循环肿瘤细胞检测及临床应用价值
外周血循环肿瘤细胞(CTCs)分离富集检测及其临床应用
仅能揭示瞬时的基因组特征 不可行 无 58%（肺癌）
49.6%（肺癌）
97.2%（肺癌） 未见报道 不可以 不可以 数据质量较差
CTC检测助力肿瘤诊疗
2 最具潜力的液体活检---CTC检测
7
2.1 CTC概念
循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell,CTC)指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环的肿瘤细胞。
03 非典型形态
• CTC入血后随血液快速流动。 • 与其他细胞碰撞、受到血管壁 的挤压。 • 受机体免疫系统以及药物的攻 击。 • CTC形态有别于肿瘤组织、细 胞大小、形态及表型发生变化。
瘤标志物
Weinberg提出CTC 可作为具有临床实 践价值的诊断指标， 为临床提供重要信
息
CTC的EMT状态与 肿瘤治疗效果和复
发相关
CFDA批准叶酸受 体阳性CTC检测试
剂盒
1869 1889
1976
1982
2004
2007 2008
2011
2012
2013
2014
2016 2017
提出“种子与土壤”假说， 即肿瘤细胞可随血液在 体内循环，进入其他器 官如同种子遇到土壤，
03 非典型形态
•相同肿瘤的不同细胞之间的基因 与表型存在差异。
• 不同实体肿瘤来源CTC，不同患 者CTC表面抗原表达、分布存在差 异。
Burrell RA, et. al. Nature. 2013 ;501(7467):338-45.
2.3 循环肿瘤细胞特点---非典型形态
01 稀有性
02 异质性
优点：非侵入式； 无创； 可重复性取样； 获取全面的疾病信息。
Alix-Panabières C, Pantel K. Clin Chem. 2013 Jan; 59(1):110-8.
ctc循环肿瘤细胞检测
CTC循环肿瘤细胞检测循环肿瘤细胞（CTC）是一种罕见的血液中的癌细胞，可以从原发肿瘤脱落，并通过血液循环传播到其他部位。
CTC的检测对于癌症的早期诊断、治疗选择和预后判断具有重要意义。
CTC循环肿瘤细胞检测是一种非侵入性、无创的方法，可以提供关于肿瘤发展和蔓延的有价值的信息。
本文将介绍CTC循环肿瘤细胞检测的原理、方法和应用。
原理CTC循环肿瘤细胞检测的原理基于CTC的特殊性质。
CTC具有一定的生物特性，如细胞形态学特征、表面标记、核酸和蛋白质表达等，使其能够与正常血液细胞区分开来。
通过对CTC进行特异性标记和分离，可以将其从血液中分离出来，并进行进一步的表征和分析。
目前，CTC的检测方法大致可以分为两类：物理方法和生物学方法。
物理方法包括密度梯度离心、滤膜分离和微流控芯片等，通过差异化的物理性质实现CTC的分离。
生物学方法则利用CTC与正常血液细胞之间的生物学区别，如表面标记的差异、特定蛋白和核酸标记等，通过生物学分子靶向的方式进行CTC的富集和分离。
方法CTC循环肿瘤细胞检测的方法多样，具体的选择取决于实验室的设备和研究目的。
下面将介绍几种常见的CTC检测方法：密度梯度离心法密度梯度离心法是最早用于CTC检测的方法之一。
该方法通过利用瘦脂蛋白或葡聚糖等高分子物质在不同浓度下形成的梯度来分离CTC。
通过对梯度离心后，在不同密度层次上找到CTC，并进行进一步的分析和鉴定。
滤膜分离法滤膜分离法基于滤膜的孔径大小来分离不同大小的细胞。
通过选择合适的滤膜孔径，可以将CTC与正常血液细胞分离开来。
然后，通过对滤膜上沉积的细胞进行进一步的标记和分析，即可获得CTC的信息。
微流控芯片法微流控芯片法是一种新兴的CTC检测方法。
该方法利用微流控技术，在芯片上制造出复杂的细流体网络，并通过微米级别的微通道将CTC富集和分离。
微流控芯片法具有高通量、高灵敏度和高特异性的优点，被广泛应用于CTC的检测。
应用CTC循环肿瘤细胞检测在临床和研究领域具有广泛的应用前景。
循环肿瘤细胞检测在乳腺癌患者中的应用研究进展
循环肿瘤细胞检测在乳腺癌患者中的应用研究进展1. 引言1.1 乳腺癌患者中循环肿瘤细胞检测的重要性与传统的组织活检相比，循环肿瘤细胞检测具有更高的敏感性和特异性，能够在患者体内实时监测病情变化，为临床医生提供更为全面的信息支持。
通过检测循环肿瘤细胞的数量和特征，可以评估疾病的进展程度、预测患者的生存率，为后续治疗方案的选择提供重要参考依据。
乳腺癌患者中循环肿瘤细胞检测的重要性不容忽视，它为个体化治疗、减少复发率、提高生存率提供了重要的支持和保障。
随着检测技术的不断进步和完善，循环肿瘤细胞检测在乳腺癌患者中的应用前景将更加广阔。
1.2 循环肿瘤细胞检测技术的发展历程循环肿瘤细胞检测技术的发展历程始于1999年，当时美国约翰·霍普金斯大学的F. A. Allard等人首次报道了利用免疫磁珠（immunomagnetic beads）结合免疫荧光细胞分离技术（immunofluorescence cell sorting）进行循环肿瘤细胞检测的方法，为后续研究奠定了技术基础。
随后，随着单细胞分析技术的发展，流式细胞术（flow cytometry）和PCR等技术被引入循环肿瘤细胞检测中，使得对肿瘤细胞的检测更为精准和可靠。
在接下来的几年里，随着技术的不断进步和完善，一系列自动化检测系统和精准定量方法相继问世，如Circulating Tumor Cell Chip、EPISPOT、CellSearch等，大大提高了循环肿瘤细胞检测的灵敏度和准确性。
新一代高通量测序技术的引入也为循环肿瘤细胞的分析提供了更多可能，使得其在乳腺癌患者中的应用研究有了更深入的发展。
