腺病毒载体在小鼠肝脏的分布及其表达规律研究

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腺病毒的一些常见问题及解答-整理自丁香园

汇总了腺病毒的一些常见问题及解答！1.目前，对于基因治疗的载体选择，很难有一个统一的结论，文章也很多，我将在如下给出。

本人认为，无论选择哪种载体，关键在于此载体在局部的表达效率。

无论是采用IN VIVO 或者EX VIVO的方法，因为我们最终的目的是要在局部表达我的目的基因，并且使其具有一定的作用。

而对于载体的副作用，目前较为公认的就是病毒载体转染效率高，但副作用大；质粒载体毒性小，但转染效率比拟低。

同时，对于目前所常用的一些带有报告基因的表达载体如BD公司所开发的系列载体，pEGFP、pDsRed、pEYFP和pECFP等：这些载体如果用于细胞水平的检测，也许会更加的方便、直观，但是，如果用于体内的基因治疗，那就不是一个理想的载体了。

而传统的表达载体如INVITROGEN公司〔invitrogen )的pCDNA载体系列，会更好一些。

同时，为了获得更加高效的表达，一些公司也开发出了具有信号肽的表达载体，以增加外源基因的分泌表达。

正如一个疾病的治疗一样，治疗的方法越多，就证明还没有一个最有效地治疗手段。

基因治疗的载体也是同样，很难说哪个载体具有高转染、高表达、低毒性的全部优点。

以上是本人的一点愚见，还请各位同道指正。

2.转染过小鼠肝癌细胞H22，请赐教：用什么方法可以到达最正确效果，脂质体、电转还是重组病毒？如果用脂质体，哪家的最好？H22细胞为悬浮细胞，用病毒〔逆转录病毒和腺病毒〕最为理想，一是转染效率高，二是不用筛选直接用于实验。

但逆转录病毒的转染效率并不能到达100%，且影响因素多，而腺病毒感染效率高，几乎可达100%，但只能短期表达〔7－10天〕，随着细胞传代，外源基因会逐渐丧失。

当然，H22也可用脂质体进行转染，筛选应在96孔板上进行，由于培养液少、细胞相对静止，两周后可见细胞克隆生长，在倒置显微镜下用吸管吸取克隆，进行扩大培养。

3.重组腺病毒作基因治疗，因为不是很了解，用AdEasy系统可以吗？具体的实验步骤是来自什么地方？主要细胞及试剂的来源？.BIOgene公司有整个系统，从质粒到细胞都有，我AdEasy的根本原理请参阅文献A Vol.95.pp.2509-2514,March 19984.以腺病毒为载体做肿瘤细胞的基因转染，查文献，病毒滴度测定用噬斑法，但所用细胞不统一，是否有统一规定？就用肿瘤细胞来测行吗？只有能反式提供E1的细胞才能用来测腺病毒滴度，一般用HEK293细胞，用肿瘤细胞肯定不能形成噬斑。

腺病毒常见问题与解答

腺病毒常见问题与解答1、腺病毒载体对目的基因的长度是否有要求？有要求。

对E1和E3双缺失的腺病毒载体，比如AdMax的Kit C、Kit D等，其总包装的外源片断要求小于8 kb。

而对于只有E1缺失或E3缺失的载体，比如Kit A、Kit B等，外源片断要求小于5 kb。

注意，外源片断指包括启动子、外源基因和poly A等在内的整个插入片断。

2、我的试验需要多少总量的腺病毒载体？腺病毒介导外源基因的基因治疗研究一般分为体外培养细胞试验(体外试验)和动物试验(体内试验)两部分，不同的实验设计所需要的病毒量也不尽相同。

根据经验，完成一个完整的肿瘤治疗实验需要腺病毒的病毒量总量约为3×1012VP左右.3、如何提高腺病毒的活性？提高腺病毒的活性，关键应该是在病毒包装过程和扩增过程。

