胰腺基础讲座—— 第六讲胰腺疾病的动物模型

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内分泌系统疾病动物模型的制备、原理及应用

STZ特异性破坏胰岛β细胞，胰腺不能分泌胰岛素，使机体不能耐受糖分而出现糖尿病。此种情况与临床l型糖尿病发病相似；高热量饮食，再配合低剂量STZ，胰岛素作用于外周组织时作用减低，即可诱导出与2 型糖尿病接近的动物模型。
给猴、狗、大鼠和小鼠等注射链脲佐菌素后，血糖水平的改变也可分为三个时相：①早期高血糖相，持续约1~2小时，乃此药抑制胰岛释放所致；②低血糖相，持续约6~10小时，可能是由于胰岛β细胞破坏，大量胰岛素释放，是血糖显著降低；③24小时后出现稳定的高血糖相即糖尿病阶段，此时大部分胰岛β细胞已呈现不同程度的损伤和破坏。与四氧嘧啶糖尿病不同，链脲佐菌素引起的糖尿病高血糖反应及酮症均较缓和。
STZ是一种含亚硝基的化合物，可通过以下机制特异性地破坏胰岛β细胞：
①直接破坏胰岛β细胞：主要见于注射大剂量STZ后；②通过诱导一氧化氮（NO）的合成，破坏胰岛β细胞； ③STZ激活自身免疫过程，进一步导致β细胞的损害：小剂量注射STZ可破坏少量胰岛β细胞，死亡的胰岛β细胞可作为抗原被巨噬细胞吞噬，产生TH1刺激因子，使TH1细胞系占优势而产生IL-2及IFN-γ，在胰岛局部促使炎性细胞浸润，并活化释放IL-1、TNF-α、IFN-γ、NO和H2O2等物质杀伤细胞。死亡细胞又可作为自身抗原，再次递呈给抗原递呈细胞进行处理，释放细胞因子,放大细胞损伤效应，最终诱发DM。
一.实验性糖尿病动物模型
1 手术切除胰腺法
常采用狗、猫和大鼠等造模，全部或大部分切除实验动物的胰腺，但保存胰十二指肠动脉吻合弓。如果连续两天血糖值超过11.1mmol/L或行葡萄糖耐量试验120min时的血糖值仍未恢复到注射前水平则认为DM造模成功。其机制是全部或大部分切除胰腺后，β细胞缺如而产生永久性DM。

新型慢性胰腺炎（T7D23A小鼠）动物模型

新型慢性胰腺炎（T7D23A小鼠）动物模型胰腺炎是因为胰蛋白酶的自身消化作用而引起的疾病，包括急性胰腺炎、复发性急性胰腺炎和慢性胰腺炎。

这些疾病常常引起腹痛、恶心、呕吐、发热等症状，但并没有特异性疗法。

以往的研究表明，编码消化蛋白酶或其抑制剂的基因若发生突变，则往往会促进急性胰腺炎的发生，并逐渐发展成慢性胰腺炎。

例如，PRSS1（阳离子胰蛋白酶原）、CTRC（胰凝乳蛋白酶C）以及SPINK1（Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂1）的致病突变通过刺激自发激活或干扰保护机制，从而促进胰蛋白酶原转化成有害的胰蛋白酶。

不过，基因突变引起的胰腺内胰蛋白酶原自发激活具有直接致病作用，这虽然获得了大量的遗传和生化证据支持，但目前还缺乏适当的动物模型来证实。

更重要的是，由于胰蛋白酶原自身激活所驱动的自发性慢性胰腺炎的动物模型的缺乏，这阻碍了针对胰内胰蛋白酶的治疗药物的临床前试验。

为此，波士顿大学口腔医学院（Henry M. Goldman School of Dental Medicine）的Andrea Geisz和Miklós Sahin-Tóth开发出一种T7D23A基因敲入小鼠，以填补此领域的空白。

