转移性结直肠癌循环肿瘤细胞的临床检测意义
关于循环肿瘤细胞(CTC)的一些认识
关于循环肿瘤细胞（CTC）的一些认识摘要：通常把进入人体外周血的肿瘤细胞称为循环肿瘤细胞（circulating tumor cell）。
随着人们对循环肿瘤细胞研究的深入，尤其是伴随现代检测技术的广泛应用，CTC逐渐被人们所重视。
循环肿瘤细胞的检测可有效地应用于体外早期诊断，化疗药物的快速评估，个体化治疗包括临川筛药、耐药性的检测，肿瘤复发的监测以及肿瘤新药物的开发等。
检测CTC 有着良好的应用前景，随着这一研究领域的不断发展，必将产生新的诊疗手段，从而使肿瘤的治疗提高到一个崭新的阶段。
关键词：循环肿瘤细胞；CTC；检测方法；临床意义早在1896年，Ashworth曾报道1例因癌症死亡的患者外周血中发现了类似肿瘤的细胞，并首次提出循环肿瘤细胞（circulating tumor cell, CTC）的概念[1]。
随着人们对循环肿瘤细胞研究的深入，尤其是伴随现代检测技术的广泛应用，CTC逐渐被人们所重视。
1、概述CTC指自发或因诊疗操作进入外周血循环的肿瘤细胞。
随着肿瘤细胞的不断增殖,部分细胞可以通过分泌一种抑制黏附因子表达的物质,增加其运动能力并使之与肿瘤母体脱离。
这些脱落的肿瘤细胞再分泌一种蛋白溶解酶，以破坏周边宿主结缔组织并进入脉管系统。
诊疗操作也可使肿瘤细胞扩散进入外周血循环。
2、检测方法2.1免疫细胞化学（immunocytochemistry, ICC）这一检测方法基于抗原抗体结合反应的原理，利用单克隆抗体（McAb）与特异的肿瘤标记物结合，并通过酶与底物反应显色来判断肿瘤细胞的存在。
检测的肿瘤标志物主要分三类：①上皮细胞角蛋白（CK），如CK19；②上皮细胞膜特异性抗原，如黏蛋白类，包括EMA、HMFG、HEA125等；③肿瘤相关糖蛋白（TAG），如TAG12。
1980年，Sloane等首次采用ICC的方法检测乳腺癌患者骨髓中的肿瘤细胞。
该方法可以进行形态学分析，但是检测的细胞量少，敏感性只有10－4～10－5（即在1万~10万个单核细胞中发现一个肿瘤细胞），而且许多分化差的肿瘤不能表达目标抗原，而非上皮细胞中细胞角蛋白和上皮细胞抗原亦可能阳性,故特异性不高。
肿瘤标志物在结直肠癌诊断应用中的研究新进展
肿瘤标志物在结直肠癌诊断应用中的研究新进展结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是一种常见的消化系统恶性肿瘤，是世界各国人口健康的重要威胁之一。
根据世界卫生组织（WHO）的数据显示，结直肠癌是全球第三常见的癌症，每年有数以百万计的新病例发生。
而不幸的是，许多患者往往在癌症已经发展到晚期时才被确诊，这时候癌症所造成的病情已经相当严重，给患者的健康和生存带来了极大的威胁。
早期的诊断和治疗对结直肠癌患者的生存率和预后至关重要。
而肿瘤标志物的检测在结直肠癌的早期诊断和预后评估中具有非常重要的作用。
本文将介绍一些最新的研究进展，探讨肿瘤标志物在结直肠癌诊断应用中的新进展。
一、循环肿瘤DNA（ctDNA）循环肿瘤DNA是一种能够在患者的血液样本中检测到的肿瘤相关DNA片段。
在结直肠癌患者中，ctDNA可以用于疾病监测、治疗反应评估和预后预测。
最近的研究发现，ctDNA 的检测对于早期结直肠癌的诊断有着较高的敏感性和特异性，可以帮助医生更早地发现患者的病情，从而提高患者的生存率。
二、循环肿瘤细胞（CTC）循环肿瘤细胞是指从原发肿瘤中脱落的肿瘤细胞经血液循环而进入到体循环中的细胞。
CTC的检测可以通过对患者的外周血样本中的肿瘤细胞进行计数和分析，从而帮助医生评估患者的病情和预后。
近年来的研究发现，CTC的检测可以作为结直肠癌患者预后评估的重要指标，对预后不良的患者进行更加精准的治疗。
三、转录组学标志物转录组学是研究生物体在一定生长或发育状态下所有基因转录产物的总和，可以全面了解细胞在分子水平上的表达情况。
近年来的研究表明，转录组学分析可以在结直肠癌的早期诊断和疾病分类中发挥重要作用。
通过对结直肠癌组织样本进行转录组学分析，可以发现一些特异性的分子标志物，这些标志物可以帮助医生更早地发现患者的病情，并进行更加精准的治疗。
四、微生物组标志物近年来的研究表明，肠道微生物组在结直肠癌的发生和发展中扮演着重要的角色。
结直肠癌循环肿瘤细胞临床应用的研究进展
认为 Ｃ Ｔ Ｃ。由于 Ｃ Ｔ Ｃ在 微弱 压力 环 境 中被 筛 选 ， 因 此 ９ ８ ％ 被筛 选 出 来 的 Ｃ Ｔ Ｃ都 保 留 着 较 高 活 性 ¨ 。 同
时， Ｃ Ｔ Ｃ — Ｃ ｈ ｉ ｐ检测 敏 感 性 较 高 ， 在 捕 获 目标 细 胞 方 面
具有 较大 优势 。
胞（ ｃ ｉ ｒ ｃ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｕ ｎｅ ｒ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ， Ｃ Ｔ Ｃ） 与结 直肠 癌 临床 分期 有
