ABO血型鉴定操作规程(试管法)
试管法鉴定ABO血型标准操作规程
试管法鉴定ABO血型标准操作规程
1、目的
为规范输血科ABO血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。
2、适用范围
本文件适用于本院输血科ABO血型鉴定的操作过程的规范化管理。
3、方法及原理
3.1方法：试管凝集法
3.2原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。
4、试剂
4.1血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）；
4.2 5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；
4.3受检者血清或血浆；
4.4受检者5%红细胞盐水悬液;
5、样本采集及处理
用一次性EDTA-K2真空采血管抽取静脉血1ml，将标示有患者姓名、性别、年龄、住院号、病室/门急诊、床号等信息的标签贴在标本管上，。
检验科ABO及RH血型标准操作规程
检验科ABO及RH血型标准操作规程1.【目的】确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。
2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。
3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。
1.25%A、B及O型试剂红细胞悬液。
1.3受检者血清。
1.4受检者5%红细胞盐水悬液。
2.RH 2.1IgG型抗D标准血清。
2.25%D阳性红细胞生理悬液。
2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。
4.【测定原理】ABO血型鉴定：生理盐水凝集法一试管法常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。
常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。
②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。
结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。
RH鉴定：红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。
虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。
Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。
5.【操作步骤】ABO鉴定步骤：1.试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。
2.标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。
3.分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。
4.取出试管后用手指轻弹试管底，若沉淀物成团漂起，表示发生凝聚现象；若试管内沉淀物恢复悬液状态，表示无凝集现象。
ABO 血型鉴定操作规程
1.0 原理ABO 血型鉴定操作规程2.03.04.05.0 5.1 5.26.0 6.16.2 6.36.4 6.5 6.66.77.0 7.1 根据红细胞上和血清（或血浆）中有无 A 抗原和（或）B 抗原及其抗体，将血型分为A 型、B 型、AB 型及 O 型。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定 ABO 血型。
正定型正定是指用已知抗-A、抗-B 血清来检测受检红细胞上有无相应的 A 抗原和（或）B 抗原；反定型反定是指用已知 A1型、B 型红细胞来检测受检血清（或血浆）中有无相应的抗-A 和（或）抗-B。
原始样品要求5 mL 静脉全血。
样品容器和添加剂真空试管，EDTA.K2抗凝/普通试管，不抗凝。
检测环境要求温度：18℃～27℃，湿度：30%～70%。
所需材料和设备设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。
材料抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水（NS）、干净空试管。
检测操作过程将受检标本以 1000g 离心 5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用 NS洗涤三次后，配成 3%～5%红细胞悬液。
取 6 支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。