纯化过程只是去掉有缺陷的病毒和细胞碎片等容易引起机体免疫反应的过程，如果扩增的病毒滴度高，那么纯化后就会更高的。

4、克隆到转移载体的基因中的5’和3’UTR（未翻译区）的额外的碱基会影响蛋白表达吗？UTR尽可能短一些，特别是在5’要避免在mRNA里形成二级结构。

在起始密码子ATG 前面可以加一小段（6-9bp）的碱基序列可以增强目的基因的表达，比如Kozak序列(GCCGCCACCATG)。

5、如何判断腺病毒载体是否能高效感染某种细胞？参照文献报道是很简单的办法，也可以用带报告基因的腺病毒先行预实验。

Ad5能高效感染绝大多数人类、小鼠等的体细胞（包括分裂和非分裂细胞），比如肝、肌肉、神经组织等。

但对血液系统来源细胞和某些肿瘤细胞，比如乳腺癌、白血病细胞等，感染效率较低。

6、腺病毒载体在体外实验（in vitro）中应注意哪些问题？1）由于细胞表面受体的差异，腺病毒载体在不同的细胞中转导效率不同。

可根据文献报道或用带报告基因的腺病毒载体判断病毒用量。

2）在细胞处于对数生长期时感染病毒效果较好。

避免在消化细胞后立刻感染病毒，因为此时细胞膜上的病毒受体往往受到了暂时的破坏。

腺病毒载体在基因治疗研究中的应用

腺病毒载体在基因治疗研究中的应用基因治疗是近年来发展非常迅速的一种新型疗法，其通过改变人体内某些基因的表达或功能，从而达到治疗疾病的目的。

而其中的一种常用方法就是利用腺病毒载体进行基因转导。

下面我们将深入探讨腺病毒载体在基因治疗研究中的应用。

一、腺病毒载体基础介绍首先，我们需要了解什么是腺病毒载体。

腺病毒是一种小型病毒，具有广泛的宿主范围和极高的转导效率，因此成为了基因治疗领域中最常用的载体之一。

腺病毒的基因组为一条线性双链DNA分子，它的大小约为30kb，可以携带大量外来基因负责转导。

同时，腺病毒中的大部分基因已被删减或失活，因此可以在病毒粒子内部容纳更多的外来基因。

二、腺病毒载体的优势相比于其他的基因治疗载体，腺病毒载体具有许多的优势。

首先，腺病毒对人体的免疫应答十分低。

因为腺病毒感染人类的过程通常都是无症状的，在人体内会迅速被淋巴系统清除，因此它不会引起人体免疫反应。

其次，腺病毒的转导效率非常高，因为它具有广泛的靶细胞类型和容易侵入细胞的特性。

最后，腺病毒的基因修饰能力也很高，可以很容易的携带大量的外来基因，在转导过程中基因也不会被分解或改变。

三、腺病毒载体在基因治疗中的应用现如今，腺病毒载体已广泛应用于临床试验和基础研究中。

以传统的疗法为例，在肝脏癌等疾病中常常需要利用手术切除病变组织，但手术切除对机体的侵害很大。

通过利用腺病毒载体送入基因，就可以避免这种创伤，缩短患者的恢复期。

此外，腺病毒载体还可以用于治疗和预防一些遗传疾病，例如囊性纤维化和色素性视网膜炎。

四、腺病毒载体的展望在未来，腺病毒载体极有可能成为基因治疗领域的重要发展方向之一。

随着科技的发展和基因治疗研究的深入，人们可以更加深入的了解腺病毒载体中的机制，并且对其进行更加精确的改造。

同时，人们也需要进行更加深入的实验和测试，以探究腺病毒载体在人体内的表现和转导效率。

这一系列的研究和测试，将为腺病毒载体在基因治疗中的应用提供更好的基础和保障。

腺病毒质粒载体的构建及表达调控机制研究

腺病毒质粒载体的构建及表达调控机制研究第一章引言腺病毒是一种广泛应用于基因治疗和基因表达的载体，由于其病毒自身不具有致病性，可以更安全地应用于临床治疗和药物研发。

腺病毒载体的构建和表达调控机制的研究是基因治疗和药物研发领域的热点问题。

本文将从腺病毒质粒载体的构建方法、载体的表达调控机制、及应用前景等方面进行探讨。

第二章腺病毒质粒载体的构建方法腺病毒的质粒载体构建需要遵循一定的规律和原则，以确保载体的高效性和稳定性。

现将常用的腺病毒质粒载体构建方法进行简要介绍：2.1 插入式构建法插入式构建法是最常用的构建方法之一，其基本原理是将外源基因片段插入到腺病毒质粒载体中，再通过体外转染等方法将整个质粒导入到细胞内进行转染。

插入式构建法具有构建简便、转染效能高、适用性强等优点。

但由于插入的外源基因片段较长且载体承载能力有限，仅适用于小分子基因的插入。

2.2 重组式质粒构建法重组式质粒构建法是从腺病毒DNA中特异性截取相应序列，并将其与外源基因片段重组形成新的质粒载体。

重组式质粒构建法具有高效性、稳定性等优点，能够承载大分子基因片段的插入。

但构建难度较大，需要较为专业的技术支持。

2.3 克隆式质粒构建法克隆式质粒构建法是将腺病毒基因组进行克隆，这种方法能够在保持病毒活性的前提下获得高效的转染效果和稳定性。

克隆式质粒构建法适用于需要经常进行高效转染以及灭活性病毒的构建，但需要高超的实验技能和完善的实验设备。

第三章腺病毒质粒载体的表达调控机制腺病毒质粒载体的表达调控机制是基因治疗和药物研发领域的重要问题之一。

本章将从内在调节和外部控制两个方面进行介绍。

3.1 内在调节内在调节是指在腺病毒质粒载体表达阶段，利用载体本身的启动子、基因调节元件等进行调节。

常用的内在调节方法有以下几种：3.1.1 CMV启动子调节CMV启动子是最常见的内在调节方法之一，其具有高效性、稳定性等优点。

CMV启动子能够在典型的哺乳动物细胞中发挥优异的表达效果，并能够适应细胞类型、转染条件等变化。

腺病毒载体构建原理与方法的研究进展

作者单位:100052北京,中国预防医学科学院病毒学研究所病毒形态研究室#综述#腺病毒载体构建原理与方法的研究进展何金生王健伟洪涛由于腺病毒(Adenovirus,Ad)载体在哺乳动物及其多种细胞上进行基因转移和蛋白表达的高效性,使其在基因疫苗及基因治疗的研究中受到人们的青睐,成为当今使用最多的病毒载体之一。

