ABO疑难定型-基础认识
abo血型系统定型原则和实验方法
abo血型系统定型原则和实验方法
ABO血型系统定型原则是利用凝集试验技术，通过正定型（红细胞定型）和反定型（血清定型）两组试验来准确鉴定ABO血型。
具体步骤如下：
1. 正定型：取75×12mm干净小试管2支，分别标记抗A、抗B。
按标记滴加抗A、抗B试剂血清1滴。
再各滴加3-5%待检者红细胞悬液1滴，混匀。
2. 反定型：取75×12mm干净小试管3支，分别标记A细胞、B细胞、O 细胞。
3管各滴加待检者血清1滴。
按标记分别滴加混匀的A型、B型、O 型试剂红细胞1滴，混匀。
5管同时2档（3400转/分-15秒）离心。
3. 轻轻摇动试管，观察反应结果。
对于结果解释，如果被检红细胞膜上有与该试剂血清抗体相对应的抗原，或者被检血清中有与该试剂红细胞抗原相对应的抗体，则为阳性，即凝集为阳性。
如果不凝集，则为阴性。
以上是ABO血型系统定型原则和实验方法，仅供参考，建议查阅专业书籍或咨询专业人士获取更准确的信息。
ABO疑难血型三步分析法
ABO疑难血型三步分析法在血型分类中没有疑难血型,迄今为止在文献中也查不到“疑难血型”的定义，因为“疑难血型”是1种血型难以检定或判定的“现象”,而不是1种型别。
检定1份标本是否属“疑难血型”，除了标本本身的特殊性外，还与实验室的设备、技术人员的水平、经验等多种因素有关，例如1份ABO亚型标本,在基层医院血库可能因为正定型与反定型不一致而分析不出原因被认为是“疑难血型”,但在血液中心血型参比实验室该问题可能就易于迎刃而解。
在检定血型时,标本如果受多种因素干扰使结果难以判定,便呈现“疑难血型”现象。
一、干扰ABO血型正确判定的因素（一）生理性因素1.年龄老年人(ABO抗原或ABO抗体减弱),6个月前的婴儿(ABO 抗原或ABO抗体不成熟),可能导致ABO血型误定。
2.ABO亚型包括A(B)型、B(A)型,ABO抗原减弱导致细胞定型(正定型)受干扰,或血清中出现不规则抗体干扰血清定型(反定型)。
3.冷凝集素有些健康人血清中含有冷凝集素,且在<4℃才有活性,不干扰ABO血型检定,如果冷凝集素效价升高,或在室温以上反应,致敏自身红细胞可能干扰ABO正定型,存在于血清可能干扰ABO反定型。
4.“先天性”无ABO抗体近年有“先天性”无ABO抗体的个案报告,原因有待研究。
5.双精子授精红细胞呈嵌合体。
6.个体特异性个别人血清中ABO可溶性血型物质过高,ABO正定型红细胞凝集减弱。
（二）实验技术原因1.标本混淆如采错被检者,红细胞和血清非同一人,记录结果与标本编号不对应。
2.静脉输液处采样ABO抗体被输液稀释,干扰ABO反定型。
3.采样不规范用凝血块洗下红细胞检定血型，其中混有凝集程度不一的红细胞；用血浆做ABO反定型,操作过程中纤维蛋白析出凝集试剂红细胞。
4.试剂质量问题或漏加试剂定型试剂过期失效，未达标准，被污染。
操作中未遵循“先加血清后加细胞”的原则，大批量样本试验时漏加试剂血清或试剂红细胞。
5.实验操作不规范被检红细胞未洗涤,非特异性粘附血浆蛋白,或被检红细胞悬液过浓或过稀。
ABO疑难血型鉴定
ABO正、反定型不合疑难血型三步分析法”ABO正反定型不符定义：①ABO正反定型不符，即正定型与反定型提示的血型结果不一致②ABO正反定型相符，但为弱反应，正定型反应强度＜3+，或反定型反应强度＜2+③正定型为O型，反定型与A细胞、B细胞凝集强度差别≥2+凡是遇到ABO正、反定型不合的病人第一步: 排除人为因素／操作失误１，重新采集血样⑴分抗凝，不抗凝两管⑵排除采错人，输血/输液处采样……２，核对试剂，器材仔细阅读试剂效期，说明书，操作方法，注意事项３，规范化操作复检复检ABO 血型仍然正、反定型不合，就确定为疑难血型进入三步法第二步第二步：凡是ABO正、反定型不合的病例按下面方法，分析病人的抗原、抗体是“变多？还是变少？”正、反定型结果判断1，正定型AB, (两种抗原) 抗原变多正定型O, (无抗原) 抗原变少2，反定型O, (两种抗体) 抗体变多反定型AB, (无抗体) 抗体变少3，正定型A, 或B (一种抗原) ①抗原变多;②抗原变少反定型A, 或B (一种抗体) ①抗体变多;②抗体变少★不要过问“真滴变多变少没有”，你依样画葫芦就是了规律很好记，不管是抗原/抗体：两种→肯定是变多没有→肯定是变少；一种→可能是变多，也可能是变少归纳ABO正,反定型不合的“五大类30种原因”知道有个“五大类30种原因”就可以了不要记，书上有这些表，现用现翻书★用排除法（1）红细胞抗原变少7种（2）红细胞抗原变多7种①＜6月,老年（临床）□①自身凝集素（临床诊断）□②白血病（临床诊断）□②红细胞粘附大量蛋白（RBC未洗）□③输异型血（输血史）□③样本含试剂反应物（RBC未洗）□④造血干细胞移植（病史）□④造血干细胞移植（病史）□⑤血型物质↑□⑤获得性B抗原（类B）（临床感染）□⑥急性大失血（临床病史）□⑥B(A)表型□⑦ABO亚型□⑦输异型血（输血史）□注意：每条的临床提示（3）血清抗体变少6种（4）血清抗体变多7种①<6个月/老年（临床）□①自身抗体（临床诊断AIHA）□②ABO亚型□②同种抗体（抗筛）□③低丙种球蛋白血症（化验）□③对试剂反应的物质□④造血干细胞移植（病史）□④血清蛋白异常（化验）□⑤先天性ABO抗体缺失□⑤输异型血浆（输血史）□⑥大量输液（输血史）□⑥造血干细胞移植（病史）□⑦输含血型抗体Ig（输血史）□注意：每条的临床提示5）混合凝集（mf）3种①3个月内输异型血（输血史）□②造血干细胞移植（病史）□③双精子受精/嵌合体（问家系）□注意：每条的临床提示归纳剩下不能排除的原因：第三步: 实验验证针对剩下几种不能排除的原因, 选择针对性实验验证，如何选择针对性实验呢?翻看书本:《输血免疫血液学实验技术》人民卫生出版社,2011 .1; P131。
ABO疑难定型
