一株羊源产气荚膜梭菌的分离与鉴定

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一株鸽源C型产气荚膜梭菌的分离与鉴定

一株鸽源C型产气荚膜梭菌的分离与鉴定摘要：从武汉某地拾到一只死亡的信鸽，剖检观察其病变疑似鸽坏死性肠炎，从其肠内容物中分离到1株细菌，对分离菌株进行形态观察、生化试验、细菌外膜蛋白基因的聚合酶链式反应（PCR）扩增的基因型鉴定及动物试验等，结果鉴定该分离菌株为C型产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）。

关键词：鸽产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）；分离；鉴定产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）又称魏氏梭菌（Clostridium welchii），广泛存在于自然界的土壤、水源、人及动物肠道中，是导致人和多种动物疾病的人兽共患病原菌，严重威胁动物及人类公共卫生安全。

Welchii和Nutall于1892年首先从一具腐败的人类尸体中分离得到该菌，并命名为魏氏梭菌，之后世界各地均有各种动物感染该菌发病的报道[1-3]。

产气荚膜梭菌通过产生多种外毒素致病，其中α、β、γ、δ是主要的致死毒素，按其所产生的毒素分为5种基因型，其中A型菌产生α毒素，C型菌产生α、β毒素。

禽类感染A型或C型产气荚膜梭菌可导致坏死性肠炎，造成严重损失[1-3]，因此对该菌的分离鉴定和基因分型，对禽类坏死性肠炎的防治研究具有重要意义。

2013年3月从武汉某地拾到一只死亡的信鸽，剖检观察其小肠肠管扩张充气、出血严重，粪便呈暗绿色，疑似鸽坏死性肠炎病变，遂取其小肠后段内容物接种于CW琼脂培养基，从中分离到1株细菌，经鉴定为C型产气荚膜梭菌。

1 材料与方法1.1 材料病料来源：2013年3月于武汉某地拾到的一只死亡的成年信鸽。

培养基：CW琼脂基础（含卡那霉素）、50%卵黄盐水悬液购自青岛日水生物技术有限公司；含卡那霉素+卵黄的CW琼脂培养基按使用说明书自制。

厌气肉肝汤、肉肝胃酶消化汤按《中华人民共和国兽用生物制品规程》[4]自制。

参考菌株：A型产气荚膜梭菌（C57-12株）、C 型产气荚膜梭菌（C59-37株）冻干菌株购自中国兽医药品监察所；大肠杆菌由湖北省农业科学院畜牧兽医研究所兽医研究室分离保存。

规模羊场环境气载产气荚膜梭菌耐药性及其ERIC-PCR分型

规模羊场环境气载产气荚膜梭菌耐药性及其ERIC-PCR分型钟召兵，王　宁，孙红华，杨夫会（泰安市岱岳区畜牧兽医局，山东泰安　271000）摘　要：为监测不同规模羊场空气中分离的气载产气荚膜梭菌耐药性变迁及不同菌株间的遗传相似性，从而为临床治疗和控制感染提供依据，收集了2016—2017年来自不同规模羊场分离的气载产气荚膜梭菌30株，采用K-B法进行药敏试验，应用基因间重复序列聚合酶链反应（ERIC-PCR），对菌株进行DNA分型及同源性分析。

结果显示：30株气载产气荚膜梭菌在监测的9种药物中，对庆大霉素的耐药性最强（86.7%），其次为青霉素（43.3%），对头孢噻肟耐药率最低（1%），对其他药物耐药率在3.3%~36.7%之间；ERIC-PCR谱型表现为14个基因型（Ⅰ~XIV），其中大部分来源于不同的克隆株，且有2个克隆株的相似度为99.0%。

本研究结果表明：规模羊场的气载产气荚膜梭菌多重耐药较严重，分子多样性复杂；气载产气荚膜梭菌来源广泛，不同地区、环境和条件下，同一种病原菌的基因型也存在一定差异，可能存在多个基因型；同一个规模羊场的基因型也不同，不同羊场之间也存在相同的基因型。

关键词：气载产气荚膜梭菌；耐药性；ERIC-PCR；分型中图分类号：S852.61 文献标识码：B 文章编号：1005-944X（2018）03-0076-05DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2018.03.021Study on Drug Resistance and ERIC-PCR Typingof Airborne Clostridium Perfringens in Scaled Sheep FarmsZhong Zhaobing，Wang Ning，Sun Honghua，Yang Fuhui（Daiyue Animal Husbandry and Veterinary Bureau，Taian，Shandong　271018，China）Abstract：In order to monitor the drug resistance changes of airborne Clostridium perfringens（C. perfringens）in different goat farms and the genetic similarity of different strains，so as to provide basis for clinical treatment and infection control，30 airborne strains were collected from different scaled goat farms in 2016—2017，the sensitivity of antibiotics was detected by K-B method，and the strains classiﬁcation and DNA homology were analyzed by ERIC-PCR. The results showed that，during the detection of the 9 drugs，the resistance of 30 strains of C. perfringens to gentamicin was the highest（86.7%），followed by penicillin（43.3%），and the drug resistance rate of perfringens strains to cefotaxime was the lowest（1%）. The rate of drug resistance to other drugs was between 3.3%-36.7%. The ERIC-PCR pattern showed 14 genotypes（Ⅰ-XIV），most of which came from different clones，and the similarity of two clone strains were 99%. The research results showed that the multi drug resistance of airborne C. perfringens in scaled goat farms was serious，and the molecular diversity was complex. The source of airborne C. perfringens was wide，and there was a certain difference in different regions，different environments and different conditions，indicating multiple genotypes may exist. The genotypes in the same goat farms may be different，and the same genotype also may exist in different goat farms.Key words：C. perfringens；drug resistance；ERIC-PCR；type基金项目：泰安市科技计划项目（2016年）２０１８年第３５卷第　３　期微生物气溶胶可以借助空气进行扩散和传输，引发人类和动植物疾病的流行与传播，如传染病、过敏症和中毒等[1]。

