基因工程复习题答案版

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基因工程习题及答案

基因工程习题及答案

第二章习题一、单选题1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指( B )A.I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶E. RNAase2.下列关于同裂酶的叙述错误的是( B )A. 是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。

B. 它们的识别序列完全相同。

C. 它们的切割方式可以相同,也可以不同。

D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样,但切割位点间的序列一样。

E. 两种同裂酶的切割产物连接后,可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。

3. 多数限制酶消化DNA的最佳温度是( A )A. 37℃B.30℃C.25℃D.16℃E.33℃4. 下列关于限制酶的叙述错误的是( B )A. I类限制酶反应需要 Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。

B. II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。

C. III类限制酶反应需要Mg2+、ATP,S-腺苷蛋氨酸能促进反应,但不是绝对需要。

D. I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性,II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。

E. II类限制酶要求严格的识别序列和切割点,具有高度精确性。

5. 如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA上识别6bp的切割概率为( D )A. 1/44B. 1/66C. 1/64D.1/46E. 1/1066. 多数II类限制酶反应最适PH是 ( C )A. PH:2-4B. PH:4-6C. PH:6-8D. PH:8-10E. PH:4-107. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D )A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后,可能会阻碍限制酶的酶解活性。

B. 许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。

C. 有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。

D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液,是由于磷酸根会抑制限制酶反应。

E. BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用,所以酶切反应中常加入一定量的BSA。

基因工程期末试题及答案

基因工程期末试题及答案

基因工程期末试题及答案一、选择题(每题2分,共20分)1. 基因工程是指利用现代生物技术手段对DNA进行操作和控制的一种技术。

2. 基因工程的主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。

3. DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。

4. 在基因工程中,限制性内切酶用于切割DNA分子,产生特定片段。

5. 基因工程可以产生转基因生物,通过对生物基因进行改造,使其具有特定的特性。

6. CRISPR/Cas9是一种常用的基因编辑工具,可以精确地修改基因组中的特定片段。

7. 基因工程在医学领域可以用于基因治疗,通过修复或替换异常基因,治疗遗传性疾病。

8. 在农业领域,基因工程可以用于改良作物,提高产量和抗病虫害能力。

9. PCR是一种常用的基因扩增技术,可以通过复制DNA片段来放大特定基因。

10. DNA梯度离心是基因工程中常用的分离DNA片段的方法。

二、问答题(每题10分,共30分)1. 请简要介绍基因工程的基本原理和主要方法。

基因工程的基本原理是通过对DNA进行操作和控制来改变生物的遗传性状。

其主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。

基因克隆是通过将特定DNA片段放入载体中,然后转化到宿主细胞中,使重组DNA在宿主细胞中大量复制。

PCR是一种基因扩增技术,通过在DNA复制过程中加入特定引物,使特定基因片段在体外大量扩增。

DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。

2. 什么是转基因生物?请举例说明。

转基因生物是指经过基因工程改造,将外源基因导入到目标生物体中,使其具有新的遗传性状的生物。

例如,将耐旱基因导入水稻,使其具有抗旱能力;将Bt毒素基因导入棉花,使其具有抗虫能力。

3. 基因工程在医学领域有哪些应用?举例说明。

基因工程在医学领域可以用于基因治疗、疫苗研发等。

例如,利用基因工程技术可以修复或替换患者体内异常基因,治疗遗传性疾病。

另外,基因工程也可以用于疫苗研发,通过基因工程技术将病原体的基因导入宿主细胞,产生病原体的抗原蛋白,从而刺激免疫系统产生抗体,用于预防传染病。

基因工程期末考试试题及答案

基因工程期末考试试题及答案

基因工程期末考试试题及答案一、选择题1. 基因工程是指:A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然淘汰答案:B2. 下列哪项不是基因工程常用的工具酶?A. 限制性内切酶B. DNA连接酶C. 反转录酶D. 聚合酶链反应酶答案:C3. 基因枪技术主要用于:A. 植物基因转化B. 动物基因转化C. 微生物基因转化D. 病毒基因转化答案:A二、填空题1. 基因工程中,常用的载体有________、________和________。

答案:质粒、病毒、人工染色体2. 基因工程中,________是基因表达的调控元件。

答案:启动子三、简答题1. 请简述基因工程的基本步骤。

答案:基因工程的基本步骤包括:目标基因的获取、目标基因与载体的连接、转化宿主细胞、筛选含有重组DNA的宿主细胞、目的基因的表达和检测。

2. 基因工程在医学领域的应用有哪些?答案:基因工程在医学领域的应用包括:生产重组蛋白质药物、基因治疗、疾病诊断、疫苗开发等。

四、论述题1. 论述基因工程对农业生产的影响。

答案:基因工程对农业生产的影响主要体现在以下几个方面:提高作物的抗病虫能力、增强作物的抗逆性、改善作物的营养价值、提高作物的产量和质量、促进农业可持续发展。

2. 基因工程在环境保护中的应用。

答案:基因工程在环境保护中的应用主要包括:开发生物修复技术,用于污染土壤和水体的净化;利用基因工程改造微生物,用于处理工业废水和废气;通过基因工程改良植物,用于重金属污染土壤的修复等。

五、案例分析题1. 某公司利用基因工程技术成功开发了一种抗虫棉,该抗虫棉能够减少农药的使用,降低农业生产成本。

请分析该技术可能带来的社会、经济和环境效益。

答案:该技术可能带来的社会效益包括提高农民的生活质量,减少因农药使用带来的健康风险。

经济效益包括降低农药成本,提高作物产量,增加农民收入。

环境效益包括减少农药对环境的污染,保护生态平衡,促进农业的可持续发展。

基因工程复习题及参考答案

基因工程复习题及参考答案

基因工程复习题及参考答案1、什么是移动基因?移动基因又叫转位因子(transposable elements),它可以从染色体基因组上的一个位置转移到另一个位置,甚至在不同的染色体之间跃迁,也有称跳跃基因。

(或控制因子、结合解离因子)2、什么是断裂基因?在编码序列中间插入无编码作用的碱基序列,从而使一个基因被分隔成不连续的若干区段的基因,这类基因被称为间隔或断裂基因。

