玻璃化冷冻法在人桑葚胚胎和卵裂期胚胎冻融周期中的临床研究

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囊胚和卵裂期胚胎玻璃化冷冻解冻移植周期的妊娠结果分析

囊胚和卵裂期胚胎玻璃化冷冻解冻移植周期的妊娠结果分析罗清炳;徐鸿毅;张鑫;李欣;张昌军【期刊名称】《中国性科学》【年(卷),期】2016(0)11【摘要】目的:比较囊胚和卵裂期胚胎玻璃化冷冻解冻后移植周期的妊娠结果.方法:回顾分析2014年1月至2014年12月在我院生殖医学中心行玻璃化冷冻解冻移植周期388个患者的妊娠情况,其中囊胚冷冻解冻165个移植周期(A组),卵裂期胚胎冷冻解冻223个移植周期(B组).结果:A组和B组解冻存活率分别98.76％和96.74％,两组间无统计学差异(P＞0.05);临床妊娠率、种植率和单胎率A组(68.48％、57.38％和76.10％)显著高于B组(68.48％、57.38％和59.37％);多胎率、双胎率和三胎率A组(23.01％、22.12％和0.88％)显著低于B组(40.62％、31.25％和9.37％,P＜0.05);A组和B组的流产率分别为5.31％和6.25％,两组间无统计学差异.结论:囊胚和卵裂期胚胎玻璃化冷冻解冻均能获得较高的存活率、临床妊娠率和种植率,且囊胚玻璃化冷冻移植周期提高了临床妊娠率及种植率,同时降低了多胎率的发生.【总页数】3页(P100-102)【作者】罗清炳;徐鸿毅;张鑫;李欣;张昌军【作者单位】湖北医药学院附属人民医院生殖医学研究中心,湖北十堰442000;湖北医药学院附属人民医院生殖医学研究中心,湖北十堰442000;湖北医药学院附属人民医院生殖医学研究中心,湖北十堰442000;湖北医药学院附属人民医院生殖医学研究中心,湖北十堰442000;湖北医药学院附属人民医院生殖医学研究中心,湖北十堰442000【正文语种】中文【中图分类】R711.6【相关文献】1.玻璃化冷冻D3卵裂期胚胎复苏后培养至囊胚移植与冷冻囊胚的临床结局比较[J], 姚观平;杨名慧;钱正利;张明哲2.玻璃化冷冻胚胎-解冻移植周期中囊胚和卵裂期胚胎的妊娠结果分析 [J], 王鹏;巩晓芸;赵静;胡泊;王致辉;朱玥洁;腊晓琳3.卵裂期胚胎、囊胚的玻璃化冷冻解冻的妊娠结果分析 [J], 张顺吉;林戈;卢光琇4.解冻周期单囊胚移植与卵裂期双胚胎移植的比较:一项关于反复种植失败周期的研究 [J], 刘卫卫; 韩伟; 高洋; 郝向伟; 黄国宁5.玻璃化冷冻-复苏囊胚和卵裂期胚胎移植周期的临床结果比较 [J], 罗清炳;徐鸿毅;张鑫;李欣;张昌军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Cryotop玻璃化冷冻人类卵裂期胚胎的临床应用_苏雁

二、冷冻方法
· ４１０ ·
江苏医药２０１２年２月第３８卷第４期ＪｉａｎｇｓｕＭｅｄＪ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ２０１２，Ｖｏｌ３８，Ｎｏ．４
冷冻前仔细观察胚胎，在室温下将胚胎移至玻璃化平衡液（ＥＳ，ＫＩＴＡＺＡＴＯ，ＶｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＫＩＴ，Ｃｏｄｅ．ＶＴ１０１－０１，日本）中平衡１０ｍｉｎ，然后转移至玻璃化冷冻液（ＶＳ，ＫＩＴＡＺＡＴＯ，ＶｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＫＩＴ，Ｃｏｄｅ．ＶＴ１０１－０２，日本）中平衡，并迅速把胚胎放到Ｃｒｙｏｔｏｐ（ＫＩＴＡＺＡＴＯ，Ｃｒｙｏｔｏｐｐａｃｋａｇｅ，日本）的前端，并迅速浸入液氮，在浸入液氮前，胚胎在ＶＳ液体内的时间控制在３０－６０ｓ，每支Ｃｒｙｏｔｏｐ装载１－２个胚胎。
结果一、胚胎复苏与移植情况玻璃化法冷冻复苏５５个周期，共１７２枚胚胎，存活１４４枚，复苏率为８３．７％；复苏后培养１６ｈ观察，有３９个周期，共６９枚胚胎继续发育，表现出良好的发育潜能。其中１个周期因胚胎复苏后均退化，放弃移植，复苏周期共移植１３３个胚胎，平均每人移植２．４个胚胎。二、临床妊娠情况
玻璃化法冻融共移植的５４个周期中，临床妊娠２４例、妊娠率４４．４％；其中单胎１３例、双胎１１例，共着床了３５个胎囊，种植率为２６．３％；早期流产３例，流产率１２．５％，５例足月分娩１０个正常婴儿，其余１９例继续妊娠。