这种小鼠携带阳离子胰蛋白酶原（T7亚型）的杂合p.D23A突变，为胰腺炎的研究和治疗提供了出色的模型。

这项成果近日发表在《Nature Communications》上。

T7D23A基因敲入小鼠的开发小鼠基因组包含20个胰蛋白酶原基因。

之前的研究表明，只有四种胰蛋白酶原高水平表达，它们分别是：T7、T8、T9和T209亚型。

其中，T7亚型占胰蛋白酶原总量的40-50%，并且与其他亚型相比自发激活更快，产生的胰蛋白酶水平也更高。

为了产生自发激活增加的T7突变体，研究人员在激活肽中引入了Ala突变，以取代Asp23（p.D23A）。

为了在体外测试T7 p.D23A突变体的激活特性，他们纯化了重组野生型和突变型T7胰蛋白酶原，并测定了自发激活。

金黄地鼠胰腺癌动物模型的建立

金黄地鼠胰腺癌动物模型的建立马青松;张小明;沈成义;吴泽珊;蒲宇;武超颖;杨正伟【摘要】Objective:To establish the N-Nitrosobis (2-oxopropyl)amine(BOP)-induced animal model of pancreatic cancer in ham-sters. Methods:120 female Syrian golden hamsters were randomly divided into experimental group (80) and control group (40). The hamsters of experimental group were subcutaneously injected with 10mg/kg body weight BOP,once a week for 7 weeks;control group were injected with normal saline. 10 hamsters in experimental group and 5 in control group were sacrificed randomly at the 11th-week after the first injection and thereafter at 2-week intervals respectively. Histopathologic examinations were performed. Results:Jaundice, malnutrition and metastasis were found in some animals of experimental group. The average weight was lighter than control group,and the difference was statistically significant (P<0. 05).23 pancreatic cancers were found by naked eyes. One case showed 3 pancreatic tumors. 3 cases showed 2 tumors,and the others were single. Among them,tumor diameter is smaller than 5mm while equal to or larger than 5mm was found in 7 and 16 respectively. The median tumor diameter,volume and weight was 6. 8mm,178. 71 mm3 and 0. 32 g re-spectively. Pathologic findings of 9 cases of pancreatic carcinoma are in situ. 22 cases of invasive carcinoma were all pancreatic ductal adenocarcinomas. All tumor-bearing hamsters were associated with different degrees of atypical ductal hyperplasia. Atypical ductal hyperplasiawere found in toto animals 19 weeks later. Totally 65 cases of atypical ductal hyperplasia were found in the experimental group. The overall tumor-generating rate was 81. 3%(65/80). Conclusion:BOP successfully induced PDAs in Syrian golden hamsters. The model establishment method is simple and easy to copy. Histopathologic findings are similar to human pancreatic cancer. It is suggested that it’s an ideal animal modelof pancreatic cancer for in vivo studies.%目的：建立N-Nitrosobis(2-oxopropyl)amine(BOP)诱导性金黄地鼠胰腺癌动物模型。

急性胰腺炎动物模型研究进展

急性胰腺炎动物模型研究进展吴复刚1 圠智高2?尚瑞莲? 孙自?2 王要军2?1山东郓城县张营医院呱东郓城 274?00;?济南军?总医院斈化科山东济南?250?31）??【?图分类号】R5?7 【文献标识态】A ?文章编?】16?2-5?85(2009)06-0038-02 ??栥性胰腺梎（AP?是消化擻统常见病，其起旅突然，旅情凶险?进展迅耟，治疗仰难，死?率高，廠以上特梹而为临嚊医生所惘手。

为庆研究A?的发病漺制及其相应治疗疹法、策浥，多年来，医学敌人士一直致力于?找理想纄AP动扩模型以满足临床瀔究的需醁。

经过多年探索，AP动物模型的制备方法垗到了极儧的丰富手段也緥臻成熟?根据A?动物模型制备的栻体方法根据是?需要手眯介入而?制备方擕分为：觴伤性，非致伤性?药物诱?)及混專性。

现?而述之?1 致伤性袢结扎法是20世纪80年代初由Chetty提出的制备大鼠胰腺炎模型的方法，意即将胆胰管于十二指肠入口上下各约1cm结扎，从而诱发AP模型，该法操作简单，重复性好，费用经济，但该方法会产生较剧的胃潴留，从而导致严重脱水，使胰腺炎相关研究的准确性受到较多争议[1]。

为了克服上述缺点，据Chetty法衍生出很多改良法。

如将十二指肠切开，于十二指肠纵向置入一塑料管，余法同Chetty，该法克服了胃潴留的问题，但操作似乎难度较大，创伤也较大。

王广义等在十二指肠结扎的基础上，再行两结扎点切断，并剩余段十二指肠和胃吻合术，该法术后多短期内水肿明显，故此实际操作中受到技术水平的限制，从而使模型稳定性受到影响。

另外根据胰腺导管在不同节段汇入胆总管的解剖结构特点，再在上述原理的基础上进行胆胰管壶腹部结扎法，将胆总管末端入十二指肠部结扎，胆管内压升高使胆汁反流入胰，胆盐直接激活胰酶产生自身消化从而产生AP发病过程。