在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各 50 L ，其余管加入受检血浆/血清各100 L 。
在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者 3%～5%红细胞悬液各 50 L ，摇匀。
在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入 A1、B、O 红细胞试剂各 50 L ，摇匀。
1000g 离心 15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。
根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在 4℃、37℃下观察结果。
结果判断凝集强度判断标准见表 1。
表1 凝集强度判断标准表凝集强度4+3+2+1+±-或θMFpHH判断标准红细胞凝集成一大块，液体背景透明，无游离红细胞数个大凝集块，液体背景透明，无游离红细胞有很多小凝集块，液体背景透明，无游离红细胞有许多很小的凝集块，肉眼可见，液体背景不透明，有游离红细胞微小的凝集块，肉眼很难看清，需要用显微镜观察无凝集，无溶血，全是游离红细胞混合凝集外观，镜下可见少数红细胞凝集，而大部分是游离红细胞部分溶血完全溶血7.2 ABO 血型结果判断见表2：正定型抗-A 血清血抗-B 血清血Ac表 2 2 血型结果判断表反定型定Bc Oc自身对照血型＋――＋―＋―＋―＋＋―＋―＋―――――――――ABOAB7.37.48.09.010.0注：“＋”表示凝集或溶血；“―”表示不凝集。
试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程
试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程一、目的为规范ABO和RhD血型鉴定的技术操作，保证鉴定结果准确及临床输血安全有效。
二、适用范围适用于试管法进行ABO和RhD血型鉴定。
三、原理1、单克隆抗-A、抗-B试剂与受检者红细胞反应作为正定型，A、B、O型试剂红细胞与受检者血清（血浆）反应作为反定型，以检测受检者红细胞上的A、B抗原及血清（血浆）中抗-A、抗-B。
根据受检者红细胞表达的A、B抗原及血清（血浆）中抗-A、抗-B情况判断ABO血型。
2、单克隆抗-D试剂与受检者红细胞反应，检测受检者红细胞是否表达D抗原，根据结果判断RhD血型。
四、设备与试剂设备：普通离心机，血型血清学专用离心机，显微镜试剂：单克隆抗A抗B抗D试剂，3%-5%的A、B、O红细胞五、环境条件室温控制在18-27℃，湿度保持在30%-70%。
六、步骤和方法1、将受检者血标本离心分离血清（血浆）及压积红细胞，取压积红细胞30—50微升加生理盐水1毫升稀释成3%—5%红细胞悬液。
2、取干净试管6支，正定型分别标记为抗-A、抗-B，反定型分别标记Ac、Bc、Oc另标记抗-D，在标记为抗-A、抗-B、抗-D的3支试管中分别加入相应的单克隆试剂2滴约100微升，再各加入受检者3%—5%红细胞悬液1滴约50微升；在标记为Ac、Bc、Oc的3支试管中各加入受检者血清（血浆）2滴约100微升，再分别加入相应的A、B、O型试剂红细胞1滴约50微升，轻摇使试管内反应物混匀。
用血型血清学专用离心机120g离心1 min后观察结果。
3、首先观察有无溶血现象，然后轻轻转动试管，边转动边观察有无凝集，使沉于管底的红细胞全部悬浮。
如肉眼观察不能确定有无凝集时须在显微镜下观察确定。
4、结果判断4.2 ABO血型鉴定结果判定规则，如下表：4.3 RhD血型判定：红细胞与单克隆-D试剂凝集为RhD阳性，无凝集为RhD阴性。
七、质量控制单克隆抗-A、抗-B、抗-D试剂在有效期内使用，每批次在使用前应检测特异性和效价。
ABO和RH血型鉴定操作规程4
ABO和RH（D）血型鉴定操作规程一、目的：规范ABO和RH(D)血型鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。
二、适用范围：适用于血库ABO和RH（D)血型鉴定三、所需材料和设备:1、材料：抗—A、抗—B、抗—D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞,生理盐水，滴管，患者标本。
2、设备：离心机，显微镜.四、操作规程1、试管法:（1）取洁净试管3支，分别标明抗A、抗B及抗D,分别加入抗A、抗B及IgM抗D 单克隆血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5％红细胞生理盐水悬液1滴,轻摇混匀。
（2）另取洁净试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血浆1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液1滴,轻摇混匀。