一株C型产气荚膜梭菌的分离与鉴定

中国动物保健2024.01实践案例doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.01.060摘要：产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患病原菌，在一定条件下可引起多种严重疾病。

从疑似山羊魏氏梭菌病例中分离到一株细菌，通过厌氧培养、显微镜镜检、分子生物学鉴定表明该分离菌为产气荚膜梭菌，使用药敏纸片法进行分离菌株药敏性试验研究，数据分析表明：分离菌对常见抗生素具有不同程度的耐药性，对头孢噻呋敏感性最高，对多西环素、卡那霉素、新霉素、氟苯尼考、环丙沙星、庆大霉素等耐药，以期为山羊健康养殖提供技术参考。

关键词：产气荚膜梭菌；分离鉴定；药敏试验；疫病防控一株C 型产气荚膜梭菌的分离与鉴定宋锋，刘赛，荣榕（山东省滨州市博兴县畜牧兽医服务中心山东滨州256600）收稿日期：2023-09-03产气荚膜梭菌（魏氏梭菌）是一种革兰氏阳性、杆状、可形成芽孢的厌氧菌，产气荚膜梭菌是一种人畜共患病原菌、其特点是在体内或者食物中生长迅速，菌体细胞数量在10min 内可以翻倍[1]，该菌在生长过程中快速产生有毒气体（如亚硫酸盐），可引起人畜各种组织感染，如污染伤口的气性坏疽，人类胃肠炎（包括食源性和非食源性腹泻），动物的坏死性肠炎（NE ），牛、羊和家兔的梭菌病等[2-3]。

另外，产气荚膜梭菌是食品加工卫生方面的重要指标，其在周围环境中广泛分布，经常从土壤及动物肠道和粪便中分离出来[4]。

其在不适宜生存的恶劣条件下（如缺乏营养、干燥、高温、低温、紫外照射等）可以形成对外界具有较强抗性的芽孢，芽孢作为其生物休眠体具有很强的生存能力，不易被常规消毒剂、高温高压等灭菌条件所杀灭，在环境适宜时，芽孢杆菌可以重新萌发繁殖，具有很强的致病性，往往给畜牧养殖业（猪、牛、羊及家禽等）带来巨大的经济损失[5-6]。

近年来产气荚膜梭菌耐药性随着抗菌药物的大量使用逐年增加，许多临床强毒株出现了多重耐药性，给养殖业健康发展和食品安全、人类健康带来了巨大的挑战[7]。

羊源C型产气荚膜梭菌的分离鉴定、药敏试验及免疫治疗

羊源C型产气荚膜梭菌的分离鉴定、药敏试验及免疫治疗叶宝宏;冯平;许信刚;付明哲【摘要】从陕北某绵羊养殖场猝死绵羊的肝脏和脾脏中分离得到1株细菌,通过细菌培养特性、菌体形态、菌落特征、染色特性、生化试验、外毒素测定、毒素类型的PCR检测和药敏试验等鉴定,结果表明,该分离菌为革兰氏阳性大杆菌,生长特性和生化试验结果符合产气荚膜梭菌的所有特点;该菌可产生致小白鼠死亡的外毒素,PCR检测结果证实外毒素为α毒素和β毒素;药敏试验结果表明,该菌对环丙沙星、诺氟沙星等抗生素高度敏感,对庆大霉素、卡那霉素等抗生素不敏感.表明该菌为引起绵羊猝狙的C型产气荚膜梭菌,用羊梭菌疫苗紧急免疫羊群并配合应用抗生素治疗能有效控制该病的流行.【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2016(025)007【总页数】6页(P960-965)【关键词】绵羊;C型产气荚膜梭菌;分离鉴定;毒素;药敏试验【作者】叶宝宏;冯平;许信刚;付明哲【作者单位】榆林学院生命科学学院,陕西榆林719000;榆林学院生命科学学院,陕西榆林719000;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】S852.61产气荚膜梭菌(Clostridium perfrungeus)，又称魏氏梭菌(Clostridium welchii)，为芽胞杆菌科梭状芽胞杆菌属成员。

产气荚膜梭菌为革兰氏阳性菌，菌体呈粗杆状，边缘笔直，菌端较齐，单个或成双排列，有时可见短链，是温和的厌氧菌[1-2]。

产气荚膜梭菌为典型的条件致病菌，正常情况下广泛分布于自然界和人畜肠道中，与动物肠道其他菌群保持相对平衡，当外界环境发生变化时会大量增殖，产生外毒素，表现出致病性。