3、什么是假基因?是一种核苷酸序列同其相应的正常功能基因基本相同,但却不能合成出功能蛋白质的失活基因。

在真核生物中是很普遍存在,它形成的主要原因是小的碱基对缺失或插入以致不能正常编码。

4、什么是重复基因?即在基因组中有多个拷贝的基因。

在真核生物基因组中发现这种现象,真核生物中的重复基因可以达到30%。

重复基因主要是为了满足生物体快速发育的需要。

5、什么是重叠基因?即多个基因共用碱基对的基因。

重叠方式有完全重合叠,也有部分重叠。

6、什么是基因工程?对DNA的遗传基因进行体外操作,把不同来源的基因按照单元设计的蓝图,重新构成新的基因组合,再把它引入细胞中,构成具有新的遗传特性的生物。

7、基因工程的主要研究内容?(1)从复杂的生物有机体基因组中分离出带有目的基因的DNA片段。

(2)体外连接重组DNA分子。

(3)重组DNA分子转移到适当的受体细胞并增殖。

(4)从大量的细胞群体中筛选获得了重组DNA分子的受体细胞克隆。

(5)从受体细胞克隆提取目的基因。

(6)将目的基因克隆到表达载体上,导入寄主细胞,产生出人类所需要的物质。

8、核酸的凝胶电泳基本原理在直流电场中,带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳。

在电场中,推动带电质点运动的力(F)等于质点所带净电荷量(Q)与电场强度(E)的乘积。

F=QE。

(1)核酸分子的糖-磷酸骨架中的磷酸基团,是呈离子化状态的,——DNA和RNA的多核苷酸链可叫多聚阴离子。

(2)当核酸分子放置在电场中时,它就会向正电极的方向迁移。

基因工程复习题及答案

基因工程复习题及答案

基因工程复习题及答案一、选择题1. 基因工程是指:A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然进化答案:B2. 基因工程中常用的载体是:A. 噬菌体B. 质粒C. 病毒D. 所有以上选项答案:D3. 以下哪个不是基因工程中常用的受体细胞?A. 细菌B. 酵母C. 植物D. 动物答案:C4. 基因枪法属于哪种基因转移技术?A. 化学介导法B. 电穿孔法C. 微注射法D. 粒子轰击法答案:D5. 基因编辑技术CRISPR-Cas9中,Cas9蛋白的主要作用是:A. 识别目标DNA序列B. 切割目标DNA序列C. 连接DNA片段D. 转录mRNA答案:B二、填空题6. 基因工程的基本操作步骤包括:目的基因的________、________、检测与表达。

答案:提取、重组7. 基因工程在医学领域的应用包括________、________和基因治疗。

答案:基因诊断、基因疫苗8. 在基因工程中,________技术可以用于快速繁殖转基因植物。

答案:组织培养9. 基因工程中,________是将目的基因导入植物细胞的常用方法。

答案:农杆菌介导法10. 基因工程在农业上的应用包括提高作物的________、________和改良品质。

答案:抗病性、抗虫性三、简答题11. 简述基因工程在环境保护方面的应用。

答案:基因工程在环境保护方面的应用主要包括:- 利用基因工程改造微生物,以降解环境中的有毒物质,如石油污染物。

- 通过基因工程改良植物,使其能够耐受重金属污染,从而净化土壤。

- 利用基因工程改造的微生物处理工业废水,减少水体污染。

12. 阐述基因工程在生物制药领域的主要应用。

答案:基因工程在生物制药领域的主要应用包括:- 生产重组蛋白质药物,如胰岛素、干扰素等。

- 利用转基因动物生产药物,如转基因羊产生的抗凝血酶。

- 利用基因工程改造的微生物生产抗生素等药物。

- 开发基因治疗药物,用于治疗遗传性疾病。

基因工程期末考试题及答案

基因工程期末考试题及答案

基因工程期末考试题及答案一、选择题(每题2分,共20分)1. 基因工程中常用的工具酶是:A. 纤维素酶B. 限制性内切酶C. 淀粉酶D. 过氧化氢酶答案:B2. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 基因的表达C. 基因的克隆D. 基因的测序答案:D3. 基因枪法是一种:A. 植物转基因方法B. 动物转基因方法C. 微生物转基因方法D. 所有生物的转基因方法答案:A4. 重组DNA技术中,通常使用哪种质粒作为载体?A. 质粒DNAB. 线粒体DNAC. 核糖体RNAD. 染色体DNA答案:A5. 基因工程中,目的基因的表达通常需要:A. 启动子B. 终止子C. 增强子D. 所有选项答案:D二、填空题(每空2分,共20分)1. 基因工程是指按照人们的意愿,将不同来源的基因在体外构建杂合DNA分子,然后导入到活细胞和生物体内,以改变生物的遗传特性并取得新品种或新产品。

2. 基因工程中常用的宿主细胞有大肠杆菌、酵母菌和________。

答案:哺乳动物细胞3. 基因工程中,________是连接目的基因和载体DNA的关键酶。

答案:DNA连接酶4. 目的基因的表达需要________和________的协同作用。

答案:启动子;终止子5. 基因工程产品在医学领域的应用包括生产________、________和基因治疗等。

答案:重组蛋白;单克隆抗体三、简答题(每题10分,共30分)1. 请简述基因工程在农业中的应用。

答案:基因工程在农业中的应用主要包括提高作物的抗病性、抗虫性、抗旱性和提高作物的产量和品质。

例如,通过基因工程培育的抗虫棉可以减少农药的使用,提高棉花的产量和质量。

2. 基因工程在医学领域有哪些应用?答案:基因工程在医学领域的应用包括生产重组蛋白药物、单克隆抗体、基因治疗和疫苗开发等。

例如,利用基因工程技术生产的胰岛素可以治疗糖尿病,单克隆抗体用于治疗癌症和自身免疫性疾病。

3. 请解释什么是转基因生物,并简述其潜在的风险。

基因工程试题及答案解析

基因工程试题及答案解析

基因工程试题及答案解析一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶是:A. 蛋白酶B. DNA聚合酶C. 核糖核酸酶D. 限制性核酸内切酶答案:D2. 基因工程中,用于将目的基因导入植物细胞的方法是:A. 电穿孔法B. 显微注射法C. 农杆菌转化法D. 脂质体介导法答案:C3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 目的基因的扩增D. 目的基因的检测与鉴定答案:C二、填空题1. 基因工程中,常用的运载体有____、____和____。