玻璃化与程序化对人早期胚胎冷冻复苏效果观察

中图分类号：Ｒ６－７６３文献标识码：Ａ文章编号：１０ — １１（０２５０２ — ３０６４４２１）０ — ４４０
收稿日期：２１－０ —１修订日期：２１ —０一Ｏ０２５８Ｏ２７２作者简介：张若鹏（９４）男，医学硕士，副主任医师，１７～从事生殖医学与妇科微创工作１年。５
上皮细胞，在柱状上皮细胞中并不表达阎。本实验通过对转染了Ｃ１Ａ基因与转染了空载体及未Ｋ３、Ｂ转染任何基因的鼻咽癌细胞放疗前后凋亡坏死率的检测，体现凋亡坏死率的增加为放射治疗与基因增敏的共同作用，两者存在协同关系。且在同放疗条件下，转染了Ｃ１基因组比对照组细胞Ｋ３
影响［．国现代医学杂志，２０，１（９Ｊ中］０５５１）：
２３－９５９３２３．
［］徐波，王洁，卞度宏．三氧化二砷体外诱导宫颈癌细５胞株凋亡及其机制的研究［．实用医学杂志，Ｊ］
２０，２（）４ — ４．０６２３：２５２７
一
的凋亡更显著，体现Ｃ１基因可增强放射线对肿Ｋ３瘤细胞的杀伤作用，提高放疗敏感性。随着对Ｃ１因认识的不断深入，它促进细胞凋亡的关Ｋ３基键性作用已被揭示，从而表现为对电离辐射敏感性增高，有望成为ＮＣＰ治疗中备受瞩目的新靶点。但随着研究的不断深入，还有很多问题需进一步研究，我们下一步将进行Ｃ１基因的体内研究，Ｋ３来了解其放疗增敏的原因。虽然现在仍处于临床

不同胚胎冷冻方法对人类早期胚胎解冻后的复苏效果及临床结局的影响

不同胚胎冷冻方法对人类早期胚胎解冻后的复苏效果及临床结局的影响王星星;江莉;毛文琪;张季阳;翟丹梅;杭馥;陆丹【摘要】目的比较玻璃化冷冻与程序化冷冻对人类早期胚胎解冻后复苏效果及临床结局的影响.方法辅助生殖技术获取的剩余可利用人类胚胎2 884枚,其中采用玻璃化冷冻复苏666个周期,解冻胚胎1 516枚、复苏1 383枚、移植胚胎1 375枚;程序化冷冻复苏506个周期,解冻胚胎1 368枚、复苏1 090枚、移植1 077枚.比较两种方法的复苏效果及临床结局.结果玻璃化冷冻组胚胎复苏率、胚胎完整率分别为92.02％、92.11％,高于程序化冷冻组的79.68％、69.63％(P＜0.05);两组种植率、临床妊娠率、周期取消率、多胎妊娠率、早期流产率、新生儿胎龄、早产率、新生儿出生体重、出生缺陷率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论玻璃化冷冻较程序化冷冻有更高的胚胎复苏率及胚胎完整率,胚胎利用率高,两种冷冻方法的临床结局相似,适用于人类胚胎的冷冻.【期刊名称】《广西医学》【年(卷),期】2016(038)002【总页数】3页(P175-177)【关键词】胚胎冷冻;玻璃化冷冻;程序化冷冻;胚胎移植;妊娠结局;复苏【作者】王星星;江莉;毛文琪;张季阳;翟丹梅;杭馥;陆丹【作者单位】广西医科大学第一附属医院生殖中心,南宁市530021;广西医科大学第一附属医院生殖中心,南宁市530021;广西医科大学第一附属医院生殖中心,南宁市530021;广西医科大学第一附属医院生殖中心,南宁市530021;广西医科大学第一附属医院生殖中心,南宁市530021;广西医科大学第一附属医院生殖中心,南宁市530021;广西医科大学第一附属医院生殖中心,南宁市530021【正文语种】中文【中图分类】R711.6在人类辅助生殖技术中，胚胎冷冻技术旨在经过冷冻和复苏后，胚胎仍能保持原有的生物学活性。