（3）立即以1000r/min离心1分钟后将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(溶血）现象。
如肉眼不见凝集,应将反应物取置于玻片上，再以低倍显微镜检查。
（4）观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度，有助于A、B亚型,类B或嵌合体血型的发现。
2、玻片法：(1) 取血型鉴定专用玻璃板一块，在凹孔旁分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B及抗D单克隆血清1滴，再各加受检者5%红细胞悬液1滴,混匀。
(2）标明A、B及O细胞，分别加入受检者血浆1滴,再各加入A、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀.（3）轻轻转动玻板，使血清与红细胞充分混匀,连续15分钟以肉眼观察有无凝集(溶血)反应。
有需要时也可用低倍显微镜观察结果.(4) Rh（D）血型鉴定时应作阳性对照及阴性对照。
3、结果判断:4、凝集强度判断:4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰;2+ 红细胞凝块分散成许多小块,背景可见到游离红细胞；1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；+—镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；混合外观凝集是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；-阴性镜下未见凝集，红细胞均匀分布.5、报告实验结果，并保存受检标本：一般保存一周以上6、注意事项6。
ABO、RH血型检测(试管法)标准操作规程
ABO、RH血型检测（试管法）标准操作规程【操作人员】经批准人授权的同志【部门主管】【质量控制员】【目的】保证测试结果的准确性。
【适用仪器范围】双目显微镜、普通离心机。
【该SOP变动程序】该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。
【应用范围】ABO、RH血型检测的手工操作。
【标本采集和处理】由临床科室采用真空负压EDTA K2抗凝管采集3ml-5ml，作好标记，立即送检。
检验人员认真核对患者姓名、性别、床号、检验目的以及标本是否与申请单一致。
确认无误后用专用记号笔在试管与申请单上编写对应数字序号，并按日期索引进行登记。
将标本置于台式离心机内，放置保证平衡，以1500转/min离心10分钟。
保证血浆于血球有效分离。
溶血标本应重采取、乳糜血及标本量不足应加以登记，溶血性疾病应注明。
【检查项目】一、ABO血型（一）原理根据红细胞上有或无A抗原或（和）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型和O 型四种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B 分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B 抗原；所谓反定型，是用已知A红细胞B 红细胞来测定血清中有无相应的抗-A 或（和）抗-B。
（二）试剂和材料1．抗-A（B 型血）、抗-B（A 型血）。
2．5％A 、B 试剂红细胞盐水悬液。
3．受检者血浆。
4．受检者5％红细胞悬液。
试剂可在室温2～8℃下避光保存至有效期。
（三）操作步骤1．试管法(1)正向定型a．取试管2支，分别标上A、B字样。
b．向A管滴加抗A分型试剂1滴，向B管滴加抗B分型试剂1滴。
c．向A、B管各滴加5％的待检红细胞悬液各1滴。
d．混匀（天冷时试管架置370C水浴箱15分钟）后配平衡，在离心机内1000转/min离心1分钟。
将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以低倍镜检查。
ABO血型鉴定操作规程
ABO血型鉴定操作规程ABO血型鉴定是一种常见的血液学检验方法，用于确定个体的血型类型。
ABO血型鉴定操作规程是指在进行ABO血型鉴定时应该遵循的步骤和操作规范，以确保检验结果的准确性和可靠性。
下面将介绍一份ABO血型鉴定操作规程，供参考。
一、实验室准备2.确保实验室环境清洁整洁，工作台面干净无异物。
3.检查试剂盒和试剂的有效期和保存条件，确保试剂的质量良好。
4.对实验室设备进行日常检查和维护，确保设备正常工作。
二、标本采集与处理1.根据要求收集患者的血样，确保标本采集过程无菌无误。
2.将标本装在标本采集管中并进行标注，确保标本不被混淆。
3.采用标本离心的方法分离血浆和红细胞，准备好把血浆和红细胞分开的离心管。
三、试剂的稀释与标记1.根据试剂盒的说明书和标准操作规程对试剂进行稀释和标记。
2.确保试剂的标记清晰明确，不混淆。