２ ． １ 免疫磁 性 分离 技 术 免疫 磁 性 分 离 及 其 各 种 改
进 技 术 目前 在 结 直肠 癌 Ｃ Ｔ Ｃ的 检 测 中应 用 最 广 泛 。 其中 Ｃ ｅ ｌ ｌ — Ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ是 该 原 理 应 用 最 广 泛 也 是 最 具 代 表
后， 仍有 ３ ０ ％左 右 的患者 在 术 后 ５ ａ内出 现 复发 或 远 处转 移 ， 且 大多数 都 不 能 再 次进 行 根 治 性 手 术 。 因
及 与 其他 检测 技术 的联 合应 用显 得至关 重 要 。近年来 、 的一些 新 技 术 ， 例如荧光定量 Ｒ Ｔ ． Ｐ Ｃ Ｒ、 巢式 Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ
该技 术检测 敏 感度 高 、 操 作 简便 ， 并可 避免 待检 细胞 破
坏， 使 Ｃ Ｔ Ｃ的计数 成 为 可能 。
２ ． ２ 反转 录 Ｐ ＣＲ（ Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ） 技 术 Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ 是 一 项
１ 结直肠癌 、 ＣＴ Ｃ概 述
１ ． １ 结 直肠癌 结 直肠 癌 为世 界第 四大 恶性 肿瘤 ， 在
性 的一项 有效 的检 测技 术 ， 并被美国 Ｆ Ｄ Ａ批 准应 用 于 结肠 癌患 者 的 无 病 生 存 期 （ Ｄ Ｆ Ｓ ） 和总生存期 （ Ｏ Ｓ ） 。
结直肠癌液体活检临床研究进展及国内应用现状和精准治疗
临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical 2019 年第 6 卷第 9 期2019 Vol.6 No.9198结直肠癌液体活检临床研究进展及国内应用现状和精准治疗侯文运，李旭斌，杨亚斌（首都医科大学附属北京康复医院，北京 100000）【摘要】随着精准医疗在肿瘤临床领域中的广泛开展，人们对循环肿瘤细胞(circulating tumor cells，CTCs)和循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA，ctDNA)的认识逐渐加深，以血液为基础的肿瘤分子诊断广泛应用于临床中，为肿瘤患者的早发现早治疗提供了可能。
本文针对液体活检的两种技术:循环肿瘤细胞和循环肿瘤DNA检测技术的特点，总结国内国外在结直肠癌液体活检及精准医疗领域的最新研究进展，探讨结直肠癌液体活检的应用现状及临床前景。
【关键词】液体活检；结直肠肿瘤；循环肿瘤细胞；循环肿瘤DNA【中图分类号】R735.3 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.09.198.011 液体活检的概念肿瘤是危害人类健康的主要疾病之一，随着生物技术的不断发展和精准医疗的推进，直肠癌的治疗模式也逐渐发展为以手术治疗为主的综合性治疗。
[1]目前虽然组织活检是诊断肿瘤的金标准，医生通常采用组织活检的方法对患者进行检测与诊断，但不可否认这种方式也存在一些弊端，如对患者造成的创伤较大，易导致肿瘤转移等。
近年，随着肿瘤的液体活检[2]这一分子诊断的概念被提出，并且备受关注，液体活检有望迅速进入临床指导肿瘤的诊断与治疗。
这项系统而精细的“医学工程”中，从组织到细胞直至分子层面的关于肿瘤的全方位信息，为早期诊断、用药指导、术后监测和疗效评估等临床诊疗环节提供了保障。
液体活检（liquid biopsy）。
液体活检是指对患者血液样本中的细胞和核酸的检测，主要包括循环肿瘤细胞和循环肿瘤DNA两类。
以循环肿瘤细胞、循环肿瘤DNA检测为代表的液体活检技术受到临床医师的高度重视，有望成为补充或替代传统组织学活检的新兴检测手段，并成为精准医学时代乳腺癌诊治的重要工具。
结直肠癌患者血清循环肿瘤细胞、糖类抗原24-2、糖类抗原19-9水平及其与临床病理特征关系
结直肠癌患者血清循环肿瘤细胞、糖类抗原24-2、糖类抗原19-9水平及其与临床病理特征关系章玉玲;周岳【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2022(51)3【摘要】目的:检测结直肠癌患者血清循环肿瘤细胞(CTC)、糖类抗原24-2(CA_(242))和糖类抗原19-9(CA_(199))水平,探讨它们与直肠癌患者不同临床病理特征的关系。
方法:收集106例结直肠癌患者作为结直肠癌组,收集结直肠腺瘤患者100例作为结直肠腺瘤组,收集同期健康体检者100例作为对照组。
采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CTC水平。
采用全自动免疫分析仪检测CA_(242)和CA_(199)水平。
比较三组研究对象CTC、CA_(242)、CA_(199)水平。
比较不同临床病理特征结直肠癌患者CTC、CA_(242)、CA_(199)水平。