胚胎冷冻技术提高了每一卵巢刺激周期累积妊娠率，减少多胎妊娠率，预防卵巢过度刺激综合征。

人类卵母细胞玻璃化冷冻的研究进展

人类卵母细胞玻璃化冷冻的研究进展在过去的几十年里，人类卵母细胞的玻璃化冷冻（vitrification）技术一直是生殖医学领域的一个研究热点。

玻璃化冷冻是一种冷冻技术，通过迅速降低温度并添加特殊冷冻剂，将细胞内的水分转化为无结晶的玻璃态，从而避免了冷冻过程中因冰晶形成而对细胞结构和功能造成的损伤。

人类卵母细胞是女性生育力的关键组成部分，但由于其细胞壁的特殊结构和一些衰老因素的影响，卵母细胞的冷冻保存一直是一个具有挑战性的任务。

然而，玻璃化冷冻技术的广泛应用为保存和储存卵母细胞提供了一种有效的方法。

近年来，许多研究致力于改善人类卵母细胞的玻璃化冷冻技术。

首先是冷冻剂的选择。

传统的冷冻剂通常包括甘露醇和丙二醇等，它们可以降低细胞内水分的冻结点，减少冷冻过程中对细胞的损伤。

然而，这些常规冷冻剂的使用还是会引发一定的细胞损伤，因此需要寻找更适合的替代品。

最近有研究发现，抗冻裂脱水剂（cryoprotectants）能够更有效地保护卵母细胞，如聚胺基酸和聚糖等。

其次是玻璃化冷冻的整个过程中对卵母细胞的处理。

近年来，研究者们发现，在卵母细胞冷冻之前，对细胞进行一定时间的预处理，能够减少其在冷冻过程中的受损程度。

例如，细胞的快速预冷冻过程能够减少其在冷冻时所受到的冷冻损伤。

此外，对卵母细胞进行精心设计的膜处理和包覆技术，也能显著提高细胞的冷冻保存率。

创新的玻璃化冷冻设备和技术也对人类卵母细胞的冷冻保存起到了积极的促进作用。

人类卵母细胞是非常敏感的细胞，需要在非常短的时间内完成冷冻，避免冷冻过程中对细胞的额外损伤。

因此，一些新型的冷冻设备，如快速冷冻器和微流控器，能够在非常短的时间内将细胞迅速冷冻，从而避免了细胞因长时间接触冷冻剂而产生的冷冻损伤。

此外，越来越多的研究关注卵母细胞冷冻后的质量评估。

传统的评估方法主要依靠检测冷冻后的细胞形态和一些形态学指标，但这种方法对早期胚胎的质量评估并不准确。

近年来，一些新兴的技术，如单细胞转录组测序和代谢组学分析，能够更准确地评估冷冻后卵母细胞的质量和其潜在的发育能力。

应用玻璃化冷冻技术保存人未成熟卵母细胞的研究

玻璃化冷冻技术在人卵裂期胚胎冷冻保存中的应用结局分析蒋晓明，沙爱国，周友泉，李萍，那旭红，纪红，邓星（361003厦门，中国人民解放军第174医院生殖医学中心）低温冷冻保存技术是人类辅助生殖技术的重要组成部分，胚胎冷冻技术的应用大大提高了临床治疗的效率、丰富了临床治疗的方案。

目前主要应用的胚胎冷冻技术包括程序冷冻和玻璃化冷冻。

程序冷冻技术已相对成熟和稳定并已得到广泛的应用，玻璃化冷冻技术作为一项兴起的新技术，正越来越多的受到关注。

本研究对我中心开展的人卵裂期胚胎玻璃化冻融-胚胎移植后的治疗结局进行了回顾性分析。

问题1：前言交代研究背景请引用一条文献。

1 材料与方法1.1 研究对象及分组选择本中心2008年12月至2009年10月接受胚胎玻璃化冻融-胚胎移植的全部199个周期作为实验组， 2008年1月至2008年12月接受胚胎程序冻融-胚胎移植的全部215个周期及2008年1月至2009年10月实施的全部974个IVF/ICSI-ET周期作为对照组。

所有冷冻、移植胚胎为卵裂期胚胎。

1.2 胚胎玻璃化冷冻保存及复苏问题2 ：Sucrose请翻译成中文问题3：IVF/ICSI-ET等第一次出现的英文缩写请注明中英文全称1.2.1 冷冻保存液的配制冷冻平衡液：D-PBS中添加10％ EG +10％DMSO+20％SPS；冷冻液：D-PBS中添加20％EG+20％DMSO+20％SPS＋0.4 mol/L Sucrose。

1.2.2 复苏液的配制复苏液Ⅰ：D-PBS中添加20％SPS；复苏液Ⅱ：D-PBS中添加20%SPS+1 mol/L Sucrose；复苏液Ⅲ：D-PBS中添加20%SPS+0.25mol/LSucrose；复苏液Ⅳ：D-PBS中添加20%SPS+0.125mol/LSucrose。