3.标记好试剂的试管，准备好用于分析的试管。
四、ABO血型鉴定实验过程1.将患者的血浆和稀释后的抗体试剂混合均匀。
2.通过凝集试验和沉淀试验等方法对混合后的血浆进行判断，确定患者的血型类型。
3.记录检验结果并进行复核，确保结果的准确性。
五、实验数据的记录和存储1.记录实验的时间、地点、操作人员等基本信息。
2.记录检验结果和分析过程，确保数据的完整和准确。
3.存储检验数据和样本，确保数据的可追溯性和保密性。
六、结果解读与报告1.根据实验结果进行血型鉴定，判断患者的血型类型。
2.根据实验结果填写并发放血型鉴定报告，包括患者姓名、血型类型、检验日期等信息。
以上就是一份ABO血型鉴定操作规程的简要介绍，希望对实验室工作人员在进行ABO血型鉴定时提供一定的参考。
在进行实验操作时要严格按照规程和标准操作程序进行，确保检验结果的准确性和可靠性。
ABO血型鉴定操作规程
1 目的指导工作人员进行ABO血型实验。
2 适用范围血型检验岗位工作人员3 职责负责送检标本ABO血型的检测工作。
4 【原理】ABO血型鉴定,是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。
同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或/和抗B。
【标本】1．静脉抗凝或不抗凝血1.5～2.0ml。
【器材】载玻片、滴管、小试管、台式离心机或微柱凝胶离心机、玻璃棒、蜡笔或记号笔、显微镜等。
【试剂】1.1 抗-A、抗-B试剂1.2 5%和10%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液1.3 受检者血清1.4 受检者5%和10%红细胞盐水悬液1.5 10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管【操作步骤】2.1 试管法2.1.1查抗原：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A和抗-B分型血清各 2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。
2.1.2查抗体：取洁净小试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。
用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。
2.1.3立即1000rpm离心(离心时间为离心机校准时间)。
2.1.4轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象,如肉眼观察不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜下观察有无凝集。
主题内容ABO血型鉴定操作规程生效日期：2010/10/23 第页共5页2.1.5 凝集强度判断标准4+=红细胞凝集成一大块,血清清晰透明；3+=红细胞凝集成几大块,血清尚清晰；2+=红细胞成中等大凝块,游离红细胞<1/2；1+=红细胞成小凝集块，游离红细胞>1/2；±=红细胞成微小凝集块，周围有很多游离红细胞。
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。
(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。
(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。
医院人ABO血型正定型标准操作程序
人ABO血型正定型标准操作程序
【项目名称】抗A、抗B血型鉴定
【实验用途】专用于鉴定人ABO血型
【标本种类】新鲜全血
【仪器和材料】抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）
【试剂稳定性】：原装试剂在2~8℃避光保存，有效期24个月【操作步骤】
①平板法（玻片法）：本品与受检者全血或10％红细胞生理氯化钠悬液按1:1使用，不必再稀释，按照有无凝集判定结果。
②试管法：本品与受检者5％红细胞生理氯化钠悬液按1:1使用，不必再稀释，摇匀，1000r/min离心1分钟或室温静置1小时，按
【注意事项】
①、对含有较多自身冷凝集素的受检者，在鉴定血型时往往被误定为AB血型，遇到此种情况，需用37℃生理氯化钠溶液洗涤受检者红细胞2-3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。
②、在做配型试验时，如发现有不配现象，则取受检者血清，用已知A或B血型红细胞进行反定型试验，以核实原鉴定的血型是否正确。
③、用立即试管法不能测出亚型（如Ax），需延长作用时间。
④、本品如出现浑浊或变色则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知A、B、O血型红细胞检查结果是否与已知血型相符，以防制品污染、变质失效，而造成鉴定错误。