分析CTC、CA_(242)、CA_(199)与结直肠癌患者不同临床病理特征的相关性。
结果:结直肠癌组和结直肠腺瘤组患者CTC、CA_(242)、CA_(199)水平明显高于对照组,且结直肠癌组CTC、CA_(242)、CA_(199)水平明显高于结直肠腺瘤组(均P<0.05)。
CTC、CA_(242)、CA_(199)水平在TNM分期为Ⅲ-Ⅳ期、分化程度为低分化、有淋巴结转移和肝转移的结直肠癌患者中明显升高(均P<0.05)。
Spearman相关性分析结果显示,CTC、CA_(242)、CA_(199)水平与TNM分期、分化程度、淋巴结转移、肝转移密切相关(均P<0.05)。
结论:CTC、CA_(242)、CA_(199)水平在结直肠癌患者中明显升高,且与结直肠癌患者临床病理特征密切相关。
【总页数】4页(P322-324)【作者】章玉玲;周岳【作者单位】荆州市中医医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R735.34【相关文献】1.结直肠癌血清癌胚抗原、糖类抗原19-9表达水平及其临床价值探讨2.结直肠癌患者术前血清癌胚抗原及糖类抗原19-9阳性与临床病理学特征的关系3.结直肠癌患者的血清癌胚抗原、甲胎蛋白和糖类抗原19-9水平及临床意义4.结直肠癌患者术前血浆纤维蛋白原、癌胚抗原、糖类抗原19-9水平与临床病理特征的关系5.围术期血清癌胚抗原、糖类抗原19-9及其比值对结直肠癌患者术后预后的临床价值因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
循环肿瘤细胞的检测
循环肿瘤细胞的检测李帅;刘晓强【摘要】循环肿瘤细胞的检测有助于研究肿瘤转移机制、指导肿瘤治疗、判断治疗效果、为推断预后提供可靠参考、监测肿瘤的转移或复发.随着研究的进展,循环肿瘤细胞逐渐被人们所重视.外周血中循环肿瘤细胞的数目较少,精确分离很困难.目前用于循环肿瘤细胞检测的方法很多,通常包括富集技术和分析技术两个部分,实际操作中常需要选择两个部分的不同方法加以有效结合;近年来随着实验技术的进步,建立了兼有富集和分析功能的细胞搜索系统.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2010(016)006【总页数】4页(P928-931)【关键词】循环肿瘤细胞;检测方法;富集;分析;细胞搜索系统【作者】李帅;刘晓强【作者单位】天津医科大学第二医院泌尿外科,天津,300211;天津医科大学第二医院泌尿外科,天津,300211【正文语种】中文【中图分类】R446.1血循环中检测到循环肿瘤细胞并不意味着有远处转移,但转移的概率会大大增加。
如果在转移灶出现前就能预测患者将要发生转移,就可以采取更加积极主动的治疗。
早在 1869年,Ashworth[1]就报道在 1例癌症死亡的患者外周血中发现了类似肿瘤的细胞,并首次提出循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的概念。
但由于外周血中 CTCs的数目较少,精确分离很困难,限制了 CTCs的应用。
随着人们对肿瘤转移机制研究的深入,尤其是伴随现代检测技术的广泛应用,CTCs逐渐被人们所重视。
目前用于 CTCs检测的方法很多,通常包括富集技术和分析技术。
富集技术主要通过一些物理化学原理将这些细胞特异性地富集起来,提高 CTCs检测的敏感性。
分析技术主要依靠肿瘤细胞上存在的一些肿瘤特异性或器官特异性标记以及肿瘤细胞本身的形态学特征来发现 CTCs。
实际操作中常需要选择两个部分的不同方法并加以有效结合,最终寻找出敏感性和特异性均较高的方法。
近年来,随着CTCs研究的进展和实验技术的进步,建立了兼有 CTCs富集和分析功能的细胞搜索系统。
循环肿瘤细胞检测技术及临床应用
基金项目：上海市科委自然基金项目（１５ＺＲ１４３７９００）资助*通讯作者文章编号：１００７－４２８７（２０１５）０７－１２２３－０５循环肿瘤细胞检测技术及临床应用曹雅楠，庄文芳，盛慧明*（上海交通大学医学院附属同仁医院检验科，上海２００３３６）循环肿瘤细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ＣＴＣ）计数有助于早期诊断肿瘤转移，反映患者的治疗效果及肿瘤预后。
近年来循环肿瘤细胞检测的广泛应用大力推进了相关技术的发展。
本文对近年来外周血循环肿瘤细胞检测技术的发展，临床及研究领域的应用情况及未来展望做一简要综述。
循环肿瘤细胞（ＣＴＣ）一经发现，就得到了广泛重视，ＣＴＣ被认为是肿瘤播散转移的标志。
研究表明，肿瘤组织每天会释放大量肿瘤细胞入血，但在循环中的存活率极低，大多会发生凋亡，只有少量具有强侵袭力的肿瘤细胞可表达凋亡抑制因子得以存活［１］，这些存活下来的肿瘤细胞即ＣＴＣ。
ＣＴＣ在外周血中含量极少，一般每１０６-１０７个白细胞中仅含有１个。
所以，ＣＴＣ检测首先要进行细胞富集，以提高检测灵敏度，再对富集的细胞进行ＣＴＣ检测。