为了取得更满意的效果,人们在腺病毒载体构建与改进方面,做了大量工作。

本文谨就近年来腺病毒载体构建原理与方法的研究进展扼要综述如下。

1腺病毒载体的构建原理腺病毒的基因组为线形双链DNA,长度约为36kb,被包装在一个二十面体的蛋白质外壳内,可分为编码区和非编码区。

编码区又可分为早期转录区和晚期转录区两种,前者有E1、E2、E3、E4四个区,编码病毒的调节蛋白,后者有L1、L2、L3、L4、L5五个区,编码病毒的结构蛋白。

非编码区含有病毒进行复制和包装等功能所必需的顺式作用元件。

除E3区外,其余的编码区及顺式作用元件均为病毒复制所必需。

第1代腺病毒载体是由去除腺病毒基因组的E1和P或E3两个区而获得,其复制必须在由5型腺病毒转化的可组成性表达E1蛋白的293细胞中完成。

其主要优点为:在体外有很高的繁殖滴度(1011~1012PFU P ml);易感的宿主细胞范围广,既能感染增殖细胞,又能感染非增殖细胞;病毒基因组存在于细胞染色体外,避免了因整合引起的细胞突变。

但由于病毒载体与表达E1蛋白的293细胞之间存在同源序列。

在293细胞中繁殖时,通过重组,可重新获得E1区,出现复制型腺病毒(Replication-competent Ads, RCAs),这使得第1代腺病毒载体的应用受到限制112。

此外,由于发现在多种转化及原代的细胞内存在具有Ela样活性(Ela-like activity)的物质,因而E1区缺失的腺病毒载体在这些细胞内,仍能进行Ela非依赖性的腺病毒DNA复制,并从头合成病毒的早期和晚期蛋白,激发宿主针对腺病毒的细胞和体液免疫,使载体在体内的持续时间以及再次应用均受到极大影响122。

腺病毒载体的研究进展

因表达和校正功能。蒋文明等嘴ＰＲＲＳ的串联Ｍ蛋白
与ＧＰ５蛋白重组腺病毒免疫小鼠，结果表明可以诱导产
蛋白（ｇｒｅｅｎ
ｐｒｏｔｅｉｎ。ＧＦＰ）报告基冈，便于直接观察转染及感染效率，并可测定重组病毒的滴度。此种方法为目前研究人员所普遍使用。质粒体外连接法由Ｍｉｚｕｇｕｃｈｉ等１６－７１建立．是将稀有的限制性内切酶位点引入穿梭质粒和腺病毒骨架载体中，将外源基因克隆人穿梭质粒中．再通过酶切连接的方法将穿梭质粒连接人腺病毒骨架载体，转化大肠杆菌复制重组质粒，转染相应的包装细胞系后。即可产生复制缺陷型的重组腺病毒。该法相对于细菌内同源重组法更简单、快速，只需两步，避免了ＢＪ５１８３不稳定、获得的质粒ＤＮＡ量较少等缺点．但是大片段的连接效率较低．需通过大量的噬斑筛选，程序较复杂罔。另外，还报道有酵母内同源重组、ｃｒｅ－ｌＯＸ介导的重组、黏性质粒构建方法等。
Ｒ
Ｊ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
ｄｉｓｅａｓｅ
ｃａｔｔｌｅ．【Ｊ】．ＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＲｅｓ，２００５，１４（５）：５６３—５６７．
Ｒ
【１０】ＣｌｅｍｅｎｔｓＪＥ，Ｗａｌｌ
ｓｈｅｅｐｔｈａｔ
Ｊ，Ｎａｒａｇａｎ
ｅｘｐｒｅｓｓｔｈｅ
ｏ，ｅｔ
ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｖｉｒｕｓ
ｏｆ
ｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９８５，３１５：６８０—６８３．ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ
ＧＰ５融合蛋白的基因插入腺病毒
后免疫小鼠．两者的特异性抗体均可检出。Ｗａｎｇ等【Ｉ嘴
猪圆环病毒２型Ｃａｐ蛋白基因插入到重组Ａｄｖ中，可诱导小鼠产生高滴度衄清ｌｇＧ。用同型Ａｄｖ再次免疫时，取得较好的增强效果。汤景元等【ｌ刀将猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）Ｍ蛋白基因插入到Ａｄｖ后，免疫小鼠，产生了ＰＲＲＳＶ特异性抗体和细胞免疫反应。韦显凯”卧将表达ＰＥＤＶＳ蛋白不同基因片段的重组腺病毒注射人小鼠后，

重组腺病毒介导的FLT3配体和阿霉素联合治疗小鼠肝癌

ＣｈａｎｇｈａｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００４３３，Ｃｈｉｎａ；２．ＥａｓｔｅｒｎＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙＨｏｓｐｉｔａ１）
李刚，卫立辛，杨庆，贾凤岐。，张柏和，吴孟超
（１．第二军医大学长海医院普通外科，上海２００４３３；２．东方肝胆外科医院，上海２００４３８）
［摘要］目的：将重组腺病毒介导的ＦＬＴ３配体（ＦＬＴ３ｌｉｇａｎｄ，ＦＬ）与阿霉素（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ，ＡＤＭ）联合治疗小鼠肝癌，探索基因治疗和化疗相结合治疗肿瘤的新方法。方法：构建携带鼠ＦＬ的重组腺病毒载体（ＡｄｍＦＬ），单独用其或ＡＤＭ以及两者联
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｈｅｐａｔｏｍａｉｎｍｉｃｅｂｙａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ－ｍｅｄｉａｔｅｄＦＬＴ３一ｌｉｇａｎｄｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈａｄｒｉａｍｙｃｉｎ
ｂｅａｒｉｎｇｍｉｃｅ．Ｔｈｅｉｒｅｆｆｅｃｔｓｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｔｈｅｔｕｍｏｒａｎｄｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｏｆｔｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：（１）ＩｎＦＬ＋

2023年广东省深圳市高考生物二模试卷+答案解析(附后)