⑤、试剂应在有效期内使用。
S006红细胞ABO血型(反定型)鉴定标准化操作规程
红细胞ABO血型（反定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用试管法检测红细胞ABO血型（反定型）。
三、原理用已知的A1、B、O标准红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。
四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(反定型)确认。
五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：A1、B、O试剂各1支， 10ml /支；5、贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻。
6、有效期：自检定合格之日起2个月；7、试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。
八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管3支，分别标明A1型细胞、B型细胞、O型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管，再分别用滴管加入A1、B、O型试剂红细胞悬液1滴。
2、，摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s。
3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
红细胞ABO血型（反定型）结果凝集强度判断对照表4、ABO血型（反定型）表现型反应格局表九、质量控制1、对新进批号的试剂应作亲和力与效价验定。
血型鉴定试管法的应用
目录
• 试管法血型鉴定的操作及注意事项 • ABO正反定型不符的原因分析及解决
方法
试管法ABO血型鉴定的操作步骤
• 试管法测定ABO血型 1、正定型 在2只分别标记抗A、抗B干净试管中分别加入相应的试剂；在每个试管中
各加1滴2-5%受检者的红细胞悬液；轻轻混匀，离心15秒（3400转/分），轻 轻重悬细胞扣，检查凝集情况；判读结果，与反定型结果比较。 • 2、反定型
ABO定型常见问题的解决方法
冷自身抗体 ➢ 用37℃温盐水洗涤红细胞、56℃热放散。 ➢ 巯基试剂(DTT、2-Me)处理红细胞。 ➢ 将血浆和红细胞分别在37℃孵育5-10分钟后 再进行试验。 ➢ 自身吸收、O型红细胞吸收吸收去除血浆中的 冷自身抗体
ABO定型常见问题的解决方法
室温反应的同种抗体 ➢ 用谱细胞做抗体鉴定。 ➢ 选择没有相应抗原的A、B细胞做反定型。 ➢ 常见抗体：MN、Lewis、P血型系统抗体。
蛋白凝集
蛋白凝集
盐水法——蛋白凝集
• 加生理盐水前
盐水法——蛋白凝集
• 加生理盐水后，凝集消失
ABO定型常见问题的解决方法
ABO亚型 ➢ 正定：抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1、抗-H ➢ 反定：A1c、A2c、Bc、Oc、自身对照 ➢ 吸收放散试验 ➢ 唾液型物质检测 ➢ 血型基因检测 ➢ 有条件者可作家系调查
实验程序
反应
条件
-A
IS
二次
多次
人源
ABO正定型
反应
-B
-A1
-AB 条件
Ac
4oC
ABO反定型
Bc
Oc
自身c
ABO血型定型试剂
抗-H
抗-H 用于检测ABO亚型及孟买、类孟买型。 ( A或B亚型H抗原增强，孟买 、类孟买H抗原阴性。) 注意：
ABO血型鉴定标准操作程序
SOP_10-1 ABO血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：血型鉴定。
三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1 原理：血清中常存在反应强的抗体，而红细胞上缺乏相应的抗原。
许多组织细胞上有规律地存在着A、B、H抗原，以及分泌型的分泌液中存在着A、B、H物质。
红细胞上的A/B /D抗原与抗B/A /D标准血清发生凝集反应。
ABO血型的分类及其与抗血清的反应：红细胞与抗血清反应表型红细胞上抗原血清中抗体抗A 抗BO 无抗A、抗B ――A A 抗B + ―B B 抗A ―+AB A、B 无+ +2 试剂：A、B、O标准血清；A、B、O定型红细胞；生理盐水。
3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTA－K2干粉）中，混匀后备用。
3.2 ABO血型盐水介质鉴定（试管法）：3.2.1制备患者3~5%的红细胞盐水悬液。