产气荚膜梭菌可以产生α、β、ε、ι等多种外毒素，依据毒素中和试验可将该菌分为A、B、C、D和E 5个毒素型，羊源产气荚膜梭菌多为B型和C型[3-4]。

西藏那曲市1株牦牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定

产气荚膜梭菌，旧称魏氏梭菌、产气荚膜杆菌，是一种临床条件致病菌，广泛分布于人、环境和牲畜的胃肠道[1-4]，是造成动物坏死性肠炎、肠毒血症、气性坏疽的主要病原菌之一。

产气荚膜梭菌所产生的毒素种类较多，目前已发现的毒素至少20种[5]，且均为蛋白质。

根据该菌产生四种主要致死性毒素（α、β、ε和ι）的种类不同而被分为A（α）、B（α、β、ε）、C（α、β）、D（α、ε）、E（α、ι）五种毒素类型[6]。

产气荚膜梭菌引起的牦牛疾病时有报道[7-9]。

西藏地区也有发生不明原因的牦牛死亡，死亡牛可见四肢前后伸直、口腔流液体、肛门外翻且充血、腹泻等症状，部分牦牛病程3～5 d、有的1 d 死亡。

剖检可见实质器官的广泛性出血。

小肠针尖样出血，也可见“血肠样”，大肠充气、黏膜出血，胆囊高度肿胀，膀胱积尿，皱胃黏膜充血，瘤胃可见血块。

为确诊该病病原，本试验采集病死牦牛的肝脏、肾脏、心脏、脾脏、小肠内容物等病料，实验室进行细菌分离，通过分离鉴定，以确定引起该牦牛死亡的主要病原菌。

１　主要材料1.1 病料采集一头疑似产气荚膜梭菌感染引起死亡的牦牛的肝脏、肾脏、心脏、脾脏以及小肠内容物。

1.2 主要试剂及仪器哥伦比亚血琼脂平板（江门市凯林贸易有限公司），厌氧罐、厌氧产气袋（日本三菱化学公司），厌氧肉肝汤培养基、卵黄琼脂培养基、石蕊牛奶培养基、梭菌增菌培养基（青岛海博生物技术有限公司），生化鉴定管（青岛海博生物技术有限公司），引物合成（生工生物工程上海股份有限公司），PCR 相关试剂（北京全式金生物技术有限公司），恒温培养箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂），PCR 仪、电泳仪、凝胶成像系统（美国Bio-Rad 生产）。

２　细菌的分离鉴定2.1 病料接种将病料接种在厌氧肉肝汤中，37℃厌氧培养18～24 h，培养过程中观察细菌是否生长和收稿日期：2019-06-05基金项目：国家肉牛牦牛产业技术体系（CARS-37）;元亨基因;班戈县农牧业科研服务项目;西藏农牧学院2018年研究生教学案例库建设。

产气荚膜梭菌的分离鉴定

ｔｏｔｄｅｈｏｄｔｎｆｃｌｖｔｎｏｏｔｉｕｐｒｉｇｎｙｅＡ．ＴｈｅｕｔｎｉａｅｈｔｔｅｃｌｒｆｈｒｓｕｉｄｔｅｃｎｉｉｓｏｕｔａｉｆｓｒｄｉｍｅｆｒｎｅｓｔｐｏｉｏＣｌｅｒｓｌｓｉｄｃｔｄｔａｈｕｔｅｏｕＣｌｓｒｄｕｐｒｉｇｎｓＡｎｃｒｉＢｅｅｓｎＤｉｅｔＢｒｏｈ。ａｄｔｅｃｎｉｏｓ３Ｃｎｏｒ．ｏｔｉｉｍ＇ｆｒｎｅｓｗａａｏｂｃｅｆＰｐｉｇｓｏｔｅｎｈｏｄｔｎｗａ５ａｄ７ｈｕｓｉ
山西医科大学实验动物中心。
１２病料．
共采集病死鹿病料３８例。分别采自太原市晨虹鹿业有限公司，阳泉市北庄、燕龛鹿场，昔阳县大寨鹿场，山西省药物培植场南樊鹿场，绛县
二里半鹿场以及太谷、榆次部分个体鹿场发生出血性肠炎的病死鹿。在鹿死亡２４ｈ内采集病死鹿
的疾病，给养鹿业造成很大的损失
。流行病
学调查证明，在我国饲养的鹿中出血性肠炎发病率居首位，是对我国养鹿业威胁较大的传染病之
一。。
。
众多研究人员对引起鹿出血性肠炎的病原
进行了大量的研究工作。据报道，导致发生该
ＧＡ０ｅ．．ＷｎｗｅｉａＩｅｔ
（ｌｅｅｏＡｎｍａｆｅｅａｄＴａ’ｎｌｇＣｏｌｇｆｉｌＳｉｍ’ ｎｈｏｏｙ，Ｓａｉｒｃｌｍ＇ｌＵｎｖｒｉ，Ｔｉｈｎ３８０，Ｃｎ）ｈｈ２ ‘Ａｇｉｕｔａｉｅｓｔｙａｇｕｓａｘｉ０００ｈｉａＡｂｔａｔ１Ｃｌｓｒｄｕｐｒｒｎｎｓｌｔｓ，ｗｈｃ－ｒｏｔｉｕｐｒｉｇｎｔｐａｔｒｓｒｍｔｅａｙａ — ｓｒｃ：２ｏｔｉｉｍｅ｝ｉｇｅｓｉｏａｅｉｈｗｅｅＣｌｓｒｄｉｍｅＪｒｎｅｓｙｅＡｆｅｅｕｂｒｐｕ