ABO疑难定型一、ABO疑难血型鉴定的方法（一）正反定型：正定型：-A, -B，-AB, -H, -A1反定型：Ac, Bc, Oc, 自身对照1. ABO正定型中各种试剂用途疑难定型中正定型用抗血清抗-A及抗-B抗-AB:确认弱A和弱B抗原,与弱A及弱 B抗原亲和力强,会产生强反应抗-H:用于检查亚型及孟买型, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型抗-A1: 用于A亚型(如A2, A3)检测2. H抗原在红细胞上的分布3. ABO反定型中各种试剂的用途反定型中试剂红细胞的意义A及B细胞: 确认抗-A或抗-B抗体O型红细胞:检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型自身对照: 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等)A2细胞: 用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下（二）型物质测定型物质准备：1~2ml唾液，沸水煮10分钟，离心后得到的上清。
标清的调制：标清用盐水稀释至其效价为1：16中和：将0.5ml型物质与调制后的标清0.5ml等体积混合,室温放置30分钟检测：用Ac检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.结果判断：如果抗-A被中和，则被检者为A型，如果抗-B被中和，则被检者为B 型。
（三）吸收放散吸收用RBC：盐水洗涤5次的被检者压积RBC 1ml。
吸收用的标准血清将压积RBC和标清按等体积比例混合，在相应的温度条件下（4℃）孵育1小时，每隔15分钟混匀一次用盐水洗涤孵育后的细胞6次，得到压积RBC，加入等量盐水。
56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。
用标准试剂红细胞检测放散液。
（四）O型筛选红细胞的应用抗原组成:三组合细胞,要求必须具备全部的Rh因子I: O型R1R1(CDe/CDe); II:O型 R2R2(cDE/cDE); III: O型rr(cde/cde)用途: 用于受血者、献血员及孕产妇等的ABO系统以外不规则抗体的筛选目的: 在配血之前,有针对性、按比例的去寻找与带有抗体的病人相配合的血（五）自家冷凝集血样的ABO定型正定型用红细胞的准备:血样采集后,立即离心,获得压积红细胞用37℃温盐水洗涤红细胞45℃热放散3分钟巯基试剂处理: 破坏IgM抗体自家冷凝集血样的ABO定型反定型用血浆或血清的准备血样采集后放置4℃冰箱静置24小时,使红细胞充分吸收自身冷凝集抗体用自身红细胞吸收去除自身冷抗体用O型红细胞吸收去除ABO系统以外的非特异性及特异性抗体（六）获得性B1. 获得性B及多凝集现象获得性B:肠紊乱及感染病人, 细菌酶影响A抗原的受体肠内壁通透性增加,而后细菌多糖吸附在红细胞表面多凝集现象:异常或变形的RBC被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隐蔽受体多凝集血样中的血清不与自身反应)2. 获得性B产生的主要机理二、ABO正反定型不符的问题分析（一）ABO定型问题经常发生的情况为：1. 明显缺失应该出现的抗-A或抗-B：(1) 新生儿血样(2) 免疫缺陷、免疫紊乱(3) 前带现象(4) 血型型物质过多(5) 抗原太弱，常规方法检查不出来，相应血清中无抗体(6) 亚型，反应是混合视野2. 由于试剂被污染，或试剂中有额外抗体3. 明显多出抗原(或多出抗体)(1) 亚型，如A2型可能血清中有抗-A1(2) 自家凝集(3) 获得性B（二）引起ABO正反定型不一致的原因分析1. 技术因素：(1) 试剂贮存不当(2) 使用技术错误(3) 使用错误的试剂(4) 使用污染或失效的试剂(5) 离心速度不当2. 存在IgM性质的自家冷抗体由于自家冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自家溶血的病人，在低于37℃时血细胞自发凝集，影响正反定型。
ABO定型及配血不合的分析
获得类B 获得类B解决办法
询问病史：是否有肠道感染 用自身血清检查红细胞，获得性类B 用自身血清检查红细胞，获得性类B抗原其血清不 凝聚自身红细胞。 唾液型物质检测：如是分泌型，其唾液只含有A物 唾液型物质检测：如是分泌型，其唾液只含有A 质而不含B 质而不含B物质
缗钱状假凝集
特点： ①在显微镜下红细胞膜完整，细胞间界限 清洗地成缗钱串聚集。 ②缗钱状假凝集反应不受温度影响，室温 与37℃结果一样。 37℃结果一样。 解决方法：被检细胞先用盐水洗涤后再作 配血试验
缗钱状凝集引起的正反定型不符
正定型 抗Ａ 抗Ｂ 抗ＡＢ ４＋ ２＋ ４＋
反定型 Ａ细胞 Ｂ细胞 O细胞 ２＋ ４＋ 2+
弱或缺失抗体导致的正反定型不符
正定型 抗Ａ 抗Ｂ － ３＋ 反定型 Ａ细胞 Ｂ细胞 － －
抗ＡＢ ４＋
＊：可能血型：Ｂ（老年人）
ＡＢＯ定型不一致的原因分析（二） ＡＢＯ定型Байду номын сангаас一致的原因分析（ 定型不一致的原因分析 弱反应或缺失抗原
１、Ａ亚型、Ｂ亚型或ＡＢ亚型 亚型、 亚型或ＡＢ亚型 ＡＢ 白血病导致Ａ ２、白血病导致Ａ或Ｂ抗原减弱 何杰金病（Hodgkin’ 有时会抑制抗原表达， ３、何杰金病（Hodgkin’s）有时会抑制抗原表达， 与白血病类似 由于某种疾病（如腹腔癌、胰腺癌） ４ 、 由于某种疾病 （ 如腹腔癌 、 胰腺癌 ） 导致血浆 中存在大量的型物质，中和抗－Ａ或抗－Ｂ抗体， －Ａ或抗－Ｂ抗体 中存在大量的型物质 ， 中和抗 －Ａ 或抗 －Ｂ 抗体 ， 引起正定型为假阴性或弱阳性。 引起正定型为假阴性或弱阳性 。 通过洗涤红细胞 可解决此问题。 可解决此问题。 获得性Ｂ ５、获得性Ｂ －Ａ或抗－Ｂ试剂中存在低频抗原的抗体 或抗－Ｂ 6、抗－Ａ或抗－Ｂ试剂中存在低频抗原的抗体
常见ABO疑难血型案例分析
1）抗体减少或缺失：加大待测血清量、延长反应时间 2）额外抗体：
三、反定型处理流程（试管法复查）
• 额外抗体
反定型
Ac、Bc、Oc、自身对照（AC）
