介绍一种脂肪组织的冷冻制片方法
富含脂肪及淋巴组织的冰冻切片制作体会
淋 巴结、 乳腺 淋巴瘤和胸腺 肿瘤等） 经 由德 国 Ｌ ｅ ｉ ｃ ａ Ｃ Ｍ １ ９ ５ ０型恒低 温冷 冻切 片机进 行快速 冰冻切 片制作 ， 控制 冷 冻头 一３ ５
℃ 用新 的 锋 利 刀 片 ， 首 先调 整切 片 厚 度 为 ５ 进 行 冰 冻 切 片制 作 数 张 ， 后将 切 片 厚 度 调 整 至 １ ５
ｏ ｄ ｓ Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｅ ｎ ｓ ｏ ｒ ｓ ｈ ｉ ｐ（ ｍａ ｍ ｍ ａ ｒ ｙ ｌ ｙ ｍ ｐ ｈ ｎ ｏ ｄ ｅ ｓ ， ｍａ ｍｍ ａ ｒ ｙ ｌ ｙ ｍ ｐ ｈ ｏ ｍａ ， ｔ ｈ ｙ ｍ ｕ ｓ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ， ｅ ｔ ａ １ ． ）ｗ ｅ ｒ ｅ ｑ ｕ ｉ ｃ ｋ ｆ ｒ ｏ ｚ ｅ ｎ ｓ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ
哈尔滨 医药 ２ ０ １ ５年 ６月第 ３ ５卷第 ３期
富含脂肪及淋 巴组织的冰冻切片制作体会
胡 矗
（ 广 东省 清远市 人 民 医院 ， 广 东 清远 ５ １ １ ５ １ ８ ）
摘要 目的 探 讨 富含 脂 肪 及 淋 巴成 分组 织 的 冰 冻切 片制 作 方 法 。 方 法 临 床 送 检 的 富 含 脂 肪 及 淋 巴成 分 组 织 （ 乳 腺 甚 至 更厚 ， 将 切 出的 平 整
oct冷冻切片流程
oct冷冻切片流程
1.组织固定：新鲜组织需固定于4%多聚甲醛中，固定时间通常为24小时以上。
之后从固定液中取出组织，在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。
2.脱水：将修切好的组织放于15%的蔗糖溶液内，4℃冰箱脱水沉底后，转入30%
的蔗糖溶液内，继续在4℃冰箱脱水沉底。
3.OCT包埋：脱水后的组织用滤纸将表面水稍吸干，切面朝上放于包埋台上。
在
组织周围滴上OCT包埋剂，注意OCT不要太多，以免流到固定头外，组织表面露在OCT外。
然后将包埋台放在冰冻切片机的速冻台上速冻包埋，待OCT变白变硬后即可进行切片。
4.外固定头放在冷冻机内的速冷台上，在-25℃左右冻10min。
组织较大或脂肪
组织时间可长一些，一般情况下10min左右即可。
如果冷冻不足，则切片可呈粥糜状或切不下来；如果冷冻过分，则切片呈碎悄状或切片上呈条痕状，都得不到良好的切片。
5.将包埋台固定于切片机上，先粗切将组织面修切平整后即可开始切片。
切片厚
度通常为8~10μm。
6.将干净的载玻片平放于切出的组织片上方，使组织贴于载玻片上。
动作要稳，
一次完成，以便将切片完整地贴在载玻片上。
7.切片晾干后，用95%乙醇固定10s，水洗后进行常规染色。
冰冻切片步骤很全面
冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片。
它实际上是以水为包埋剂，将组织进行冰冻至坚硬后切片的。
在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程，大大缩短了制片时间。
同时，由于此法不需要经过脱水、透明和浸蜡等步骤，因而较适合于脂肪、神经组织和一些组织化学的制片，并作为快速切片的方法应用在临床诊断。
1. 取材：应尽可能快地采取新鲜的材料，防止组织发生死后变化。
2. 速冻：为了较好地保存细胞内的酶活性或尽快制成切片标本的需要，一般在取材后就要立刻对组织块进行速冻，使组织温度骤降，缩短降温的时间，减少冰晶的形成。