答案:质粒、噬菌体、动植物病毒2. 基因工程中,常用的筛选标记基因有____、____和____。

答案:抗性基因、荧光蛋白基因、酶基因三、简答题1. 简述基因工程的应用领域。

答案:基因工程的应用领域包括农业、医学、工业、环境保护等。

在农业中,基因工程可以用于培育抗病、抗虫、抗旱等性状的作物;在医学领域,基因工程可以用于生产重组蛋白药物、基因治疗等;在工业上,基因工程可以用于生产酶、疫苗等;在环境保护方面,基因工程可以用于生物修复、污染物降解等。

2. 基因工程中,如何确保目的基因在宿主细胞中正确表达?答案:确保目的基因在宿主细胞中正确表达需要考虑以下几个方面:首先,目的基因需要有合适的启动子和终止子,以确保其在宿主细胞中得到正确转录和终止;其次,需要考虑目的基因的密码子偏好性,以确保其在宿主细胞中能被高效翻译;再次,需要考虑目的基因的稳定性,避免其在宿主细胞中被降解;最后,还需要考虑目的基因产物的后翻译修饰和定位。

四、论述题1. 论述基因工程在医学领域的应用及其可能带来的伦理问题。

答案:基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断和基因疫苗等。

重组蛋白药物可以用于治疗糖尿病、侏儒症等疾病;基因治疗可以用于治疗遗传性疾病;疾病诊断可以通过基因检测来实现;基因疫苗可以用于预防某些遗传性疾病。

然而,基因工程的应用也带来了伦理问题,如基因隐私权、基因歧视、基因治疗的安全性和有效性等。

《基因工程》各章内容及参考答案(42页).docx

《基因工程》各章内容及参考答案(42页).docx

复习题1 (包括分子生物学基础知识)(请各位同学将所有题目翻译成英文后再做!)一、解释下列名词1.Gene manipulation2.Promotor3.Cloning:4.Subcloning二、填空题:将下列各题空缺部分的答案填在后面的方框内,两者用“;”隔开。

1.基因操作(Gene manipulation)的核心部分是基因克隆(gene cloning), gene cloning的基本要点有(),()和()。

2.()是遗传物质的基木单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。

它可以是连续的,也可以是();可以是(),也可以是RNA;可以存在于染色体上,也可以()3.基因操作并不是一个法律概念,除了包括基因克隆外,还包括基因的()、()、()和()等与基因研究相关的内容。

4.启动子(Promo(or)是指()。

通常一个Gene是否表达,()是关键的一步,是起决定作用的。

在转录过程屮,Promoter还是()的结合位点。

5.原核生物的RNApolymerase主要由两部分组成:()和(),其屮。

■因子并不参与RNA 的合成,它的作用主要是()。

6.从()到()的这一段距离称为一个转录单位,或者一个转录产物,其屮可包括一个或者多个Gene。

7.转录终止子主要有两种,一种是(),另一种是()。

8.重叠基因(Overlapping gene)是指(),间隔基因(Interrupted gene)是指()三、选择题:从备选答案中选出正确的结果,正确答案是唯一的。

四、简答题:1.简述基因克隆的两个基本特征?参考答案:基因克隆的两个基本特征是一是强调外源核酸分子(一般情况下都是DNA)在不同宿主屮的繁殖,打破自然种的界限将来自于不相关物种的基因放入一个宿主中是基因操作的一个重要特征,基因操作的另一个重要特征是繁殖。

2.什么是gene cloning ?什么是亚克隆(subcloning) ?参考答案:基因克降:一定程度上等同于基因的分离,即从复杂的生物体基因组中,经过酶切,消化等步骤,分离带有目的基因的DNA片段。

大学基因工程试题及答案

大学基因工程试题及答案

大学基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶属于哪一类酶?A. 核酸酶B. 蛋白酶C. 脂肪酶D. 淀粉酶答案:A2. 以下哪个不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的克隆B. 目的基因的表达C. 目的基因的检测D. 目的基因的复制答案:D3. 基因工程中常用的运载体有哪些?A. 质粒B. 噬菌体C. 动植物病毒D. 所有以上答案:D二、填空题1. 基因工程中常用的_________技术可以用于目的基因的检测。

答案:PCR2. 基因工程中,_________是将目的基因导入受体细胞的关键步骤。

答案:转化3. 在基因工程中,_________是将目的基因插入到运载体中形成重组DNA分子的过程。

答案:克隆三、简答题1. 简述基因工程在医学领域的应用。

答案:基因工程在医学领域的应用包括生产重组药物、基因治疗、疾病诊断和疫苗开发等。

2. 描述基因工程中目的基因的克隆过程。

答案:目的基因的克隆过程包括提取目的基因、构建基因文库、筛选含有目的基因的克隆、目的基因的扩增和纯化等步骤。

四、论述题1. 论述基因工程技术在农业中的应用及其可能带来的问题。

答案:基因工程技术在农业中的应用包括改良作物品质、提高作物产量、增强作物抗病虫害能力等。

可能带来的问题包括生态平衡的破坏、基因污染、食品安全问题等。

2. 分析基因工程中目的基因表达调控的重要性及其策略。

答案:目的基因表达调控在基因工程中至关重要,它决定了基因工程产品的功能和产量。

调控策略包括启动子的选择、增强子的应用、转录后调控等。

基因工程复习(含答案)

基因工程复习(含答案)

基因工程复习题一、名词解释: (10~20%)基因工程基因工程工具酶限制性内切酶限制性内切酶得Star活性PCR引物PCR扩增平台期DNA芯片基因组文库cDNA文库转化限制与修饰系统原位杂交: 将细胞或组织得核酸固定保持在原来得位置上, 然后用探针与之杂交得一种核酸分子杂交技术, 该方法可较好地反映目得基因在细胞或组织中得分布与表达变化。

粘性末端: 双链DNA被限制性内切酶切割后, 形成得两条链错开几个碱基, 而不就是平齐得末端。

Northern印迹杂交: 将RNA进行变性电泳后, 再转移到固相支持物上与探针杂交得一种核酸分子杂交技术, 可用于检测目得基因得转录水平。

转位: 一个或一组基因片段从基因组得一个位置转移到另一个位置得现象。

基因工程: 在体外, 用酶学方法将各种来源得DNA与载体DNA连接成为重组DNA, 继而通过转化与筛选得到含有目得基因得宿主细胞, 最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子得过程称为基因工程, 又称基因克隆、DNA克隆与重组DNA等。