循环肿瘤细胞检测技术经过多年的发展与进步，已经成为乳腺癌患者管理中不可或缺的重要手段，为临床诊断、治疗和预后评估提供了重要依据。
随着技术的不断革新和完善，循环肿瘤细胞检测在乳腺癌患者中的应用前景将更加广阔。
1.3 研究目的和意义乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，对女性的生命健康造成了严重威胁。
外周血叶酸受体阳性循环肿瘤细胞检测在非小细胞肺癌筛查中的应用价值
•论外周血叶酸受体阳性循环肿瘤细胞检测在非小细胞肺癌筛查中的应用价值唐兴.蒋东，赵军苏州大学附属第一医院胸外科，江苏苏州215006摘要：目的观察非小细胞肺癌患者外周血叶酸受体阳性循环肿瘤细胞（circulating tumor cells, C T C s)水平变化，探讨外周血叶酸受体阳性C T C s在非小细胞肺癌筛查中的应用价值。
方法非小细胞肺癌患者136例为肺癌组，肺部良性病变患者10例为良性病变组，健康志愿者54例为对照组。
3组均采用以叶酸受体为靶点的免疫磁珠阴性富集+实时荧光定量P C R法检测外周血叶酸受体阳性C T C s水平；采用化学发光免疫分析法检测血清癌胚抗原（carcino-embryonic antigen. C E A)、糖链抗原（carbohydrate antigen. C A)125、C A724、细胞角蛋白19 片段（cytokeratin 19 fragment，C Y F R A21-1)、神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase，N S E)水平。
比较3组C T C s水平；比较不同临床特征非小细胞肺癌患者C T C s水平;绘制R O C曲线，评价C T C s及血清C E A、C A125、C A724、C Y FR A21-1、NSE 5项指标联合诊断非小细胞肺癌的价值。
结果肺癌组C T C s水平[11. 21 (8. 58,15. 30) F U/3m l j高于良性病变组[7. 55 (5. 23，10•25)F U/3m L]和对照组[4.95(3•55,7•62)F U/3m L](；：)<0•05),良性病变组高于对照组（P<0•05)。
T N M分期I、II、丨H、W期非小细胞肺癌患者CTCs 水平[11. 00(8. 58,13. 30)、13. 25(10. 48,16. 88)、14. 77( 11. 47,16. 55)、17. 89(17.07.19.22)F U/3m L]两两比较差异均有统计学意义（幵=〗6.443./3<0.05);不同年龄、性别、肿瘤最大径、丁分期、分化等级、病理类型非小细胞肺癌患者C T C s水平比较差异均无统计学意义（P>0.05),R O C曲线分析结果显示，C T C s以8. 70 F U/3m L为最佳截断值，诊断非小细胞肺癌的A U C为0. 953(95%t7:0.926〜0. 979,P<0.05),灵敏度为79.40%,特异度为98.10%,诊断效能优于〔[六、(：八125、(：八724乂'丫？1^21-1、>«£联合检测。
循环肿瘤细胞(CTC)检测
循环肿瘤细胞（CTC）检测一、什么是循环肿瘤细胞（CTC）？循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell，CTC）是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称，因自发或诊疗操作从实体瘤病灶（原发灶、转移灶）脱落，进入外周血循环的肿瘤细胞。
CTC非常稀少，每毫升血液中109血细胞只有几个CTC。
大部分CTC在进入外周血后会发生凋亡或被吞噬，少数能够逃逸并发展成为转移灶，增加恶性肿瘤患者的死亡风险。
二、肿瘤的发生及检测诊断全国肿瘤登记中心发布的2015年年报显示，2011年我国新增癌症病例约337万例，比2010年增加28万例——这相当于每分钟有6人被诊断为癌症。
然而，令人担忧的是这样的情势似乎仍未到达峰顶，未来可能还会不断增加。
美国约翰-霍普金斯大学Kinmel 癌症中心的Bert-Vogelstein 等专家在2013年3月份的一篇综述文章中写道：在今年将死于癌症的一百万人里，绝大部分是因为他们的癌症没有在发生、发展的前90%的时间内被发现。
因此，我们需要明确一点：癌症是一种慢性病，它只是被突然发现，并非是突然发生的。
我们需要尽可能早的发现它，从而提高治愈率。
伴随肿瘤的发生过程，肿瘤细胞的大小也随之增大。
传统方法诊断出癌症的时候，大部分已经是晚期。
晚期癌症的治愈率极低，其五年生存率也很低。
在肿瘤的发生过程中，早期到中期之间是最佳治疗期，因此，如果在早期就可以发现肿瘤的存在，必然可以提高治愈率。
临床癌症研究（Clinical Cancer Research）杂志上发表的荟萃分析（Meta-analysis）证实CTC在乳腺癌预测中的价值，结果表明早期和转移性乳腺癌患者的循环肿瘤细胞CTC检测是一个稳定的预测和预后工具。
如果将肿瘤易感性基因检测和循环肿瘤细胞检测完美结合，那么能够将肿瘤的早期发现率提高数倍。
肿瘤易感性检测是对未来可能患有癌症的一种风险预测。
如果风险等级高，除了改变生活方式外，还可以定期做循环肿瘤细胞检测，即CTC检测，而且检查频率可以适当增加，每2-3个月检查一次，从而达到实时监控的目的。
ctc检测的临床应用原理
CTC检测的临床应用原理什么是CTC检测CTC（循环肿瘤细胞）是指从主要肿瘤部位脱离，进入血液循环，并具有能够引起远处转移的潜能的肿瘤细胞。
CTC检测可以通过采集患者的血液样本，并对其中的循环肿瘤细胞进行分离和分析，从而评估肿瘤的侵袭性、转移潜力以及预后。