液氮速冻切片法是实验室最常用的速冻切片方法。
具体做法是将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm）,如组织块小可适量加OCT 包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内, 当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾, 此时小盒保持原位切勿浸入液氮中,大约10-20s 组织即迅速冰结成块。
在制成冻块后, 即可置入恒冷箱切片机冰冻切片。
若需要保存, 应快速以铝箔或塑料薄膜封包，立即置入-80 C 冰箱贮存备用。
3．固定：样品托上涂一层OCT包埋胶，将速冻组织置于其上，4C冰箱预冷5-10min让OCT胶浸透组织。
取下组织置于锡箔或者玻片上，样品托速冻。
组织置于样品托上，其上再添一层OCT胶，以完全覆盖为宜，速冻架（PE 上30min。
4.切片：恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机，其基本结构是将切片机置于低温密闭室内，故切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至5-10 z。
切片时，低温室内温度以-15 C〜-20C为宜，温度过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。
切好室温放置30min后，入4C丙酮固定5~10min，烘箱干燥20min。
PBS洗5min X3。
进行抗原热修复，微波热修复也可，室温自然冷却。
可用3%H2O2孵育5~10min,消除内源性过氧化物酶的活性。
病理制片技术――冷冻切片的制作
病理制片技术――冷冻切片的制作一、概述冷冻切片是利用物理降温的方法将新鲜的组织标本冷冻使其产生一定的硬度进行切片的技术方法。
与石蜡切片相比，由于冷冻切片不需脱水包埋因此制片速度快，是为手术进行中的临床医师提供病理诊断的良好方法。
此外由于冷冻切片的标本是未经固定的新鲜组织，因此冷冻切片也是脂肪染色、酶组织化学染色以及某些免疫组织化学染色和原位分子杂交的理想制片方法。
冷冻切片的不足是组织细胞的形态略逊于石蜡切片。
二、冷冻切片的制作方法利用氯乙烷喷洒、二氧化碳喷射、半导体制冷的方法均可制作普通的冷冻切片，用于术中的病理诊断。
恒冷箱冷冻切片机可以制作适用于各种目地的冷冻切片，是目前最为常用的理想冷冻切片制片方式。
1.冷冻切片的技术操作方法(1)将恒冷箱冷冻切片机的速冻头和箱内温度调整到适宜的切温度，一般情况下为一18～一25℃。
(2)在标本冷冻托上涂布一层冷冻包埋剂一OCT，然后将取材后新鲜标本安放在标本冷冻托上并用OCT覆盖标本。
(3)标本冷冻完成后将标本托固定在切片机的机头上，调整机头位置使其恰好位于切片刀的后方。
(4)使用粗切削方式进行标本的粗切削至暴露标本的最大平面，使用自动推进方式连续切削2～3刀后用毛笔清除机头、标本托及切片刀上的组织碎屑。
(5)调整并确认切片的厚度，一般为4～8 um，染脂肪和神经组织应控制在12~25 u m。
(6)放下防卷板使防卷板的位置恰好与切片刀的刀刃完全平行并略突出于刀刃。
(7)以自动推进的方式进行切片，良好的切片将在防卷板的下方形成一张完整平整的薄片，如切片略有弯曲可用小毛笔轻轻展平切片。
(8)打开防卷板，用载玻片平稳地轻压切片使其平整地吸附到载玻片上。
三、冷冻切片的染色切好的冷冻切片立即投入丙酮中进行固定，一般固定1～2 min即可进行染色，用于免疫组化染色的冷冻切片应在切片略干时即刻投入冷甲醇中固定10~15 rmin然后进行相应的组织化学染色程序。
1．冷冻切片的HE染色程序。