目得基因:基因工程中, 那些被感兴趣得、被选作研究对象得基因就叫作目得基因。

连接器: 人工合成得一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段, 连接到目得基因得两端, 便于基因重组中得切割与连接。

转化: 受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变得过程。

停滞效应: PCR中后期, 随着目得DNA扩展产物逐渐积累, 酶得催化反应趋于饱与, DNA扩增产物得增加减慢, 进入相对稳定状态, 即为停滞效应, 又称平台期。

逆转录PCR: 以mRNA为原始模板进行得PCR反应。

PCR: 即聚合酶链式反应。

在模板, 引物, 4种dNTP与耐热DNA聚合酶存在得条件下, 特异性地扩增位于两段已知序列之间得DNA区段地酶促合成反应。

α-互补(α-complementation):指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中, 插入了lac 启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸得核苷酸序列(又称α-肽), 该序列不能产生有活性得β-半乳糖苷酶。

基因工程复习题(标准答案版)

基因工程复习题(标准答案版)

基因工程原理复习题思考题基因工程绪论1、基因工程的定义与特征。

定义:在体外把核酸分子(DNA的分离、合成)插入载体分子,构成遗传物质的新组合(重组DNA),引入原先没有这类分子的受体细胞内,稳定地复制表达繁殖,培育符合人们需要的新品种(品系),生产人类急需的药品、食品、工业品等。

特征:1、具跨越天然物种屏障的能力。

2、强调了确定的DNA片段在新寄主细胞中的扩增。

2、试述基因工程的主要研究内容。

1)、目的基因的分离2)、DNA的体外重组(载体、受体系统等)3)、重组DNA分子转移到受体细胞及其筛选4)、基因在受体细胞内的扩增、表达、检测及其分析。

3、基因工程在食品工业上有何应用发展?主要是通过基因重组,使各种转基因生物提高生产谷氨酸、调味剂、酒类和油类等有机物的产率;或者改良这些有机物组成成分,提高利用价值。

4、转基因是一把双刃剑,请客观谈谈对转基因及转基因食品安全性的认识。

转基因技术所带来的好处是显而易见的,在人类历史进步和发展中起到了积极作用。

首先,通过该项技术可以提供人们所需要的特性,改良培育新品种;第二,延长食品保存时间或增加营养成分;第三,将抗虫防菌基因转入到作物中,使作物本身产生抵抗病虫害侵袭的能力,减少了农药的使用量,有利于环境保护;第四,转基因技术及基因食物在医学方面得到广泛研究和应用。

人们对转基因技术的主要担忧在于环境方面。

外源基因的导入可能会造就某种强势生物,产生新物种或超级杂草、损害非目标生物、破坏原有生物种群的动态平衡和生物多样性,也即转基因生物存在潜在的环境安全问题。

转基因作物的大面积种植已有数年,食用转基因食品的人群至少有10亿之多,但至今仍未有转基因食品对生命造成危害的实例;更何况目前每一种基因工程食品在上市前,都要经过国家法律认可,食品卫生部门和环境部门的严格检测。

只有测试合格了,才能投放市场。

因此公众完全可以安全地消费、大胆地食用转基因食品。

第一章 DNA的分子特性与利用1、原核生物和真核生物的基因表达调控有何差别?1)原核基因表达调控的三个水平:转录水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控原核基因表达调控主要是在转录水平上的调控。

基因工程练习题带答案

基因工程练习题带答案

基因工程练习题一、单项选择题1.在基因工程中,切割载体和含有目的基因的DNA片段中,一般需使用A.同种限制酶B.两种限制酶C.同种连接酶D.两种连接酶2.基因工程常用的受体有①大肠杆菌②枯草杆菌③结核杆菌④动植物细胞A.①②③④B.①②③C.②③④D.①②④3.有关基因工程的叙述正确的是A.限制酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成是在细胞内完成的C.质粒都可作为载体D.蛋白质的结构成分为合成目的基因提供资料4.下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体A.细菌质粒B.噬菌体C.动植物病毒D.细菌核区的DNA5.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。

在基因操作的基本步骤中,不进行碱基互补配对的是A.人工合成目的基因B.目的基因与运载体结合C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的检测表达6.不是基因工程方法生产的药物是A.干扰素B.白细胞介素C.青霉素D.乙肝疫苗7.在基因工程中用来修饰改造基因的工具是A.限制酶和连接酶B.限制酶和水解酶C.限制酶和运载酶D.连接酶和运载酶8.下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件A.具有某些标记基因B.决定宿主细胞的生存C.能够在宿主细胞中复制D.有一个或多个限制酶切点9.水母发光蛋白由236个氨基酸构成,其中有三种氨基酸构成发光环,现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记。

在转基因技术中,这种蛋白质的作用A.促使目的基因导入宿主细胞中B.促使目的基因在宿主细胞中复制C.使目的基因容易被检测和选择D.使目的基因容易成功表达10.应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才能达到检测疾病的目的。

这里的基因探针是指A.用于检测疾病的医疗器械B.用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子10/ 1C.合成β—球蛋白的DNAD.合成苯丙氨酸羟化酶的DNA片段11.基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来,这要利用限制性内切酶。

基因工程试题及答案全集

基因工程试题及答案全集

作业一:一、名词解释:1、基因:是遗传的物质基础,是DNA(脱氧核糖核酸)分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称,是具有遗传效应的DNA分子片段。

2、基因组该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子3、操纵子:原核生物的几个功能相关的结构基因往往排列在一起,转录生成一个mRNA,然后分别翻译成几种不同的蛋白质.这些蛋白可能是催化某一代谢过程的酶,或共同完成某种功能.这些结构基因与其上游的启动子,操纵基因共同构成转录单位,称操纵子.4、启动子:是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件,包括至少一个转录起始点.在真核基因中增强子和启动子常交错覆盖或连续。

有时,将结构密切联系而无法区分的启动子、增强子样结构统称启动子。

5、增强子:是一种能够提高转录效率的顺式调控元件,最早是在SV40病毒中发现的长约200bp的一段DNA,可使旁侧的基因转录提高100倍,其后在多种真核生物,甚至在原核生物中都发现了增强子.增强子通常占100~200bp长度,也和启动子一样由若干组件构成,基本核心组件常为8~12bp,可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。