1.2.3 玻璃化冷冻室温下，胚胎在平衡液中停留4min后移入冷冻液，20秒内装载并直接投入液氮保存。

封闭式麦管玻璃化冷冻法用于人早期胚胎冷冻效果观察

０７ｏＬ丙二醇＋．ｏＬ蔗糖、．ｌＬ丙．５ｍｌ／０２ｍｌ／０５ｍｏ／
山东医药２１００年第５０卷第１５期
封闭式麦管玻璃化冷冻法用于人早期胚胎冷冻效果观察
乜照燕张，娜吴海峰甄秀丽郭丽娜张。，，，轶
（１河北医科大学第四医院，家庄００１；石５０１２河北省胸科医院）
５６
麦管斜面上。将０２ｌ．５ｍ麦管装于０５ｍ麦管内，．ｌ立即置入液氮并封闭０５ｍ麦管，．ｌ置液氮中保存。胚胎与玻璃化冷冻保护液接触的总时问控制在６０ｓ之内。程序化组：温下将胚胎移至１５ｍｌＬ丙室．ｏ／二醇中８—１ｉ，．ｏＬ丙二醇＋．ｏＬ蔗０ｒｎ１５ｍｌａ／０１ｔｌｏ／糖４～ｉ５ｒｎ中并装入０２ｌ管，管。２ａ．５ｍ麦封２℃ 开始，２℃／ｉ至一植冰，．／ｎ降至一以ｍｎ降７０３ｑｍｉＣ３２℃ ，１以０℃／ｎ从一３ｍｉ２℃降至一１０℃ ，０备好液氮及镊子，迅速放人液氮中。１２２胚胎复苏玻璃化组从液氮中取出冷冻麦．．管，从外套管内取出装有胚胎的麦管，快速将麦管从液氮中转移到３７℃预热１ｈ的１０ｍｌＬ蔗糖、０．ｏ／１ｍｇｍＳ的ＨＦ中１ｉ，／ｌＡＨＴｎ后移至含０５ｍｌＬ蔗ａｒ．ｏ／糖、．５ｏＬ蔗糖溶液中，０２ｌｍ／分别停留３ｍｎ最后在ｉ，含１ｇｍＳ０ｍ／ｌＡ的ＨＦ中平衡５ｒｎ后移入培养ＨＴｉａ箱内培养。程序化组取出麦管，在空气中停留４０ｓ后，５℃水浴１ｉ后转至１５ｍＬＬ丙二醇＋．３ｎａｒ．ｏ／０２ｍｏＬ蔗糖、．ｏ／ｌ／１０ｍｌＬ丙二醇＋０２ｍｏＬ蔗糖、．ｌ／

玻璃化冷冻对冻融卵裂期胚胎移植周期结局的影响

种植率２６．１％，流产９个周期（８．５％）。慢速程序冷冻复苏２２５个周期、８１８个胚胎，存活５９８个（７３．１％），
完整存活４３６个（５３．３％），移植２２５个周期，临床妊娠７４个周期（３２．９％），种植率１５．２％，流产７个周
Ｑｉｎｒａ￣，ＨｕａｎｇＱｉｙｕｎ，ＣｈｉＬｉｎｓｈｅｎｇ，ＺｈａｎｇＪｉｎｇｗｅｎ，ＺｈｕＬＬＲｅｐｒｏｄｕｃｉｔｖｅＭｅｄｉｃａｌＣｅｎｔｅｒ，ＦｏｓｈａｎＭａｔｅｒｎａｌ
Ｉｎｌｆｕｅｎｃｅｏｆｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｏｎｅｌｉｎｉｃａｌｏｕｔｃｏｍｅｏｆｈｕｍａｎｆｒｏｚｅｎ — ｔｌｌａｗｅｄｃｌｅａｖｅｄｅｍｂｒｙｏｔｒａｎｓｆｅｒＬｉｕ
１０７（４３．９％）ｏｆｔｈｅｍｇｏｔｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｅｇｎａｎｃｙ，ｔｈｅｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓ２６．１％（１６５／６３２）．Ａｓｔｏｓｌｏｗ —ｆｒｅｅｚｉｎｇｍｅｔｈｏｄ，ｉｎ２２５ｅｍｂｙｏｒｔｈａｗｃｙｃｌｅｓ，８１８ｅｍｂｙｏｒｓｗｅｒｅｔｈａｗｅｄ，５９８（７３．１％）ｏｆｔｈｅｍｓｕｖｉｒｖｅｄ，４３６（５３＿３％）ｏｆｔｈｅｍｉｎｔａｃｔｌｙｓｕｒｖｉｖｅｄ，ａｎｄ５９４ｅｍｂｙｏｒｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｉｎ２２５ｃｙｃｌｅｓ，ａｎｄ７４（３２．９％）ｏｆｔｈｅｍｇｏｔｃｌｉｎｉｃａｌ