脂肪组织冻存液及脂肪组织冻存方法[发明专利]
![脂肪组织冻存液及脂肪组织冻存方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/3bdbd73fbb1aa8114431b90d6c85ec3a87c28b13.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610696833.5(22)申请日 2016.08.19(71)申请人 杭州易文赛生物技术有限公司地址 310000 浙江省杭州市余杭区五常街道丰岭路25号(72)发明人 杜小春 陈茜 戴玲华 (74)专利代理机构 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371代理人 李佳(51)Int.Cl.A01N 1/02(2006.01)(54)发明名称脂肪组织冻存液及脂肪组织冻存方法(57)摘要本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种脂肪组织冻存液及脂肪组织冻存方法。
所述冻存液含有体积百分数为4％～6％的二甲基亚砜、质量百分数为0.5％～10％的羟乙基淀粉以及质量百分数为10％～20％的人血白蛋白。
所述冻存方法包括：1)、对脂肪组织样本清洗后将其移入装有缓冲液的离心管中离心；2)、将脂肪组织移至新的离心管内并剪成碎块，加缓冲液并离心；3)、将脂肪组织移出并与预冷的脂肪组织冻存液混合得到混合液，将所述混合液冷冻后移入液氮中保存。
权利要求书1页 说明书7页 附图3页CN 106465710 A 2017.03.01C N 106465710A1.一种脂肪组织冻存液，其特征在于，所述冻存液含有体积百分数为4％～6％的二甲基亚砜、质量百分数为0.5％～10％的羟乙基淀粉以及质量百分数为10％～20％的人血白蛋白。
2.根据权利要求1所述的脂肪组织冻存液，其特征在于，所述冻存液含有体积百分数为4％～6％的二甲基亚砜、质量百分数为3.5％～7％的羟乙基淀粉以及质量百分数为13％～17％的人血白蛋白。
3.根据权利要求1或2所述的脂肪组织冻存液，其特征在于，所述冻存液的溶剂为复方电解质注射液；所述复方电解质注射液含有氯化钠5.26±0.4g/L、葡萄糖酸钠5.02±0.4g/L、三水醋酸钠3.68±0.3g/L、氯化钾0.37±0.05g/L、六水氯化镁0.30±0.05g/L。
脂肪组织冰冻切片步骤
脂肪组织冰冻切片步骤
脂肪组织冰冻切片的步骤如下：
1. 取材：在合适的环境下获取脂肪组织，一般大小为1.5×1.5×0.5cm，注意应尽量剔除脂肪组织、钙化、骨质等影响切片质量的成分。
2. 速冻：使用液氮或干冰-丙酮（乙醇）法将组织速冻。
液氮法是将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内，然后将其放入盛有液氮的小杯内，注意小盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，10~20s组织即迅速冰结成块。
干冰-丙酮（乙醇）法是将150~200ml丙酮（乙醇）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达-70℃，然后使用异戊烧进行速冻。
3. 切片：将速冻后的组织块固定在切片机上，调整切片的厚度为4~6μm，然后进行切片。
4. 贴片：将切好的组织切片立即放入冰冻固定液中固定10~20秒，然后取出贴片。
5. 染色：使用苏木精染液进行染色，室温下染色1分钟，如果室温较低，则需要适当延长染色时间。
6. 水洗：染色后进行水洗，洗去多余的染液。
7. 封片：将切片晾干后，使用合适的封片剂进行封片。