6、基因表达:是指细胞在生命过程中,把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译,转变成具有生物活性的蛋白质分子。

二、简答题1、说明限制性内切核酸酶的命名原则要点.答:限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序号. 基本原则: 3—4个字母组成,方式是:属名+种名+株名+序号;首字母:取属名的第一个字母,且斜体大写;第二字母: 取种名的第一个字母,斜体小写;第三字母:(1)取种名的第二个字母,斜体小写;(2)若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字母代替。

第四字母:若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体。

顺序号: 若在同一菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以I,Ⅱ,Ⅲ,…等,用正体.2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性?受哪些因素影向?答:Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性,但是这种特异性受特定条件的限制,即在一定环境条件下表现出来的特异性。

高中生物 基因工程习题(解析版)

高中生物  基因工程习题(解析版)

专题06 基因工程复习题一、单选题1.在基因工程中,科学家所用的“剪刀”“针线”和“载体”分别是指()A.大肠杆菌病毒、质粒、DNA连接酶B.噬菌体、质粒、DNA连接酶C. DNA限制酶、RNA连接酶、质粒D. DNA限制酶、DNA连接酶、质粒【答案】D【解析】(1)在基因工程的操作中,“分子手术刀”是限制酶。

(2)“分子缝合针”是DNA连接酶。

(3)“分子运输车”是基因进入受体细胞的载体,常用的载体包括质粒、动植物病毒、λ噬菌体的衍生物等。

2.下列说法正确的是()A.限制性核酸内切酶的识别序列是GAATTC,只能在G和A之间切断DNAB. DNA连接酶能够将任意2个DNA片段连接在一起C.质粒是能够自主复制的小型双链环状DNA分子D.基因工程的载体只有质粒一种【答案】C【解析】酶具有专一性,不同的限制性核酸内切酶的识别序列是不相同的,Eco R Ⅰ限制酶的识别序列和切割位点GAATTC序列,A错误;DNA连接酶可将具相同的黏性末端的两DNA片段连接起来,B错误;质粒是基因工程常用的载体,是能够自主复制的环状DNA 分子,C正确;目前常用的载体有质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒,D错误。

3.PCR是多聚酶链式反应技术的缩写,下列有关PCR过程叙述中不正确的是()A.目的基因DNA解旋过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键B.引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成C.复制过程中需要DNA聚合酶、A TP、四种核糖核苷酸D. PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高【答案】C【解析】PCR的过程是DNA双链间氢键断裂解旋,引物通过碱基互补配对原则与DNA模板链的结合,在热稳定的DNA聚合酶的作用下,以四种脱氧核糖核苷酸为原料合成新的DNA分子。

4.下面是获得抗虫棉的技术流程示意图。

有关叙述错误的是()A.重组质粒构建过程中需要限制性内切酶和DNA连接酶B.图中愈伤组织分化产生的再生植株基因型一般都相同C.卡那霉素抗性基因中含有相关限制性内切酶的识别位点D.转基因抗虫棉有性生殖的后代不能稳定保持抗虫性状【答案】C【解析】重组质粒构建过程中需要限制性内切酶切出相同的黏性末端,再经DNA连接酶连接形成重组质粒,故A正确;细胞分化的过程不会改变遗传物质,故形成的再生植株的基因型一般是相同的,故B正确;卡那霉素抗性基因作为标记基因,其中不可能含有相关限制性内切酶的识别位点,故C错误;转基因抗虫棉植株相当于杂合子,其后代会发生性状分离,故D正确。

小学基因工程试题及答案

小学基因工程试题及答案

小学基因工程试题及答案一、选择题(每题2分,共20分)1. 基因工程中常用的运载体是:A. 质粒B. 病毒C. 线粒体D. 叶绿体答案:A2. 基因工程的基本操作步骤不包括:A. 目的基因的获取B. 目的基因的表达C. 目的基因的复制D. 目的基因的检测和表达产物的鉴定答案:C3. 基因工程中,限制性核酸内切酶的主要作用是:A. 连接目的基因和运载体B. 切割目的基因C. 切割运载体D. 切割DNA分子答案:D4. 基因工程中,用于检测目的基因是否导入受体细胞的方法是:A. DNA分子杂交技术B. 抗原-抗体杂交技术C. 核酸探针技术D. 以上都是答案:D5. 基因工程在农业上的应用不包括:A. 培育抗虫作物B. 培育抗病作物C. 培育抗旱作物D. 培育抗酸雨作物答案:D二、填空题(每空1分,共20分)1. 基因工程是指按照人们的意愿,对生物的基因进行改造,使生物表现出人们所希望的_________。

答案:性状2. 基因工程中,常用的运载体必须具备的条件包括:能在宿主细胞中稳定存在并复制、具有_________位点、具有标记基因等。

答案:限制酶3. 基因工程中,目的基因与运载体结合后,需要通过_________技术将重组DNA导入受体细胞。

答案:转化4. 基因工程在医学上的应用包括:生产_________、生产疫苗、基因治疗等。

答案:干扰素5. 基因工程在环境保护上的应用包括:利用基因工程菌处理污水中的_________,利用基因工程植物处理重金属污染等。

答案:有机物三、简答题(每题10分,共20分)1. 简述基因工程在医药领域的应用。

答案:基因工程在医药领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、生产疫苗、基因治疗等。

通过基因工程技术,可以将目的基因导入微生物、动物或植物细胞中,使其表达出所需的药物蛋白或疫苗成分,从而用于疾病的预防和治疗。

2. 阐述基因工程在农业上的主要应用。

答案:基因工程在农业上的主要应用包括:培育抗虫、抗病、抗旱等抗逆性作物,提高作物的产量和品质;通过基因工程改良作物的营养成分,如提高作物中的维生素和蛋白质含量;利用基因工程改良作物的生长周期,使其适应不同的气候和土壤条件。