１ ＣＴＣ富集技术１．１ 以形态学为基础的富集ＣＴＣ细胞体积大，直径超过２５μｍ，胞核形状不规则，核浆比异常。
肿瘤细胞体积分离法和核孔分析技术通过滤网可将直径大于８μｍ的肿瘤细胞分离，但此类方法敏感性较低［２］。
基于密度梯度分离原则的Ｏｎｃｏｑｕｉｃｋ，利用单个核细胞较其它血液成分相比密度低，采用１．０７７ｇ／ｍｌ的密度梯度将单个核细胞和肿瘤细胞与血液其它成分分离，同时增加设置多孔屏障，进而分离得到更加纯化的目的细胞［３］。
１．２ 以免疫学为基础的富集免疫磁珠法将磁性微珠包被单抗形成免疫磁珠，再结合靶细胞上的对应抗原形成抗原-抗体-磁珠复合物，在外加磁场作用下定向移动、吸附，进而与其它细胞分离。
该分离技术的方法有两种：（１）阳性分离法是直接从细胞混合液中分离出靶细胞；（２）阴性分离法则是利用免疫磁珠去除无关细胞，利用抗ＣＤ４５抗体或抗ＣＤ６１抗体去除血液中的巨核细胞和血小板，使靶细胞得以纯化［４］。
肿瘤标志物的临床意义
肿瘤标志物1、甲胎蛋白（AFP）：参考值：＜20ng／ml （放免法）＜10.9ng/ml (化学发光法)．原发性肝细胞癌>200ng/m1，且渐升高，可达400ng／m1。
急慢性活动性肝炎可＞100ng/m1，但随转氨酶恢复正常可逐渐降低。
．妊娠、睾丸及卵巢肿瘤、某些消化系肿瘤伴肝转移者水平增高。
2、癌胚抗原（CEA）：参考值：放免：＜15ng/m1 发光：＜5ng/ml．对消化道肿瘤如：胃、结直肠、胰腺、胆囊肿瘤有较好的阳性检出率，亦可作为肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤的辅助诊断指标。
因其在良恶性疾病间可有交叉，对其特异性有一定影响，但良性病变一般仅有暂时低度增高。
亦可作为肿瘤病人的一般追踪随访指标。
3、β2-微球蛋白（β2-Mg）：参考值：血清1.675±0.335ug/ml，尿0.0 91±0.068ug/ml．体内正常有核细胞均能合成，肿瘤细胞代谢活性增高，至血中水平升高，各类白血病、何杰金氏病、多发性骨髓瘤等诊断为有价值指标。
．亦可作为其它肿瘤辅助指标。
血、尿中β2-Mg可作为灵敏的肾功能评价指标。
4、血清铁蛋白（Ferritin，Fer或SF）：参考值：成年男性：28-397ng/ ml，女性：6-159ng/m1．贫血或肝功能异常，可使Fer的水平增高。
原发性肝癌患者70％以上Fer水平增高，及AFP联合应用可提高阳性率。
．血液淋巴系统，及其它系统实体肿瘤可有一定程度增高。
5、糖类抗原CA-50：参考值：血清中阳性界值：＜25U/m1．广谱肿瘤标志物，主要为胃、结直肠肿瘤，其它消化系统及卵巢、膀胱，前列腺，肺、乳等均有一定阳性率。
可作为其它肿瘤标志物的辅助指标。
可做为放化疗及术后观察，或复发监测。
6、糖类抗原CA-19-9：参考值：血清中阳性界值：＜37U/m1．胰腺癌、胆管癌特异性升高，可大于200-240U／ml以上。
胰腺炎，阻塞性黄疸病人可呈轻、中度升高，症状改善可恢复正常，持续高水平应警惕恶性肿瘤的存在。
循环肿瘤细胞检测技术及其在结直肠癌中的应用研究
循环肿瘤细胞检测技术及其在结直肠癌中的应用研究摘要：结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是一种常见的消化道恶性肿瘤，目前对于结直肠癌的确诊主要依赖于结肠镜检以及CT、PET-CT影像学检查。
根治性切除术仍是结直肠癌的主要治疗方式，但是几乎半数患者在接受手术治疗后，存在肿瘤复发以及转移的问题。
循环肿瘤细胞（circulating tumor cells）是从原发肿瘤灶或者转移肿瘤灶中脱落进入血液循环的肿瘤细胞，脱落的肿瘤细胞在形态、分子、基因等特征上与其他正常细胞存在明显差异。
因此运用特定检测技术检测患者外周血中的CTC数目，能够有助于结直肠癌的诊断，有效预测肿瘤进展以及肿瘤转移情况，评估肿瘤治疗方案的有效性，推断肿瘤患者预后。
本文主要对近年来新的CTC检测技术以及其在结直肠癌中的临床应用进行综述。
关键词：结直肠癌，循环肿瘤细胞，检测技术，临床应用ABSTRACT：colorectal cancer is a commen digestive tract malignant tumor，the currently definite diagnosis for colorectal cancer mainly relies on colonoscopy and computed tomography、positron emission tomography-computed tomography examination.Curative resection remains the mainstay therapy for colorectal cancer，but approximately half of the patients who receiving surgery treatment，existed the problem of tumor