该法简单，操作性好，针对胰腺炎发病机制复制模型更增大了该类研究的可信性[2]。

该法的主要缺点在于胰腺开口的解剖结构变异性较大，因某些变异胰管直接汇入十二指肠，从而导致模型某种程度上受影响。

胰腺实验外科

被膜下注射法

术前准备：术前禁食12小时，自由饮水麻醉：2.5%戊巴比妥钠腹腔内注射麻醉，剂量为0.1ml/100g。或采用乙醚吸入麻醉胰腺炎的诱导：麻醉后将大鼠平卧固定，正中切口进腹，翻开胃，提起大鼠脾脏和胰尾，沿胆胰管方向于被膜下均匀注射5%牛磺胆酸钠1ml，使整个胰腺隆起，退出针头，关腹
胰胆管逆行注射法

剖腹后，暂时夹闭胆总管，从胰胆管会合处直接进针或经十二指肠插管到胰管，逆行注入活性胰酶或可激活胰酶的物质，如脱氧胆酸钠、胆汁等
急性重症胰腺炎动物模型

实验目的 :本实验介绍了几种制备大鼠急性重症胰腺炎模型的方法，在初步了解、相互比较的基础上，应掌握一两种常用方法，以便于今后开展相应的观察研究工作实验动物 :S.D.大鼠，体重200～300g
胰管内逆行注射法

术前准备：术前禁食12小时，自由饮水麻醉：2.5%戊巴比妥钠腹腔内注射麻醉，剂量为0.1ml/100g
胰腺炎的诱导

常规消毒后腹部正中切口进腹，翻开胃及小肠，找到胆胰管，于十二指肠端用小动脉夹阻闭，出肝门端以0号丝线结扎于出肝门端将5号针头刺入胆胰管内恒压下注入5%牛磺胆酸钠溶液，注入量按0.1ml/100g 体重计算，5分钟内注完注毕后10分钟去除结扎线和动脉夹，逐层关腹。术后禁食，自由饮水
胰腺实验外科
上海交通大学附属第六人民医院外科戚大川
急性水肿性胰腺炎动物模型

实验目的 : 利用化学诱导法制备急性水肿性胰腺炎介绍在大鼠中制备该模型的常用化学剂及其剂量
实验动物
雌性S.D.大鼠，体重200～300g
ห้องสมุดไป่ตู้验步骤

冷冻治疗胰腺癌动物模型的建立

小型猪在解剖、生理结构等特点方面接近人类，更适合作为冷冻治疗的动物模型。
五冷冻治疗猪胰腺癌模型
——建立方法设想 ——建立方法设想
• • • • 胰腺癌人工造瘤存在巨大困难。化学诱导法、基因工程法的可行性？移植性肿瘤模型？人体肿瘤异种移植！最大影响因素：免疫防御功能兔：腋下多次人胰腺癌细胞异位种植？猪：人胰腺癌细胞猪胰腺原位种植？射线照射制造肿瘤模型?
2.2 原位种植模型
•
1985年 Tan等首先将人胰腺癌细胞株AsPC-1 注射于裸鼠胰腺十二指肠叶型。
优点
• 成瘤时间短、成瘤率高。 • 维持原有瘤组织结构。 • 广泛用于各种治疗方式对胰腺癌或其转移瘤影响的研究。
缺点
• 消化酶处理细胞悬液，破坏原有组织结构。 • 在注射过程中瘤细胞可能丢失进入腹腔，造成人为的腹膜种植。 • 技术要求较高，肿瘤来源不是自身的，仍然属于舶来品。
1. short reproductive cycle 2. less suture ligatures 3. less bleeding 4. cheaper 5. large litter sizes 6. diverse gene pool 7. tolerate a wide variety of surgical and medical interventions 8. more ideal for surgical experimentation 1. easy to house 2. suited for long-term experiments 3. well-established animal research programs 4. surgical familiarity with this species

急性胰腺炎动物模型研究进展仁德芳

急性胰腺炎动物模型研究进展仁德芳摘要】急性胰腺炎是一种常见急腹症，重者病情进展快，病死率高，所以对于AP发病机制、病情的发展变化和治疗方法的研究显得十分重要。

本文旨在对新近大鼠急性胰腺炎模型的各种建模方法及进展进行总结概述，以便相关科研人员在实际研究中合理运用。

【关键词】急性胰腺炎；动物模型[ 中图分类号 ]R2[ 文献标号 ]A[ 文章编号 ]2095-7165（2018）19-0343-02急性胰腺炎（Acute Pancreatitis, AP）是一种常见急腹症，病变程度轻者常呈自限性，重者病情进展快，病死率高，所以对于AP发病机制、病情的发展变化和治疗方法的研究显得十分重要。