非特异性
都有凝集
盐水置换
仅自身对 照无凝集
特异性
AC _
冷同种 抗体
凝集消失 凝集不 消失
三组Ac/Bc
蛋白干扰
AC+
冷自身
抗体
直\间接抗球 蛋白试验
选抗原阴性 Ac/Bc重测血型
不规则抗 体筛查
Oc冷吸附后 重测血型
四、实例（一）
一、简要病历 患者，男，56岁，咳嗽数月加重入急诊科，无既往输血史，无既往血型
史 二、血型检测
四、实例（一）
三、疑难血型检测 1、试管法复查 试剂
室温
抗-A 4+
抗-B 0
抗-D A1细胞 B细胞 O细胞 自身对照
四、实例（二）
三、疑难血型检测 5、重做反定型验证结果
试剂细胞 洗涤三次后
四、实例（二）
四、结论 A型Rh(D)阳性，反定考虑患者对试剂物质有反应造成的干扰。
四、实例（三）
一、简要病历 患者，男，45岁，耳鼻喉科，行咽乳头状瘤切除术，无输血史。
二、血型检测
四、实例（三）
三、疑难血型检测
1、试管法复查 试剂
三、疑难血型检测 2、试管法复查 试剂
室温
抗-A 4+
抗-B 3+
抗-D A1细胞 B细胞 O细胞 自身对照
4+
4+
4+
4+
4+
正定型用温盐水洗涤三次
ABO血型疑难定型
ABO疑难定型ABO系统是唯一一个在红细胞上缺乏相应抗原的情况下其血清或血浆中存在对应抗体的最重要的血型系统。
因此ABO定型必须进行正反定型并且正反定型结果相一致的前提下才能准确鉴定ABO血型。
在正定型试验中，一般我们使用抗-A和抗-B来检测红细胞上是否存在A和/或B 抗原，反定型试验中使用A和B型标准试剂红细胞来检测血清/血浆中是否存在抗-A和/或抗-B 抗体。
一般而言，正反定型的结果互相一致。
但在一些特殊的情况下，正反定型的结果相互不一致，在本文中分析了ABO正反定型不一致的原因，并对不同的原因加以分析解决，即分别在正定型和反定型中增加一些试剂来更进一步的细化检测红细胞上的抗原和血清/血浆中可能出现的抗体，并通过型物质测定及吸收放散等方法来准确定型。
一、ABO疑难血型鉴定的方法（一）正反定型：正定型：-A, -B，-AB, -H, -A1反定型：Ac, Bc, Oc, 自身对照1. ABO正定型中各种试剂用途疑难定型中正定型用抗血清抗-A及抗-B抗-AB:确认弱A和弱B抗原,与弱A及弱 B抗原亲和力强,会产生强反应抗-H:用于检查亚型及孟买型, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型抗-A1: 用于A亚型(如A2, A3)检测2. H抗原在红细胞上的分布3. ABO反定型中各种试剂的用途反定型中试剂红细胞的意义A及B细胞: 确认抗-A或抗-B抗体O型红细胞:检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型自身对照: 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等) A2细胞: 用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下（二）型物质测定型物质准备：1~2ml唾液，沸水煮10分钟，离心后得到的上清。
标清的调制：标清用盐水稀释至其效价为1：16中和：将0.5ml型物质与调制后的标清0.5ml等体积混合,室温放置30分钟检测：用Ac检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.结果判断：如果抗-A被中和，则被检者为A型，如果抗-B被中和，则被检者为B型。
ABO疑难定型
ABO疑难定型一、ABO疑难血型鉴定的方法（一）正反定型：正定型：-A, -B，-AB, -H, -A1反定型：Ac, Bc, Oc, 自身对照1. ABO正定型中各种试剂用途疑难定型中正定型用抗血清抗-A及抗-B抗-AB:确认弱A和弱B抗原,与弱A及弱 B抗原亲和力强,会产生强反应抗-H:用于检查亚型及孟买型, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型抗-A1: 用于A亚型(如A2, A3)检测2. H抗原在红细胞上的分布3. ABO反定型中各种试剂的用途反定型中试剂红细胞的意义A及B细胞: 确认抗-A或抗-B抗体O型红细胞:检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型自身对照: 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等) A2细胞: 用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下（二）型物质测定型物质准备：1~2ml唾液，沸水煮10分钟，离心后得到的上清。
标清的调制：标清用盐水稀释至其效价为1：16中和：将0.5ml型物质与调制后的标清0.5ml等体积混合,室温放置30分钟检测：用Ac检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.结果判断：如果抗-A被中和，则被检者为A型，如果抗-B被中和，则被检者为B型。
（三）吸收放散吸收用RBC：盐水洗涤5次的被检者压积RBC 1ml。
吸收用的标准血清将压积RBC和标清按等体积比例混合，在相应的温度条件下（4℃）孵育1小时，每隔15分钟混匀一次用盐水洗涤孵育后的细胞6次，得到压积RBC，加入等量盐水。
56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。
用标准试剂红细胞检测放散液。
