海藻酸钠降解菌株的筛选

1. 碳源种类
发酵培养基分别以琼胶、淀粉、海藻酸钠和卡拉胶作为唯 一碳源，浓度为0.2%，其他物质含量不变。
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2.碳源浓度 在发酵培养基中分别添加浓度为0.1%、0.3%、0.5%、 0.7%、0.9%的海藻酸钠，其他物质含量不变。 3.氯化钠浓度 在发酵培养基中分别添加浓度为0.5%、1.0%、1.5%、 2.0%和2.5%的氯化钠，接其他物质含量不变。
实验结果---生长曲线和酶活曲线

由图可以看出，菌株11在3 h后开始进入对数生长期， 并于30 h达到最大生物量。随后，随培养时间延长， 该菌很快开始衰亡。
实验结果---生长曲线和酶活曲线


由图4可以看出，菌株11的酶活曲线在开时3h后呈增 长趋势，并在27h达到最大活性，随后，随培养时间 延长，酶的活力开始降低。 菌株11的酶活曲线与生长曲线基本吻合，即菌株11 生长和产酶基本一致。
致谢


本论文是在姚子昂老师和吴海歌老师的悉心指 导下完成的。他们以敏锐的学术思想、从课题 的选题、实验设计到论文撰写过程都给予正确 的引导和帮助。感谢高凤山老师对我论文的评 阅。在论文完成过程中，我得到了张玉娟、何 宇、高征等师兄师姐的帮助和指导，在此对他 们表达真挚的感谢。 最后，感谢四年的大学生活，感谢学院所有老 师四年来对于我的关心和爱护。
因此通过各种降解方法制备的褐藻胶寡糖在糖 化学、糖生物学、糖工程及糖类药物研究领域 具重要的研究价值。

选题依据和意义

目前褐藻胶寡糖的获取方法主要应用酶解法， 它是一种条件温和、 可控性强和特异性高的 生物降解方法,在寡糖制备各方面明显优于化 学和物理降解。
选题依据和意义

本实验利用微生物作用于海藻酸钠得到降解酶
研究背景

由于海藻酸钠具有凝胶性强，粘度大，水溶性
较差，不容易被吸收等特点，限制了海藻酸钠 许多其他方面的应用，所以具有多种生理活性 的褐藻胶多糖降解产物---褐藻胶寡糖 (Alginate Oligosaccharides，AOS)逐渐进 入人们的视野。
研究背景

褐藻胶寡糖是一类新型生物制剂， 具有可自 然降解、不污染环境和无残留等优点。近年来， 通过对褐藻胶寡糖生物活性的研究发现：褐藻 胶寡糖具有整肠和解毒、降血糖血脂、抗凝血、 抗炎、免疫调节等作用。
实验方法


4.pH 在发酵培养基中，分别按6.0、6.4、6.8、 7.2、7.6调节培养基的pH，接其他物质含量 不变。 5.蛋白胨浓度
在发酵培养基中分别添加浓度为0.1%、0.3%、 0.5%和0.7%的蛋白胨，接其他物质含量不变。
实验结果---菌株筛选

本实验初筛后分离得到10多株能够产海藻胶裂解酶的 细菌，通过比较菌落周围透明圈与菌落的直径比值以 及透明圈的透明度，选择菌株11为后期的实验菌。
实验结果--蛋白胨浓度对菌株产酶影响

由图可以看出，在培养基中蛋白胨浓度为0.3％时， 菌株11的产酶活力最高，因此选择蛋白胨浓度0.3％ 的培养基为最适培养基。
讨论分析



1.从腐烂的海带上筛选出得到10多株能够产海 藻胶裂解酶的细菌，通过比较菌落周围透明圈 与菌落的直径比值以及透明圈的透明度，选择 菌株11为后期实验的出发菌株。 2.从生长曲线和酶活曲线可看出，菌株11 生 长和产酶活动基本一致。 3.通过对碳源种类、碳源浓度、氯化钠浓度、 pH、蛋白胨浓度等因素对菌株11产酶的影响 的分析，初步得产酶的最佳培养条件为：碳源 为海藻酸钠0.7%，氮源为蛋白胨0.3%，NaCl 2.5%，PH7.2。



1样品的处理 用无菌生理盐水系列稀释海带样品，取合适浓度 涂布，30 ℃，恒温培养72 h。 2初筛 以海藻酸钠作为唯一碳源分离和筛选海藻酸钠降 解菌，30 ℃恒温培养72h。 3复筛 将初筛得到菌株先接到斜面培养基活化，再挑取 2环接入复筛培养基中30 ℃，150 r/min，培养24 h，再进行测定。
并最终获得寡糖，通过诱导筛选出产酶量高、 酶活性强的优势菌株，测定其生长曲线和酶活 曲线,对其发酵条件进行优化研究。为大规模 生产海藻酸钠裂解酶奠定理论基础，对海藻胶
寡糖的应用具有推动作用，并且对进一步研究
海洋寡糖提供研究方向。
实验材料

腐烂的海带，取自大连开发区海贝广场海域
实验方法
一.筛选菌株
海藻酸钠降解菌株的筛选
指导教师：姚子昂 教授 答辩人：许媛丽
答辩内容



研究背景 选题依据和意义 实验材料 实验方法 分析讨论 致谢
研究背景

海藻酸钠 ---又名褐藻酸
钠、褐藻胶，是一种来 源于海洋褐藻的阴离子 酸性多糖 ，是海带中提 取的由α-L-1 , 4古罗糖 醛酸(G)及β-D-1, 4甘露 糖醛酸(M)随机组合形成 的线性高分子量聚合物， 广泛应用于食品、医药 等方面。
实验结果---碳源种类对菌株产酶影响

由图可以看出,分别以相同浓度的琼胶、卡拉胶、海 藻酸钠和淀粉作为发酵培养的唯一碳源时，菌株11在 以海藻酸钠为唯一碳源时产酶活力高于其他，表明菌 株11所产的海藻胶酶为诱导酶。
实验结果---碳源浓度对菌株产酶影响

由图可以看出，在培养基中海藻酸钠浓度为0.7％时， 菌株11的产酶活力最高，因此选择海藻酸钠浓度为 0.7％的培养基为最适培养基。
二.测定高产菌株生长曲线和酶活曲线

1.生长曲线测定
每隔3h从种子液中取样按比浊法测定种子液的生 物量（以OD540 nm表示）。

2.酶活曲线测定 采用DNS法，1ml粗酶液和1ml海藻酸钠底物 40℃反应30min，加入2mlDNS沸水浴3min，冷 却，测540nm处OD值。
实验方法 三.产酶条件的研究
实验结果--氯化钠浓度对菌株产酶影响

由图可以看出，在培养基中氯化钠浓度为2.5％时， 菌株11的产酶活力较高于其他浓度，因此选择氯化钠 浓度为2.5％的培养基为最适培养基。
实验结果---pH对菌株产酶影响

由图可以看出，在培养基中的pH为7.2时，菌株 11的产酶活力明显高于其他pH，因此选择pH7.2 为最适pH。