CTC检测的临床应用CTC检测已经被广泛应用于临床实践中，并且在肿瘤的早期诊断、疾病监测、治疗选择以及预后评估等方面发挥着重要的作用。
下面将介绍CTC检测的临床应用原理。
早期诊断CTC检测可以帮助早期诊断肿瘤，其原理是通过检测血液中循环肿瘤细胞的存在和数量来判断肿瘤的存在。
由于早期肿瘤往往没有症状或症状不明显，因此常常很难进行准确的诊断。
CTC检测可以提供一种非侵入性的检测方法，通过简单的血液采集即可进行，对于高风险人群或疑似肿瘤患者进行筛查，有助于尽早发现肿瘤并进行进一步的诊断。
疾病监测对于已经确诊的肿瘤患者，CTC检测可以用于监测疾病的进展和治疗效果。
肿瘤细胞往往具有高度异质性，肿瘤细胞内的基因组和表达谱会随着疾病的进展而发生变化。
通过定期的CTC检测，可以在治疗前后对比循环肿瘤细胞的数量和特征，评估治疗的效果和预测疾病的进展。
治疗选择CTC检测还可以帮助选择合适的治疗方案。
通过分析循环肿瘤细胞的特征和表达谱，可以评估肿瘤对不同治疗药物的敏感性，并指导临床医师选择最适合的治疗方案。
这种个体化的治疗策略可以提高治疗的效果，减少无效治疗的发生，从而改善患者的生存质量。
预后评估CTC检测在预后评估中也扮演着重要的角色。
研究表明，血液中循环肿瘤细胞的存在和数量与肿瘤的侵袭性、转移能力以及患者的预后密切相关。
通过定期的CTC检测，可以监测循环肿瘤细胞的动态变化，并以此评估肿瘤的进展风险和预测患者的生存期。
CTC检测的原理与方法CTC检测的原理是通过脱落细胞和循环肿瘤细胞的特征来进行区分和鉴定。
目前常用的CTC检测方法主要包括免疫细胞化学染色法、荧光原位杂交法、脱落细胞分选法以及微流控芯片技术等。
循环肿瘤DNA的检测技术及其临床应用
循环肿瘤DNA的检测技术及其临床应用近年来，随着肿瘤治疗的不断深入，循环肿瘤DNA （circulating tumor DNA，ctDNA）的检测逐渐引起了人们的关注。
ctDNA是肿瘤细胞在血液中释放的DNA片段，通常是短片段（150-200 bp）的双链DNA，其含量较低且易被血液中其他DNA污染。
然而，通过优化实验条件和测序技术，目前已经可以对ctDNA进行有效和准确的检测，并且已有广泛的临床应用。
一、循环肿瘤DNA的检测技术目前，检测ctDNA的技术主要包括数字式PCR（digital PCR）、酶联免疫吸附法（ELISA）、多重热融曲线分析（MCA）、放射化学发光检测（RCA）和下一代测序（NGS）等。
数字式PCR是目前最常用的技术之一。
它采用微小反应体积，将DNA分散于许多单独的小区域进行扩增，可以检测出非常低的DNA量。
与传统PCR技术相比，数字式PCR可以准确地定量ctDNA，其检测灵敏度可达0.01%。
另一种常用的ctDNA检测技术是ELISA。
该技术利用针对肿瘤特异性标志物的抗体，可准确鉴定ctDNA中的癌细胞来源。
然而，它的灵敏度和特异性相对较低，只能用于筛查。
MCA可以检测ctDNA的序列特征，因此，它可以在PCR扩增的同时，对不同的DNA序列进行鉴定。
与数字式PCR相比，MCA可以检测较长的DNA片段，适用于较大的目标基因区域或全基因组分析。
RCA是一种新型的扩增技术，可将单个DNA分子扩增到可见的DNA量，并可检测非常低的DNA含量。
RCA对ctDNA纯化和富集效果较好，因此被广泛用于肿瘤的早期筛查和诊断。
NGS是一种高通量测序技术，对肿瘤的品种和类型进行快速和精确的鉴定。
同时，它还可以检测各种基因突变和结构变异，为肿瘤治疗提供参考。
二、循环肿瘤DNA的临床应用ctDNA是肿瘤细胞释放的DNA片段，它在诊断、预后评估和治疗监控等方面具有广泛的应用。
1．诊断：对于那些无法或难以取得实体肿瘤组织的肿瘤复发病例，循环肿瘤DNA的检测可以为肿瘤复发提供准确的证据。
循环肿瘤细胞检测技术及临床应用
基金项目：上海市科委自然基金项目（１５ＺＲ１４３７９００）资助*通讯作者文章编号：１００７－４２８７（２０１５）０７－１２２３－０５循环肿瘤细胞检测技术及临床应用曹雅楠，庄文芳，盛慧明*（上海交通大学医学院附属同仁医院检验科，上海２００３３６）循环肿瘤细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ＣＴＣ）计数有助于早期诊断肿瘤转移，反映患者的治疗效果及肿瘤预后。
近年来循环肿瘤细胞检测的广泛应用大力推进了相关技术的发展。
本文对近年来外周血循环肿瘤细胞检测技术的发展，临床及研究领域的应用情况及未来展望做一简要综述。
循环肿瘤细胞（ＣＴＣ）一经发现，就得到了广泛重视，ＣＴＣ被认为是肿瘤播散转移的标志。
研究表明，肿瘤组织每天会释放大量肿瘤细胞入血，但在循环中的存活率极低，大多会发生凋亡，只有少量具有强侵袭力的肿瘤细胞可表达凋亡抑制因子得以存活［１］，这些存活下来的肿瘤细胞即ＣＴＣ。
ＣＴＣ在外周血中含量极少，一般每１０６-１０７个白细胞中仅含有１个。
所以，ＣＴＣ检测首先要进行细胞富集，以提高检测灵敏度，再对富集的细胞进行ＣＴＣ检测。
１ ＣＴＣ富集技术１．１ 以形态学为基础的富集ＣＴＣ细胞体积大，直径超过２５μｍ，胞核形状不规则，核浆比异常。
肿瘤细胞体积分离法和核孔分析技术通过滤网可将直径大于８μｍ的肿瘤细胞分离，但此类方法敏感性较低［２］。
基于密度梯度分离原则的Ｏｎｃｏｑｕｉｃｋ，利用单个核细胞较其它血液成分相比密度低，采用１．０７７ｇ／ｍｌ的密度梯度将单个核细胞和肿瘤细胞与血液其它成分分离，同时增加设置多孔屏障，进而分离得到更加纯化的目的细胞［３］。
１．２ 以免疫学为基础的富集免疫磁珠法将磁性微珠包被单抗形成免疫磁珠，再结合靶细胞上的对应抗原形成抗原-抗体-磁珠复合物，在外加磁场作用下定向移动、吸附，进而与其它细胞分离。