注意，在整个过程中，都需要保持组织的冷冻状态，以防止组织内的冰晶形成和细胞结构的破坏。
同时，切片和染色的过程中，也需
要注意避免切片过厚或过薄，以及染色过深或过浅，以保证切片的质量。
以上信息仅供参考，具体操作可能会因实际情况和设备的不同而有所差异。
脂肪组织冷冻切片技巧
脂肪组织冷冻切片技巧第27卷第2期河北医科大学学报V o1.27No.22006年3月JOURNALOFHEBEIMEDICALUNIVERSITYMar.2006?141? 脂肪组织冷冻切片技巧翟金萍,何春年,张秀智,孙金海,张淑艳(河北省人民医院病理科,河北石家庄050051)【关键词】脂肪组织;冷冻切片;病理学【中田分类号】R361.2【文献标识码】B不同的组织对冷冻切片的温度有不同的要求.富含脂肪的组织如脂肪瘤,脂肪较多的良性病变等冷冻切片较困难,用常规温度及切片方法难以切出平整的片子,即使将温度降到一30℃,也很难切出理想的切片,而且易脱片.虽有许多关于改进这项技术的文章,诸如用防脱片明胶的办法等],但并没有得到很好的解决.我们利用厚切片加挤压拉片的方法做出了满意的结果,对组织结构几乎无损坏.1操作方法1.1切片温度及厚度:先取新鲜富含脂肪的组织,置于恒冷式切片机内,一25℃以下冷冻数分钟.将切片厚度调至30~40m,调好防卷板,组织切片速度应缓慢,切几张组织片,然后可掀起防卷板,选一张铺在持刀器铁板上的平整组织切片,从室内常温下取清洁的载玻片,粘贴该组织片.1.2切片技巧:用另一张洁净载玻片压在粘贴有组织片的载玻片上,轻轻加压,切片上脂肪组织中的大多数脂滴被挤出,将上面一张载玻片拉除,然后用电吹风在粘贴有组织的载玻片背面加热,将载玻片倾斜置45℃,使残余的脂滴从载玻片上流出,用滤纸吸掉.结果结缔组织和剩余胞质牢牢地贴在载玻片上.1.3染色及结果:放入95乙醇内固定1～2min,水洗片刻,进行HE染色,梯度乙醇脱水,电吹风风干,中性树胶封片.冷冻切片组织着色非常清晰.【文章编号】1007-3205(2006)02—0141-01?技术方法?似石蜡或树脂包埋,可将新鲜组织切成较理想厚度的切片.因此组织中的水份结冰起着包埋剂的作用E3].一般含水份较多的组织冷冻数分钟后既冻的足够硬度,可以切成很薄的切片.而脂肪组织被疏松结缔组织分割成脂肪小叶,脂肪小叶由大量群集的脂肪细胞构成,脂肪细胞中含有大量脂滴,胞质呈薄层,位于细胞周缘,包绕脂滴,脂肪细胞几乎不含水;而只有疏松的结缔组织含有少量的水份,所以脂肪组织很难被冻硬.一般的组织通常温度在一15℃左右,就能切出6～8m厚平整的片子.但对于富含脂肪的组织,即使一30℃,脂滴也不易冻硬,很难切出较薄的片子.所以脂肪组织经常切成泥状,难以展平.如果增加组织切片厚度达几十微米,脂肪滴太多组织太厚又影响着色和观察.2.2脂肪组织切片改进原理:长期的冷冻切片实践中,我们反复用脂肪瘤或富含脂肪的乳腺良性病变试验,用厚切片加挤压的方法解决了这个问题.冷冻切片加厚到30～40m时,很容易成片,厚度均匀,再经以上方法挤压抽拉,便制作出较大,较薄的理想脂肪组织冷冻切片.又因为脂肪中的脂滴不与水溶性的HE染料结合,常规冷冻切片染色脂肪着色困难,极易掉片.我们采用载玻片挤压后排出部分脂滴的方法,不破坏组织的形态结构,并通过加热过程,增加组织与载玻片的粘贴,使HE染色的脂肪组织细胞形态完整,着色均匀,染色分明,结构清晰(图1,2),有利于正确的诊断.(本文图见插图第3页)2结果与讨论【参考文献】2.1影响脂肪组织冷冻切片的原因:冷冻切片原理很简单,通过快速冷冻使组织中的水份结冰变硬,类[收稿日期]2005-05—21,[惨回日期]2005—06—27[作者简介]翟金萍(1955一).女,河北石家庄人.河北省人民医院列主任技师,从事病理技术及免疫组化研究.[13陈洁.制作冰冻切片的几点体会[J].