（四）O型筛选红细胞的应用抗原组成:三组合细胞,要求必须具备全部的Rh因子I: O型R1R1(CDe/CDe); II:O型 R2R2(cDE/cDE); III: O型rr(cde/cde)用途: 用于受血者、献血员及孕产妇等的ABO系统以外不规则抗体的筛选目的: 在配血之前,有针对性、按比例的去寻找与带有抗体的病人相配合的血（五）自家冷凝集血样的ABO定型正定型用红细胞的准备:血样采集后,立即离心,获得压积红细胞用37℃温盐水洗涤红细胞45℃热放散3分钟巯基试剂处理: 破坏IgM抗体自家冷凝集血样的ABO定型反定型用血浆或血清的准备血样采集后放置4℃冰箱静置24小时,使红细胞充分吸收自身冷凝集抗体用自身红细胞吸收去除自身冷抗体用O型红细胞吸收去除ABO系统以外的非特异性及特异性抗体（六）获得性B1. 获得性B及多凝集现象获得性B:肠紊乱及感染病人, 细菌酶影响A抗原的受体肠内壁通透性增加,而后细菌多糖吸附在红细胞表面多凝集现象:异常或变形的RBC被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隐蔽受体多凝集血样中的血清不与自身反应)2. 获得性B产生的主要机理二、ABO正反定型不符的问题分析（一）ABO定型问题经常发生的情况为：1. 明显缺失应该出现的抗-A或抗-B：(1) 新生儿血样(2) 免疫缺陷、免疫紊乱(3) 前带现象(4) 血型型物质过多(5) 抗原太弱，常规方法检查不出来，相应血清中无抗体(6) 亚型，反应是混合视野2. 由于试剂被污染，或试剂中有额外抗体3. 明显多出抗原(或多出抗体)(1) 亚型，如A2型可能血清中有抗-A1(2) 自家凝集(3) 获得性B（二）引起ABO正反定型不一致的原因分析1. 技术因素：(1) 试剂贮存不当(2) 使用技术错误(3) 使用错误的试剂(4) 使用污染或失效的试剂(5) 离心速度不当2. 存在IgM性质的自家冷抗体由于自家冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自家溶血的病人，在低于37℃时血细胞自发凝集，影响正反定型。
ABO系统疑难血型鉴定
人源抗-A：+抗-H ：3+ 唾液检出A、B、H物质 基因检测结果： B(A)
实例分析与点评３： 血清学结论：
B(A) 分泌型
输血建议：输Ｂ型
实例分析与点评4：
实例分析与点评4：
简要病史： 刘XX，男，63岁。脑肿瘤。
无输血史，无移植史。
实例分析与点评4：
输血相容性检测
1.微柱凝胶卡血型初检
查看病历资料 参考其他检查
从反定型入手
实验室验证
设计针对性试验验证
由卡式法改为试管法 血清充分释出，红细胞洗涤 准备抗A、抗A1、抗B、抗AB、抗H、ABO细胞 室温反应延长时间，离心观察结果 4度冰箱放置10min离心观察结果 加大血清量和试剂量，混匀离心观察结果 对凝集强度、混合外观、溶血的准确判读
ABO系统疑难血型鉴定
1 ABO系统疑难血型 凝集强度判读 2
3 实验结果不符考虑因素
案例分析与点评 4
5 ABO亚型的血清血特点
1.ABO正定型凝集强度<3+，反定型凝集强度<2+ 2.正定型为O型时，反定型价差>=2+ 3.血型正反不符提示（抗原/抗体增多或减少） 4.与历史血型不符
出现疑难血型时建议用试管法规范操作复查！
抗H: 3+(阴性B和阳性O对照）
唾液检出B、H血型物质
亲和力实验 ： 亲和力降低
实例分析与点评2： 血清学结论：
Ｂ３亚型
输血建议：输Ｂ型
实例分析与点评３：
实例分析与点评３：
简要病史： 彭XX，男，７３岁。腰椎椎管狭窄。
无输血史，无移植史。
实例分析与点评３：
输血相容性检测
1.微柱凝胶卡血型初检
ABO定型及配血不合的分析
吉林大学中日联谊医院输血科 刘玉洁
前言
临床输血是现代医学中诊治疾病，挽救生命的重 要医疗手段。同时，输血可能引起多种不良反应， 直接危机到患者生命，稍有不慎将可能发生无法 弥补的过失。所以，每个细小环节都必须做到安 全、准确、有效。血型鉴定、交叉配血、抗体筛 选是输血前的最后一道防线，要求输血科从业人 员必须有高度的责任感、严谨的科学作风，确保 试验结果准确无误。我们在临床工作中经常遇见 血型鉴定、交叉配血、抗体筛查不符及各种干扰 情况。下面把在血型血清学临床实践中的一点体 会做如下汇报，供大家参考。
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主侧交叉配血不相合的原因
病人或供血者 ABO 定型不正确，或二者的
ABO血型不配合。 病人血清中存在同种抗体，与供血者红细 胞上的相应抗原反应。 病人血清中存在自身抗体，与供血者红细 胞上的相应抗原反应。
主侧交叉配血不相合的原因
供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗
球蛋白试验阳性。 病人血清不正常，如白蛋白／球蛋白比例 不正常引起缗钱状假凝集，血清中存在高 分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性（用 盐水添加试验来解决）。 试验系统被污染。
ABO正反定型不符事例
-A + -B + -AB Ac Bc Oc 自身 + 4+ 4+ + +
可能血型: O型有问题抗体 或有输血反应,引起RBC包被 抗体 解决方案: 直接抗球蛋白试 验及抗体鉴定
ＡＢＯ定型不一致的原因分析（一） 弱反应或缺失抗体
１、新生儿 ２、老人 ３、低球蛋白症的白血病人 ４、低球蛋白的淋巴瘤病人（恶性） ５、使用免疫抑止药物而导致低球蛋白的病人 ６、先天丙球缺乏的病人 ７、免疫缺陷病人 ８、骨髓移植病人（由于治疗导致球蛋白缺乏 ， 且移植入的骨髓制造另一群红细胞 ９、双胞胎嵌合体
abo反定型原理
abo反定型原理
ABO血型反定型是指用已知抗原检测未知抗体的一种血清学检验方法，例如用标准的A 型红细胞检测抗A抗体，用标准的B型红细胞检测抗B抗体。
ABO血型系统根据凝集原A、B的分布，把血液分为A、B、AB、O四型。
红细胞上只有A 抗原的为A型血，其血清中有抗B抗体；红细胞上只有B抗原的为B型血，其血清中有抗A 抗体；红细胞上A、B两种抗原都有的为AB型血，其血清中无抗A、B抗体；红细胞上A、B 两种抗原皆无者为O型，其血清中抗A、抗B抗体皆有。
血型是由遗传决定的，一般来说是终生不变的。
同时，血型相同的人，其遗传基因型不一定相同。
ABO血型系统及定型正反不符讲义