玻璃化冷冻技术的研究进展

人成熟卵母细胞处于减数分裂的ＭⅡ期，细胞体积大，表面积与体积比值小，水分进出细胞膜的速度慢，在冻融过程中极易受到细胞内外冰晶形成造成的可逆和不可逆损伤，如皮质颗粒提前发生胞吐，透明带变硬，纺锤体微管解聚，染色体排列异常等［２，１１］。这些生理变化直接导致卵母细胞冻融后存活率和受精率下降，也是卵母细胞冷冻保存技术发展缓慢的主要原因。玻璃化冷冻对复苏后ＭⅡ期卵母细胞纺锤体形态和染色质排列并无明显的影响。研究发现，卵母细胞快速解冻后，β－微管解聚，染色质仍在赤道板浓缩。２ｈ后，β－微管重新聚集，纺锤体形态正常［７］。Ａｎｔｉｎｏｒｉ等［１２］使用１５％ＥＧ，１５％ＤＭＳＯ，加０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖及Ｃｒｙｏｔｏｐ做玻璃化冷冻，解冻３３０枚卵子，其存活率、受精率和妊娠率分别为９９．４％，９２．９％和３２．５％。目前，很多研究均采用Ｃｒｙｏｔｏｐ做人卵母细胞玻璃化冷冻［２，１０，１２－１３］，取得较为满意的结果。因为该技术可使承载卵母细胞的玻璃化溶液终体积低于１ μＬ，冷冻速率达到－２３０００℃／ｍｉｎ，避免了冰晶形成，而且可将渗透性ＣＰＡ的浓度降低３０％，极大地减弱了毒性效应，最终使解冻后的卵子具有较高的存活率、受精率和妊娠率。此外，Ｃｒｙｏｔｏｐ玻璃化冷冻卵母细胞似乎也不影响减数分裂中纺锤体和染色体的排列，避免发生基因异常现象［１３］。
不同的渗透性ＣＰＡ影响细胞膜的渗透性，这不仅与各自的化学特性和温度有关，而且针对不同物种的细胞以及发育阶段不同的细胞，ＣＰＡ的作用也有很大不同。研究发现，ＧＶ期卵母细胞的玻璃化冷
１５２
国际生殖健康／计划生育杂志２００８年５月ｎ，Ｍａｙ．２００８，Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．３

人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻解冻后复苏效果及妊娠结局探究

人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻解冻后复苏效果及妊娠结局探究发表时间：2016-12-22T16:12:16.990Z 来源：《航空军医》2016年第23期作者：费黎明钟玲红杨贵忠龙智慧王伟善赫义龙张[导读] 探究分析人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻解冻后复苏效果及其妊娠结局。

长沙生殖医学医院 410000【摘要】目的：探究分析人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻解冻后复苏效果及其妊娠结局。

方法：选取2013年3月至2016年1月期间，在我院生殖中心行玻璃化冷冻解冻患者，其中有卵裂期胚胎解冻420个周期（卵裂组），囊胚解冻120个周期（囊胚组），比较两组患者玻璃化冷冻解冻后的复苏效果及妊娠结局。

结果：两组患者的复苏率、流产率及异位妊娠率比较无显著差异（P>0.05）；囊胚组的妊娠率57.5%和种植率45.76%，均要优于卵裂组的妊娠率44.29%和种植率23.98%（P<0.05）；卵裂组中卵裂球完全存活患者的妊娠率及胚胎种植率优于囊胚组中胚胎完全存活患者的妊娠率及胚胎种植（P<0.05），具有统计学意义。

结论：囊胚解冻移植的妊娠结局要好于卵裂期胚胎。

【关键字】卵裂期胚胎；囊胚；玻璃化冷冻；近年来，冻融胚胎移植（FET）已经成为辅助生殖技术不可缺少的技术，其中玻璃化冷冻式是最常用的方法。

该方法具有安全稳定、可靠、易操作等优点[1]，已经成为卵裂期胚胎和囊胚的首选冷冻方法。

本次研究将卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻解冻后复苏效果及妊娠结局进行比较，现报道如下。

1.资料与方法1.1一般资料本次研究选取2013年3月至2016年1月期间，在我院生殖中心行玻璃化冷冻解冻患者，其中有卵裂期胚胎解冻420个周期（卵裂组），囊胚解冻120个周期（囊胚组），患者年龄26~48岁，平均年龄（32.35±3.62）岁；其中不孕原因包括：排卵障碍60例，输卵管问题268，男方因素162例，不明原因50例。