产气荚膜梭菌肠毒素的分离和鉴定方法

产气荚膜梭菌肠毒素的分离和鉴定方法
1 毒素检查
羊只死亡后，尽快取小肠内容物（最好是回肠内容物），加1%的氯仿防腐，在冷藏条件下送检。

实验室在收到送检材料后，用生理盐水稀释2~4倍（若内容物稀薄，不必稀释），充分混合后经离心沉淀（3000 r/min）15 min，取上清液，用赛氏滤器过滤后，1份直接注射动物（两只），另1份加1%的胰蛋白酶粉，在室温处理1 h以致活ε和1毒素，破坏β毒素，然后注射另一组动物（两只）。

若无离心机和赛氏滤器，可用滤纸反复过滤，直到滤液清朗即可。

动物可用小鼠（静脉注射0.2 mL~0.4mL）或家兔（静脉注射2mL~4mL）。

注射后至少观察24h，根据两组动物的反应情况作出判断。

如肠毒素含量低，动物也可能于注射后一定时间内呈现轻度昏迷，呼吸加快，经1h左右可能恢复。

.正常绵羊肠内容物注射后不引起反应。

也可用豚鼠进行毒素检查。

方法为皮内注射上述检滤液0.2 mL~0.4 mL，观察48 h，如果有毒素存在，注射部可见坏死变化。

2 中和试验
2.1 取灭菌试管5支，编为1、2、3、4、5号，然后按表1所列，分别加入含毒素滤液、抗毒素和生理盐水，每管总量为1.2 mL。

混合后将5个管同时放置37C温箱中，中和40 min。

表1 中和试验方法加样表
2.1.1 小鼠10只，分为5组，每组2只，各组依次静脉注射上述5个管中一个管中的混合液，注射剂量为每鼠0.4 mL，观察72 h，按表2判断结果。

表2 试验结果判定。

产气荚膜梭菌分离、鉴定作业指导书

产气荚膜梭菌分离、鉴定作业指导书一、操作步骤1.1活菌计数培养1.1.1按无菌操作称取食品检样25g(mL)放入均质器，加0.1%蛋白陈水稀释剂225mL，低速搅动1～2min，使之均质化，作为1∶10稀释液。

1.1.2以上述1∶10稀释的均质液按1mL加0.1%蛋白陈稀释剂9mL做成10-2～10-6的系列稀释液。

1.1.3吸取各稀释液1mL分别放入2个灭菌平皿内。

每个平皿浇注约50℃的SPS琼脂15～20mL，仔细转动平皿，使稀释液和琼脂充分混匀。

1.1.4上述琼脂平板凝固后，倒置于厌氧培养装置内，于36±1℃培养24h。

1.1.5选取长有30～300个黑色菌落的平板，计数黑色菌落数。

1.2确证试验1.2.1由平板上任取10个黑色菌落，分别按种FT培养基，于36±1℃培养18～24h。

1.2.2用上述培养液涂片，革兰氏染色镜检。

产气荚膜梭菌为革兰氏阳性粗大杆菌，其耐热株可能形成卵形芽孢，位于菌体中央或近端，其宽度一般不大于菌体。

1.2.3用接种环(针)穿刺接种动力－硝酸盐培养基，于36±1℃培养24h，观察接种线的生长情况，判断有无动力。

然后，滴加甲萘胺液和对氨基苯磺酸液各0.5mL，观察硝酸盐是否被还原。

产气荚膜梭菌无动力，能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。

1.2.4取生长旺盛的FT培养液1mL接种于含铁牛乳培养基，在46℃水浴中培养2h后观察有无“暴烈发酵”现象，5h内不发酵者为阴性。

产气荚膜梭菌发酵乳糖，凝固酪蛋白并大量产气，呈“暴烈发酵”现象，但培养基不变黑。

1.2.5用接种环取FT培养液点种于卵黄琼脂平板(每张平板至少可接种10点)，于36±1℃厌氧培养24h，观察接种点的变化。

产气荚膜梭菌产生卵磷脂酶，分解卵黄中的卵磷脂，接种点的底部及周围形成乳白色的混浊带。

二、菌数计算根据黑色菌落的计数(6.1.5)和确证试验的结果(6.2)，计算每克(毫升)食品检样的含菌数。

羔羊产气荚膜梭菌病的诊治

羔羊产气荚膜梭菌病的诊治李金花;贾德宏;徐尚荣【期刊名称】《青海畜牧兽医杂志》【年(卷),期】2014(044)005【总页数】1页(P57)【作者】李金花;贾德宏;徐尚荣【作者单位】湟中县鲁沙尔镇畜牧兽医站,湟中,811600;湟中县鲁沙尔镇畜牧兽医站,湟中,811600;青海省畜牧兽医科学院,西宁,810016【正文语种】中文【中图分类】S852.61+6.3产气荚膜梭菌是一种条件致病菌，正常条件下广泛存在于土壤、类便和消化道中，各种年龄和品种的羊均可感染发病。