技术上错误的常见来源
血液标本或试管鉴定不当 红细胞悬浮液过浓或过淡及纤维蛋白、小血凝块的干扰 人为的书写错误 标本混乱 忽略观察溶血现象 未参加试剂 未按照试剂生产商的说明操作 离心机校准不良 试剂受到污染 温度在离心过程中增高
Am分泌型的唾液中包含正常含量的A和H物质，Am血 清中通常无抗A1。
Am作为ABO位点上一个稀有的等位基因遗传 Am在法国献血者的频率是150 000中有1例。〔A型人
中占0.0015%〕，中国台湾的数据是400 000万人中1 例。
Am
抗原性较弱 抗A: - / w+ 抗H 4+〔甚至会超过Oc〕 无抗A1产生,与抗AB反响不增强 血型物质: A H
1/77000 〔A型人中的0.003%〕和1/44000
Aint
与抗A1反响较弱 2+ 与抗A及抗H反响较强 4+/3+ 仅有A1和Aint的细胞与抗A1发生反响
Aint
Landsteiner和Levine：有些A型个体的红细胞 既不能定义为A1也不能定义为A2
Aint在黑人中较白人更为常见， Aint是作为ABO位点上的一个等位基因遗传的。 它的H抗原强度象A2一样强，甚至更强。
抗体致敏的红细胞
抗体吸附于红细胞外表，可显示直抗阳性 自身免疫性溶血性贫血 抗高血压药物 输血反响 新生儿溶血病 放散技术移去抗体
减弱或缺少抗体反响
年龄<1或>70 丙球蛋白过低血症 丙球蛋白缺乏血症
未知的抗体反响
缗钱状凝集 冷自身抗体 未知的ABO同种抗体 未知的其它同种抗体
A1和A2的鉴别
工程 与抗A反响
ABO疑难定型
ABO疑难定型一、ABO疑难血型鉴定的方法（一）正反定型：正定型：-A, -B，-AB, -H, -A1反定型：Ac, Bc, Oc, 自身对照1. ABO正定型中各种试剂用途疑难定型中正定型用抗血清抗-A及抗-B抗-AB:确认弱A和弱B抗原,与弱A及弱 B抗原亲和力强,会产生强反应抗-H:用于检查亚型及孟买型, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型抗-A1: 用于A亚型(如A2, A3)检测2. H抗原在红细胞上的分布3. ABO反定型中各种试剂的用途反定型中试剂红细胞的意义A及B细胞: 确认抗-A或抗-B抗体O型红细胞:检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型自身对照: 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等) A2细胞: 用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下（二）型物质测定型物质准备：1~2ml唾液，沸水煮10分钟，离心后得到的上清。
标清的调制：标清用盐水稀释至其效价为1：16中和：将0.5ml型物质与调制后的标清0.5ml等体积混合,室温放置30分钟检测：用Ac检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.结果判断：如果抗-A被中和，则被检者为A型，如果抗-B被中和，则被检者为B型。
（三）吸收放散吸收用RBC：盐水洗涤5次的被检者压积RBC 1ml。
吸收用的标准血清将压积RBC和标清按等体积比例混合，在相应的温度条件下（4℃）孵育1小时，每隔15分钟混匀一次用盐水洗涤孵育后的细胞6次，得到压积RBC，加入等量盐水。
56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。
用标准试剂红细胞检测放散液。
（四）O型筛选红细胞的应用抗原组成:三组合细胞,要求必须具备全部的Rh因子I: O型R1R1(CDe/CDe); II:O型 R2R2(cDE/cDE); III: O型rr(cde/cde)用途: 用于受血者、献血员及孕产妇等的ABO系统以外不规则抗体的筛选目的: 在配血之前,有针对性、按比例的去寻找与带有抗体的病人相配合的血（五）自家冷凝集血样的ABO定型正定型用红细胞的准备:血样采集后,立即离心,获得压积红细胞用37℃温盐水洗涤红细胞45℃热放散3分钟巯基试剂处理: 破坏IgM抗体自家冷凝集血样的ABO定型反定型用血浆或血清的准备血样采集后放置4℃冰箱静置24小时,使红细胞充分吸收自身冷凝集抗体用自身红细胞吸收去除自身冷抗体用O型红细胞吸收去除ABO系统以外的非特异性及特异性抗体（六）获得性B1. 获得性B及多凝集现象获得性B:肠紊乱及感染病人, 细菌酶影响A抗原的受体肠内壁通透性增加,而后细菌多糖吸附在红细胞表面多凝集现象:异常或变形的RBC被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隐蔽受体多凝集血样中的血清不与自身反应)2. 获得性B产生的主要机理二、ABO正反定型不符的问题分析（一）ABO定型问题经常发生的情况为：1. 明显缺失应该出现的抗-A或抗-B：(1) 新生儿血样(2) 免疫缺陷、免疫紊乱(3) 前带现象(4) 血型型物质过多(5) 抗原太弱，常规方法检查不出来，相应血清中无抗体(6) 亚型，反应是混合视野2. 由于试剂被污染，或试剂中有额外抗体3. 明显多出抗原(或多出抗体)(1) 亚型，如A2型可能血清中有抗-A1(2) 自家凝集(3) 获得性B（二）引起ABO正反定型不一致的原因分析1. 技术因素：(1) 试剂贮存不当(2) 使用技术错误(3) 使用错误的试剂(4) 使用污染或失效的试剂(5) 离心速度不当2. 存在IgM性质的自家冷抗体由于自家冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自家溶血的病人，在低于37℃时血细胞自发凝集，影响正反定型。
ABO定型及配血不合的分析讲课文档
➢ 唾液中血型物质为多糖类－－半抗原，能特异地与相应 抗体结合，从而抑制该抗体与相应红细胞发生凝聚。
➢ 意义：可作为判断血型的辅助依据。可鉴定抗体性质。