3.2.2 正定型：抗-A 抗-B 抗-A、B 标准血清(μl) 100 100 100受检者RBC悬液(μl) 50 50 503.2.3 反定型：Ac Bc Oc 定型红细胞(μl) 50 50 50受检者血清(μl) 100 100 1003.2.4混匀。
3.2.5 以1000r/min离心1min。
3.2.6 取出试管，轻摇，使沉管底的红细胞浮起，认真观察有无溶血和/或凝集。
3.3 ABO血型正反定型结果判断：分型血清+受检者红细胞受检者血清+试剂红细胞抗-A 抗-B 抗-A、B 受检者血型Ac Bc Oc + –+ A –+ ––+ + B + –––––O + + –+ + + AB –––3.4 正反定型不一致的原因：（1）技术和管理工作的错误①血样试管及玻片混淆②书写错误③红细胞过浓或过淡④未注意样品溶血现象⑤漏加试剂⑥未按试剂说明操作⑦试剂血清效价低、亲和力不强或污染/过期/失效⑧离心速度/温度改变（2）血清异常等其它原因①抗体：新生儿、老年人、白血病、肿瘤、免疫缺陷、骨髓移植、嵌合体双生子、异型输血交换、胎盘出血等引起的抗体改变。
血型鉴定的操作流程
ABO血型鉴定正定型原理：用已知特异性抗体（标准血清）检查红细胞上的未知抗原。
试管法的操作过程1、取2支洁净小试管，编号分别为抗A和抗B2、分别加入抗A和抗B标准血清各1滴3、取1支洁净试管，用标签纸注明病人姓名，科室、床号.配成5%的红细胞悬液。
4、将配好的红细胞悬液分别加入抗A和抗B的两个试管中各1滴。
5、混匀，将试管以3400转/分钟离心15秒。
6、将试管从离心机中取出，再以推拉旋转的正确手法轻轻摇动试管，使细胞悬浮观察有无凝集现象。
7、登记结果、签名。
ABO血型鉴定正定型原理：用已知血型的标准红细胞，检查血清中的未知抗体。
试管法的操作过程：1、取3支洁净的小试管，分别标明A细胞，B细胞、O细胞；2、分别加入受检者的血清各2滴；3、分别在3个试管中加入反定细胞A、B、O（既5%的A、B、O型标准红细胞盐水悬液）各1滴；4、混匀，将试管以3400转/分钟离心15秒；5、将试管从离心机中取出，在光照下观查是否有溶血、脂血等，再以推拉旋转的正确手法轻轻摇动试管，使细胞悬浮观察有无凝集现象并记录。
ABO血型正反定型结果判断Rh（D）血型鉴定试管法（盐水法）操作过程：1、取洁净小试管3支，分别标明阴、阳对照管和试验管；2、在3支试管中各加入RhD定型血清1滴；3、在实验管中加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，在阴、阳对照管中各加入Rh阴性和阳性5%红细胞盐水悬液1滴；4、混匀，以3400转/分秒离心15秒；5、观查结果:实验管凝集，即表示受检红细胞上有相应抗原；实验管不凝集，即表示受检红细胞上没有相应抗原。
不规则抗体筛检试验凝聚胺法操作过程：1、取3支洁净的小试管，分别标上“Ⅰ”“Ⅱ”“Ⅲ”；2、分别在3支试管中加入两滴受检者血清2滴；3、分别在3支试管中加入3~5%的筛选Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号细胞试剂各1滴，混匀以3400转/分钟，离心15S，看是否凝集；4、分别在3支试管中心0.65ml的Baso低离子溶液，放置室温1分钟；5、再分别在3支试管中心加入凝聚胺溶液两滴摇匀，以3400转/分钟，离心15秒，倒去上清液，不要沥干，让管底留0.1ml液体；6、轻轻摇动试管，且测红细胞有无凝集，（必须凝集，不凝集要重新做实验）；7、分别在3支试管中加入2滴“悬浮液”轻轻转动试管混合并同时观察结果，30S肉眼看是否凝聚。
ABO血型鉴定操作规程
ABO血型鉴定操作规程 SXYJ-GZ-02021目的规范ABO血型鉴定操作，正确进行ABO血型正、反定型。
2适用范围对献血者、患者进行检测。
3职责检测者负责按此程序进行ABO血型鉴定操作。
4材料与设备抗A、抗B、抗AB血清；A、B、O型试剂红细胞；0.9%无菌生理盐水；一次性使用滴管、试管、玻片；KUBOTA KA-2200型离心机、CH20BIMF200型电子显微镜等。
5操作方法5.1待检标本的准备及要求5.1.1待检标本准备两管血样，一管用EDTA抗凝，另一管不抗凝5.1.2血清：待检的不抗凝标本应退缩充分，用离心机离心并分离出血清5.1.3细胞：从待检的抗凝标本中吸出少量红细胞，用0.9%生理盐水充分洗涤三遍，配制成约3%红细胞盐水悬液（注：红细胞悬液的制备见注意事项7.1）5.2试验步骤5.2.1试管法5.2.1.1取洁净小试管2－3支，分别标明抗A、抗B（和抗AB），滴加相应抗血清各2滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者约3%红细胞盐水悬液1滴，混匀5.2.1.2另取洁净小试管3支分别标明Ac、Bc和Oc，分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别加入A、B和O型试剂红细胞悬液1滴，混匀5.2.1.33400转/分，离心15秒（KA-2200型离心机Ⅱ档）5.2.1.4将试管轻轻摇动，悬浮管底的红细胞，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象，如肉眼未见凝集，应将反应物倒在玻片上，以低倍镜观察。