本文旨在对大鼠急性胰腺炎模型的各种研究方法及进展进行总结概述，以便相关科研人员在实际研究中合理运用。

1 逆行胰胆管注射法1980年Aho等[1]首创将5%牛黄胆酸钠经十二指肠乳头逆行注入胰胆管制得AP模型，其机制是注入牛黄胆酸钠激活胰酶并破坏胰管粘膜的完整性，活化的胰酶进入胰实质，引起胰腺自身消化及局部炎症。

同时，大量单核吞噬细胞被激活，合成和释放大量氧自由基及炎症因子，引起氧化应激及炎症反应，形成恶性循环，逐步进展为全身炎症反应综合征[2-3]。

该AP模型的严重程度取决于给药浓度、速度及给药持续时间[4]。

其优点是发病迅速，成模率高，可模拟胰管梗阻和胆汁反流所致急性胰腺炎，表现为胰腺出血坏死，累及肺、肾、肝、肠等多脏器功能[5]。

该造模方法在病因、致病机制、病理等方面与临床上的AP相似，且模型稳定，重复性好，标准化程度高[6-7]。

目前已被公认为 AP 的经典模型。

缺点手术操作复杂，易引起出血及肠管狭窄，易损伤腹腔脏器，并发感染，病程发展过快，死亡率高。

后来学者对该方法不断改进。

在穿刺技术方面，为避免十二指肠出血、狭窄等情况，现多不切开十二指肠肠壁，代之直接胰胆管穿刺法和经十二指肠胰胆管穿刺法。

直接胰胆管穿刺法是开腹后沿十二指肠内侧找到胆胰管开口，用穿刺针直接逆行刺入胆胰管给药[5]。

慢性胰腺炎小鼠模型构建原理

慢性胰腺炎小鼠模型构建原理慢性胰腺炎（CP）是一种较为常见但治疗又十分困难的疾病，其特点为渐进的、不可逆的胰腺形态学变化，是一种连续的或复发性的炎症性胰腺疾病。

以往的研究表明，编码消化蛋白酶或其抑制剂的基因若发生突变，往往会促进急性胰腺炎的发生，并逐渐发展成慢性胰腺炎。

此外，慢性胰腺炎的遗传风险也可以通过与胰蛋白酶活性无关的机制来介导。

尽管体外观察到的结果支持基因突变引起的胰腺内胰蛋白酶原自发激活具有直接致病作用，支持突变诱导的错误折叠和ER应激，但一直缺乏适当动物模型的证据。

针对这些突变基因，研究人员构建了三种慢性胰腺炎点突变小鼠。

1. spink1突变小鼠杂合SPINK 1 c.1942T>C突变直接导致CP，而没有任何辅助因子。

由Spink1+/−小鼠和C57BL/6小鼠繁殖的Spink1+/+小鼠具有正常的胰腺组织学特征，表明携带杂合Spink1突变的患者可以生下健康的后代，这也为患者的产前筛查提供了依据。

参考文献：Sun C, Liu M, An W, et al. Heterozygous Spink1 c. 194+ 2T> C mutant mice spontaneously develop chronic pancreatitis[J]. Gut, 2020, 69(5): 967-968.2. T7D23A小鼠T7D23A点突变小鼠模型，它携带阳离子胰蛋白酶原（T7亚型）的杂合p.D23A突变，这种新模型概括了人类胰腺炎的临床疾病特点，它总是先发展为急性胰腺炎，然后再发展为不可逆的慢性胰腺炎（CP）。

参考文献：Geisz A, Sahin-Tóth M. A preclinical model of chronic pancreatitis driven by trypsinogen autoactivation[J]. Nature communications, 2018, 9(1): 1-9.3. CPA1 N256K小鼠CPA1 N256K点突变小鼠，它的Cpa1基因座上携带人CPA1突变p.N256K，可导致酶错误折叠，并引发慢性胰腺炎。

急性胰腺炎实验动物模型技术原理

急性胰腺炎实验动物模型技术原理胰腺炎动物模型是研究胰腺炎发病机制及探讨临床治疗的最好的方法,但是由于不同类型的胰腺炎间其发病机制不同,对胰腺炎的发病机制还不清楚,所以没有一种很好的动物模型可以模拟人的胰腺炎。

