三种DNA提取方法对检测草莓镶脉病毒稳定性的研究-论文

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华北农学报・２０１５，３０（３）：２００ — ２０４
三种ＤＮＡ提取方法对检测草莓镶脉病毒稳定性的研究
冉策，陈柳，陆家兰，刘正坪，魏艳敏，赵晓燕，尚巧霞
（１．农业应用新技术北京市重点实验室，北京农学院植物科学技术学院，北京１０２２０６；２．北京农学院教务处，北京１０２２０６）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＤｉｆｆｅｒｅｎｔＤＮＡｉｓｏｌａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｕｓｅｄｉｎｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｄｕｅｔｏｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏ — ｌｉｔｅｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｓ．Ｔｈｅｅｘｉｓｔｉｎｇｏｆｌａｒｇｅａｍｏｕｎｔｓｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓａｎｄｐｉｇｍｅｎｔｓｉｎｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｐｌａｎｔｓｉｎｌｕｆｅｎｃｅｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｈｉｇｈｑｕａｌｉｔｙＤＮＡｆｒｏｍｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｌｅａｖｅｓａｎｄａｔｅｆｒｗａｒｄｓＰＣＲｒｅａｅ．ｔｉｏｎ．ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗｈｉｃｈｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｔｈｅＰＣＲｄｅｔｅｃｔｉｏｎｆｏｒＳｔｒａｗｂｅｒｒｙｖｅｉｎｂａｎ —
摘要：草莓成熟叶片中含有大量的多糖、蛋白质、多酚和色素等物质，影响高质量ＤＮＡ的提取和下游ＰＣＲ反应的进行。为确定适用于ＰＣＲ技术检测草莓镶脉病毒（Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｖｅｉｎｂａｎｄｉｎｇｖｉｒｌｚ￥，ＳＶＢＶ）的ＤＮＡ提取方法，从草莓叶片
（１．ＢｅｉｊｉｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮｅｗＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０２２０６，Ｃｈｉｎａ；２．ＯｆｉｃｅｏｆＡｃａｄｅｍｉｃＡｆｆａｉｒｓ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０２２０６，Ｃｈｉｎａ）
关键词：植物ＤＮＡ提取；ＣＴＡＢ试剂盒；高盐低ｐＨ法；ＳＤＳ法
中图分类号：￥４３２．４１文献标识码：Ａ文章编号：１０００—７０９１（２０１５）０３—０２００—０５
ｄｏＩ：１０．７６６８／ｈｂｎｘｂ．２０１５．０３．０３４
ＳＶＢＶｂｙＰＣＲｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄａｎｄｃｏｍｐａｒｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ．ＳｔｒａｗｂｅｒｙｒｌｅａｖｅｓｉｎｆｅｃｔｅｄｂｙＳＶＢＶｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｔｈｅｍａｔｅｒｉ．
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ｄｉｎｇｖｉｒｕｓ（ＳＶＢＶ），ｔｏｔａｌＤＮＡｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｌｅａｖｅｓｂｙｔｈｒｅｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｔｏｄｅｔｅｃｔ
ｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ，ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙＣＴＡＢｋｉｔｗａｓｔｈｅｂｅｓｔｉｎｔｈｅｓｅｔｈｒｅｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ．
ＲＡＮＣｅ，ＣＨＥＮＬｉｕ，ＬＵＪｉａ — ｌａｎ，ＬＩＵＺｈｅｎｇ — ｐｉｎｇ，ＷＥＩＹａｎ－ｍｉｎ，
ＺＨＡＯＸｉａｏ — ｙａｎ．ＳＨＡＮＧＱｉａｏ — ｘｉａ
中提取ＤＮＡ后，对样品中的ＳＶＢＶ进行特异性的ＰＣＲ检测，比较确定不同ＤＮＡ提取方法对ＰＣＲ检测ＳＶＢＶ稳定性
的影响。以感染ＳＶＢＶ的草莓叶片为材料，分别采用ＣＴＡＢ试剂盒法、高盐低ｐＨ法、改良ＳＤＳ法提取草莓叶片的总ＤＮＡ，将不同方法提取的ＤＮＡ通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法进行测定，对ＤＮＡ产量和质量进行分析。结果表明，３种方法均能获得较为完整的ＤＮＡ片段，用ＣＴＡＢ试剂盒提取的ＤＮＡ质量最高，改良ＳＤＳ法提取的ＤＮＡ质量较低。将不同方法提取的ＤＮＡ经过ＰＣＲ反应特异性检测ＳＶＢＶ后，将与目的片段大小一致的ＰＣＲ扩增产物经序列测定及分析，证明与ＳＶＢＶ的序列相吻合，证明了方法的可靠性，其质量能够满足ＰＣＲ特异性检测需要。
ｃｏｕｌｄｍｅｅｔｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｄｅｍａｎｄｓｏｆＰＣＲｄｅｔｅｃｔBaidu NhomakorabeaｉｏｎｏｆＳＶＢＶｉｎｓｔｒａｗｂｅｒｙｒｌｅａｖｅｓ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｏｔｈｅｒｔｗｏｅｘ．