2023年广东省深圳市高考生物二模试卷1. 2023年2月2日“世界湿地日”的主题为“湿地修复”。

党的十八大以来，以习近平同志为核心的党中央将湿地保护和修复工作纳入生态文明建设，从而推进我国湿地保护事业高质量发展。

下列叙述错误的是A. 湿地被誉为地球的“肾”体现的是生物多样性的直接价值B. 湿地修复选择净化能力强的多种水生植物体现了协调和自生原理C. 湿地修复过程中可以依靠自然演替等机制恢复湿地的生态功能D. 在湿地生态恢复过程中，建立缓冲带主要是为了减少人类的干扰2. 科学家利用电镜在成纤维细胞中观察到一些形态和大小略有不同的网状结构，并集中在内质中，因此将这些结构称为内质网。

下列关于内质网的叙述正确的是（）A. 是蛋白质的合成、加工场所以及运输通道B. 由双层膜围成的管状、泡状或扁平状结构C. 是一个不连续的内腔分隔的膜性管道系统D. 外膜向外折叠形成凸起的称为粗面内质网3. 许多药物是通过阻断酶活性而起作用的。

制药公司研发药物时首先筛选出能够阻断酶活性的化合物，然后对该化合物进行修饰，使之更为有效。

下列叙述错误的是A. 有些药物能结合在酶的底物结合区域起到阻断作用B. 提升药物对酶的结合能力能够增强该药物的有效性C. 理想的药物是能对绝大多数酶的活性起到阻断作用D. 药物研发过程需要综合考虑药物对人体的各种影响4. 癌细胞生长、发展、转移等过程的代谢基础是通过无氧呼吸分解葡萄糖产生ATP，这种现象称为“瓦堡效应”。

LXR（一种受体）可以直接调节“瓦堡效应”通路中关键基因的表达。

SR作为LXR的特异性抑制剂，可以切断癌细胞的能量供应。

下列叙述错误的是（）A. “瓦堡效应”可能不受氧气供应量的限制B. “瓦堡效应”把大部分能量贮存在ATP中C. LXR可能对“瓦堡效应”过程有促进作用D. SR抑制剂可能对多种癌症的治疗都有效5. 某研究小组用四种不同的方法对欧李叶片中的光合色素进行提取，实验结果如右图所示。

重组siRARγ腺病毒构建及其对小鼠肝脏祖细胞分化的影响.

ｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｉｎｄｕｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ
ＲＡ研ｇｅｎｅｓｉＲＮＡｆｏｒｍｏｕｓｅ
ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＲＡＲｌ３ｉｎＨＰｌ４．５ｄｃｅＵｓａｎｄｔｈｅｎｒｅｖｅｒｓｅｉｔｓｈｅｐａｔｉｃ
万方数据
基础医学与临床
Ｂａｓｉｃ＆ＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ
表１小鼠ＲＡＲＴ的ｓｉＲＮＡ序列Ｔａｂｌｅ１ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｓｉＲＮＡｆｏｒｍｏｕｓｅＲＡＲＴ
ｎａｍｅｏｆｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｒａｔＲＡＲ，．ｓｉＲＮＡｓｉｔｅ一１ｓｅｎｓｅｒａｔＲＡＲ－．，ｓｉＲＮＡｓｉｔｅ一１ａｎｔｉ－∞ｌｌＳｅｒａｔＲＡＲ－．，ｓｉＲＮＡｓｉｔｅ－２ｓｅｎｓｅｒａｔＲＡＲｅ．ｐｓｉＲＮＡｓｉｔｅ－２ａｎｔｉ·ｓｅｎｓｅ
ＺＨＯＵＪｉａｎ—ＷＵ，ＨＥＹｕｎ，ＧＯｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＴｈｅｒａｐｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆｔｈｅＣｈｉｌｄｒｅｎ’ＳＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｈｉｌｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄＤｉｓｏｒｄｅｒｓ，ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｈｅｒａｐｙＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｅｃｈｎｉｃａｌＣｅｎｔｅｒｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎ９４０００１４，Ｃｈｉｎａ）
ＤＨ５０ｔ大肠杆菌、ＨＥＫ２９３细胞系、ｐＡＬＢ—ＧＬｕｃ质粒为本实验室保存；内切酶靳Ｉ、Ｐ眦Ｉ、ＰａｃＩ，Ｇａｕｓｓｉａｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ检测试剂盒（ＮＥＢ公司）；内切酶ｌ＆ｎＩ、ＥｃｏＲＶ，Ｔ４ＤＮＡ连接酶和ＲＴ—ＰＣＲ试剂盒（ＴＡＫＡＲＡ公司）；２ｘＰＣＲＰｒｅｍｉｘ（东胜生物公司）；总ＲＮＡ提取试剂盒、质粒小抽试剂盒（Ｐｒｏｍｅｇａ公司），Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ…２０００、１ＫｂＰｌｕｓＤＮＡＬａｄｄｅｒ（Ｉｎ．ｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）；２×ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ反应液（天根生物公司）；ＤＭＥＭ培养基、胎牛血清（Ｇｉｂｃｏ公司）；兔抗小鼠ＲＡＲｅ／多克隆抗体、兔抗小鼠Ｂ—ａｃｔｉｎ单克隆抗体、ＨＲＰ标记的羊抗兔二抗（Ｓａｎｔａｃｎｌｚ公司）；ＰＣＲ引物由华大基因公司合成，基因测序在重庆医科大学感染病重点实验室完成。１．２方法１．２．１重组腺病毒质粒ｐＡｄ．ｓｉＲＡＲ，／的构建：采用ＳｉＤＥＳＩＧＮ软件设计３对特异性针对小鼠ＲＡＲＴ的ｓｉＲＮＡ序列（表１），体外退火（１０ｍｍｏｌ／Ｌ正义链和反义链ＤＮＡ片段各１０斗Ｌ混合，１００ｏＣ，１０ｍｉｎ，自然冷却至室温）形成两端带有踬Ｉ黏性末端的双链ＤＮＡ，与经靳Ｉ酶切纯化后的ｐＳＥＳ．ＨＵＳ质粒１６ｃＣ连接过夜，电转ＤＨ５ｃｔ大肠杆菌感受态，卡那霉素抗性ＬＢ平板上筛选单克隆菌落，摇菌提质粒，ＰＣＲ（反应体系２０斗Ｌ：２斗Ｌ质粒模板，３３０ｍｇ／ＬｓｉＲＮＡ反义链和ｕ６启动子引物各０．５乩，２×ＰＣＲｐｒｅｍｉｘ１０灿，加水至２０／ｘＬ；ＰＣＲ参数：９４℃２ｍｉｎ；９４℃ ２０ｓ，５６ｏＣ２０ｓ，７２ｏＣ２０Ｓ，３０循环；７２℃２ｍｉｎ）及勋ｎＩ和ＥｃｏＲＶ双酶切鉴定后送测序，获得３组ｐＳＥＳ．ｓｉＲＡＲＴ重组腺病毒穿梭质粒。经ＰｍｅＩ酶切（５０肛Ｌ体系：１０×ＮＥＢ缓冲液５ｔＬＬ，１００×牛血清白