但自1856年Busnar-do等以胆汁和橄榄油混合液注射犬胰管,成功地诱导急性胰腺炎模型以来,经过一个多世纪的探讨,胰腺炎动物模型的制备方法主要有以下几种:1.牛磺胆酸钠造模1）模型建立方法:大鼠于术前12h禁食,自由饮水,戊巴比妥溶液2mg/100g体质量行腹腔内麻醉,固定。

经上腹正中切口入腹,提起十二指肠以小号血管夹分别夹住十二指肠段和肝门部胰胆管。

ＴＢ针(4.5针头,1ml注射器)穿刺胰胆管(最好用微泵注射),注射5%C牛磺胆酸钠(0.1ml/100g),持续1min,停留5min,然后拔除针头,去除血管夹。

可观察大鼠胰腺组织明显水肿、出血,缝合腹壁各层[赛业可构建急性胰腺炎动物模型]。

2）模型的特点和功用：此法是急性坏死性胰腺炎(ANP)较成熟的模型。

3）模型建立和使用注意事项：24h的存活率为50%左右2.蛙皮素造模1）模型建立方法:大鼠于术前12h禁食,自由饮水,蛙皮素(25μg/kg)腹腔注射,注射后5h形成水肿性急性胰腺炎(CIP)2）模型的特点和功用：此法是水肿性急性胰腺炎模型,程度较轻.3）模型建立和使用注意事项：现在国内以研究ANP为主,使用此模型请注意研究内容.3.逆行胆管注射法结扎胰胆管,行主胰管套管插管,经主胰管注入可激活胰酶的物质或胰酶,如脱氧胆酸钠、自体胆汁等。

胰酶注入胰管产生急性胰腺炎,如与PGE2同时灌注则产生急性坏死性胰腺炎。

Schmidt等用低量胰管灌注糖脱氧胆酸结合静脉注射蛙皮素制成大鼠急性胰腺炎模型,可产生腺胞中度坏死的均匀损伤,适用于对胰腺炎的研究.4.胰管胆结扎法结扎进入十二指肠处胰胆管或单纯结扎胰管,Lerch等在壶腹部结扎胰胆管,结扎后6h出现水肿性胰腺炎,12h后出现出血、坏死、炎性细胞浸润。

第六讲胰腺疾病的动物模型

第六讲胰腺疾病的动物模型李静;唐承薇【摘要】@@ 胰腺疾病主要包括急性胰腺炎、慢性胰腺炎和胰腺癌,其动物模型的制作在研究疾病的发病机制、病因、治疗、转归等方面有重要意义.【期刊名称】《中华胰腺病杂志》【年(卷),期】2007(007)006【总页数】3页(P412-414)【作者】李静;唐承薇【作者单位】610041,成都,四川大学华西医院消化内科;610041,成都,四川大学华西医院消化内科【正文语种】中文【中图分类】R5胰腺疾病主要包括急性胰腺炎、慢性胰腺炎和胰腺癌，其动物模型的制作在研究疾病的发病机制、病因、治疗、转归等方面有重要意义。