该分离技术的方法有两种：（１）阳性分离法是直接从细胞混合液中分离出靶细胞；（２）阴性分离法则是利用免疫磁珠去除无关细胞，利用抗ＣＤ４５抗体或抗ＣＤ６１抗体去除血液中的巨核细胞和血小板，使靶细胞得以纯化［４］。
循环肿瘤细胞CTC
循环肿瘤细胞CTC肿瘤发生转移的早期, 循环肿瘤细胞(CTC)就可以沿循环系统种植于远处器官, 逐渐形成转移灶利用特异性的抗体“捕获”肿瘤细胞。
应用检测单个或小量血中循环肿瘤细胞簇(CTCs)的结果进行分析, 对推测每个独立患者具体预后、评估治疗反应的准确性和有效性都可以有明显改善。
显然, 在单个细胞水平检测血中的循环肿瘤细胞(CTC) 要比影像学分析更为敏感。
这种技术是将抗肿瘤细胞表面标志物的抗体包被在磁性小珠上, 这样不但可以利用抗原抗体结合来识别循环肿瘤细胞(CTC), 还可以用磁性“捕获”患者血样中的循环肿瘤细胞(CTC)。
这种技术的主要限制在于:是否存在针对肿瘤表面抗原的高度特异的抗体, 以及制备这种抗体质量的优劣。
更重要的一个限制因素在于, 由于肿瘤细胞往往处于去分化的状态, 循环中的肿瘤细胞常是高度异质性的, 这时具有组织特异性的表面标志物的表达就会有所下调。
这样的结果就会导致一些变异的肿瘤细胞可以逃脱掉捕获富集的过程。
如何从富集的样本中确认和识别循环肿瘤细胞?即在对含有循环肿瘤细胞(CTC) 样本进行富集处理之后，这些方法包括:①免疫荧光染色显微镜下的图像分析, 可以进行肿瘤细胞计数;②反转录聚合酶链式反应(RT -PCR)技术来检测肿瘤细胞基因标志物的mRNA 水平;③肿瘤相关基因(包括癌基因和抑癌基因)的突变分析;④DNA 甲基化技术; ⑤功能活性技术, 如端粒酶技术等。
据GENYO研究团队介绍，这主要是因为只有少量的上皮标志物可用来鉴定和分离全血中的循环肿瘤细胞，通常是上皮细胞粘附分子（EpCAM）和细胞角蛋白（CK）。
然而，这些上皮细胞也可能来自其他上皮组织，而并非肿瘤。
让事情更加复杂的是，最新数据表明存在一部分CTC，不表达EpCAM或CK。
相反，这些细胞表现出上皮-间质转化（EMT）的特征。
这个过程与肿瘤转移相关，其中上皮细胞呈现出间质特征，促进迁移、入侵和抗凋亡。
新方法：将原位杂交方法以及基于CK表达的免疫磁性选择和免疫细胞化学相结合，利用锁核酸（LNA）探针来检测miRNA。
循环肿瘤细胞(CTC)
循环肿瘤细胞(CTC)循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell; CTC)通常是指因自发或诊疗操作引起的从原发灶或转移灶侵入人体外周血的肿瘤细胞1。
此概念是在1869年由Ashworth等首次提出的2。
CTC一般以单细胞或者细胞团的形式存在于循环系统中。
大部分侵入循环系统的肿瘤细胞会在短期内死亡，只有极少数具有高度转移倾向和活力的CTCs才能存活下来，相互聚集成团，并在一定条件下发展为转移灶3。
进入外周血循环是发生肿瘤转移的必要条件，因此在外周血中检测到肿瘤细胞预示着将有可能发生肿瘤转移，目前临床已经采用CTC作为评估肿瘤预后的参考指标之一4。
近年来，CTCs在临床应用的研究获得了长足的发展，越来越的研究表明其可以为多种肿瘤提供重要的预后信息，如转移性乳腺癌5，直肠癌6，前列腺癌7等。
由于CTCs检测的对象是血液标本，取材比传统意义上的组织活检更方便，而且可重复性强，而被称之为“液态的活检”8。
多项研究发现CTCs作为肿瘤个体化治疗的一个重要靶标，在肿瘤转移起始中发挥重要作用9。
除了有助于肿瘤转移外，CTCs还具有上皮细胞-间充质转化(EMT)的特征，使得CTCs细胞具有一定的生存优势能够成功入侵新的组织位点并形成转移灶10。
Huang CH等研究发现血液中CTCs的数量与肿瘤的恶性程度有关，细胞数量的变化程度可反映治疗的效果9。
间变性淋巴瘤激酶(Anaplasticlymphomakinase, ALK)基因是一种致癌驱动基因。
突变、基因扩增或染色体重排均可以导致ALK基因异常激活，从而促进肿瘤生长12。
在3-7%的非小细胞肺癌患者中ALK基因重排是一个独特的分子子集，主要是由于该基因发生重排并与其他基因进行了融合。
Vincent Faugeroux等证实在ALK阳性的非小细胞肺癌患者中通过检测CTCs发现了ALK重排，这项研究为ALK阳性的患者在使用ALK抑制剂治疗诊断方面提供了新的观点10。
循环肿瘤细胞的富集鉴定及临床应用
（ Ｒ Ｔ— Ｐ Ｃ Ｒ ） 分析 血液 中的肿 瘤相 关 ｍ Ｒ Ｎ Ａ转 录 。 由
、
循环 肿瘤 细胞 的特性
Ｃ Ｔ Ｃ ｓ 在 血液 中极 少 ， 估计在 １ ０ 。 ～１ ０ 个 血 细 胞 中检 测 到 １个 Ｃ Ｔ Ｃ 。Ｃ Ｔ Ｃ ｓ比血 细胞 、 正 常 组 织 细
・
综述与进展 ・
循 环 肿 瘤 细 胞 的 富 集 鉴 定 及 临 床 应 用
舒பைடு நூலகம்叶 菲 陈 丽 荣
摘 要 循 环 肿瘤 细 胞 （ ｃ ｉ ｒ ｃ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｕ ｍｏ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ， Ｃ Ｔ Ｃ ｓ ） 是 由 实 体 肿 瘤 脱 落 至 血 液 循 环 中 与 正 常 血 细 胞 形 态 及 生 物 学 标 志 物
阐述 。
一
志物 （ 如 Ｅ ｐ Ｃ Ａ Ｍ、 Ｃ Ｋ等 ） 表 达 的 减 少 。另 一 方 面 ， Ｃ Ｔ Ｃ ｓ 在 发 生定植 过 程 中存 在 间质 上 皮 转 换 （ｍｅ ｓ ｅ ｎ —