两组患者的年龄、不孕原因等一般资料无显著差异（P>0.05），具有可比性。

玻璃化冷冻胚胎-解冻移植周期中囊胚和卵裂期胚胎的妊娠结果分析

ｅｃｔｏｐｉｃｐｒｅｇｎａｎｃｙｒａｔｅｎｅｉｔｈｅｒ（Ｐ＞０．０５）．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｐｒｅｇｎａｎｃｙｒａｔｅ［５５．２４％（５８／１０５）】ａｎｄｐｌａｎｔｉｎｇｒａｔｅ【５０．７９％（９６／１８９）】ｉｎｔｈｅＢｈｓｔ￣ｙｓｔｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｃａｎｔｌｙｂｅｔｔｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｃｌｅａｖａｇｅｇｒｏｕｐ［３１．２５％（１２０／３８４）】ａｎｄ［２３．３６％（７５／３２１）］ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｐ＜Ｏ．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＶｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｓａｋｉｎｄｏｆｆｒｅｅｚｉｎｇｍｅｔｈｏｄ，ｗｈｉｃｈｈａｓａｇｏｏｄｅｆｅｃｔｏｎｂｌａｓｔｏｃｙｓｔａｎｄｃｌ￣ｖａｇｅｓｔａｇｅｅｍｂｒｙｏ，ｂｕｔｔｈｅ
关键词：囊胚；卵裂期胚胎；玻璃化冷冻；解冻；移植周期；妊娠结果中图分类号：Ｒ．７１文献标识码：Ａ文章编号：１００１— ５１８３（２０１８）０８— ８１３—０３
Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｒｅｇｎａｎｃｙｒｅｓｕｌｔｓｏｆｂｌａｓｔｏｃｙｓｔａｎｄｃｌｅａｖａｇｅｅｍｂｒｙｏｄｕｒｉｎｇｖｉｔｒｉｆｉｅｄｆｒｏｚｅｎｅｍｂｒｙｏ—－ｔｈａｗｉｎｇｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｃｙｃｌｅ
（新疆医科大学第一附属医院生殖医学中心，乌鲁木齐新疆８３００５４）
摘要：目的通过回顾性研究，分析囊胚和卵裂期胚胎玻璃化冷冻解冻移植周期的妊娠结果影响。方法以２０１６年１月一２０１７年１０月新疆医科大学第一附属医院生殖助孕中心作为研究阶段开展回顾性分析，选择需玻璃化冷冻解冻患者，根据选择囊胚和卵裂期胚胎分为卵裂组、囊胚组，进行囊胚培养、玻璃化冷冻、胚胎的玻璃化解冻、囊胚培养，对比妊娠结局。结果两组年龄、不孕时间、移植周期数、ＨＣＧ内膜厚度、平均移植胚胎数差异不显著，无统计学意义，ｐ＞０．０５。两组患者的复苏率、多胎率、流产率、异位妊娠率比较无显著差异（Ｐ＞Ｏ．０５）；囊胚组的妊娠率５５．２４％（５８／１０５）、种植率５０．７９％（９６／１８９）均要优于卵裂组的妊娠率３１．２５％（１２０／３８４）、种植率２３．３６％（７５／３２１），Ｐ＜Ｏ．０５，具有统计学意义。结论玻璃化冷冻解冻是一种效果明显的冷冻方法，对于囊胚和卵裂期胚胎有良好的复苏效果，但是囊胚冷冻移植的临床效果更加明显。

玻璃化冷冻胚胎、配子及卵巢组织安全性研究进展

等，细胞外冷冻保护剂有蔗糖、藻糖等。多数学者海认为ＥＧ加上大分子糖类是最广泛使用的比较理想的冷冻保护剂［。３３
是４．＋，３．＋．。认为透明带外表小孔直径５７３和８２８４２
变小、目减少对抵抗病原菌入侵有利，数但对胚胎从
构重新恢复到原来的状态，有些胚胎出现严重的损
很短，安全性一直受到关注，文就近年来玻璃其本
化冷冻技术冷冻胚胎及配子的安全性研究综述。玻璃化冷冻损伤因素
高浓度冷冻保护剂和低温会对配子、胚胎及卵巢组织造成化学和物理损伤。化学损伤是指冷冻保护剂的细胞毒性作用；物理损伤是指细胞内水份在降温时形成冰晶对细胞膜、细胞器的机械性损伤，降温、以及复温时细胞内外渗透压改变而造成的渗透ｌ损伤。生故需对冷冻保护剂和降温复温速率进行优化。玻璃化冷冻保护剂及载体的选择快速降温有利于玻璃化形成，以为提高热传所导性采用各种载体，主要有麦管、细麦管（放、拉开封闭）拉细玻璃管、环、、铜尼龙环、电子显微镜栅以及无载体微滴法；常用细胞内冷冻保护剂有：甲二
外部摄取营养物质有害，其对培养４胎更有尤８ｈ胚害。以此解释培养２，８并４４ｈ胚胎存活率不同，速慢
冷冻组、璃化组、照组分别是：４ｈ３％，７玻对２９２％，

玻璃化冷冻人成熟卵母细胞显微受精后冻融胚胎移植成功并分娩1例

ＣｏｏｌｉｎｇＫｉｔ（日本ＫＩＴＡＺＡＴｏ公司），冷冻液分为
１资料与方法
１．１一般资料
女方，３３岁；男方，３６岁，因重度少弱精子症于２０１５年３月来本生殖中心行辅助生殖技术助孕。女方平素身体健康，月经规律，Ｂ超监测排卵提示正常，基础性激素检查正常。孕０产０。其丈夫平素体健，无烟酒嗜好，否认腮腺炎、不洁性生活等病史。在本中心进行了３次精液常规分析，其中两次精液分析结果为离心沉淀镜下见不动精子０～１条／ＨＰ。另一次结果：未见精子，并行附睾穿刺取精，未取得精子。曾用中西药治疗，数月后复查精液，常规分析结果：离心沉淀镜检活精子０～３条／ＨＰ，不动精子ｏ～３条／ＨＰ。男方查性激素正常，染色体核型分析为４６，ＸＹ。行ＩＣＳＩ助孕。女方采用短效促性腺激素释放激素激动剂（ＧｎＲＨ— ａ）长方案降调，用重组人促卵泡激素（ＦＳＨ）联合重组人绒毛膜促性腺激素（ａ — ＨＣＧ）促排卵。２０１５年６月１０日经阴道超声引导下穿刺获取卵母细胞１０枚，第二次减数分裂中期（ＭＩＩ）成熟卵母细胞９枚，取卵当天对男方进行了３
ｔｏｐ载杆（体积＜２Ｌ）。装载后将载体投人液氮罐