腺病毒介导的小鼠γ-干扰素在小鼠肺上皮细胞中的表达

腺病毒介导的小鼠γ-干扰素在小鼠肺上皮细胞中的表达高占成【期刊名称】《北京大学学报（医学版）》【年(卷),期】1998(030)003【摘要】目的:观察腺病毒介导的小鼠γ-干扰素(mIFN-γ)在小鼠肺上皮细胞内的转基因表达.方法:腺病毒介导的mIFN-γ在小鼠肺上皮细胞内的转基因,其表达的mIFN-γ mRNA、蛋白质及生物活性分别经Northern印迹杂交、ELISA和抑制鼠弓形体在小鼠巨噬细胞内生长等检测技术确定.结果:病毒的细胞感染增殖率(MOI)50为腺病毒介导的mIFN-γ在小鼠肺上皮细胞内表达的最适浓度:在感染6 h后经Northern 杂交发现mIFN-γ mRNA转录信号,24 h达高峰;在感染12 h后经ELISA检测mIFN-γ蛋白的表达阳性,48 h后达峰值.经重组腺病毒感染的小鼠肺上皮细胞培养上清液中的mIFN-γ可明显抑制鼠弓形体在经大肠杆菌脂多糖刺激的小鼠巨噬细胞内的生长.结论:小鼠的IFN-γ可经腺病毒介导向小鼠肺上皮细胞的转移,并可实现早期、高效且相对持久的表达,为细胞因子的体内转基因免疫治疗机制研究奠定了基础.【总页数】1页(P0)【作者】高占成【作者单位】北京医科大学人民医院呼吸内科,北京,100044【正文语种】中文【中图分类】Q789【相关文献】1.重组腺病毒介导γ-干扰素基因对小鼠结肠癌腹腔转移模型的实验治疗作用 [J], 丁强;吴文溪;沈历宗;范萍;华一兵;刘新垣2.腺病毒介导IL-1ra基因对小鼠局灶性脑缺血模型中ICAM-1表达抑制作用 [J],3.腺病毒介导的"睡美人"转座子与IL-10共表达对NOD小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响 [J], 庞春艳;王慧;王志华;冯秀媛;王永福4.腺病毒介导的小鼠胰岛细胞细胞周期蛋白A2基因过表达及其对细胞增殖的影响[J], 黄婷;魏巍;杨晶晶;张丽5.腺病毒介导的shRNA下调GLP-1R表达对小鼠内皮祖细胞功能的影响及机制研究 [J], 黄小川;涂强;帅青云;付杰;谢华强;张琰;曹政因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

腺病毒载体研究进展

衡阳师范学院毕业论文（设计）题目：腺病毒载体研究进展所在系：生命科学系专业：生物科学学号：09300123作者姓名：彭赞平指导教师：杨海2013年5 月18 日衡阳师范学院毕业论文（设计）任务书衡阳师范学院本科生毕业论文（设计）开题报告衡阳师范学院毕业论文（设计）附件题目：腺病毒载体研究进展所在系：生命科学系专业：生物科学学号：09300123作者姓名：彭赞平指导教师：杨海2013年 5 月12日腺病毒载体研究进展生命科学系生物科学专业09300123彭赞平指导老师：杨海老师摘要：腺病毒因具有易感染性、宿主范围广、毒性低、使用安全、容纳量大、非整合性等特点,使得腺病毒载体成为基因转移中最有前途的基因载体之一。