发病不分季节，但冬、春季一般较高。

寒冷、饲养不当特别是当饲喂过多精料时可诱发本病，消化道是该病的主要传染途径。

2014年乐都县中岭乡某羊场饲养的杜泊羊突然发病，并有3只羊发生死亡，应用细菌分离鉴定技术进行病原的分离鉴定，最后用药敏试验筛选出敏感药物用于临床治疗。

结果显示此次羊只发病是由产气荚膜梭菌引起，应用药敏实验筛选的抗生素进行临床治疗，并采取综合防治措施，使病情得以有效控制。

现将结果报告如下：该场养有156只藏系绵羊，引进30只杜泊羊种羊，从 2014 年 4月 20 日开始发病，2只初生羔羊表现为突然拉灰褐色腥臭的粪便，并于出现拉稀后1～2d内死亡，后续出现3只成年母羊(2只藏羊和1只杜伯)发病并死亡，到送检为止，已有17只羔羊发生疑似魏氏梭菌病的发病症状。

2只藏羊母羊出现腹泻采食反刍等正常并逐渐出现频频排粪、摇尾、怒责，有轻度肛门脱出，伴发运动失调、磨牙、流涎，排黏液粪便，第4d排血便；治疗无效死亡。

1只杜泊母羊没发现任何异常情况第2d突然死亡，解剖采样。

主要表现可视黏膜发绀，充血有点状出血；肛门周围沾有黏稠粪便，并有血丝，整个肠道黏膜充血，特别是小肠充血，有的肠黏膜脱落，有大小不等的出血斑；真胃有出血性炎症，胃黏膜充血肿胀，幽门及胃底部有大小不等的出血点或弥漫性出血，有的还有坏死和溃疡；直肠黏膜充血、出血；十二指肠内容物呈小豆粥色，黏膜下有明显的水肿、充血、出血；肠系膜淋巴结肿大、充血；肝脏肿大，质脆如煮熟状；胆囊肿大、胆汁充盈；心外膜有针尖大点状出血；肺充血；肾变软如泥状(D 型)，呈棕色。

羊产气荚膜梭菌的分离鉴定

一株羊源产气荚膜梭菌的分离及鉴定金铎*1,2，林家琪1,2，董真1,2，展天松1,2，顾敏1,2，焦库华1,2，王彦红*1,2，刘文博*，1,2（1，扬州大学兽医学院, 扬州，江苏， 225009；2，江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州，江苏，225009；）摘要：2013年4月，扬州大学动物医院畜禽门诊接诊一例山羊急性死亡的病例，对其进行剖检，无菌恒温厌氧分离培养，纯化鉴别，革兰氏染色，生化反应，结果表明为产气荚膜梭菌，并对此进行了一定的讨论关键词：产气荚膜梭菌；分离；鉴定。

产气荚膜梭菌旧名魏氏梭菌，产气荚膜杆菌，根据致死性毒素与其抗毒素的中和实验，将此菌分为A、B、C、D、E 5个类型，以菌体抗原进行血清型分类意义不大，菌体抗原与毒素分型之间没有明显关系，毒素至少已经发现15种，其中α、β、ε、ι、δ、θ、κ、λ、μ、υ、CPE、其他毒素、神经氨酸酶等。

A型、C型、D型的某些菌株可以产生肠毒素，A型产气荚膜梭菌主要引起动物的气性坏疽，牛、羔羊、新生羊驼、驯鹿、仔猪、家兔的肠毒血症，B型菌主要引起羔羊痢疾，还可以引起犊牛、羔羊、山羊的肠毒血症或坏死性肠炎，C型菌是绵羊猝狙的病原。

D型、E型菌也是导致牛羊肠毒血症和猪的腹泻[1]。

笔者结合相关知识，在此整理于扬州大学动物医院所见的一例羊源产气荚膜梭菌感染的疾病。

1材料与方法1.1病料来源2013年4月，江苏某养殖户饲养的240多只母山羊陆续产羔，羔羊在产后24-48小时开始出现剧烈腹泻，拉水样黑色稀粪，虚弱，随后死亡，羔羊的死亡率达60%。

剖检后发现病死羊羔严重脱水，真胃和大肠内容物呈糊状，小肠壁变薄，或黄或黑，透明，充满空气，部分肠道黏膜充血出血，卡他性出血性炎症,*基金项目：江苏高校优势学科建设工程；江苏省大学生创新训练计划省级重点项目（201311117039Z）作者简介：金铎（1992—），男，山东青岛人，扬州大学兽医学院本科生，主要从事羊临床菌株耐药性及质粒指纹图谱分析研究。

羊源性产气荚膜梭茵的药物敏感性检i贝!