急性胰腺炎的模型急性胰腺炎(AP)的发病机制甚为复杂，目前已有多种动物模型，涉及到的实验动物包括大鼠、兔、猪和犬等。

以下介绍几种常用、稳定和可靠的方法。

一、大鼠AP模型(一) 乙硫氨酸喂饲法1．动物：重300 g左右的大鼠，雌雄不限。

2．方法：每日给大鼠灌服2次DL-乙硫氨酸，每次50 mg，连续喂饲2 d，第7天即可剖解动物。

3．病理变化：可见胰腺组织呈变性、坏死及导管囊状扩张等炎性改变，约1/3的动物可有腺泡萎缩及纤维增生等慢性病变。

4．特点：该模型安全、稳定、方法简便、耗时短，可采用不同的喂养时间来控制疾病的严重程度，可出现腹水、酸中毒、低氧和低血容量症，可充分评估病程及病理生理学变化。

5．用途：适用于探讨发病机制、研究氧自由基清除剂和口服蛋白酶抑制剂治疗急性坏死性胰腺炎的效果。

(二) 胰腺局部注射法1．动物：重300 g左右的大鼠，雌雄不限。

2．方法：将胆汁、胆汁酸或细菌悬液直接注入大鼠胰腺，24 h后观察结果。

3．临床及病理变化：该法可造成出血性胰腺炎及胰腺脓肿，注射24 h后血清淀粉酶明显升高，3 d后稍有下降。

术后10 d处死，局部剖检可见变性、坏死等炎症改变，其程度视注射物的性质和剂量而有所不同。

4．特点：是研究AP应用最早也是最广泛的模型之一。

胰腺癌动物模型的比较与选择

!M"!胰腺癌动物模型的比较与选择延张励１，许小凡１，辛嘉萁２，张　红１，３１陕西中医药大学基础医学院，陕西西咸新区７１２０４６；２慕尼黑工业大学伊莎河右岸医院胰腺病研究所，德国慕尼黑８１６７５；３陕西省免疫炎症相关疾病中医药防治国际联合研究中心，陕西西咸新区７１２０４６摘要：胰腺癌（ＰＣ）发病隐匿、进展快、预后差，目前，其临床治疗尚无标准方案，而新的靶向治疗获益率并不明显，导致ＰＣ的死亡率极高。

因此，认识ＰＣ的发生、发展机制成为目前亟待解决的首要难题，而建立可靠的ＰＣ动物模型，是深入探讨ＰＣ发生发展、侵袭、转移机制及优化有效治疗靶点的基础。

目前，大量的研究已建立了多种ＰＣ动物模型，本文现对各种常用的动物模型进行比较，为ＰＣ研究过程中动物模型的选择提供一定的参考。

关键词：胰腺肿瘤；疾病模型，动物；化学，药物；异种移植模型抗肿瘤试验基金项目：国家自然科学基金（８２１７４２０１，８２１０４８１５）；陕西中医药大学创新团队项目（２０１９－ＹＬ１４）；陕西省特支计划（３０３／１４１０２００４７）ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒＹＡＮＺｈａｎｇｌｉ１，ＸＵＸｉａｏｆａｎ１，ＸＩＮＪｉａｑｉ２，ＺＨＡＮＧＨｏｎｇ１，３．（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｈａａｎｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＸｉｘｉａｎＮｅｗＡｒｅａ，Ｓｈａａｎｘｉ７１２０４６，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅＩＩ，ＫｌｉｎｉｋｕｍｒｅｃｈｔｓｄｅｒＩｓａｒ，ＴｅｃｈｎｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＭｕｎｉｃｈ，Ｍｕｎｉｃｈ８１６７５，Ｇｅｒｍａｎｙ；３．ＳｈａａｎｘｉＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｉｎｔＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｆｏｒＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＩｍｍｕｎｅＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎＲｅｌａｔｅｄＤｉｓｅａｓｅｓｗｉｔｈＴＣＭ，ＸｉｘｉａｎＮｅｗＨｒｅａ，Ｓｈａａｎｘｉ７１２０４６，Ｃｈｉｎａ）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＺＨＡＮＧＨｏｎｇ，ｚｈａｎｇｈ１２２７＠１６３．ｃｏｍ（ＯＲＣＩＤ：００００－０００３－１６８２－８１７１）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒ（ＰＣ）ｈａｓｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｉｎｓｉｄｉｏｕｓｏｎｓｅｔ，ｒａｐｉｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄｐｏｏｒｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ｕｐｔｏｎｏｗ，ｔｈｅｒｅａｒｅｎｏｓｔａｎｄａｒｄｃｌｉｎｉｃａｌｒｅｇｉｍｅｎｓｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＰＣ，ａｎｄｔｈｅｂｅｎｅｆｉｔｒａｔｅｏｆｎｅｗｔａｒｇｅｔｅｄｔｈｅｒａｐｙｒｅｍａｉｎｓａｔａｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｌｏｗｌｅｖｅｌ，ｗｈｉｃｈｒｅｓｕｌｔｓｉｎｔｈｅｈｉｇｈｍｏｒｔａｌｉｔｙｒａｔｅｏｆＰＣ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ａｎｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｆｏｒＰＣｈａｓｂｅｃｏｍｅａｄｉｆｆｉｃｕｌｔｉｓｓｕｅｔｏｂｅｓｏｌｖｅｄ，ａｎｄｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｒｅｌｉａｂｌｅａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｆｏｒＰＣｉｓｔｈｅｂａｓｉｓｆｏｒｅｘｐｌｏｒｉｎｇｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，ｉｎｖａｓｉｏｎ，ａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆＰＣａｎｄｔｈｅｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｆｆｅｃｔｉｖｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｓ．Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ａｌａｒｇｅｎｕｍｂｅｒｏｆｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｖａｒｉｏｕｓａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｆｏｒＰＣ，ａｎｄｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｃｏｍｐａｒｅｓｔｈｅｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｉｎＰＣｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＰａｎｃｒｅａｔｉｃＮｅｏｐｌａｓｍｓ；ＤｉｓｅａｓｅＭｏｄｅｌｓ，Ａｎｉｍａｌ；Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ；ＸｅｎｏｇｒａｆｔＭｏｄｅｌＡｎｔｉｔｕｍｏｒＡｓｓａｙｓＲｅｓｅａｒｃｈｆｕｎｄｉｎｇ：ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（８２１７４２０１，８２１０４８１５）；ＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＴｅａｍＰｒｏｊｅｃｔｏｆＳｈａａｎｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ（２０１９－ＹＬ１４）；ＳｐｅｃｉａｌＰｒｏｊｅｃｔｉｎＳｈａａｎｘｉＰｒｏｖｉｎｃｅ（３０３／１４１０２００４７）ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５２５６．２０２２．１２．０４４收稿日期：２０２２－０５－１６；录用日期：２０２２－０７－１８通信作者：张红，ｚｈａｎｇｈ１２２７＠１６３．ｃｏｍ胰腺癌（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒ，ＰＣ）是常见的消化系统恶性肿瘤，起病隐匿、恶性程度高、化疗反应差、疾病进展快，加之胰腺的解剖位置特殊、肿瘤切除率低，因此ＰＣ极易复发、预后极差［１］。