但由于腺病毒载体在体内靶向性差、免疫原性强、半衰期短，限制了其在基因治疗中的作用。

为解决上述问题，可对腺病毒载体的衣壳蛋白进行遗传改造或表面修饰。

本文对腺病毒及腺病毒载体的研究进展做一简要综述，为进一步优化和改良腺病毒载体提供参考。

关键词：腺病毒；腺病毒载体；研究进展目录1 腺病毒的基本结构 (1)2 腺病毒的感染机理 (1)2.1 识别与粘附 (1)2.2基因组的转录 (2)2.3基因组复制 (2)2.4病毒颗粒的组装 (3)3腺病毒载体的构建 (3)3.1腺病毒载体的构建原理 (3)3.2腺病毒载体的构建方法 (4)3.2.1体外连接法 (4)3.2.2同源重组法 (4)4腺病毒载体的发展历程 (5)5腺病毒载体的应用 (7)6腺病毒载体的不足 (8)7腺病毒载体的改良与修饰 (8)7.1腺病毒PEG化 (9)7.2腺病毒衣壳的共价修饰 (9)8展望 (10)致谢 (11)参考文献 (12)1 腺病毒的基本结构腺病毒无囊膜，直径约70-90nm，呈二十面体立体对称[1]。

腺病毒含有一个大小在36kb左右线形双链DNA分子（Ad-DNA），两端具有末端反向重复序列（inverted terminal repeat，ITR），长103-162bp。

AMPK腺病毒载体在小鼠骨骼肌中的表达和作用

AMPK腺病毒载体在小鼠骨骼肌中的表达和作用刘倩;胡芳;牛文彦【摘要】Objective: To explore the effect and expression of injected AMPK adenovirus on mouse skeletal muscle. Methods: Ten weeks old C57BL/6 male mice were randomly divided into four groups. Mice in group1 were normal control group without treatment. Mice in group 2 were intramuscularly injected green fluorescence protein adenovirus (Ad-GFP). Mice in group 3 were intramuscularly injected Ad-GFP, after which were intraperitoneally injected AMPK activator AICAR in 48 h. Mice in group 4 were intramuscularly injected Ad-AMPK-CA. Seventy two hours after adenovirus treatment, all mice were executed and the expression of adenovirus was analysed in skeletal muscle. Fluorescence intensity and ACC phosphorylation in skeletal muscle were analysed by vivo imaging system and western blot, respectively. Results: Compared with the control group, the mean fluorescence intensity of the experimental groups which were injected adenovirus was significantly higher. Compared with the Ad-GFP group, ACC phosphorylation of AICAR and Ad-AMPK-CA groups were significantly increased. Conclusion:AMPK adenovirus can express the target protein in mouse skeletal muscle, and regulate the activity of AMPK.%目的：探讨注射AMPK腺病毒在小鼠骨骼肌中的表达和作用。

腺病毒递送系统的研究及应用

腺病毒递送系统的研究及应用腺病毒（Adenovirus）是一种广泛存在于哺乳动物中的常见病毒，其寿命短，可在短时间内被宿主机体免疫系统清除。

但正是这种特性让科学家们认识到腺病毒是一种很好的生物载体，可作为递送系统来传输外源DNA或RNA进入细胞内，用于基因治疗和疫苗开发等领域。

本文将就腺病毒递送系统的研究现状及应用进行探讨。

一、腺病毒递送系统的研究现状1.1 腺病毒的基本结构腺病毒为非包膜病毒，呈多面体（优硬化）结构，由四层蛋白质外壳包裹核酸构成。

外层纤毛状饰物，次外层由12的纤维蛋白互相交叉构成，并紧密包容次内层；最内层则是含有DNA的核心（capsid），大小为80-100 nm。

这种复杂的结构为腺病毒递送系统提供了良好的基础。

1.2 基于腺病毒的递送系统在基因治疗中，生物载体是将目标基因输送到宿主机体，递送系统是指向载体输送外源DNA或RNA的工具。

腺病毒递送系统因能在广范围目标组织和器官中转座式插入基因，且能在多种细胞类型中稳定持续地产生表达产物，因此被广泛使用。

同时，腺病毒递送系统治疗安全性高，且适用于多种疾病，在慢性遗传性疾病、肝衰竭、肿瘤及疫苗开发领域有着广泛的应用。

1.3 腺病毒递送系统的优点预生产，发展为期十年的腺病毒递送系统被普遍应用于基因治疗领域，获得了显著的进展。

其优点包括但不限于以下：(1)多潜在的疾病治疗，包括遗传性疾病、多种癌症和糖尿病等多种疾病。

(2)易于生产和操作的繁殖过程，提高生产效率和产品质量。

(3)高水平的基因表达和长期的表达效果。

(4)高安全性，能够避免传染性疾病在基因治疗中传递。

二、腺病毒递送系统的应用2.1 基因治疗基因治疗是一种目前获得广泛关注的方法，它适用于多种不可逆性疾病的治疗，如遗传性疾病和癌症等等。

腺病毒递送系统作为一种高效有效的基因载体，可将外源DNA或RNA输送到宿主体内的目标组织或细胞内，实现基因治疗，从而有效改善患者的病症。

2.2 疫苗开发腺病毒递送系统适用于疫苗开发。

重组B7—2腺病毒载体的构建及其诱导小鼠抗肝癌免疫的初步研究

重组B7—2腺病毒载体的构建及其诱导小鼠抗肝癌免疫的初
步研究
黄洪莲;王小宁
【期刊名称】《中国免疫学杂志》
【年(卷),期】1998(014)005
【摘要】探讨重组腺病毒介导的Ｂ７－２基因转染对小鼠肝癌细胞免疫原性的影响。

构建Ｂ７－２的重组腺病毒载体，通过重组腺病毒介导，将Ｂ７－２和ｌａｃＺ基因分别转染小鼠肝癌细胞Ｈｅｐａｌ－６，并在不同时相检测Ｂ７－２和ｌａｃＺ基因的表达水平，建立小鼠肝癌肿瘤模型，在小鼠体内观察Ｂ７－２基因转染对小鼠肝癌免疫原性的影响。