ｃ ｈ ｙ ｍａ ｌ ｔ ｏ ｅ ｐ ｉ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ， ＭＥ Ｔ ） 。Ｃ Ｔ Ｃ ｓ可 以 表 现
Ｃ Ｔ Ｃ ｓ 。Ｃ Ｔ Ｃ ｓ的稀 有性 使 检 测 在 长 时 间 内 面 临挑 战 ， 近些 年在 检测 技 术 方 面 的研 究 有 很 大进 展 。这 些 方 法 往往 是 富集 和 鉴 定 两 个 主要 步 骤 的 结合 ，富 集 是 从 红 细胞 和 白细 胞 中分 离 出 Ｃ Ｔ Ｃ ｓ ， 鉴定 是 指 将 恶性 肿瘤 细胞 与 血 细胞 等 区分 开 来 。 目前 ， Ｃ Ｔ Ｃ ｓ的 富 集 主要是 根 据其 物理 和 生物 属性 、 免疫 表 型或 者直 接 分 析去 鉴别 。 常用 的富集 技术 包 括 和免疫 磁珠／ 微 流 控 芯 片 的方 法 、 密 度 梯度 离 心和 过 滤 。 富集 后 ， 用 荧 光 显微 镜或 流 式细 胞仪 通过 免疫 组 化 鉴定 Ｃ Ｔ Ｃ ｓ 。另 一
循环肿瘤细胞在肺癌个体化诊断中的应用价值
循环肿瘤细胞在肺癌个体化诊断中的应用价值1 研究背景近年来，肺癌已经成为了我国的一种常见的恶性肿瘤，它同时也是全世界范围内死亡率与发病率很高的恶性肿瘤之一，2019年来，孙可欣等研究表明，我国肺癌新发病例（78.7万例）和死亡例数（63.1万例）都位居我国恶性肿瘤首位；且随着社会经济发展水平和人们生活质量的提高，肺癌已成为危害人类健康的主要疾病之一，并呈现出年轻化趋势，严重威胁着人民群众的生命健康安全。
而2018年Bray F等的一项研究也表明，肺癌死亡例数（176.1万例）和新发病例数（209.4万例）仍位居全球所有肿瘤之首。
循环肿瘤细胞（CTCs）是指在体液（如血液）中漂浮的肿瘤细胞，这些细胞分离自原发肿瘤并通过血液循环到达其他部位。
对CTCs的检测和分析可以用于肺癌的诊断和预后评估。
目前，CTCs的检测主要采用技术如免疫细胞化学方法、免疫磁珠分离和聚合酶链式反应（PCR）等。
其中，免疫细胞化学方法是最常用的技术，它依赖于标记特定的肿瘤细胞表面标志物，并通过显微镜观察和计数来判断其存在与否。
肺癌是指发生在肺组织中的恶性肿瘤。
CTCs的检测在肺癌的诊断和预后评估中具有潜在的价值。
通过检测血液样本中的CTCs数量和表型，可以提供关于肺癌的信息，如肿瘤的分期、预测治疗效果和监测疾病进展等。
然而，目前CTCs的检测在肺癌的临床应用还存在一些挑战。
首先，CTCs的浓度在血液中很低，检测的敏感性有限。
其次，CTCs的异质性很高，不同患者之间和同一患者的不同时间点可能出现不同的CTCs表型。
此外，存在其他细胞的污染可能导致假阳性结果。
因此，在CTCs的检测和分析中需要进一步研究和技术改进。
在使用CTCs协助筛查出疑似肺癌患者的情况下，然后进行病理学检查诊断。
对于晚期肿瘤则需采取积极有效地综合治疗方案，现阶段，通常是通过化学治疗、手术治疗或放疗方式治疗恶性肿瘤，它们均具有自身的优势和特点。
其中，化学治疗被认为是最重要的治疗方法之一，由于它能除去残留灶、微小灶由此破坏恶性肿瘤复发和转移的源头，有着其他治疗手段所无法替代的自身优势。
循环肿瘤细胞的富集分离和检测
循环肿瘤细胞的富集分离和检测随着癌症研究的快速发展，人们对肿瘤细胞的富集分离和检测技术越来越感兴趣。
循环肿瘤细胞（CTC）是一种在血液中循环的癌细胞，具有广泛的临床应用价值。
本文将着重讨论CTC的富集、分离和检测技术。
一、CTC的富集技术1. 密度梯度离心法：利用重量或密度差异区分细胞类型。
将血液加入到梯度管中，然后进行离心分层。
CTC会富集在梯度的底部。
2. 磁性分选法：通过表面标记的磁珠去除CTC。
磁性分选可以控制分选速度和标记强度，同时保持高细胞抓取效率。
3. 微结构过滤法：通过微型孔隙过滤的物理学原理分离细胞。
由于CTC的大小和形状都较大，通过微结构过滤法可以富集和检测CTC。
4. 流式细胞术（FACS）：使用荧光标记CTC，然后在激光束中将细胞单独分离和计数。
二、CTC的检测技术1. 基于荧光的细胞计数：将CTC标记为荧光，并通过荧光显微镜直接观察、计数。
这种方法需要识别细胞表面分子，以区分CTC和其他类似细胞。
主要优点是精确和简便，但是受到分辨率和荧光标记选择的限制。
2. 基于PCR的检测技术：对CTC进行扩增，然后通过PCR检测CTC的存在与否。
该技术可以在较小的样本中进行操作。
三、CTC的临床意义CTC可以是一个很好的肿瘤指标，可以用于多种临床应用中，如疾病预后、治疗反应和个体化治疗等方面。
在肺癌等肿瘤中，CTC已经被证明是预测疗效和生存率的良好指标。
此外，CTC的分离和分类可以用于了解肿瘤的亚型发展和转移机制。
总之，CTC的富集、分离和检测技术可以使医生更好地了解肿瘤患者的疾病状态和治疗疗效。
本文提到的CTC富集、分离和检测技术的优缺点不同，选择适合自己的技术很重要。
循环肿瘤细胞(CTC)检测
循环肿瘤细胞(CTC)检测
循环肿瘤细胞（CTC）检测是通过检测血液中的肿瘤细胞来诊断和监测癌症的一种方法。
CTC是从原发肿瘤中脱落并进入循环系统的癌细胞。
它们可以通过血液样本分离和检测。
CTC检测的目的是实时监测肿瘤的疾病进展、评估治疗效果和预测患者的预后。
它可以提供有关肿瘤性状、转移倾向、治疗响应和耐药性的信息。
以下是CTC检测的一般步骤：
1.血液采集：通过静脉采集血液样本，通常使用抽血针或集
中式采血设备。
采集的血液样本需要尽快送至实验室进行处理。
2.血液处理：采集的血液样本经过预处理，通常包括红细胞
去除和白细胞富集，以减少其他细胞对检测的干扰。