recurrence and metastasis.circulating tumor cells is the tumor cells fall from primary tumor site or Metastatic tumour focal，and entered into the blood circulation，the fallen tumor cells has significant difference contrast with othernormal cells in morphology characteristics、molecule characteristic and gene characteristics.Therefore used specific detection technology testing the CTC numbersin p atients ′Peripheral blood，Can contribute to the diagnosis of colorectal cancer，Effectively predict the tumor progression and metastasis，evaluate the effectivenessof cancer treatment，predicted the prognosis of tumor patients.This paper mainly reviews the CTC detection technology in recent years and Its clinical application in colorectal cancer。
循环肿瘤细胞双探针荧光原位杂交检测 项目简介
循环肿瘤细胞双探针荧光原位杂交检测
（CTC FISH检测）项目简介
循环肿瘤细胞双探针荧光原位杂交检测（CTC FISH检测）是指进入到血液中的肿瘤细胞，可由原发灶或转移灶脱落入血，亦可能形成实体瘤之前进入血液中。
CTC FISH检测根据循环肿瘤细胞数目，判断肿瘤细胞是否发生血液转移、肿瘤良恶性程度、愈后状况和药物疗效的预估和评价、肿瘤复发与转移风险的监测等。
临床意义
CTC FISH检测是一种无创、便捷、准确、动态的肿瘤检测，对肺癌、结直肠癌、胃癌等常见癌种的鉴别具有较高的灵敏度和特异性，对高风险人群的早期筛查，肿瘤确诊患者的辅助诊断、疗效评价，术后的复发和转移监测、预后判断等具有积极指导意义。
检查时期和适应人群
适检人群：肿瘤良恶性难辨患者、肿瘤确诊患者和肿瘤高风险人群
检查时期：距离上次放化疗/手术一周后，或下次放化疗/手术前2天；
手术后7天检测；术后半年至一年定期检测
CTC标本采集要求
外周血：1、抽血前无需空腹，使用专用5 ml ACD抗凝管采血
2、血液标本取样后须立即将采血管颠倒摇匀8次，使血液与抗凝剂充
分混合
3、血液标本置于室温（15℃-30℃）保存，并于24小时内送检
4、距离上次放化疗/手术一周后，或下次放化疗/手术前2天取样
胸腹水：1、充分混匀后取样45 ml于离心管中，直接送检
2、4℃保存，并于24小时内送检
取样禁忌：白细胞> 10×109 /L；放化疗给药期；体温>39℃；孕妇
临床项目收费标准。
2023结直肠癌基因检测的临床意义
2023结直肠癌基因检测的临床意义结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，目前研究发现结直肠癌中存在一些相关基因可以用于结直肠癌患者的治疗、预后评估以及筛查林奇综合征，提示对这些基因进行检测具有重要的临床意义。
本文主要汇总了结肠癌常见基因异常的临床意义以及罕见基因异常的潜在临床意义。
结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率和病死率一直都位居前列，并且多数结直肠癌患者在初诊时已属于中晚期，正确的治疗决定患者的预后。
随着对结直肠癌发病机制的深入研究和基因检测能力的提高,与结直肠癌发病和治疗相关的基因越来越多。
目前,国内外已有的相关指南及实践推荐检测的结直肠癌相关基因包括APC.MS1RAS和BRAF等。
此外,对于其他一些具有潜在临床意义的基因也得到越来越多的关注,包括Her-2扩增/过表达、PIK3CA突变和NTRK融合等。
合理的检测及应用结直肠癌相关分子标志物已经成为目前临床实践的重要部分。
为此，《结直肠癌分子生物标志物检测专家共识》及《结直肠癌分子标志物临床检测中国专家共识》等共识相继出台，为结直肠癌的基因检测的提供了指导方案。
结直肠癌常见基因异常RAS、BRAF和MSI检测的临床意义1、RAS基因点突变：RAS是表皮生长因子受体（EGFR）信号通路里的下游基因，可以调控细胞生长、分化、增殖和存活，其中KRAS和NRAS是由RAS家族成员基因编码的两种GTP酶蛋白，约有40%~50%的结直肠癌患者存在KRAS点突变，3.8%的结直肠癌存在NRAS点突变。
目前已有多项临床研究表明,RAS野生型的晚期结直肠癌患者能从抗EGFR单抗治疗中获益，患者的总生存时间显著延长。