中图分类号：￥８５８．２６文献标识码：Ａ文章编号：１００３ — ６３７７（２０１３）０４ — ００４６ — ０３
羊肠毒血症、羊猝狙、羔羊痢疾是由产气荚膜梭菌感染引起羊只急性死亡的主要细菌性传染病。这
参考美国临床和实验室标准协会（ＮＣＣＬＳ）推荐的琼脂稀释药物敏感性实验方法『】１．进行分离菌株的药敏检测。检测抗生素种类根据中华人民共和国卫生行业标准ＷＳ／１１２４８ — ２００５厌氧菌抗微生物药敏感试验中抗生素的要求选择回。实验首选药物为青霉素、克林霉素、甲硝唑；次选药物为头孢曲松和替卡西
素的浓度。
１．３．２菌悬液的制备
从厌气培养的布氏血琼脂平板上选取已培养２４～４８ｈ菌落直径在１ｍｍ大小的５个以上形态相同
的菌落，接种到厌气肝汤中，孵育６～２４ｈ，用煮沸并冷却至３５℃左右的厌气肝汤调整培养物的浊度至０．５
林。制备抗生素原液所选用的溶剂和稀释剂见表１。
收稿日期：２０１３－０５－０４基金项目：新疆维吾尔自治区畜牧厅多胎（多羔）肉羊生产体系建设行动计划项目。
作者简介：蒋曙光（１９５６一），男，高级兽医师，主要从事家畜疫病防治。４６

一例小尾寒羊魏氏梭菌的分离鉴定

１．３仪器
加去离子水补齐至２５Ｌ。最佳反应条件为９４￣Ｃ预变性
５ｍｉｎ、９４ ℃变性３０ｓ，５５ ℃退火３０ｓ、７２ ℃延伸３０ｓ、共３５个循环，７２ ℃延伸１０ｍｉｎ。取ＰＣＲ产物与ＬｏａｄｉｎｇＢｕｆｅｒ混合后在１．５％的琼脂糖凝胶电泳９０ｖ，２５ｍｉｎ。后用ＥＢ染液染色
亡小鼠解剖，取心脏和肝脏触片，革兰氏染色后在显微镜下观察结果，并与之前培养的致病菌进行形态学对比。２．４致病茼总ＤＮＡ提取因魏氏梭菌有荚膜，且细胞壁较难破裂，ＤＮＡ提取难度较大，故采用超声波方法提取细菌ＤＮＡ。
菌致病性强，致死率高，发病速度快，可引起动物多种严重传染病，如肠毒血症、肠坏死性肠炎等，春季为发病的高发期。
１材料
取已用肝汤培养基培养好的菌液５０ｍＬ于２００ｍＬ锥形瓶中，用超声波仪器震碎５ｍｉｎ后取出菌液，４０００ｒ，离清于沸水中煮沸５ｍｉｎ后再次４０００ｒ离心５ｍｉｎ后取上清作为ＤＮＡ模板，４￣Ｃ保存备用。
Ｔａｑ酶２Ｌ、上下引物（２７Ｆ、１４９２Ｒ）各１Ｌ、ｄＮＴＰ１Ｌ，
肝汤培养基、血液琼脂培养基（按生产商说明书配置），
ｄＮＴＰ、Ｔａｑ酶、ＲｘｎＢｕｆｅｒ、ＭＡＣ１２、去离子水、上下引物（２７Ｆ、１４９２Ｒ）、ＪＭ１０９、ｌｇＴ — Ｖａｃｔｏｒ载体、凝胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒、内切酶。

致人腹泻产气荚膜梭菌的分离鉴定与基因分型

致人腹泻产气荚膜梭菌的分离鉴定与基因分型摘要：目的：探讨产气荚膜梭菌与食物中毒之间的联系。

方法：采集腹泻病人的粪便样品，进行生化鉴定和细菌分离培养，设计针对cpa、cpb、etx、iA、cpe及cpb2序列的6对特异引物，并采用多重PCR方法，对产气荚膜梭菌进行基因分型。

结果：50份样品中，分离出10株产气荚膜梭菌，且均为A型，其中5株扩增cpb2基因。

结论：产气荚膜梭菌是导致人类发生腹泻的主要病原菌，而重要的致病因子可能是其β2毒素。

关键词：致人腹泻；产气荚膜梭菌；多重PCR；基因分型气荚膜梭菌在自然界中广泛存在，其是人兽皆可感染的病原菌[1]。

由于气荚膜梭菌是人与动物肠道内的常见菌，因此其为引发人类腹泻与食物中毒的一个重要诱因。

为了对气荚膜梭菌进行深入的研究，我们对腹泻病人的临床样品进行病原的分离鉴定与基因分型，以对引起食物中毒和腹泻的状况进行分析。

现报道如下。

1.资料和方法1.1一般资料采集腹泻病人的临床粪便样品共计50份，不同个体的粪便样品分开收集，并标注编号以区分不同病患的样品。

1.2气荚膜梭菌的分离鉴定取6g粪便样品，加入灭菌生理盐水50mL，以1000r/min速度搅拌充分后，离心10min，取上清液1mL接种10mL的紫牛乳培养液，送入厌氧培养罐进行43℃厌氧培养9-12h。