I型糖尿病（胰岛素依赖）动物模型

I型糖尿病（胰岛素依赖）动物模型
1、自发性糖尿病模型实验动物：BB大鼠、LETL大鼠、NOD小鼠模型特点：起病快、症状明显，BB大鼠伴有酮症酸中毒。

适用研究：I型糖尿病研究获取方法：直接购买
2、诱发性糖尿病模型（1）手术诱导实验动物：大鼠、猫、狗模型特点：切除胰腺后,β细胞缺失而产生永久性DM。

适用研究：I型糖尿病研究获取方法：全部或大部分切除实验动物的胰腺，但保存胰十二指肠动脉吻合弓。

如果连续两天血糖值超过11.1 mmol/L或者葡萄糖耐量试验120 min时的血糖值仍未恢复到注射前水平则认为DM造模成功。

（2）化学药物诱导（STZ）实验动物：小鼠、大鼠、家兔、狗模型特点：链脲佐菌素（streptozotocin STZ）诱导胰岛β细胞死亡。

适用研究：I型糖尿病研究获取方法：采用STZ腹腔注射。

STZ的参考剂量为50～150mg ／kg。

（另一种四氧嘧啶诱导法由于不如STZ好，这里就不作介绍。

）
3、转基因模型实验动物：NOD-RIP-B7-1小鼠模型特点：过表达辅助刺激因子B7-1而致糖尿病发病时间较正常NOD小鼠明显提前，在12周龄即发生糖尿病。

适用研究：I型糖尿病研究获取方法：自己构建转基因小鼠或直接定制购买。

大鼠胰腺炎模型制备

大鼠急性胰腺炎模型制作0.5%戊巴比妥钠（剂量50mg/ kg）腹部皮下注射进行麻醉，大鼠麻醉后正中切口进入腹腔；在十二指肠对系膜缘无血管区上用5号皮试针头戳一小孔，通过肠壁穿刺孔将另一钝头5号皮试针插入十二指肠粘膜内的胆胰管开口并深入1cm；用两枚显微血管夹临时夹住胆胰管肝门部和穿刺针，以防注射牛磺胆酸钠时液体流人肝脏和十二指肠；用1ml注射器向胆胰管内匀速注射3.5%牛磺胆酸钠（用药剂量1.6ml/kg，注射速度0.2ml/min）；注射完毕后继续阻断胆胰管上下端5min，可观察到大鼠的胰腺出现明显的局限性或弥漫性充血水肿，表面肿大变硬，包膜张力增高，并可有少量血性腹水产生，说明动物模型已建立，移去夹在胆胰管上下端的显微血管夹；用6个“0”丝线荷包缝合穿刺孔，两层关腹。

分笼安置大鼠。

慢性胰腺炎动物模型实用文档自发性慢性胰腺炎大鼠使用自发性慢性胰腺炎大鼠(WBN/Kob rats)可以用在许多方面的研究中,如在研究药物对慢性胰腺炎的治疗时,Redding等使用WBN/Kob rats研究炎症因子COX-2抑制剂对慢性胰腺炎的治疗作用,发现大鼠的炎症浸润和纤维化均明显减轻。