因此，对于这部分患者推荐首选化疗联合抗EGFR单抗的治疗方案。
而对于RAS 基因突变患者，应用抗EGFR单抗则无明确获益，一般采用化疗联合VEGF单抗治疗。
因此，推荐在晚期或转移性结直肠癌患者开始治疗前，应进行RAS突变的检测，有助于帮助患者选择最佳的个体化治疗方案。
循环肿瘤细胞(CTC)
循环肿瘤细胞(CTC)循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell; CTC)通常是指因自发或诊疗操作引起的从原发灶或转移灶侵入人体外周血的肿瘤细胞1。
此概念是在1869年由Ashworth等首次提出的2。
CTC一般以单细胞或者细胞团的形式存在于循环系统中。
大部分侵入循环系统的肿瘤细胞会在短期内死亡，只有极少数具有高度转移倾向和活力的CTCs才能存活下来，相互聚集成团，并在一定条件下发展为转移灶3。
进入外周血循环是发生肿瘤转移的必要条件，因此在外周血中检测到肿瘤细胞预示着将有可能发生肿瘤转移，目前临床已经采用CTC作为评估肿瘤预后的参考指标之一4。
近年来，CTCs在临床应用的研究获得了长足的发展，越来越的研究表明其可以为多种肿瘤提供重要的预后信息，如转移性乳腺癌5，直肠癌6，前列腺癌7等。
由于CTCs检测的对象是血液标本，取材比传统意义上的组织活检更方便，而且可重复性强，而被称之为“液态的活检”8。
多项研究发现CTCs作为肿瘤个体化治疗的一个重要靶标，在肿瘤转移起始中发挥重要作用9。
除了有助于肿瘤转移外，CTCs还具有上皮细胞-间充质转化(EMT)的特征，使得CTCs细胞具有一定的生存优势能够成功入侵新的组织位点并形成转移灶10。
Huang CH等研究发现血液中CTCs的数量与肿瘤的恶性程度有关，细胞数量的变化程度可反映治疗的效果9。
间变性淋巴瘤激酶(Anaplasticlymphomakinase, ALK)基因是一种致癌驱动基因。
突变、基因扩增或染色体重排均可以导致ALK基因异常激活，从而促进肿瘤生长12。
在3-7%的非小细胞肺癌患者中ALK基因重排是一个独特的分子子集，主要是由于该基因发生重排并与其他基因进行了融合。
Vincent Faugeroux等证实在ALK阳性的非小细胞肺癌患者中通过检测CTCs发现了ALK重排，这项研究为ALK阳性的患者在使用ALK抑制剂治疗诊断方面提供了新的观点10。
循环DNA在结直肠癌中的诊断价值
Ｄ ｋｓＡ期 ２例 、 ｕ ｅ Ｂ期 １ ９例 、 Ｃ期 ２ 例 ； 分 化管 状 １ 高 腺癌 ２ ８例 ， 低分 化 腺 癌 （ 括 黏液 腺 癌 和 印戒 细 胞 包 癌 ）４例 。选 择 同期 结 直肠 腺瘤 患 者 ｌ １ ８例 （ 后 病 术
结 直 肠癌 是常 见 的消 化 道 肿 瘤 ， 病 率 有 逐 年 发
２ ２ 循 环 Ｄ Ａ水 平 与结直 肠癌 临床 病理 参数 的相 ． Ｎ 关 性 与组 织学类 型 的关 系 ： 管状 腺癌 、 黏液 腺 癌循 环 Ｄ Ａ水平 分别 为 （ １ ．３±６ ７ ２ 、 ８ １ ７ Ｎ ６ ５ １ ２ ．５） （ ５ ． ２±
１２ 检 测方 法 ． 以 Ｑ Ａ ｍｐＤ Ａ ＢｏｄＭｉｉ ｉ提 Ｉ ａ Ｎ ｌ ｎ Ｋｔ ｏ
由于肿 瘤 患 者 外 周 血 中存 在 相 当数 量 的 Ｄ Ａ Ｎ 并 具有 一些 肿瘤 特 征 性 遗 传 学 异 常 改变 ， 究 人 员 研
取 所有研 究 对象 的 血浆 Ｄ Ａ， Ｄ Ａ Ｄ ｐｔ ｋ试 剂 Ｎ 用 Ｎ ｉｓ ｃ ｉ
高 。本 研究 通过 分 析 结 直 肠 癌 患 者 循 环 Ｄ Ａ水 平 Ｎ 的变化 及 与术后 转 移 的相 关性 ， 明确 结 直肠 癌 患 者
循环 Ｄ Ａ变 化 的水平 为 （ ８ ． ７± ７ ． ６ ｎ ／ ｌＣ期 Ｎ ６ ６６ ５ ８ ９ ） ｇｍ ， 为 （ ０ ．０±５ ３ ６ ｎ／ ｌＰ＞０ ０ ； ７０ ４ ４ ． ５） ｇ ｍ ， ． ５ 与远 处 转 移 的关 系 ： 本文 ｌ 发 生 肝肺 转 移 者 循 环 Ｄ Ａ 水平 ０例 Ｎ
循环肿瘤细胞检测方法以及临床应用的研究 进展
Advances in Clinical Medicine 临床医学进展, 2018, 8(10), 958-962Published Online December 2018 in Hans. /journal/acmhttps:///10.12677/acm.2018.810159The Research Progress of Circulating Tumor Cell Detection and Clinical ApplicationShiwi Xu1, Dong Yin21Bengbu Medical College, Bengbu Anhui2Jiaxing First Hospital, Jiangxi AnhuiReceived: Nov. 30th, 2018; accepted: Dec. 14th, 2018; published: Dec. 21st, 2018AbstractWith more and more individualized and precise diagnosis and treatment of tumors, the detection technology of circulating tumor cells has great application value for prognosis assessment, guiding treatment and medication, and studying biological characteristics of tumors, due to its small trauma and high repeatability. However, due to the low content of circulating tumor cells in peri-pheral blood, low detection rate and high detection cost, the development of detection technology has been limited. This paper reviews the current methods of detecting circulating tumor cells, hoping to inspire us to explore more efficient methods.KeywordsCirculating Tumor Cell, Colorectal Cancer, Detection Technology, Review循环肿瘤细胞检测方法以及临床应用的研究进展徐士伟，尹东1蚌埠医学院，安徽蚌埠2嘉兴市第一医院，安徽嘉兴收稿日期：2018年11月30日；录用日期：2018年12月14日；发布日期：2018年12月21日摘要随着肿瘤诊疗越来越个体化、精准化，循环肿瘤细胞检测技术由于其创伤小、可重复性高，对肿瘤预后徐士伟，尹东评估、指导治疗用药、研究肿瘤生物学特性等方面存在着巨大的应用价值。
循环肿瘤细胞检测在肺癌临床应用中的研究进展_赵元辰_秦英刚_花宝金
在结直肠癌循环肿瘤细胞中KRAS和PIK3CA的突变以及EGFR异质性的研究
在结直肠癌循环肿瘤细胞中KRAS和PIK3CA的突变以及EGFR异质性的研究结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤，KRAS和PIK3CA突变以及EGFR异质性是其发病机制中的重要因素。
研究这些变异对于诊断和治疗结直肠癌具有重要的临床意义。
KRAS和PIK3CA是两个常见的突变基因，在结直肠癌中突变频率较高。
KRAS基因编码K-Ras蛋白，其突变会导致激活下游信号通路，促进细胞增殖和生长。
PIK3CA基因编码PI3K蛋白，突变导致 PI3K 信号通路的激活，进一步促进细胞增殖和生长。
这两个基因的突变与预后不良、肿瘤耐药以及复发等不良临床结果相关。
EGFR（表皮生长因子受体）是一种重要的成员，激活EGFR信号通路可促进细胞增殖、生长和转移。
EGFR抑制剂，如西妥昔单抗，是结直肠癌的重要治疗药物。
然而临床实践中发现，EGFR抑制剂在一些结直肠癌患者中并不起作用。
一种解释是EGFR信号通路异质性，即在同一个肿瘤中，不同细胞群体对于EGFR抑制剂的敏感性不同。
因此，研究EGFR异质性对于个体化治疗和改善疗效具有重要意义。
研究KRAS和PIK3CA在结直肠癌循环肿瘤细胞中的突变可以通过分析循环肿瘤DNA血清或血浆样本实现。
循环肿瘤细胞是一种释放到血液循环中的肿瘤细胞群体，其含有异质性突变信息。
通过采集血液样本，提取循环肿瘤DNA，可以进行基因突变检测。
研究利用下一代测序等高通量技术，可以快速、准确地检测KRAS和PIK3CA等相关基因的突变情况。
研究EGFR异质性可以通过组织切片和免疫组化等技术实现。
组织切片可以获取肿瘤组织，免疫组化则可以检测肿瘤细胞中EGFR蛋白的表达情况。
此外，近年来免疫组织化学标记技术的发展，也可利用组织切片上的多种标记进行多重免疫染色和定量分析，进一步揭示EGFR信号通路的异质性。
研究结直肠癌循环肿瘤细胞中KRAS和PIK3CA的突变以及EGFR异质性对于指导个体化治疗具有重要意义。
在明确患者的突变情况和EGFR的表达程度后，可以针对性地选择合适的靶向治疗药物，提高治疗效果和预后。
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临床医药文献电子杂志
Electronic Journal of Clinical Medical Literature
2019 年 第 6 卷第 30 期2019 Vol.6 No.30
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转移性结直肠癌循环肿瘤细胞的临床检测意义
顾心怡1，陈荣进1，张 宇2，黄雪洁2