3.CTC分离：采用特定的技术和设备对血液样本进行CTC的
分离。
这些技术包括免疫磁珠法、微流控装置、密度梯度离心或免疫荧光染色等。
通过这些方法，CTC可以从其他血细胞中分离出来。
4.CTC检测：分离的CTC可以通过免疫细胞化学、免疫荧光
染色、PCR、原位杂交等方法进行检测和分析。
这些技术可以检测CTC的表面标记物和基因组变异，以确认其为肿瘤细胞，并评估其数量和特征。
CTC检测的优势在于其非侵入性和实时性。
它可以通过反复检测来监测肿瘤的进展和治疗的效果。
这种检测方法仍在不断发
展和改进中，面临一些技术挑战和标准化的需求，但已被广泛应用于临床研究和患者管理中，对癌症的早期诊断、治疗监测和个体化治疗具有潜在的重要意义。
循环肿瘤细胞检测的优势是什么
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢循环肿瘤细胞检测的优势是什么导语：对于肿瘤的了解，一般人大多是一知半解，只知道它是一种可怕的疾病，在专业层次上并不了解。
肿瘤细胞里有一种英文简称CTC 的，叫做循环肿瘤对于肿瘤的了解，一般人大多是一知半解，只知道它是一种可怕的疾病，在专业层次上并不了解。
肿瘤细胞里有一种英文简称CTC的，叫做循环肿瘤细胞，它是把存在于外周血里的所有肿瘤细胞统称为循环肿瘤细胞。
循环肿瘤细胞检测就是通过技术手段来检测外周血所存在的循环肿瘤细胞，从而进行监测和预设治疗手段，当前循环肿瘤细胞检测的优势是什么呢，下面就来讲一讲。
CTC（循环肿瘤细胞，CirculatingTumorCell）是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称。
CTC检测通过捕捉检测外周血中痕量存在的CTC，监测CTC类型和数量变化的趋势，以便实时监测肿瘤动态、评估治疗效果，实现实时个体治疗。
CTC检测由于只需抽取5-10毫升血液，检测方便、无创、没有副作用，被看作“液体活检”。
CTC检测是一种非侵入性的新型诊断工具，通过对外周血循环系统中的肿瘤细胞进行精确的计数以及分型，为肿瘤患者的预后判断、疗效评价以及个体化治疗提供重要的指导作用。
其中益善生物原创的循环肿瘤细胞分离与分型技术处于国际领先水平，为肿瘤无创实时监测和实时个体化治疗提供了技术保障。
CanpatrolCTC检测技术：CanpatrolCTC检测技术只需采集5-10ml外周血，是益善生物历时六年独立研发的拥有自主知识产权和完全核心技术的CTC检测产品，它结合了纳米技术与多重RNA原位分析技术的优势，无须依赖特定生物标志物，对所有CTC进行分离与分型，是目前国际上唯一能同步实现预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏。
循环肿瘤细胞和循环肿瘤DNA的检测技术研究
循环肿瘤DNA的
02
检测技术
检测方法
基于PCR的 方法
基于细胞培 养的方法
基于测序的 方法
基于免疫的 方法
检测流程
样本收集：收集患者的血液样本
建库：将核酸进行建库处理
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
核酸提取：从血液样本中提取核酸
上机测序：对建好的库进行上机测 序
检测应用
循环肿瘤DNA的检测技术在结直肠癌、肺癌等癌症的早期筛查和诊断中具有广泛应用。
CTC和ctDNA 的检测可用于 判断肿瘤的恶 性程度和预后。
CTC和ctDNA 的检测可用于 监测肿瘤的复
发和转移。
CTC和ctDNA 的检测可用于 指导肿瘤的治
疗。
对肿瘤疾病的治疗价值
监测肿瘤疾病的发展
评估肿瘤疾病的预后
指导肿瘤疾病的治疗
监测肿瘤疾病的复发
对肿瘤疾病的预后评估价值
检测技术可以准确预测肿瘤患者的预后情况。
检测流程
细胞分离：从样本中分离出 肿瘤细胞
样品收集：收集患者血液或 其他体液样本
细胞标记：对肿瘤细胞进行 标记，以便后续检测
检测分析：对标记的肿瘤细 胞进行检测分析，如基因测
序等
结果解读：解读检测结果， 为临床诊断和治疗提供参考
检测应用
预后评估：预测患者生存率、复发风险等 病情监测：监测肿瘤进展、转移情况等 指导治疗：为制定治疗方案提供参考依据 复发监测：监测肿瘤复发情况，及时采取干预措施
数据分析：对 实验数据进行 统计分析，得 出检测结果并
撰写报告
联合检测应用
预测肿瘤的复发风险 监测肿瘤的治疗效果 指导肿瘤的个性化治疗 发现新的肿瘤治疗方法
循环肿瘤细胞结果解读
循环肿瘤细胞结果解读循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cells，CTCs）是指在肿瘤发生、发展过程中从原发灶或转移灶脱落，随血液流动并进入外周血液循环的肿瘤细胞。
通过对CTCs的检测和分析，可以对肿瘤进行早期发现、疗效监测、预后评估以及复发预测等方面的工作。
本文将对循环肿瘤细胞结果解读进行介绍，主要包含以下方面：一、细胞计数CTCs计数是指对血液中循环肿瘤细胞数量的检测，是评估肿瘤病情和预后的重要指标之一。
一般来说，CTCs数量越多，病情越严重，预后越差。
对于不同类型和分期的肿瘤，CTCs计数的正常范围也有所不同，需要根据具体情况进行分析。
二、细胞分型细胞分型是指通过对CTCs的形态、免疫表型等特点进行分析，将其分为不同的亚型。
不同类型的CTCs具有不同的生物学特性和临床意义。
例如，某些类型的CTCs具有较高的侵袭能力和转移能力，而另一些类型的CTCs则较为惰性，转移风险较低。
因此，对CTCs进行分型有助于更好地了解肿瘤的生物学特性和预测患者的预后。
三、细胞活性细胞活性是指CTCs的增殖能力和代谢活性等生物学特性。
