据需要确定。
大多数吸附剂都能强烈地吸水，而且水分易 被其它化合物置换，而使吸附剂的活性降低， 通常用加热的方法使吸附剂活化。