5.2.1.5观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，有助于亚型、类B或cisAB等特殊血型的发现。
5.2.1.6凝集强度判断标准4+ 红细胞凝集成一个结实的凝集块，血清清晰透明3+ 红细胞凝集成几个大的凝块，血清尚清晰2+ 红细胞凝集成中等大的凝集块，背景清晰，周围可见到游离红细胞1+ 肉眼可见小凝集块，背景混浊，周围有较多游离红细胞±微小凝集，背景混浊mf 即混合凝集外观，指红细胞凝集大块与游离红细胞共存θ阴性，无凝集或溶血，镜下红细胞均匀分布PH 表示部分溶血，有一些细胞残留H 表示完全溶血，无残留细胞5.2.2玻片法5.2.2.1取清洁玻片一张（或血型纸一张）。
ABO血型鉴定——试管法
项目一ABO血型鉴定——试管法【申请单】请完成申请单所要求项目×××市人民医院检验申请单姓名性别年龄门诊号住院号诊断或症状检验标本检验目的送检科室医师送检日期年月日【方法选择】表1-1 血型鉴定方法方法玻片法试管法微柱凝胶血型卡法本次检查选择√√【材料准备】1.抗A血清。
2.抗B血清。
3.2% ~ 5%的A1型，B型红细胞盐水悬液。
4.如果需要，可增加抗A，B试剂和A2血型红细胞。
5.受检者2% ~ 5%的红细胞悬液。
6.玻片7.蜡笔8.显微镜【操作方法】1.正定型：检测红细胞上的A或B抗原。
①加1滴抗A到一支洁净试管中并标记；②加1滴抗B到一支洁净试管中并标记；③如果需要，可选做加1滴抗A，B到第三支试管，并标记；④向每一试管滴加1滴2% ~ 5%的待检红细胞悬液；⑤轻轻混匀，按照校准速度和时间离心，通常（900 ~ 1000）×g离心15秒；⑥轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；⑦观察、解释、记录试验结果，并与血清（血浆）试验结果对照。
2.反定型：检测血清或血浆中的抗体。
①取2支洁净试管，分别标记A1和B，分别向其中滴加2~3滴血清或血浆；②加1滴A1型试剂红细胞到标记A1的试管；③加1滴B型试剂红细胞到标记B的试管；④如果需要，加1滴A2试剂红细胞到一支已加入2 ~ 3滴血清或血浆的试管中，并做好标记；⑤轻轻混合试管内容物，按照校准速度和时间离心，通常（900 ~ 1000）×g离心15秒；⑥检查是否有溶血现象。
然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；⑦观察、解释、记录试验结果，并与红细胞试验结果对照。
【结果判定】1.红细胞试验中的凝集以及血清或血浆试验中的溶血或凝集均为阳性结果。
2.细胞扣重悬后表现为均匀的细胞悬液是阴性结果。
3.凝集强度判断标准见表1-1。
4.ABO定型的血清或血浆试验以及红细胞试验的解释见表1-2.5.如果红细胞定型试验与血清定型试验结果不一致，应通过进一步试验解决，然后才给出ABO血型结果。
ABO 血型鉴定标准操作程序文件
ABO 血型鉴定标准操作程序文件1、【实验原理】根据红细胞上有或无A 抗原或（和）B 抗原，将血型分为A型、B型、AB型和O型四种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定A B O 血型。
所谓正定型，是用已知抗A 和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原；所谓反定型，是用已知A红细胞B红细胞来测定血清中有无相应的抗A或（和）抗B。
2、【使用的标本种类和收集方法】2.1、受检者5％红细胞悬液红细胞悬液制备：采取受检者的红细胞，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水16滴（0.8ml）配成5％的红细胞悬液。
2.2、受检者血清采取受检着静脉血2-3ml，置水浴箱中至完全凝固，3000转/分钟离心5分钟，分离上层血清备用。
2.3、标本接收2.3.1、血型鉴定不接收临床送检标本（除外2.3.2规定内容）。
2.3.2、特殊急诊检验人员无法采血时，接收临床送检标本需登记采血护士姓名及送检护士姓名、并查对标本标签和检验单内容是否相符，如有不符可以拒收标本。
2.4、标本容器要求：洁净一次性塑料试管2．5、 5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液制备方法2.5.1、制备方法分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3 次，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水16滴（0.8ml）配成5％的红细胞悬液。
2.5.2、保存条件：配制好的5％的红细胞悬液在试管上注明红细胞血型及配制时间，2-8℃避光保存，有效期3天。