通过检测CTCs的活性，可以了解肿瘤的生长和代谢状态，预测患者对治疗的反应和预后。
例如，对于化疗等治疗方式，如果CTCs活性较高，则可能对治疗较为敏感，疗效较好；如果CTCs活性较低，则可能对治疗不敏感，需要调整治疗方案或更换药物。
四、染色体分析染色体分析是指通过对CTCs的染色体结构和数目进行分析，了解肿瘤细胞的遗传学特征。
染色体异常是肿瘤发生发展的重要机制之一，通过对CTCs进行染色体分析，可以了解肿瘤细胞的遗传学变化，有助于发现新的治疗靶点和预测患者的预后。
五、基因突变检测基因突变检测是指通过对CTCs中的基因突变进行检测和分析，了解肿瘤细胞的基因组学特征。
基因突变是肿瘤发生发展的重要机制之一，通过对CTCs进行基因突变检测，可以发现新的突变位点和治疗靶点，预测患者对治疗的反应和预后。
ctc检测指标
ctc检测指标摘要：一、引言二、ctc 检测指标的定义与作用1.ctc 检测的意义2.ctc 检测指标的定义三、ctc 检测指标的计算方法1.计算公式2.影响因素四、ctc 检测指标的应用领域1.临床应用2.研究应用五、ctc 检测指标的局限性与展望1.局限性2.发展前景正文：一、引言随着医学技术的发展，肿瘤的早期发现、早期诊断和早期治疗越来越受到重视。
循环肿瘤细胞（CTC）检测作为一种非侵入性的检测方法，在肿瘤的早期诊断中具有重要的价值。
CTC 检测指标是衡量CTC 检测效果的重要参数，对于评估肿瘤患者的病情和治疗效果具有重要意义。
二、ctc 检测指标的定义与作用1.ctc 检测的意义CTC 是肿瘤细胞通过血液循环进入外周血的细胞，携带了肿瘤的基因信息。
检测CTC 有助于医生了解肿瘤的基因突变、化疗药物敏感性等信息，为患者提供个性化的治疗方案。
2.ctc 检测指标的定义CTC 检测指标是衡量CTC 检测方法性能的一种量化指标，通常包括检测敏感性、检测特异性、检测准确率等。
三、ctc 检测指标的计算方法1.计算公式CTC 检测指标的计算公式一般为：敏感性= 真阳性/ (真阳性+ 假阴性)特异性= 真阴性/ (真阴性+ 假阳性)准确率= (真阳性+ 真阴性) / (真阳性+ 假阳性+ 真阴性+ 假阴性)2.影响因素CTC 检测指标受多种因素影响，如样本处理方法、检测设备、检测方法等。
在实际应用中，需要综合考虑这些因素，以获得更准确的CTC 检测结果。
四、ctc 检测指标的应用领域1.临床应用CTC 检测指标在临床中主要用于评估肿瘤患者的病情和治疗效果。
通过比较不同治疗方案下患者的CTC 检测指标，可以为患者选择更合适的治疗方案。
2.研究应用CTC 检测指标在肿瘤研究领域也具有广泛应用，如研究肿瘤细胞的生物学特性、药物敏感性等。
此外，还可以用于研究肿瘤细胞与免疫系统之间的相互作用，为肿瘤免疫治疗提供理论依据。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
・
新 技术与新进展 ・
循环肿瘤 细胞检测及 临床 应用价值
郭玮 孙云帆 潘柏 中 樊嘉
【 摘要 】 循环 肿瘤细胞 （ ｃ ｉ ｒ ｃ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｕ ｍｏ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ，Ｃ Ｔ Ｃ） 作 为 “ 液 体 活 检 ”标 志 用 于 肿 瘤 患 者 实
Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ２ ０ ０ ０ ３ ２ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ， Ｅ ｍ ａ ｉ ｌ ： ｆ ａ ｎ ｊ ． ｉ ａ ＠ｚ ｓ － ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ １ ． ｓ ｈ ． ｃ ｎ Ｇ ｕ ｏ Ｗ ｅ ｉ ａ ｎ ｄ Ｓ ｕ ｎＹ ｕ ｎ ｆ ａ ｎ ｃ ｏ ｎ Ｗ ｉ ｂ ｕ ｔ ｅ ｄ ｅ ｑ ｕ ａ ｌ ｌ ｙｔ ｏ 捃ｍ ａ ｎ ｕ ｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｔ ． ［ Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ］ Ｃ ｉ ｒ ｃ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｕ ｍｏ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ （ Ｃ Ｔ Ｃ ） ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ａ ｓ ａ ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｂ ｉ ｏ ｐ ｓ ｙ ｃ ｏ ｕ ｌ ｄ ｂ ｅ ｃ ａ ｒ ｒ ｉ ｅ ｄ ｏ ｕ ｔ ｉ ｎ ａ ｒ ｅ ａ ｌ －
中华 临床实 验室 管理 电子 杂志 ２ ０ １ ４年 ８月 第 ２卷 第 ３期
Ｃ ｏ ｎ ｉ ｃ Ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ） ， Ａ ｕ ｇ ｕ ｓ ｔ ２ ０ １ ４ ， Ｖ ｏ １ ． ２ ， Ｎ ｏ ． ３