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O型筛选红细胞的应用
➢ 试验系统被污染。
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次测交叉配血不相合的原因（一）
➢ 供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的 抗体。
➢ 病人与供血者的ABO血型不相合。 ➢ 病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人
球蛋白试验阳性。
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主侧配血不相符原因分析（一）
现象
可能原因
解决方案
主侧：＋
病人或供血者ABO错误
自身 １＋
＊：可能血型 Ｏ 第32页，共47页。
亚型抗体引起的正反定型不符
正定型
反定型
抗Ａ 抗Ｂ 抗ＡＢ Ａ细胞 Ｂ细胞 O细胞
４＋ ４＋ ４＋ １＋ －
－
＊：可能血型 A2B 抗A1抗体
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自身 －
疑难配血及原因分析
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常规配血技术
➢ 选择的技术不仅要能检查出不配合的IgM抗 体，还必须能检查出尽可能多的不配合的 IgG抗体。最大限度的减少抗体的漏检。
➢ 病人血清中存在自身抗体，与供血者红细 胞上的相应抗原反应。
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主侧交叉配血不相合的原因
➢ 供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗 球蛋白试验阳性。
➢ 病人血清不正常，如白蛋白／球蛋白比例 不正常引起缗钱状假凝集，血清中存在高 分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性（用 盐水添加试验来解决）。
ABO疑难定型
ABO疑难定型一、 ABO疑难血型判断的方法（一）正反定型：正定型： -A, -B ， -AB, -H, -A1反定型： Ac, Bc, Oc,自己比较1.ABO正定型中各种试剂用途疑难定型中正定型用抗血清抗-A 及抗 -B抗-AB: 确认弱 A 和弱 B 抗原 , 与弱 A 及弱 B 抗原亲和力强 , 会产生强反应抗-H: 用于检查亚型及孟买型 , A 亚型红细胞上的 H 抗原多于正常 A 型抗-A1: 用于 A 亚型 ( 如 A2, A3) 检测2.H抗原在红细胞上的分布3.ABO反定型中各种试剂的用途反定型中试剂红细胞的意义A及 B细胞 : 确认抗 -A 或抗 -B 抗体O型红细胞 : 检查可否存在ABO系统以外抗体搅乱ABO反定型自己比较 :用于确认正反定型结果的有效性, 消除自己抗体对定型的搅乱( 如冷凝集等 )A2细胞 :用于亚型的判断,特别是在思疑是 A 亚型且又存在抗 -A1 抗体的情况下（二）型物质测定型物质准备： 1~2ml 唾液，开水煮10 分钟，离心后获得的上清。
标清的调制：标清用盐水稀释至其效价为1：16中和：将 0.5ml 型物质与调制后的标清0.5ml 等体积混杂 , 室温放置 30 分钟检测：用 Ac 检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.结果判断：若是抗-A 被中和，则被检者为 A 型，若是抗 -B 被中和，则被检者为B 型。
每隔（三）吸取放散吸取用 RBC：盐水冲洗 5 次的被检者压积RBC 1ml。
吸取用的标准血清将压积 RBC和标清按等体积比率混杂，在相应的温度条件下（15 分钟混匀一次4℃）孵育 1 小时，用盐水冲洗孵育后的细胞 6 次，获得压积RBC，加入等量盐水。
56℃水浴震荡10 分钟，离心获得上清即为放散液。
用标准试剂红细胞检测放散液。
（四） O型精选红细胞的应用抗原组成 : 三组合细胞 , 要求必定具备全部的Rh因子I: O型R1R1(CDe/CDe); II:O型R2R2(cDE/cDE); III: O型rr(cde/cde)用途 :用于受血者、献血员及孕产妇等的ABO系统以外不规则抗体的精选目的 :在配血从前,有针对性、按比率的去搜寻与带有抗体的病人相当合的血（五）自家冷凝集血样的ABO定型正定型用红细胞的准备:血样采集后 , 马上离心 , 获得压积红细胞用 37℃温盐水冲洗红细胞45℃热放散 3 分钟巯基试剂办理 :破坏IgM抗体自家冷凝集血样的ABO定型反定型用血浆或血清的准备血样采集后放置4℃冰箱静置24 小时 , 使红细胞充分吸取自己冷凝集抗体用自己红细胞吸取去除自己冷抗体用 O型红细胞吸取去除ABO系统以外的非特异性及特异性抗体（六）获得性B1.获得性 B 及多凝集现象获得性 B:肠凌乱及感生病人 , 细菌酶影响 A 抗原的受体肠内壁通透性增加 , 此后细菌多糖吸附在红细胞表面多凝集现象 : 异常或变形的 RBC被全部正常人的血清凝集( 微生物酶作用裸露或激活膜隐蔽受体多凝集血样中的血清不与自己反应)2.获得性 B 产生的主要机理二、 ABO正反定型不符的问题解析（一） ABO定型问题经常发生的情况为：1.明显缺失应该出现的抗 -A 或抗 -B ：(1)再生儿血样(2)免疫弊端、免疫凌乱(3)前带现象(4)血型型物质过多(5)抗原太弱，老例方法检查不出来，相应血清中无抗体(6)亚型，反应是混杂视野2.由于试剂被污染，或试剂中有额外抗体3.明显多出抗原 ( 或多出抗体 )(1)亚型，如 A2型可能血清中有抗 -A1(2)自家凝集(3)获得性 B（二）引起ABO正反定型不一致的原因解析1.技术因素：(1)试剂储藏不当(2)使用技术错误(3)使用错误的试剂(4)使用污染或无效的试剂(5)离心速度不当2.存在 IgM 性质的自家冷抗体由于自家冷抗体 ( 冷凝集病 ,CHD)而以致自家溶血的病人，在低于 37℃时血细胞自觉凝集，影响正反定型。