成功地构建了Ｂ７－２的重组腺病毒载体，用Ｂ７－２及ｌａｃＺ重组腺病毒分别转染小鼠肝癌细胞，转染后
【总页数】4页(P330-333)
【作者】黄洪莲;王小宁
【作者单位】第二军医大学东方肝胆外科研究所;广州第一军医大学分子免疫研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R735.705
【相关文献】
1.重组B7-1/B7-2逆转录病毒载体的构建及其在小鼠肝癌基因治疗中的应用 [J], 黄洪莲
2.可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞株中的表达 [J], 杨柳芹;房殿春;杨仕明;汪荣泉;彭贵勇;陈文生
3.腺病毒载体介导人KDR胞外段诱导抗小鼠肝癌的免疫效应 [J], 谭晓华;吴彬;王芳;刘兵;王友臣
4.重组鼠CD20腺病毒载体感染的树突状细胞诱导小鼠抗肿瘤免疫的研究 [J], 王友臣;谭晓华;刘兵;李慧;王芳
5.小鼠MIP1-α重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞中的表达 [J], 贾凤岐;王维锋;江小玲;杨庆;卫立辛;杨广顺;吴孟超
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重组siRARγ腺病毒构建及其对小鼠肝脏祖细胞分化的影响

重组siRARγ腺病毒构建及其对小鼠肝脏祖细胞分化的影响周建武;何昀;龚梦嘉;毕杨【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2014(034)001【摘要】目的构建并筛选小鼠RARγ基因的siRNA腺病毒载体,并探讨抑制RARγ表达对小鼠肝脏祖细胞分化的影响.方法设计3对特异性针对小鼠RARγ基因的siRNA序列,体外退火形成双链,与SfiⅠ酶切后的pSES-HUS质粒连接,随后在BJ5183中与pAdEasy-1骨架质粒同源重组获得pAd-siRARγ重组腺病毒质粒,并在HEK293细胞中包装腺病毒Ad-siRARγ.腺病毒感染小鼠肝脏祖细胞HP14.5d,real-time PCR及Western blot检测RARγ的表达,1 μmol/L ATRA诱导肝细胞分化,ALB-Gluc活性及PAS染色检测肝脏细胞分化的状态.结果 PCR、酶切鉴定均证实siRNA正确克隆至腺病毒质粒中,测序结果与设计的siRNA序列一致.腺病毒在HEK293细胞中包装10 d可见红色荧光细胞的云雾状扩增,HP14.5d 细胞的48 h腺病毒感染率为60％.其中,Ad-siRARγ2、3可有效抑制小鼠HP14.5d细胞中RARγ的表达(P＜0.05).ATRA可诱导肝细胞分化,ALB-Gluc活性及PAS染色阳性细胞明显高于对照组,Ad-siRARγ2,3可显著抑制ATRA诱导的小鼠HP14.5d细胞的ALB表达和糖原合成能力(P＜0.05).结论成功构建并筛选出能有效抑制RARγ表达的siRNA腺病毒,感染小鼠肝脏祖细胞HP14.5d能显著抑制ATRA诱导的肝细胞成熟分化.【总页数】7页(P22-28)【作者】周建武;何昀;龚梦嘉;毕杨【作者单位】重庆医科大学附属儿童医院儿研所干细胞实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆市干细胞治疗工程技术研究中心,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院儿研所干细胞实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆市干细胞治疗工程技术研究中心,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院儿研所干细胞实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆市干细胞治疗工程技术研究中心,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院儿研所干细胞实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆市干细胞治疗工程技术研究中心,重庆400014【正文语种】中文【中图分类】R34【相关文献】1.MafA基因重组腺病毒的构建及其对小鼠肝癌细胞的影响 [J], 任伟;Sabire Ozcan2.小鼠MafB基因重组腺病毒载体的构建及其对破骨细胞分化的影响 [J], 朱云;王正宇;杨小中;马涛;陈婷梅;张健3.DN-AMPK腺病毒载体的构建及其在小鼠成肌细胞系C2C12肌管分化中的影响[J], 杨成红;邓思思;臧奕4.小鼠FcγRⅡB基因重组腺病毒的构建及其对巨噬细胞分泌IL-10的影响 [J], 秦娣;秦学林5.携带siRbpj重组腺病毒载体的构建及其对BMP9诱导骨髓间充质干细胞成骨分化作用影响 [J], 张晓艳;杨伦韵;谢佳瑛;左国伟;罗进勇;唐敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Ad-HO-1腺病毒载体的构建及其对大鼠移植肝的保护作用的开题报告

Ad-HO-1腺病毒载体的构建及其对大鼠移植肝的保护作用的开题报告一、研究背景肝移植治疗肝衰竭、肝癌等疾病已经成为一种有效手段。

然而，随着移植技术的不断发展，移植后肝脏再灌注损伤、缺血再灌注损伤等问题也日渐凸显，使得肝移植后存活率和术后质量受到很大影响。

因此，研究肝脏再灌注损伤的机制以及寻找有效的保护手段已成为当前研究的热点。

近年来，基因治疗不断发展成为治疗各种疾病的新方法，其中腺病毒是最常用的基因载体之一。

腺病毒具有基因载体安全性高、转染效率高、转染肝细胞稳定等优点，对于肝再灌注损伤的治疗也有很大的应用前景。

二、研究目的本研究旨在构建一种基于Ad-HO-1腺病毒载体的基因治疗方法，探究在大鼠移植肝中，Ad-HO-1腺病毒载体所带来的保护作用和机制，为寻找治疗肝脏再灌注损伤的有效手段提供一定的理论和实验依据。