对出现爆裂发酵的培养液，划线于TSC平板后，进行43℃厌氧培养24h，挑选疑似菌落进一步分离纯化。

挑选平板上黑色菌落接种接种鲜血琼脂平板，经厌氧培养24h后，挑选出现双环溶血的菌落，进一步采用标准化试剂盒进行生化鉴定。

1.3菌株的基因分型1.3.1PCR引物设计根据产气荚膜梭菌毒素基因序列设计的引物序列见表1。

1.3.2多重PCR扩增在反应体系中加入缓冲液、混合引物、灭菌超纯水，DNA模板10μL，TaqDNA 聚合酶1μL，以50μL灭菌石蜡油覆盖。

反应程序：94℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸1min，共进行35个循环，最后72℃延伸10min。

山羊产气荚膜梭菌的分子流行病学调查与毒素型分析

山羊产气荚膜梭菌的分子流行病学调查与毒素型分析2021年第2期山羊产气荚膜梭菌的分子流行病学调查与毒素型分析曹思宇1，张彤宇1，2，张燕1，成大荣1，3*，邢华1，3*（1.扬州大学兽医学院，江苏扬州225009；2.南京传奇生物科技有限公司，江苏南京211100；3.江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009）摘要：试验采集江苏地区10市肉羊场（山羊）及扬州大学动物医院的山羊新鲜粪便，PCR 法对产气荚膜梭菌进行核酸检测，对该菌在肉羊中的感染情况做流行病学调查，对鉴定呈阳性的菌株进行毒素型鉴定。

结果表明：临床粪样产气荚膜梭菌的总检出率19.12%，其中健康羊粪样的阳性检出率21.42%，发病羊粪样3.50%；不同地区阳性率有所不同，阳性率最高23.33%。

在108株分离到的气荚膜梭菌株中，62.03%为A 型株、37.96%为D 型、未见B、C、E 型。

结果提示，被检临床健康肉羊广泛携带产气荚膜梭菌，且大多携带A 型菌，少部分携带D 型菌。

关键词：产气荚膜梭菌；山羊；流行病学；毒素型中图分类号：S 852.6文献标识码：B文章编号：1672-9692（2021）02-0073-03Molecular epidemiological investigation and toxin type analysis of Clostridium perfringens in goatsCao Siyu 1,Zhang Tongyu 1,2,Zhang Yan 1,Cheng Darong1,3*,Xing Hua1,3*(1.College of Veterinary Medicine,Yangzhou University,Jiangsu Yangzhou 225009;2.Nanjing Legend Biotechnology Co.LTD,Jiangsu Nanjing 211100;3.Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses,Jiangsu Yangzhou 225009)Abstract:PCR was detect the nucleic acid of Clostridium perfringens (C.perfringens )from fresh goat feces collected from mutton sheep farms (goats)in ten cities of Northern Jiangsu Province and Yangzhou University Animal Hospital.Epidemiological investigation was conducted to investigate the infection of C.perfringens in meat sheep,and toxin type identification was conducted for the identified positive strain.The results showed that the total detection rates of clinical fecal samples was 19.12%.The positive detection rate of healthy stool samples was 21.42%,and the positive detection rates of diseased fecal samples was 3.50%.The positive rate was different in different regions,and the highest positive rate was 21.45%.Among 108isolates of C.perfringens ,62.03%was type A,37.96%was type D,and no B,C or E were found.It suggested that C.perfringens was widely carried in the healthy mutton sheep tested,and most of the mutton sheep carried type A bacteria,while a few carried type D bacteria.Key words:Clostridiumperfringens ;Goats;Epidemiology;Toxintype产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens ，C.perfringens ）又称魏氏梭菌，在自然界分布广泛，存在于污水、土壤、人畜粪便及肠道中，是一种人畜共患病原菌[1-2]。

羊产气荚膜梭菌病综合防治

羊产气荚膜梭菌病综合防治作者：魏伟来源：《畜牧兽医科学》 2019年第18期魏伟（内蒙古鄂尔多斯市达拉特旗兽医局展旦召苏木动物防疫站，鄂尔多斯 014323）摘要：羊产气荚膜梭菌病是由产气荚膜梭菌引起的，此菌具有多种血清型，不同类型的产气荚膜梭菌对羊造成的危害存在很大差异，但都会产生大量毒素，引发急性毒血症。

该文主要结合1个养殖场的实际发病情况，分析了羊产气荚膜梭菌病的诊断和综合防治，希望通过该次研究进一步防范上述疾病的传播蔓延有一定帮助。

关键词：氧产气荚膜梭菌病；诊断；综合防治中图分类号：S858.26文献标识码：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.18.0890 引言产气荚膜梭菌是动物生存环境中常见的1种致病菌，属于条件致病菌，该种疾病的传播流行和养殖场的饲养管理有着密不可分的联系。

