海藻酸钠降解菌株的筛选

实验材料
腐烂的海带，取自大连开发区海贝广场海域
实验方法
一.筛选菌株
1样品的处理 用无菌生理盐水系列稀释海带样品，取合适浓度 涂布，30 ℃，恒温培养72 h。
2初筛 以海藻酸钠作为唯一碳源分离和筛选海藻酸钠降 解菌，30 ℃恒温培养72h。
3复筛 将初筛得到菌株先接到斜面培养基活化，再挑取 2环接入复筛培养基中30 ℃，150 r/min，培养24 h，再进行测定。
致谢
本论文是在姚子昂老师和吴海歌老师的悉心指 导下完成的。他们以敏锐的学术思想、从课题 的选题、实验设计到论文撰写过程都给予正确 的引导和帮助。感谢高凤山老师对我论文的评 阅。在论文完成过程中，我得到了张玉娟、何 宇、高征等师兄师姐的帮助和指导，在此对他 们表达真挚的感谢。
最后，感谢四年的大学生活，感谢学院所有老 师四年来对于我的关心和爱护。
答辩内容
研究背景 选题依据和意义 实验材料 实验方法 分析讨论 致谢
研究背景
海藻酸钠 ---又名褐藻酸
钠、褐藻胶，是一种来 源于海洋褐藻的阴离子 酸性多糖 ，是海带中提 取的由α-L-1 , 4古罗糖 醛酸(G)及β-D-1, 4甘露 糖醛酸(M)随机组合形成 的线性高分子量聚合物， 广泛应用于食品、医药 等方面。
实验结果---生长曲线和酶活曲线
由图可以看出，菌株11在3 h后开始进入对数生长期， 并于30 h达到最大生物量。随后，随培养时间延长， 该菌很快开始衰亡。
实验结果---生长曲线和酶活曲线
由图4可以看出，菌株11的酶活曲线在开时3h后呈增 长趋势，并在27h达到最大活性，随后，随培养时间 延长，酶的活力开始降低。
实验结果---pH对菌株产酶影响
由图可以看出，在培养基中的pH为7.2时，菌株 11的产酶活力明显高于其他pH，因此选择pH7.2 为最适pH。
实验结果--蛋白胨浓度对菌株产酶影响
由图可以看出，在培养基中蛋白胨浓度为0.3％时， 菌株11的产酶活力最高，因此选择蛋白胨浓度0.3％ 的培养基为最适培养基。
二.测定高产菌株生长曲线和酶活曲线
1.生长曲线测定
每隔3h从种子液中取样按比浊法测定种子液的生 物量（以OD540 nm表示）。
2.酶活曲线测定 采用DNS法，1ml粗酶液和1ml海藻酸钠底物 40℃反应30min，加入2mlDNS沸水浴3min，冷 却，测540nm处OD值。
实验方法
三.产酶条件的研究
1. 碳源种类
发酵培养基分别以琼胶、淀粉、海藻酸钠和卡拉来自百度文库作为唯 一碳源，浓度为0.2%，其他物质含量不变。
2.碳源浓度 在发酵培养基中分别添加浓度为0.1%、0.3%、0.5%、 0.7%、0.9%的海藻酸钠，其他物质含量不变。
3.氯化钠浓度 在发酵培养基中分别添加浓度为0.5%、1.0%、1.5%、 2.0%和2.5%的氯化钠，接其他物质含量不变。
研究背景
由于海藻酸钠具有凝胶性强，粘度大，水溶性 较差，不容易被吸收等特点，限制了海藻酸钠 许多其他方面的应用，所以具有多种生理活性 的褐藻胶多糖降解产物---褐藻胶寡糖 (Alginate Oligosaccharides，AOS)逐渐进 入人们的视野。
研究背景
褐藻胶寡糖是一类新型生物制剂， 具有可自 然降解、不污染环境和无残留等优点。近年来， 通过对褐藻胶寡糖生物活性的研究发现：褐藻 胶寡糖具有整肠和解毒、降血糖血脂、抗凝血、 抗炎、免疫调节等作用。
讨论分析
1.从腐烂的海带上筛选出得到10多株能够产海 藻胶裂解酶的细菌，通过比较菌落周围透明圈 与菌落的直径比值以及透明圈的透明度，选择 菌株11为后期实验的出发菌株。
2.从生长曲线和酶活曲线可看出，菌株11 生 长和产酶活动基本一致。
3.通过对碳源种类、碳源浓度、氯化钠浓度、 pH、蛋白胨浓度等因素对菌株11产酶的影响 的分析，初步得产酶的最佳培养条件为：碳源 为海藻酸钠0.7%，氮源为蛋白胨0.3%，NaCl 2.5%，PH7.2。
由图可以看出，在培养基中海藻酸钠浓度为0.7％时， 菌株11的产酶活力最高，因此选择海藻酸钠浓度为 0.7％的培养基为最适培养基。
实验结果--氯化钠浓度对菌株产酶影响
由图可以看出，在培养基中氯化钠浓度为2.5％时， 菌株11的产酶活力较高于其他浓度，因此选择氯化钠 浓度为2.5％的培养基为最适培养基。
实验方法
4.pH 在发酵培养基中，分别按6.0、6.4、6.8、 7.2、7.6调节培养基的pH，接其他物质含量 不变。
5.蛋白胨浓度
在发酵培养基中分别添加浓度为0.1%、0.3%、 0.5%和0.7%的蛋白胨，接其他物质含量不变。
实验结果---菌株筛选
本实验初筛后分离得到10多株能够产海藻胶裂解酶的 细菌，通过比较菌落周围透明圈与菌落的直径比值以 及透明圈的透明度，选择菌株11为后期的实验菌。
因此通过各种降解方法制备的褐藻胶寡糖在糖 化学、糖生物学、糖工程及糖类药物研究领域 具重要的研究价值。
选题依据和意义
目前褐藻胶寡糖的获取方法主要应用酶解法， 它是一种条件温和、 可控性强和特异性高的 生物降解方法,在寡糖制备各方面明显优于化 学和物理降解。
选题依据和意义
本实验利用微生物作用于海藻酸钠得到降解酶 并最终获得寡糖，通过诱导筛选出产酶量高、 酶活性强的优势菌株，测定其生长曲线和酶活 曲线,对其发酵条件进行优化研究。为大规模 生产海藻酸钠裂解酶奠定理论基础，对海藻胶 寡糖的应用具有推动作用，并且对进一步研究 海洋寡糖提供研究方向。
菌株11的酶活曲线与生长曲线基本吻合，即菌株11 生长和产酶基本一致。
实验结果---碳源种类对菌株产酶影响
由图可以看出,分别以相同浓度的琼胶、卡拉胶、海 藻酸钠和淀粉作为发酵培养的唯一碳源时，菌株11在 以海藻酸钠为唯一碳源时产酶活力高于其他，表明菌 株11所产的海藻胶酶为诱导酶。
实验结果---碳源浓度对菌株产酶影响