玻璃化冷冻人卵母细胞体外受精－胚胎移植9例临床分析

玻璃化冷冻人卵母细胞体外受精－胚胎移植9例临床分析黄华;伍玲园;唐秀法;陈自洪;孙燕萍;牛向丽【摘要】Objective To explore the effect of vitrification of human oocytes applied to in vitro fertilization and embryo transfer (IVF-ET).Methods Nine patients who could not be fertilized due to male factors underwent IVF-ET.The mature ova of these patients were treated with vitrified cryopreservation .Intracytoplasmic sperm injection (ICSI) was conducted after the ova were thawed .The recovery, fertilization,segmentation and pregnancy after transplantation were recorded .Results A Total of 58 ova were thawed in the 9 patients,and the recovery rate was 68.2%(58/85) .Of the mature ova received ICSI after recovery ,40 ova were fertilized and 34 developed into embryos . The fertilization rate and segmentation rate were 69.0%and 85.0%respectively.In 7 transplantation cycles ,15 embryos were transplanted and clinical pregnancy was completed in 3 cases,and the clinical pregnancy rate was 42.9%.Conclusion Vitrified cryopreservation of human oocytes can achieve satisfactory clinical pregnancy rate .IVF-ET can be one of the choices for clinical therapy .%目的：探讨人卵母细胞玻璃化冷冻在体外受精－胚胎移植（ IVF-ET）中的应用效果。

人类卵母细胞玻璃化冷冻的研究进展

人类卵母细胞玻璃化冷冻的研究进展玻璃化冷冻技术已逐渐成为辅助生育技术中重要的应用技术之一，玻璃化冷冻可避免冻融过程中细胞内冰晶的形成，降低细胞损伤，在人类配子、胚胎的冷冻保存中取得了不少进展。

近十几年来，玻璃化冷冻技术已成功应用于成熟卵母细胞、未成熟卵母细胞等方面的冷冻保存并取得成功。

该技术操作简单、迅速快捷，正逐渐成为人类辅助生殖技术中重要的应用技术之一。

本文综述了玻璃化冷冻技术在保存人类不同发育阶段卵细胞方面的研究进展。

标签：玻璃化冷冻；卵细胞；辅助生殖技术卵母细胞冻存是辅助生育领域的研究热点之一，冷冻技术主要有程序化冷冻及玻璃化冷冻法。

玻璃化冷冻是一种快速冷冻技术，将冷冻对象放在冷冻保护剂中，待细胞脱水及渗透性冷冻保护剂进入细胞且两者达到平衡后，再投入液氮进行冷冻保存。

玻璃化冷冻可使细胞迅速通过“危险温度区”，使其从液态直接变为无结构的玻璃状态，从而保持溶液状态的分子和离子分布，避免冰晶的形成，减少了细胞的机械性损伤。

Kuleshova等［1］在1999年首次运用玻璃化冷冻技术冻存人类的胚胎并获得健康女婴的出生。

近年来玻璃化冷冻已广泛应用于人类配子的冷冻保存临床研究［2~7］，并取得了不少进展。

1 玻璃化冷冻的基本原理及影响因素1.1 冷冻原理研究发现液体在冷冻过程中可形成晶体和玻璃体两种状态。

物质在晶体中分子由原有无序状的结构改变为有序的排列；而在玻璃体中分子原有的结构顺序没有改变，仍处于液态中的无序状。

液体的性质和降温的速率决定了液体在冷冻过程中以何种状态固化。

从理论上讲，只要获得足够的降温速率，任何液体都可以进入玻璃态，但在工作中，形成玻璃态所需的降温速率往往需要通过在溶液中添加冷冻保护剂来实现。

玻璃化冷冻中，细胞在高浓度的冷冻保护剂中超高速降温，形成无结构的玻璃态，而不形成冰晶，可避免冷冻过程中冰晶对细胞的损伤，使细胞在降温过程中保持完整的结构。

故自玻璃化冷冻技术问世以来，由于其潜在的优势，已在人类辅助生殖中受到青睐。

玻璃化冷冻技术在人类胚胎中的应用价值

玻璃化冷冻技术在人类胚胎中的应用价值目的探讨玻璃化冷冻技术在人类胚胎中的应用价值。

方法选择2014年3月～2016年2月在我院生殖中心做试管婴儿的264例不孕不育患者，经患者知情同意后，将实施体外受精-胚胎移植术患者卵裂期胚胎和囊胚符合冷冻标准的胚胎进行玻璃化冷冻保存。

根据患者情况解冻胚胎移植，观察胚胎复苏后的临床妊娠效果。

结果玻璃化冷冻74个周期，解冻胚胎149枚，解冻后存活胚胎147枚，存活率98.66%；种植胚胎56枚，种植率38.10%；临床妊娠42例（单胎27例，双胎14例，宫外孕1例），临床妊娠率为56.76%。