基因工程试题库及答案

基因工程试题库及答案

基因工程习题集一、名词解释:(20×4/)1、基因2、克隆3、基因定位4、PCR5、基因工程工具酶6、组织培养7、限制性核酸内切酶8、受体细胞9、生物技术 10、基因沉默11、重组DNA技术12、逆转录酶13、单克隆抗体14、核移植技术15、细胞融合16、胞内酶17、凝胶过滤18、固定化酶 19、蛋白质工程20、生物反应器二、单项选择题:(60×2/)1.下列关于基因工程应用的叙述,正确的是()A.基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因B.基因诊断的基本原理是DNA分子杂交C.一种基因探针能检测水体中的各种病毒D.原核基因不能用来进行真核生物的遗传改良2.在已知某小片段基因碱基序列的情况下,获得该基因的最佳方法是()A.用mRNA为模板逆转录合成DNA B.以4种脱氧核苷酸为原料人工合成C.将供体DNA片段转入受体细胞中,再进一步筛选 D.由蛋白质的氨基酸序列推测mRNA 3.我国科学家运用基因工程技术,将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导人棉花细胞并成功表达,培育出了抗虫棉。

下列叙述不.正确的是()A.基因非编码区对于抗虫基因在棉花细胞中的表达不可缺少B.重组DNA分子中增加一个碱基对,不一定导致毒蛋白的毒性丧失C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递至近缘作物,从而造成基因污染D.转基因棉花是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的4.采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵,培育出转基因羊。

但是,人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。

以下有关叙述,正确的是()A.人体细胞中凝血因子基因编码区的碱基对数目,等于凝血因子氨基酸数目的3倍B.可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA分子导入羊的受精卵C.在该转基因羊中,人凝血因子基因存在于乳腺细胞,而不存在于其他体细胞中D.人凝血因子基因开始转录后,DNA连接酶以DNA分子的一条链为模板合成mRNA5.科学家通过基因工程的方法,能使马铃薯块茎含有人奶主要蛋白。

基因工程期末复习题(含答案)

基因工程期末复习题(含答案)

一、填空题1、基因文库的构建通常采用cDNA法和鸟枪法两种方法。

2 、限制性内切酶识别序列的结构一般为具有 180 度旋转对称的回文结构。

3、DNA 连接酶主要有两种:T4噬菌体和大肠杆菌DAN连接酶。

4、根据质粒在宿主细胞中所含拷贝数的多少,可以把质粒分为两种类型:紧密型质粒和松弛型质粒。

5、原核受体细胞通常包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和蓝细菌。

6、原核生物或低等真核生物,将外源重组 DNA 导入受体细胞的方法有借助生物载体的转化、转染、转导。

7、对细菌细胞进行转化的关键是细胞处于感受态。

8、基因工程是_____1970’____年代发展起来的遗传学的一个分支学科。

9、部分酶切可采取的措施有:(1)减少酶量;(2)缩短反应时间;(3)增大反应体积等。

10、第一个分离的限制性内切核酸酶是EcoK;而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是EcoRl。

11、DNA 聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用枯草杆菌蛋白酶切割 DNA 聚合酶I 得到的分子量为 76kDa 的大片段,具有两种酶活性:(1)5'-3'合成酶的活性;(2)3'-5'外切核酸酶的活性。

12、为了防止 DNA 的自身环化,可用_碱性磷酸酶__去双链 DNA_ 5’端的磷酸基团_。

13、测序酶是修饰了的 T7 DNA 聚合酶,它只有5'-3'合成酶的活性,而没有 3'-5' 外切酶的活性。

14、切口移位(nick translation)法标记 DNA 的基本原理在于利用 DNA 聚合酶 I 的5'一 3'合成酶和 5'一 3'合成酶的作用。

15、欲将某一具有突出单链末端的双链 DNA 分子转变成平末端的双链形式,通常可采用S1 核酸酶切割或DNA 聚合酶补平。

16、反转录酶除了催化 DNA 的合成外,还具有核酸水解酶 H 的作用,可以将DNA-RNA 杂种双链中的 RNA 水解掉。

基因工程原理练习题及其答案

基因工程原理练习题及其答案

基因工程复习题题型:名词解释(10个)30分;填空(每空1分) 20分;选择题(每题1分)10分;简答题(4个)20分;论述题(2个)20分.第一章绪论1。

名词解释:基因工程:按照预先设计好的蓝图,利用现代分子生物学技术,特别是酶学技术,对遗传物质DNA直接进行体外重组操作与改造,将一种生物(供体)的基因转移到另外一种生物(受体)中去,从而实现受体生物的定向改造与改良。

遗传工程广义:指以改变生物有机体性状为目标,采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作,以改良品质或创造新品种。

包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次.狭义:基因工程.克隆:无性(繁殖)系或纯系。

指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的一群由遗传上同一的DNA分子、细胞或个体组成的特殊生命群体。

2.什么是基因克隆及基本要点?3.举例说明基因工程发展过程中的三个重大事件.A)限制性内切酶和DNA连接酶的发现(标志着DNA重组时代的开始);B) 载体的使用;C) 1970年,逆转录酶及抗性标记的发现。

4。

基因工程研究的主要内容是什么?基础研究:基因工程克隆载体的研究基因工程受体系统的研究目的基因的研究基因工程工具酶的研究基因工程新技术的研究应用研究:基因工程药物研究转基因动植物的研究在食品、化学、能源和环境保护等方面的应用研究第二章基因克隆的工具酶1.名词解释:限制性核酸内切酶:一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列,并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶.回文结构:双链DNA中的一段倒置重复序列,当该序列的双链被打开后,可形成发夹结构。

同尾酶:来源不同、识别序列不同,但产生相同粘性末端的酶。

同裂酶:不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列黏性末端:DNA末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的DNA末端通过互补配对粘合,这样的DNA末端,称为粘性末端。

平末端:DNA片段的末端是平齐的。

基因工程试题及答案

基因工程试题及答案

《基因工程》一、选择题(每小题1.5分,共15分)1.基因工程的创始人是()。

A A。

KornbergB W。

GilbertC P。

BergD S. Cohen2.关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有()不太恰当。

A 由作用于同一DNA序列的两种酶构成B 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶C 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰D 不同的宿主系统具有不同的限制—修饰系统3.在DNA的3’—5'链上,基因的起始密码子是()A ATG(或GTG)B AGTC TAGD TGA4.II限制性内切核酸酶可以特异性地识别()。

A 双链DNA的特定碱基对B 双链DNA的特定碱基序列C 特定的三联密码D 以上都正确5.末端转移酶是合成酶类,具有( )活性。

A 3’→5’DNA聚合酶B 5'→3'DNA聚合酶C 5'→3'DNA内切酶D 5'→3’DNA外切酶6.下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中,( )是不正确的。