（1.遵义医学院研究生院，贵州 遵义 563000；2.大连大学附属中山医院，辽宁 大连 116001）【摘要】目的 探讨转移性结直肠癌患者外周血循环肿瘤细胞与临床参数之间的关系。
方法 收集2014-10-01～2017-10-31确诊为转移性结直肠癌的44例患者的血液样本，采用Cell Search 系统检测CTC ，分析CTC 与转移性结直肠患者各病例参数之间的关系。
结果 转移性结直肠癌患者外周血循环肿瘤细胞检出阳性水平与患者的年龄、性别、肿瘤位置、原发部位、转移部位、化疗方案、浸润深度（T 分期）无关（P ＞0.05）；与淋巴结转移状态（N 分期）相关（P ＜0.05）；CTC 阳性的患者中位PFS 为10个月，而CTC 阴性的患者中位PFS 为14个月；差异有统计学意义（P ＜0.05）。
结论 患者淋巴结转移数量越多，外周血循环肿瘤细胞的阳性检出率越高；外周血循环肿瘤细胞阳性的患者比阴性的患者无进展生存期短。
【关键词】转移性结直肠癌；外周血循环肿瘤细胞；检测
【中图分类号】R735.3+7 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.30.16.01
本文通过研究转移性结直肠癌患者外周血循环肿瘤细胞数量与临床参数之间的关系，探讨循环肿瘤细胞在结直肠癌诊疗中的临床意义。
1 资料与方法
1.1 研究对象
收集2014-10-01～2017-10-31就诊于大连大学附属中山医院的44例转移性结直肠癌患者作为研究对象，男性30例，女性14例；年龄28～93岁，中位年龄63岁；使用FOLFORI 化疗方案13例，使用FOLFOX 化疗方案17例，其他化疗方案14例。
纳入标准：（1）经病理学或细胞学明确诊断为结直肠癌的患者；（2）影像学或病理学提示已有远处转移；（3）无其他恶性肿瘤病史；（4）无化疗禁忌症；（5）均签署知情同意书。
排除标准：（1）严重的心、肺疾病；（2）合并其他恶性肿瘤。
1.2 方法1.
2.1 样本采集
使用枸橼酸钠抗凝管采集每例患者外周血7.5 mL ，通常采集肘正中静脉血，室温保存并于24小时内完成循环肿瘤细胞的分离、富集与鉴定。
1.2.2 CTC 检测
本实验采用Cell Search 系统进行检测，包括Cell Tracks 自动处理系统、Cell Tracks 分析仪、Mag Nest 磁孵育装置、Cell Save 储存管、Cell Search 试剂盒。
将加缓冲液入血液样本稀释，离心后去除上清液，加入表面含有抗EpCAM 特异性抗体的纳米磁颗粒，通过抗原抗体反应，纳米磁颗粒会与血液中所有表达EpCAM 的细胞结合。
然后加入荧光染色试剂进行染色，移入Mag Nest 装置的样本盒中，最后进行计数（CK8 /18 /19 角蛋白抗原阳性、肿瘤特异性细胞核抗原DAPI 阳性，CD45白细胞表面抗原阴性为循环肿瘤细胞）。
本实验以CTC 数量≥1为阳性。
1.3 统计学分析运用SPSS 20.0统计学软件进行数据处理。
若数据符合正态分布且方差齐性，用t 检验；否则采用x 2检验或Fisher's
确切概率检验，采用Kaplan-Meier 生存分析法绘制生存曲线，比较CTC 与PFS 的关系，用log-rank 检验进行无进展生存时间的比较。
P ＜0.05为有统计学差异。
2 结 果
2.1 转移性结直肠癌患者CTC 计数与各临床参数的关系44例转移性结直肠癌患者CTC 计数为（4.59±9.46）个 /7.5 mL ，CTC 阳性患者22例，CTC 阴性患者22例，CTC 阳性率为50.00 %。
分析结果显示CTC 检测结果与N 分期有显著相关性。
N0、N1、N2期CTC 的阳性率分别为14.29%、28.57%、66.67%，差异有统计学意义（x 2=7.627，P =0.022）；两两比较显示：N2期CTC 计数明显高于N0期和与N1期，差异有统计学意义（分别为x 2=5.540，P =0.030；x 2=4.571，P =0.033），N0期与N1期无显著差异（x 2=0.525，P =0.624）。
而患者年龄、性别、原发部位、转移部位、治疗方案、T 分期无关，差异无统计学意义（P ＞0.05）。
2.2 转移性结直肠癌患者CTC 计数与PFS 的关系长期随访转移性结直肠癌患者直至发生疾病进展可以发现CTC 为阳性的患者中位PFS 为10个月，而CTC 为阴性的患者中位PFS 为14个月；差异有统计学意义（P =0.022）。
3 讨 论
本研究结果显示：CTC 与患者年龄、性别、原发部位及转移部位、治疗方案、浸润深度无相关性，与淋巴结转移有明显相关性，淋巴结转移数量越多，CTC 阳性率越高；CTC 阳性的患者比CTC 阴性的患者无进展生存期短。
综上所述，循环肿瘤细胞的检测可以弥补影像学检查的缺点，更准确的了解患者疾病进展程度、评价疗效、判断预后，为患者提供个体化治疗，延长患者的生存期。
参考文献
[1] 谢 强,张宏宇.结直肠癌循环肿瘤细胞的研究进展[J].临床医学
研究与实践,2018,3(12):193-195.
本文编辑：李 豆。