结论玻璃化冷冻法是人类胚胎保存的优选方法，获得了理想的复苏率、种植率和妊娠率。

[Abstract] Objective To explore the application value of vitrification technique in human embryos. Methods After obtaining the informed consent of 264 infertile patients who tried to have test tube babies in the reproductive center of our hospital from March 2014 to February 2016，vitrification technique was used to preserve the cleavage stage embryos and the embryos meeting the blastaea freezing standards of the patients having received external fertilization-embryo transplantation. The embryo was unfreezed and transplanted according to the patient situation and the clinical pregnancy effect after embryo recovery was observed. Results After 74 periods of vitrification，149 embryos were unfreezed，of which 147 embryos survived，with the survival rate of 98.66%，56 embryos were implanted，with the implant rate of 38.10%，and 42 cases of clinical pregnancy were achieved （27 cases of single birth，14 cases of twins and 1 case of ectopic pregnancy），with the clinical pregnancy rate of 56.76%. Conclusion Vitrification is a preferred method of preserving human embryos as it obtains the desired recovery rate，implantation rate and pregnancy rate.[Key words] Test tube baby；Vitrification techniaue；Human embryos；Application value从1978年世界第一例“试管婴儿”Louise Brown出生至今，全世界已经有超过500多万例通过人类辅助生殖技术（human assisted reproductive technology，ART）诞生的婴儿。

玻璃化冷冻

精率较高，胚胎发育良好。
达到的主要技术和指标：

玻璃化冷冻卵裂期胚胎、囊胚已全面应用于临床

卵子冷冻已开展并应用于临床
已总结成文一篇，已发表

另两篇文章总结中，待发表
请提宝贵意见
复苏卵裂期胚胎398例，复苏囊胚期胚胎59例。
玻璃化法和程序化法冷冻人胚胎发育潜能及临床结局的比较
指标周期数程序化冷冻 133 玻璃化冷冻 457
解冻数
年龄复苏率完胚率平均移植个数周期取消率临床妊娠率种植率流产率
注：*表示两组差异显著，P<0.05
523
30.5±4.2 77.2(404/523) 44.3(179/404) 2.5±0.6 2.3(3/133) 36.2(47/130) 21.1(70/331) 27.7(13/47)
人卵子、胚胎玻璃化冷冻技术的研究及临床应用
汇报内容：
1、研究背景
2、研究方法
3、研究内容
4、研究结果
5、主要创新点
研究背景：
胚胎冷冻保存是辅助生殖领域中不可缺少的重要部分胚胎冷冻技术的作用

提高单次取卵的累积妊娠率
减少了多胎妊娠防止OHSS的发生
研究背景：

冷冻技术的方法
1148
30.2±4.1
94.4(1084/1148)
﹡
73.7(799/1084)﹡ 2.2±0.5﹡ 1.3(6/457) 50.8(229/451) 16.6(38/229)
﹡
30.2(302/1000)﹡
玻璃化法冷冻人卵裂期胚胎和囊胚发育潜能及临床结局的比较
指标周期数解冻数年龄复苏率周期取消率临床妊娠率种植率流产率卵裂期胚胎 398 1007 30.2±4.1 94.2(949/1007) 1.5(6/398) 51.8(203/392) 30.5(273/623) 15.8(32/203) 囊胚期胚胎 59 141 30.0±4.0 95.7(135/141) 0(0/59) 44.1(26/59) 27.9(29/104) 23.1(6/26)

人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻妊娠结局分析

ｔｉｎａｌｍａｔｕｒｅｔｅｒａｔｏｍａｄｉａｇｎｏｓｅｄｏｗｉｎｇｔｏｓｕｄｄｅｎｃｈｅｓｔｐａｉｎ
比例也几近相等。ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析显示，ＣＡ１９９与畸胎瘤
ｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｔｕｍｏｒｍａｒｋｅｒｓｉｎｏｖａｒｉａｎｍａｔｕｒｅｃｙｓｔｉｃｔｅｒａｔｏｍａ
作为一个单独的诊断指标是不够的，但结合超声检查、
ｉｏｖａｓｅＳｕｒｇ，２０１０，５８：２９８—３０１．
成分的显示，含有支气管上皮组织ＭＴＣ中ＣＡ１９９的阳性率显著高于含有消化道和甲状腺组织或其他成分的ＭＣＴ。免疫组化显示：假复层纤毛状上皮黏液性细胞等运气管上皮类似成分的ＣＡ１９９结果阳性，证明了ＣＡ１９９存在于ＭＣＴ的支气管黏膜和腺体，并显示支气管黏膜和腺体分泌ＣＡ１９９的囊性空腔病变Ｅ。而体积增大或双侧性使ＣＡ１９９
更多渗入血液成为可能。血清ＣＡ１９９可以作为ＭＣＴ的协助诊断工具，尽管它
公莉，王艳平，汪秀芹，等．ＣＡ１９９在卵巢畸胎瘤诊断中
的临床意义．中国实用医药，２０１２，７：７ —８．
ＣｈｏＨＹ，ＫｉｍＫ，ＪｅｏｎＹＴ，ｅｔａＩ．ＣＡ１９９ｅｌｅｖａｔｉｏｎｉｎＯ —