A 质粒的复制只受本身的遗传结构的控制,因而有较多的拷贝数.B 可以在氯霉素作用下进行扩增。

C 通常带有抗药性标记。

D 同严紧型质粒融合后,杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子。

7.关于cDNA的最正确的说法是().A 同mRNA互补的单链DNAB 同mRNA互补的双链DNAC 以mRNA为模板合成的双链DNAD 以上都正确8.关于T4 DNA Ligase,下列说法中哪一项不正确?()A 是最常用的DNA连接酶.B 不但能连接粘性末端,还能连接齐平末端。

C 不但能连接粘性末端。

D 最适温度37 ℃.9.下列关于建立cDNA文库的叙述中,()是错误的?A 从特定组织或细胞中提取DNA或RNAB 用反转录酶合成mRNA的对应单链DNAC 以新合成的单链DNA为模板合成双链DNAD 新合成的双链DNA克隆到载体上,并导入受体细胞10.用下列方法进行重组体的筛选,只有()说明外源基因进行了表达.A Southem blotB Northem blotC Western印迹D 原位菌落杂交二、填空题(每空1分,共25分)1.限制性内切核酸酶分为三类,基因工程中应用的是_____________。

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基因工程原理复习题思考题考试时间:2009.06.21 上午9:00-11:00 地点5D305基因工程绪论1、基因工程的定义与特征。

定义:在体外把核酸分子(DNA的分离、合成)插入载体分子,构成遗传物质的新组合(重组DNA),引入原先没有这类分子的受体细胞内,稳定地复制表达繁殖,培育符合人们需要的新品种(品系),生产人类急需的药品、食品、工业品等。

特征:1、具跨越天然物种屏障的能力。

2、强调了确定的DNA片段在新寄主细胞中的扩增。

2、试述基因工程的主要研究内容。

1)、目的基因的分离2)、DNA的体外重组(载体、受体系统等)3)、重组DNA分子转移到受体细胞及其筛选4)、基因在受体细胞内的扩增、表达、检测及其分析。

3、基因工程在食品工业上有何应用发展?主要是通过基因重组,使各种转基因生物提高生产谷氨酸、调味剂、酒类和油类等有机物的产率;或者改良这些有机物组成成分,提高利用价值。

4、转基因是一把双刃剑,请客观谈谈对转基因及转基因食品安全性的认识。

转基因技术所带来的好处是显而易见的,在人类历史进步和发展中起到了积极作用。

首先,通过该项技术可以提供人们所需要的特性,改良培育新品种;第二,延长食品保存时间或增加营养成分;第三,将抗虫防菌基因转入到作物中,使作物本身产生抵抗病虫害侵袭的能力,减少了农药的使用量,有利于环境保护;第四,转基因技术及基因食物在医学方面得到广泛研究和应用。

人们对转基因技术的主要担忧在于环境方面。

外源基因的导入可能会造就某种强势生物,产生新物种或超级杂草、损害非目标生物、破坏原有生物种群的动态平衡和生物多样性,也即转基因生物存在潜在的环境安全问题。

转基因作物的大面积种植已有数年,食用转基因食品的人群至少有10亿之多,但至今仍未有转基因食品对生命造成危害的实例;更何况目前每一种基因工程食品在上市前,都要经过国家法律认可,食品卫生部门和环境部门的严格检测。

只有测试合格了,才能投放市场。

因此公众完全可以安全地消费、大胆地食用转基因食品。

第一章DNA的分子特性与利用1、原核生物和真核生物的基因表达调控有何差别?1)原核基因表达调控的三个水平:转录水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控原核基因表达调控主要是在转录水平上的调控。

2)真核生物基因表达的特点:●1.基因组DNA存在的形式与原核生物不同;●2.真核生物中转录和翻译分开进行;●3.基因表达具有细胞特异性或组织特异性;●4.真核基因表达的调控在多个水平上进行:DNA水平的调控、转录水平调控、转录后水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控;2、什么是基因?根据基因的产物,基因可分为哪三类?基因是具有生物学功能的、在染色体上占据一定位置的一段核苷酸序列,是分子遗传的功能单位。

根据基因的产物,基因可分为三类:●转录并翻译编码蛋白质的基因:包括结构蛋白基因、编码酶的基因、调节基因●转录但不翻译产物的基因:包括tRNA、rRNA●不转录但有功能的DNA区段:如启动子、操纵基因3、引起核酸变性的因素主要有哪些?核酸变性后性质有何变化?引起核酸变性的因素:--温度、酸、碱、甲醛和尿素等。

DNA变性后,它的一系列性质发生变化,如紫外吸收(260 nm)值升高(增色效应), 粘度降低等,如DNA增加25-40%. RNA约增加1.1%。

4、DNA复性及其影响因素。

变性DNA在适当的条件下,两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构,这一过程称为复性。

DNA复性的程度、速率与复性过程的条件有关,也与它本身的组成和结构有关:分子量越大复性越难。

浓度越大,复性越容易。

(附加:注意:将热变性的DNA骤然冷却至低温时,DNA不可能复性。

但是将变性的DNA 缓慢冷却时,可以复性。

复性的应用:核酸的杂交,分子扩增)第二章基因工程操作的基本技术1.DNA凝胶电泳中核酸分子分离的机理。

在碱性环境下,核酸分子带负电荷,在外加电场的作用下,分子在凝胶多孔性刚性滤孔中从负极向正极泳动,其中主要由于分子筛效应和电荷效应达到分离不同大小核酸分子的目的。

2.DNA凝胶电泳中影响电泳迁移率的因素主要有哪些?1)分子本身的影响⌝分子的大小:小则快⌝带电荷数:多则快⌝分子构型:超螺旋>解螺旋2)电场:直流电场⌝电压高则快⌝电压太高则结果不准确常用3~5V/CM3)支持物介质⌝种类:琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶⌝凝胶浓度: 浓度大,筛孔小,适合小分子电泳;浓度小,筛孔大,适合大分子电泳4)电泳缓冲液⇐ pH值:偏碱性,带负电荷⇐离子浓度:离子浓度高⎽电流大⎽发热快⎽胶溶解⇐种类:TAE、TBE、TPE、TNE3. PCR 的原理和主要反应过程,并分析影响PCR 扩增的影响因素。