ABO疑难血型三步鉴定法
ABO疑难血型的三步分析鉴定法
第一步：排除人为因素或操作失误。
1.重新采集血样重新规范化采集抗凝血和不抗凝血两管。
2.核对试剂，器材核对试剂，仔细阅读试剂说明书和有效期；检查离心机及其他器材
3.复查AB0血型，排除人为因素或操作失误造成的AB0正、反定型不一致。
第二步：查阅临床资料，逐条分析对照可能导致ABO正反定型结果不一致的原因(表一)，或逐条分析排除不可能的原因，然后归纳总结不能排除的原因。
1.患者年龄、性别。
2.家系。
3.临床治疗用药史、输血史、造血干细胞移植史。
4.临床诊断。
第三步：根据逐条分析排除不可能的原因，归纳总结不能排除的原因，或最可能的原因，设计针对性验证实验。
表一ABO正反定型结果不一致的分类。
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ABO疑难定型范道旺单位：北京市红十字血液中心摘要： ABO系统是唯一一个在红细胞上缺乏相应抗原的情况下其血清或血浆中存在对应抗体的最重要的血型系统。
因此ABO定型必须进行正反定型并且正反定型结果相一致的前提下才能准确鉴定ABO血型。
在正定型试验中，一般我们使用抗-A和抗-B来检测红细胞上是否存在A和/或B抗原，反定型试验中使用A和B型标准试剂红细胞来检测血清/血浆中是否存在抗-A和/或抗-B抗体。
一般而言，正反定型的结果互相一致。
但在一些特殊的情况下，正反定型的结果相互不一致，在本文中分析了ABO正反定型不一致的原因，并对不同的原因加以分析解决，即分别在正定型和反定型中增加一些试剂来更进一步的细化检测红细胞上的抗原和血清/血浆中可能出现的抗体，并通过型物质测定及吸收放散等方法来准确定型。
关键词：ABO定型疑难定型解决方案一、ABO疑难血型鉴定的方法（一）正反定型：正定型：-A, -B，-AB, -H, -A1反定型：Ac, Bc, Oc, 自身对照1.ABO正定型中各种试剂用途疑难定型中正定型用抗血清抗-A及抗-B抗-AB：确认弱A和弱B抗原,与弱A及弱B抗原亲和力强,会产生强反应抗-H：用于检查亚型及孟买型, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型抗-A1：用于A亚型(如A2, A3)检测2.H抗原在红细胞上的分布3.ABO反定型中各种试剂的用途反定型中试剂红细胞的意义A及B细胞：确认抗-A或抗-B抗体O型红细胞：检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型自身对照：用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等)A2细胞：用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下（二）型物质测定型物质准备：1~2ml唾液，沸水煮10分钟，离心后得到的上清。
标清的调制：标清用盐水稀释至其效价为1：16中和：将0.5ml型物质与调制后的标清0.5ml等体积混合,室温放置30分钟检测：用Ac检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.结果判断：如果抗-A被中和，则被检者为A型，如果抗-B被中和，则被检者为B型。
（三）吸收放散吸收用RBC：盐水洗涤5次的被检者压积RBC 1ml。
吸收用的标准血清将压积RBC和标清按等体积比例混合，在相应的温度条件下（4℃）孵育1小时，每隔15分钟混匀一次用盐水洗涤孵育后的细胞6次，得到压积RBC，加入等量盐水。
56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。
用标准试剂红细胞检测放散液。
（四）O型筛选红细胞的应用抗原组成：三组合细胞,要求必须具备全部的Rh因子I：O型R1R1(CDe/CDe); II:O型R2R2(cDE/cDE); III：O型rr(cde/cde) 用途：用于受血者、献血员及孕产妇等的ABO系统以外不规则抗体的筛选目的：在配血之前,有针对性、按比例的去寻找与带有抗体的病人相配合的血（五）自家冷凝集血样的ABO定型正定型用红细胞的准备血样采集后，立即离心，获得压积红细胞，用37℃温盐水洗涤红细胞，45℃热放散3分钟巯基试剂处理：破坏IgM抗体自家冷凝集血样的ABO定型反定型用血浆或血清的准备血样采集后放置4℃冰箱静置24小时,使红细胞充分吸收自身冷凝集抗体用自身红细胞吸收去除自身冷抗体用O型红细胞吸收去除ABO系统以外的非特异性及特异性抗体（六）获得性B1.获得性B及多凝集现象获得性B：肠紊乱及感染病人, 细菌酶影响A抗原的受体肠内壁通透性增加,而后细菌多糖吸附在红细胞表面多凝集现象：异常或变形的RBC被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隐蔽受体多凝集血样中的血清不与自身反应)2.获得性B产生的主要机理二、ABO正反定型不符的问题分析（一）ABO定型问题经常发生的情况为：1.明显缺失应该出现的抗-A或抗-B：(1) 新生儿血样(2) 免疫缺陷、免疫紊乱(3) 前带现象(4) 血型型物质过多(5) 抗原太弱，常规方法检查不出来，相应血清中无抗体(6) 亚型，反应是混合视野2.由于试剂被污染，或试剂中有额外抗体3.明显多出抗原(或多出抗体)(1) 亚型，如A2型可能血清中有抗-A1(2) 自家凝集(3) 获得性B（二）引起ABO正反定型不一致的原因分析1.技术因素：(1) 试剂贮存不当(2) 使用技术错误(3) 使用错误的试剂(4) 使用污染或失效的试剂(5) 离心速度不当2.存在IgM性质的自家冷抗体由于自家冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自家溶血的病人，在低于37℃时血细胞自发凝集，影响正反定型。
可用DTT或2-ME来处理细胞及血清来解除此种IgM抗体引起的干扰。