时动 态监测。随着分离 、富集和检测技术 的发展 ， 已经能够在外周血 中检测到单个 ＣＴ Ｃ。近几年来 ， 关于循环肿 瘤细胞 的研究受 到多方关 注。 已有 大量证据提 示 Ｃ Ｔ Ｃ与预后 的关系，此外 ，对 肿瘤微转 移 早期诊断和分期 、疗效 监测 及个体化医疗更具 临床 价值。许多针对早期和转移性肿瘤 的临床试验将 Ｃ Ｔ Ｃ作 为监测指标 ，并 联合其他平行 试验研究 Ｃ Ｔ Ｃ分子特 征的临床价值 。Ｃ Ｔ Ｃ作为实 时监测肿瘤治 疗反应 的指标广泛应用于 临床 ，为确定肿瘤患者治疗策略提供依据 。 【 关键词 】 循环肿瘤细胞 ； 液 体活检； 转移和分期 ； 预后 ； 疗效监测； 个体化医疗
Ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｉ ｔ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｃ ｉ ｒ ｃ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｕ ｍｏ ｒ ｔ ｅ ｎ ｓ Ｇ ｕ ｏ Ｗ ｅ ｉ ＊ Ｓ ｕ ｎ 咖 Ｐ ａ ｎ Ｂ ａ ｉ ｓ ｈ ｅ ｎ ， Ｆ ａ ｎ Ｊ ｉ ａ ． ＂ Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｚ ｈ ｏ ｎ ｇ ￣ ＇ ｈ ａ ｎ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｆ ｕ ｄ ａ ｎ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ２ ０ ０ ０ ３ ２ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ．
ｔ ｉ ｍｅ ｍａ ｎ ｎ ｅ ｒ ． Ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｈｅ ｔ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｉ ｎ ｅ ｎ ｒ ｉ ｃ ｈ ｍｅ ｎ ｔ ， ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ａ ｎ ｄ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ｏ ｎ ｅ ｓ ｉ ｎ ｇ ｌ ｅ ｔ ｕ ｍｏ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｕ ｒ ｋ ｉ ｎ ｇ ａ ｍｏ ｎ ｇ ａ ｂ ｉ ｌ ｌ ｉ ｏ ｎ ｎ ｏ ｒ ｍａ ｌ ｈ ｅ ｍａ ｔ ｏ ｐ ｏ ｉ ｅ ｔ ｉ ｃ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｃ ａ ｌ ｌ ｂ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｉ ｓ ｍｕ ｃ ｈ ｅ ｖ ｉ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅ ｒ ｅ ｇ ａ ｒ ｄ ｉ ｎ ｇ ｈｅ ｔ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ＣＴ Ｃ ｎｄ ａ ｔ ｈ ｅ ｉ ｒ ｐ ｒ ｏ ｇ ｎ ｏ ｓ ｔ ｉ ｃ ｒ ｅ ｌ ｅ ｖ ａ ｎ ｃ ｅ ． ｈｅ Ｔ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｃ ｎｃ ａ ｅ ｒ ｄ ｉ ａ ｎｏ ｇ ｓ ｉ ｓ ｎｄ ａ ｓ ｔ ａ ｇ ｉ ｎ ｇ ， ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｓ ｅ ｍｏ ｎ ｉ ｔ ｏ ｉｎ ｒ ｇ ， ｎｄ ａ ｐ ｅ ｒ ｓ ｏ ｎ ａ ｌ ｉ ｚ ｅ ｄ ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ｉ ｓ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｌ ｙ ｅ ｖ ｅ ｎ ｍｏ ｒ ｅ ｍｅ ｎｉ ａ ｎｇ ｆ ｕ １ ． Ｒｅ ｃ ｅ ｎ ｔ ｌ ｙ ， ＣＴ Ｃ ｗａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ａ ｓ ａ
Ｌ ｉ ｖ ｅ ｒＣ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ． Ｆｕ ｄ ａ ｎ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ２ ０ ０ ０ ３ ２ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ
Ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇａ ｕ ｔ ｈ ｏ ｒ ． ＂ Ｆ ａ ｎ Ｊ ｉ ｄ ． Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ Ｓ ｕ ｒ ｇ ｅ ｒ ｙ ， Ｚ ｈ ｏ ｎ ｇ ｓ ｈ ａ ｎ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， ＂ Ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ Ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ， Ｆ ｕ ｄ ａ ｎ