PCR 原理:变性温度下, DNA 双链变性双螺旋解开成单链DNA ,在退火温度中人工合成的特异引物根据碱基互补配对原则与单链DNA 特异结合,然后在DNA 聚合酶的作用下,在延伸温度下不同的脱氧核苷酸按照碱基互补配对原则在引物的引导下合成与模板DNA 互补的新链,实现DNA 的扩增。

影响PCR 扩增的影响因素:§(1)Taq 酶:常用1U/25µL≥浓度低,扩增产物不够;≥浓度高,非特异性扩增增加;≥酶的活性;§(2)dNTP 的浓度:常用100-200µmol/L ,不能低于20µmol/L ,特异性、保真性;§(3)模板:主要考虑纯度及使用量,对纯度要求不高,但含有酚、氯仿等杂质则难以成功。

使用量从几个ng 到100ng.§(4)引物浓度:0.1-0.5µmol/L 之间,过多则非特异扩增增加,形成引物二聚体;§(5)Mg2+浓度:常用 0.5-2.5mmol/L ;影响:酶的活性、引物-模板退火、特异性§(6)PCR 反应程序设定:变性温度和时间、引物退火温度Tm 与时间、引物延伸温度与时间和循环数4. PCR 引物设计的原则,若给一指定DNA 序列并需要通过PCR 扩增此序列,如何设计扩增引物?(关于如何设计这个问题,靠自己了)引物设计原则:1、G+C 含量45-55%;2、Tm 值高于55;3、引物特异性;4、引物扩增跨度;5、是否形成引物二聚体5. 定量PCR 的原理?Ct 值的含义。

原理:通过实时检测PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号,来实现对起始模板进行定量及定性的分析。

初始模板量X0的对数值与C(T) 值之间呈线性关系:log X0= - log(1+Ex) *Ct+ log N Ct 值的含义是:每个反应管内的荧光信号开始由本底进入指数增长阶段时到达设定的域值时所经历的循环数(如后图所示,图仅供参考)Threshold line C(t) valueC(t) value 18.12 - 0.0阈值线 Ct 值 Ct 值6.分子杂交的类型主要有哪些?探针的标记方法与标记类型?常用的双链DNA的标记方法是哪两种?探针的标记方法:切口平移法、随机引物合成法,末端标记法,PCR标记法,体外转录标记法。

探针按核酸分子分:DNA探针和RNA探针;按标记物的不同:放射性标记探针和非放射性标记探针。

标记类型:按核酸分子的不同:可分为DNA探针和RNA探针根据标记物的不同:可分放射性标记探针和非放射性标记探针;双链DNA探针标记主要方法:切口平移法、随机引物合成法;7.Southern杂交一般过程及影响杂交因素。

Southern杂交操作步骤:(1) 用限制性内切酶酶切DNA, 经凝胶电泳分离各酶切片段;(2) 转膜:将DNA片段转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上;(3) 预杂交:封阻滤膜上非特异性位点;(4) 杂交:让探针与同源DNA片段特异性结合;(5) 洗脱:去除非特异性结合的探针;(6) 自显影检查目的DNA所在的位置。

Southern杂交影响因子1)、目的DNA在总DNA中所占的比例2)、探针的大小和标记效率3)、转移到滤膜上的DNA量4)、探针与靶DNA的同源性8.基因组文库的构建过程?如何确定文库的大小?基因组文库的构建过程:1)从生物体提取大片断的基因组DNA;2)用适当的限制性内切酶(常为4碱基识别位点)进行部分酶切或超声波打断基因组DNA ;3)在琼脂凝胶电泳上或蔗糖梯度离心筛选适当长度的DNA片断(根据载体的要求);4)载体的酶切、回收;5)将处理好的基因组DNA片断与载体连接;6)将重组子导入宿主细胞7)文库的鉴定、收集、保存;确定文库大小的方法:以在构建的基因组文库中任一基因存在的概率来衡量文库的质量或完备性,它与基因文库最低所含克隆数N(即文库大小)之间的关系可用下式表示:N = ln ( 1 – P ) / ln ( 1 – f )其中:N:文库所需的总克隆数;P:任一基因被克隆(或存在于基因文库中)的概率;f:克隆片段的平均大小/ 生物基因组的大小。

9.基因文库的类型包括哪两种?各有什么特点?10.一般质粒DNA的构型有哪几种?在琼脂糖凝胶电泳中的有何特点?超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA在琼脂糖凝胶电泳的特点是:电泳的泳动速度由大到小分别是:超螺旋质粒DNA>线状质粒DNA>开环质粒DNA11.碱裂解法提取质粒DNA的原理,分析影响试验结果的各种可能因素。

碱裂解法原理:在碱性条件下,双连DNA氢键断裂,结构破坏变性,环状超螺旋质粒不充分变性。

在中性条件下变性质粒恢复原来构型,而线性大分子细菌DNA不能复性呈不溶物而经离心除去。

(各种可能因素是上一届的,具体其实大家可以根据那天师兄说的去写)提取失败:1)洗去双链时,将质粒DNA洗去;2)破壁失败,质粒没析出;3)加剂问题电泳失败:1)电压太高2)没加染色剂3)胶穿孔4)电泳时间过长12.电泳缓冲液使用一定时间后出现DNA在凝胶中跑不动现象的原因,有何解决办法?原因:电泳缓冲液的离子的富集作用;解决方法:1.更换成新配置的电泳缓冲液;2.把电泳槽中的缓冲液倒出混匀后再重新使用13.电泳的指示剂和染色剂有何区别,各自的作用是什么?指示剂一定要在电泳前加入,指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液;(一般为:溴酚兰,二甲苯青)作用:①预知电泳的速率及方向;②使样品呈现颜色,便于加样;③一些高浓度蔗糖或其它物质增加DNA的密度,可以防止DNA的扩散染色剂即可以在电泳前加入样液,又可以电泳后再对凝胶染色;(溴化已锭[EB]、硝酸银、Goldview染料)作用:呈现出核酸电泳后的带型。

第三章基因克隆的酶学基础1、限制性核酸内切酶的类型,基因工程常用的是哪种限制性核酸内切酶?(常用II型)2、什么是星活性,产生星活性的因素可能有哪些?在非最适合的条件下酶的识别特异性降低,产生非特异性带,这种活性称星活性。

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