3、【使用的试剂】3.1、抗A 、抗B定型试剂（单克隆抗体）3.1.1、批准文号：3.1.2、生产厂家：3.1.3、保存条件：2-8℃避光保存，有效期内使用。
4、【仪器】4.1、仪器型号：4.2、仪器厂家：4.3、许可证号：4.4、仪器使用具体要求见离心机使用维护程序。
5、【操作步骤、报告结果】5.1、正定型：取清洁试管2支作好标记，分别加入抗A（蓝色）和抗B（黄色）标准血清各2滴。
试管法ABO血型鉴定
精心整理试管法 ABO血型判定1.查验目的判定供受血者ABO血型，保证临床输血安全。
2．查验方法试管法2.1. 试管法2.1.1. 实验原理ABO血型判定，是依据 IgM 类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原联合能出现凝聚反响的原理，用已知IgM 类特异性标准抗A和抗 B 血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和） B 抗原，同时用已知标准 A 型红细胞和 B 型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM 类抗 A或（和）抗 B。
2.1.2. 标本要求静脉 EDTA抗凝血 2.0 ～3.0ml ，以 3000r/min 离心 3 分钟，分别上清液。
2.1.3.试剂单克隆或多克隆抗A、抗 B 试剂， 3-5%A、B 及 O型试剂标准红细胞悬液。
2.1.4. 器械离心计， 4℃冰箱、显微镜， 12×70mm试管 ( 以下称“小试管” ), 滴管，10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管。
2.1.5.操作步骤2.1.5 ．1．正定型（查抗原）：取试管 2 支，分别注明抗A、抗 B，加入抗 A2 滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐和抗B分型血清各水悬液 1 滴，混匀。
精心整理2.1.5 ．2. 反定型（查抗体）：取试管3 支，分别注明 A 型、B型和 O型细胞。
用滴管分别加入受检者血清 2 滴于试管底部，再分别以滴管加入 A、B、O型 5%试剂红细胞悬液1 滴，混匀。
2.1.5 ．3. 立刻以 3000r/min 离心 10 秒。
（离心时间为离心计校准时间）。
2.1.5 ．4. 轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼察看有无凝聚（或溶血）现象 , 如肉眼察看不见凝聚，应将反响物倒于玻片上，再以低倍镜下察看有无凝聚。
2.1.5 ．5. 凝聚强度判断标准＋＋＋＋：红细胞凝聚成一大片或几片，仅有少量单个游离红细胞，血清清楚透明。
＋＋＋：红细胞凝聚成数个大颗粒凝块，有少量单个游离红细胞，血清透明。
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宁晋县中西医结合医院ABO血型鉴定操作规程
一．项目名称ABO 血型鉴定（正定型）
二．方法试管法
三．检验原理根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A或（和）抗B抗体，可以将红细胞血型分为A型、B型、O型和AB型。
根据抗A和抗B抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，可以鉴定ABO血型。
四．试剂上海血液生物医药有限公司
抗A血型定型试剂和抗B血型定型试剂（单克隆抗体）
五．标本采集抗凝或不抗凝的末梢血或静脉血均可，用生理盐水做成2-5%红细胞悬液六．操作
1 取试管2支并分别标注抗A和抗B。
2 抗A试管中加入抗A试剂一滴，在抗B试管中加入抗B试剂一滴。
3 在抗A、抗B试管中分别加入受检者2-5%的红细胞悬液一滴，混匀。
4 用离心机3400离心15秒。
5 检验是否有溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞
再悬浮。
6 观察凝集情况，并记录结果。
必要时借助显微镜。
7 许多红细胞亚型（如Ax）能在抗AB试剂的盐水中凝集，但与抗A不凝，在室温（23±3℃）中放置几分钟，可以增强反应，但放置时间不宜超过30分钟。
8 检验结果的解释
ABO血型反应格局表
正定型
血型抗A试剂抗B试剂
+ - A
- + B
- - O
+ + AB
七．检验方法的局限性
与反定型一起进行，正反定型不一致须进一步检查。
八．注意事项
1 对含有较多自身冷凝剂素的受检者，需要37℃的生理盐水溶液洗涤受检者红细胞2-3
次，去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后在鉴定血型。
2 新生儿的血样中抗体含量较低，抗原发育不完全。
同时可能含有母亲血液中的抗A
或抗B抗体，可能导致假阳性或假阴性的出现。
3 出现ABO正反定型不符，须查明原因并解决问题后在记录结果。