当动物身体抵抗能力较强时，带菌动物能正常生存，并不会出现明显的发病情况，但当机体的抵抗能力下降后，病菌能大量繁殖，产生毒素。

1 发病经过2018年5月13日早晨，养殖户在巡查过程中发现了羊舍中出现1头死亡羊。

该养殖场共养殖绵羊130头，其中成年羊79头，羔羊51头。

养殖场中先后有5头羔羊出现发病情况，病情快速传播蔓延，发病初期，患病羊表现为突然发病，最终全部死亡，有部分患病羊没有出现任何临床症状，突然倒地死亡，有的患病羊仅会表现出神经症状，在圈舍中胡乱冲撞，转圈，在数分钟后就会死亡。

养殖场虽然制定比较完善的疫苗免疫程序，养殖户并没有严格执行，已经连续多年没有对羊群进行妥善的疫苗免疫接种。

养殖场整体养殖密度较大，卫生环境较差，也没有进行妥善的分群工作，不同日龄的羊群相互接触很容易加重疫病的交叉传播蔓延。

2 流行特点羊产气荚膜梭菌病是春夏之交和秋季牧草结籽时期最容易传播流行的一类细菌性传染性疾病，由于产气荚膜梭菌属于条件性致病菌，该种疾病的传播流行与养殖场的饲养管理有很大联系。

疫苗免疫接种不当，气候突然发生变化等应激因素刺激，羊群身体抵抗能力较差，致病菌就会表现出明显的致病性。

山羊产气荚膜梭菌病的病理学诊断与防治

山羊产气荚膜梭菌病的病理学诊断与防治
随韶璞;张海涛;朱广琴
【期刊名称】《甘肃畜牧兽医》
【年(卷),期】2022(52)8
【摘要】2021年10月,徐州市某养殖场部分羊只发病,表现为消瘦,发病2~3 d后拉稀,呼吸困难,继而死亡。

为分析该羊场羊只死亡原因,对送检的羊只进行剖检和病理组织学检查。

剖检可见肠鼓气,十二指肠及空肠不同程度出血;肾脏皮质部质地较软,呈软泥状;相较皮质部,髓质部稍结实;肺淤血、水肿;羊的胃部充满大量未消化饲料。

病理组织学检查可见小肠黏膜坏死脱落,固有层小血管扩张充血,大量淋巴细胞浸润;肾脏肾小管上皮细胞严重变性、坏死。

结合临床特征、剖检结果、病理组织学检查和涂片显微镜观察,确定病羊感染了由产气荚膜梭菌引起的羊肠毒血症。

针对该病的防治可采取加强饲养管理、环境消毒、预防免疫等措施。

【总页数】5页(P9-12)
【作者】随韶璞;张海涛;朱广琴
【作者单位】徐州生物工程职业技术学院
【正文语种】中文
【中图分类】S858.27
【相关文献】
1.猪产气荚膜梭菌病的临床诊断与防治
2.波尔山羊产气荚膜梭菌病诊断
3.肉兔A 型产气荚膜梭菌病的诊断与防治
4.猪产气荚膜梭菌病的临床诊断与防治
5.猪产气荚膜梭菌病的临床诊断与防治
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产气荚膜梭菌cpe^+菌株的筛选与鉴定

产气荚膜梭菌cpe^+菌株的筛选与鉴定唐源;杨鹤峰;王开功;周碧君;罗阿东;文明【期刊名称】《畜牧与兽医》【年(卷),期】2009(0)3【摘要】参考相关资料,针对产气荚膜梭菌肠毒素基因(cpe)设计合成1对特异性引物,对34株贵州分离株进行PCR扩增,并将扩增产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后测序和分析。

结果在34株产气荚膜梭菌贵州分离株中有1株C型菌株扩增出与预期大小相一致的目的片段,经克隆测序后,该片段大小为233 bp,其与产气荚膜梭菌参考株肠毒素基因序列的核苷酸同源性为99.6%~100%,推导氨基酸同源性为98.7%~100%,表明所扩增产物为产气荚膜梭菌的肠毒素基因片段。

本试验筛选鉴定出1株产气荚膜梭菌cpe+菌株,为今后进一步探讨产气荚膜梭菌性食物中毒机制奠定了基础。

【总页数】4页(P8-11)【关键词】产气荚膜梭菌;肠毒素基因;克隆;鉴定【作者】唐源;杨鹤峰;王开功;周碧君;罗阿东;文明【作者单位】贵州大学动物科学学院;贵州省六盘水市兽医防治检疫站;贵州大学动物疫病研究所【正文语种】中文【中图分类】S852.6【相关文献】1.C型产气荚膜梭菌cpe基因克隆与分析 [J], 秦雯;文明2.粪样中产气荚膜梭菌的分离及cpe+菌株的鉴定 [J], 徐晓静;孙庆;赵李祥3.仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原诊断及疫苗研究Ⅲ.7株A型产气荚膜梭菌菌株的产毒素试验 [J], 屠伟英;蒋玉文;蔡祈英4.猪源A型产气荚膜梭菌β2毒素与宿主细胞互作蛋白的筛选鉴定 [J], 曾秀; 张兰桥; 周姣; 王婧祺; 戴益民; 张锦华5.产气荚膜梭菌病多联浓缩苗的研究──产气荚膜梭菌病多联浓缩苗的试制及牛田间试验 [J], 马乐英;蒋祯;杜莲洪;吕红;罗显驿;杨受玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。