血清的反定型可在37℃进行，用O型红细胞作为对照。
3.抗原表达弱或缺失：(1) A、B抗原的表达可在下述情况下被抑制：a.白血病b.双胞胎c.H基因变异(2) A、B抗原表达太弱：由于A、B抗原表达太弱，与抗-A或抗-B不反应，但确实存在A或B抗原，因此血清中无相应的抗体。
4.高水平可溶性血型物质的病人：极少数有卵巢囊肿的妇女，由于含高浓度的可溶性血型物质，使抗原减弱或消失，此血型物质分泌进入血液可以中和抗-A或抗-B。
当使用未洗涤的RBC用于ABO 定型时，型物质就会中和抗-A或抗-B，引起假阴性反应。
5.混合视野：(1) 来自近期输注非ABO同型红细胞病人的血样(2) 骨髓移植后不久(3) Tn或A3型红细胞6.缺失或弱抗-A、抗-B(1) 新生儿血清(2) 免疫缺陷、紊乱病人(3) 老年人7.前带现象当抗-A或抗-B的效价（如35000）IgG太高时, 立即离心法与A 或B细胞不反应。
解决方法：(1) EDTA抗凝血浆结合钙(2) 使用EDTA保存液悬浮细胞(3) 将血浆于56℃灭活补体(4) 血浆或血清用盐水1:10稀释8.多凝集：多凝集红细胞，具有不正常的膜结构，可被正常成人血清凝集。
起因是微生物酶引起膜的改变，以及膜上糖基合成不完善。
9.不正常血清蛋白：白蛋白/球蛋白比例失调的血清引起红细胞产生缗钱状假凝集。
10. 血样血清中存在抗试剂成分的抗体：如抗防腐剂的抗体、抗EDTA 的抗体等，此种抗体可以通过将红细胞洗涤而解除。
三、解决ABO定型不一致的指导原则（一）出现弱反应或缺失抗原的解决方案出现弱/缺失抗原的可能情况1.A亚型、B亚型或AB亚型2.疾病状态：如白血病导致A或B抗原减弱，何杰金病（Hodgkin’s）有时会抑制抗原表达，与白血病类似。
3.过量的血型物质：由于某种疾病（如腹腔癌、胰腺癌、卵巢囊肿）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗－A或抗－B抗体，引起正定型为假阴性或弱阳性。
通过洗涤红细胞可解决此问题。
4.获得性B5.抗－A或抗－B试剂中存在低频抗原的抗体出现弱/缺失抗原的解决措施1.洗涤RBC且延长孵育时间进行试验，如果使用洗涤红细胞后反应加强，则考虑是型物质的抑制2.酶处理红细胞再次试验3.吸收放散确定是否是亚型。
4.了解输血史(尤其是O型红细胞输注)来分析混合视野5.了解病情诊断（尤其是白血病）6.了解是否是骨髓移植受者7.了解是否是双胞胎8.是否使用从前未使用过的单克隆抗体血清进行了血型鉴定9.分泌型型物质检查10. 进行玫瑰花试验来确定是否混入其它红细胞，或进行细胞分离11. 如果是弱A或弱B遗传，则检查红细胞上H抗原的表达患者的正定型与正常反应强度相比属于减弱的反应。
从反定型中可以看出，患者血清中不存在ABO系统以外的抗体干扰，也不存在自身抗体的干扰，因和B细胞产生反应，表明红细胞上可能具有A抗原。
在正定型中与国产的单克隆抗-A无反应活性，而和抗-AB有弱反应，暗示A亚型的可能。
通过吸收放散、型物质检查确认A亚型。
可能是A3.（二）出现弱反应或缺失抗体的解决措施出现弱反应或缺失抗体由四种情况引起1.年龄：新生儿及老人。
2.低球蛋白血症：如白血病人、使用免疫抑止药物、低球蛋白的淋巴瘤病人（恶性）、骨髓移植后病人。
3.丙球缺乏血症：如免疫缺陷病人4.双胞胎嵌合体解决方案1.延长反应时间2.于室温及4℃检查血清中的抗体。
用A、B、O及自身红细胞进行检查3.于室温及4℃检查血清中抗体。
用酶处理的A、B、O及自身细胞进行检查。
可能需要在试验前进行冷抗体的自身吸收4.确定病人年龄及临床诊断（如新生儿、免疫病）5.确定输血史（非ABO同型的血浆输注）补充试验：正反定型分别在室温及4度孵育30分钟可能血型为O型，但具有低效价的抗-A（三）出现多余抗原（额外抗原）的解决方案出现多余抗原的可能情况1.抗原发生改变：（1）获得性B：肠道疾病患者，细菌作用导致（2）多凝集现象：红细胞被掘大多数人的正常血清凝集2.红细胞已经被抗体包被：如自家免疫溶血性贫血、输血反应及HDN。
3.非抗－A及抗－B的抗体与相应抗原形成复合体吸附在红细胞表面，引起正定型非特异性凝集。
（洗涤红细胞）如抗血清添加剂：染料的抗体与抗体结合附着在红细胞表面导致。
4.混合视野：非同型输注，如O型红细胞给其他型输用，非ABO 同型的骨髓移植，A3亚型等。
5.低频率抗原抗体反应：定型血清中的存在低频抗原的抗体，与对应的低频抗原产生阳性反应。
解决措施1.将红细胞洗涤再进行试验，确定是否是病人或献血员的血清中存在针对ABO定型试剂成分的抗体2.用O型及自家红细胞于室温检查病人血清，确定血清中是否有冷自家抗体，如果有，则用2ME或DTT处理。
3.用不同厂家的试剂检查洗涤的红细胞4.了解病人的临床诊断5.如果怀疑是获得性B，则用酸化的抗-B检查6.进行ABH分泌型型物质检查7.如果用多克隆抗-A检查结果是混合视野，则用蛋白酶处理RBC 试验，考虑是否是多凝集解决方案: 询问病史,尤其是下消化道疾病，用酸化的抗-B(pH 6.0)检查在反定型试验中可以看出，O型红细胞和自身对照皆为阴性，表明反定型试验结果可靠，即为O型。
而在正定型试验中均为阳性，可能出现的阳性反应不属于ABO系统的抗原抗体反应。
需要了解定型血清是否是人血清来源，并了解被检者的疾病诊断，使用非人血清来源的标准定型血清来进行正定型。
可能血型为O型的多凝集现象。
可能血型Ｏ,由于抗-B染料丫啶黄和标清中的相应抗体形成复合物附着在红细胞表面，造成正定型中出现和红细胞产生3+的非特异性阳性反应。
（四）出现额外抗体：产生未知的抗体反应的可能情况1.蛋白或血浆不正常引起的缗钱状凝集：血清蛋白浓度异常，球蛋白浓度由于疾病而升高（多发性骨髓瘤），原发性居球蛋白血症，纤维蛋白原浓度升高，血浆扩容剂的使用以及何杰金氏淋巴瘤，新生儿脐血中的华通氏胶。
2.冷反应性自身抗体：存在ABO系统的意外抗体：如A2或A2B个体血清中可能存在天然抗－A1，顺式AB人群中弱的抗-B,导致反定型试验多出抗体。