Hisada 等给WBN/Kobrats服用troglitazone,4周后大鼠α-平滑肌动蛋白的表达,I、III型胶原的沉积均明显减轻[4]。

自发性慢性胰腺炎大鼠也可以用于对慢性胰腺炎发病机制的探讨,如Meili等发现WBN/Kob rats中分泌抑制蛋白(secretory tress protein,SSP)的合成和分泌增多[5],Graf R 发现WBN/Kob rats中胰蛋白酶分泌抑制蛋白(pancreatic secretory trypsin inhibitor,PSTI-I)分泌增多。

由此可见自发性慢性胰腺炎大鼠模型稳定可靠,用途广泛,方法简便。

但此模型的缺点是实验周期长,成本很高。

该模型主要表现为慢性胰腺炎的早期特征,缺少晚期并发症的表现。

急性胰腺炎动物模型的具体方法及步骤

急性胰腺炎动物模型的具体方法及步骤原型物种人来源雨蛙肽导致急性重症胰腺炎模式动物品系SPF级C57BL/6小鼠，雄性，周龄为8w-10w，体重为20g-25g。

实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

实验周期4-6 weeks建模方法A组：较轻症状的胰腺炎模型：每周中的一天注射腹腔注射雨蛙肽7次，50 µg/kg（1.25µg/只），每次注射间隔1小时。

共注射6周。

B组：重症胰腺炎模型：每周：1d~3d腹腔注射2次33%乙醇150ul，3g/kg。

2次腹腔间隔12小时。

第4d腹腔注射7次雨蛙肽，50 µg/kg（1.25µg/只），每次注射间隔1小时。

5d~7d腹腔注射2次33%乙醇150ul，3g/kg（每只动物75mg）。

2次腹腔间隔12小时。

以上建模方式持续6周。

C组：正常组。

应用急性胰腺炎模型在建模第6周时，处死各组动物，取新鲜胰腺组织。

固定于4%多聚甲醛24h 以上。

将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内，随后进行脱水，固定，包埋和切片。

进行HE和masson染色，判断胰腺纤维化程度。

HE染色结果：A组为轻微胰腺炎组，B组为严重胰腺炎组，C组为正常组。

B 组跟C组相比胰岛细胞脂肪样空泡变性，部分腺泡细胞疏松水肿，部分腺泡细胞鹰眼样巨细胞病变。

A组跟C组相比胰岛无明显病变，血管有增生。

严重程度不及B组。

Masson染色结果：A组为轻微胰腺炎组，B组为严重胰腺炎组，C组为正常组。

B组与C组相比胰腺血管周边和胰岛纤维化，胰岛细胞脂肪样空泡变性，腺泡细胞也发生淀粉样变性。

A组与C组相比只有血管周边有轻微的纤维化，胰岛和腺泡细胞无明显病变。

取各组实验动物血清，对血淀粉酶，尿淀粉酶，血脂肪酶，谷丙转氨酶、血肌酐及乳酸脱氢酶等生化检测指标联合检测可以评估急性胰腺炎模型。

一种新型L-精氨酸诱导的大鼠急性坏死性胰腺炎动物模型的建立

酶［（５０２± ２．）／１（２４３± ６．）／、４ｈ２３．４０．）／、８ｈ３４．５１８ＵＬ４ｈ１０．３８５ＵＬ、ｈ２６．３６２ＵＬ２（８６０－５２ＵＬ４（７１２± ５．）／、２－５
ｍｏｅｒｕ．ｌｒｔｗｅｅｏｓｒｅｔ１２４ｎ２ｈａｔｒｍｏｅｉｇＣｎｉｓａｉｎ，ｈｅｅｆｄｌｇｏｐＡｌａｓｒｂｅｖｄａｈ，２ｈ，４ｈ，８ｈａｄ７ｆｄｌ．Ｔｍａｆｔｔ４ｅｎｅｏｔｅｌｖｌｏ
ＤＯ：０３７／ｍａｊｉｓ．６４０８．０２１．１Ｉ１．８７ｃ．．ｓ１７－７５２１．２００ｎ
基金项目：新疆军区医院优秀人才基金资助项目作者单位：８００兰州军区乌鲁木齐总医院肝胆外科（３００郭飞、刘江
各种ＡＰ动物模型用于科学研究。通过大鼠腹腔闭合Ｎ时注射Ｌ精氨酸、．缩胆囊素、雨蛙素等诱导ＡＰ是常Ｎ见的动物模型，但给药剂量和频次不容易掌握，多引且
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