三、研究内容和方法1. 构建Ad-HO-1腺病毒载体。

将HO-1基因插入腺病毒中，构建HO-1基因的腺病毒载体Ad-HO-1。

2. 检测Ad-HO-1腺病毒载体转染效率。

将Ad-HO-1腺病毒载体与肝细胞共同培养，检测转染效率。

3. 筛选出适宜剂量的载体。

在大鼠移植肝模型中，通过调整不同剂量的载体进行筛选，寻找出适宜剂量。

4. 检测Ad-HO-1腺病毒载体的保护作用。

大鼠移植肝模型经过预处理后，将Ad-HO-1腺病毒载体注射入体内，观察其对移植肝的保护作用。

5. 分析Ad-HO-1腺病毒载体的保护机制。

通过组织检测、RT-PCR、Western blot等方法，分析Ad-HO-1腺病毒载体对移植肝保护的分子机制。

四、研究意义本研究旨在探究基于Ad-HO-1腺病毒载体的基因治疗方法在移植肝再灌注损伤中的应用，为临床应用提供理论和实验支持。

与传统的药物或手术治疗方法相比，基因治疗具有具有精准度高、副作用小、长期疗效好的优势，对于治疗临床难治的疾病有着广泛的应用前景。

腺病毒载体的研究进展与展望

腺病毒载体的研究进展与展望
袁子国;张秀香;高胜言;徐慧娟;扈荣良
【期刊名称】《吉林畜牧兽医》
【年(卷),期】2008(029)001
【摘要】随着重组技术在生物领域上的应用,病毒活载体疫苗的研制成为基因工程疫苗研制的热点,其中,腺病毒由于其具有独特的优势,成为疫苗载体应用中的不可缺少部分,本文就腺病毒载体的研究进展作一简要综述,旨在为其进一步应用提供参考依据.
【总页数】3页(P13-14,17)
【作者】袁子国;张秀香;高胜言;徐慧娟;扈荣良
【作者单位】军事医学科学院,军事兽医研究所,吉林长春,130062;吉林大学,畜牧兽医学院,吉林长春,130062;吉林大学,畜牧兽医学院,吉林长春,130062;吉林农业大学,生命技术学院,吉林长春,130118;军事医学科学院,军事兽医研究所,吉林长
春,130062;军事医学科学院,军事兽医研究所,吉林长春,130062
【正文语种】中文
【中图分类】S852.65
【相关文献】
1.腺病毒及腺病毒载体的研究进展 [J], 金天明;武迎红
2.腺病毒载体研究进展与展望 [J], 祝秀梅;慕洪涛;王凡;吕志慧;马全英;刘学荣;黄银君;牟克斌
3.人类腺病毒载体介导的基因治疗研究进展与展望 [J], 张德礼
4.人类腺病毒载体疫苗及其免疫研究进展与展望 [J], 张德礼
5.腺病毒载体介导的人肺囊性纤维化基因治疗的研究进展与展望 [J], 张德礼;高显明
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MafA基因重组腺病毒的构建及其对小鼠肝癌细胞的影响

MafA基因重组腺病毒的构建及其对小鼠肝癌细胞的影响任伟;Sabire Ozcan【期刊名称】《中华内分泌外科杂志》【年(卷),期】2008(002)005【摘要】目的利用AdEasy-1系统构建胰岛素转录因子之一的MafA基因重组腺病毒(Ad-MafA),并观察其对小鼠肝癌细胞的影响.方法将质粒cDNA3/MafA扩增、酶切获得MafA DNA片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack-CMV的巨细胞病毒(CMV)启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-MafA,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-MafA,经293细胞包装后得到含MafA全长DNA片段的重组腺病毒AdMafA;将Ad-MafA体外感染小鼠肝癌细胞(Hepa1-6),以RT-PCR和Western blot检测MafA在hepa1-6细胞的表达.结果连接、重组后通过酶切法筛选出pAd-MafA,经293细胞包装,5d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,通过反复感染HEK细胞扩增得到高滴度的重组腺病毒,Ad-MafA体外感染肝癌细胞1d后,MafA基因表达和蛋白表达明显增加.结论利用新型腺病毒载体AdEasy-1系统可在短期内制备同时表达GFP和MafA的重组腺病毒(Ad-MafA),Ad-MafA体外感染小鼠肝癌细胞可显著提高MafA的表达,这将为基因治疗糖尿病提供新的手段.【总页数】5页(P295-299)【作者】任伟;Sabire Ozcan【作者单位】重庆医科大学附属第一医院内分泌科,重庆,400016;美国肯塔基大学Chandler医学中心分子和细胞生物化学系,美国【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.携带小鼠白细胞介素-12 siRNA基因重组腺病毒载体的构建及其在树突状细胞中的表达 [J], 罗建飞;胡炜焰2.XAF1基因重组腺病毒载体的构建及其在人肝癌细胞体内外的表达 [J], 孙璟;朱黎明;姚玮艳;涂水平;吴云林;乔敏敏;江石湖3.小鼠MafB基因重组腺病毒载体的构建及其对破骨细胞分化的影响 [J], 朱云;王正宇;杨小中;马涛;陈婷梅;张健4.NT4p53(C22)Ant融合基因重组腺病毒的构建及对肝癌细胞的杀伤作用 [J], 周琦;尚旭;许永波;姜珏;王华;李苗5.小鼠FcγRⅡB基因重组腺病毒的构建及其对巨噬细胞分泌IL-10的影响 [J], 秦娣;秦学林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。