现代实用医学.2001.13(12):614.[2]梁化印.脂肪冰冻切片锇酸快速染色[J].中国组织化学与细胞化学杂志,1997,6(4):408.[3]BancroftJD.StevensA,BraekenburyWH.Histopathologieal stainsandtheirdiagnosticuses[M].LondonandNewYork? PublishersofEdinburgh,1975.25-27.罗格列划人I~i~UN丰动J1)~4碾1々j晤TXB和Frlm【浆水,卜的影响Ii?叶¨n∞ruJ{}’iJHE川.—|1Jn,【*I,F№【…’mI1I。
脂肪组织的病理制片方法改进
脂肪组织的病理制片方法改进摘要：目的：本研究旨在改进脂肪组织的病理制片方法，提高制片质量和有效性。
方法：从2022年7月至2023年7月，我们收集了100例脂肪组织标本，并采用对比法进行病理制片方法的改进。
具体操作包括优化标本固定、处理和切片过程，选择合适的染色方法，以及改进显微镜下的观察和评估技术。
结果：通过对比法改进的脂肪组织病理制片方法，我们观察到了明显的改善。
首先，标本固定和处理的优化使得组织结构得到更好的保留和展示，减少了伪影和伪结构的出现。
其次，切片过程的改进降低了切片损伤和断层的风险，提高了切片的连续性和完整性。
此外，选择合适的染色方法使得细胞和组织结构更加清晰可见。
最后，改进的观察和评估技术提高了病理医师对脂肪组织病变的诊断准确性和信度。
结论：本研究通过采用对比法改进脂肪组织的病理制片方法，取得了显著的成果。
这些改进使得制片质量得到提高，为病理诊断提供了更可靠和准确的依据。
未来的研究可以进一步探索其他改进方法，进一步提高脂肪组织病理制片方法的效果和可行性。
关键词：脂肪组织；病理制片；方法改进引言脂肪组织是人体中重要的组织之一，它在能量储存、热量调节和保护内脏器官等方面发挥着重要的作用。
因此，研究脂肪组织的病理变化对于理解肥胖、代谢性疾病等相关疾病的发生机制具有重要意义。
然而，在传统的病理制片方法中存在一些问题，如组织结构的破坏、染色效果不佳等，这限制了我们对脂肪组织病理变化的准确观察和分析。
因此，改进脂肪组织的病理制片方法具有重要的意义。
1资料与方法1.1一般资料2022年7月至2023年7月，共收集了100例脂肪组织标本，并采用对比法进行病理制片方法的改进。
1.2方法（1）脂肪组织的病理制片改进过程中，切片技术的改进是关键。
切片技术直接影响到制片的质量。
传统的手工切片方法需要病理学家手工操作切片刀，容易产生误差。
随着自动切片机的出现，病理学家可以使用自动切片机进行切片，提高了切片的准确性和一致性。
一种脂肪组织冰冻切片的制备方法[发明专利]
![一种脂肪组织冰冻切片的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/0a2296ef5122aaea998fcc22bcd126fff7055d97.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010856609.4(22)申请日 2020.08.24(71)申请人 厦门大学附属第一医院地址 361004 福建省厦门市思明区镇海路上古街10号(72)发明人 黄红浪 付莉 李卫华 张维 肖凌云 汤雅玲 陈双龙 宋冰洁 童安祺 (74)专利代理机构 厦门市新华专利商标代理有限公司 35203代理人 罗恒兰(51)Int.Cl.G01N 1/06(2006.01)G01N 1/28(2006.01)G01N 1/42(2006.01)(54)发明名称一种脂肪组织冰冻切片的制备方法(57)摘要本发明涉及一种脂肪组织冰冻切片的制备方法，其包括冰冻切片机和速冻台进行预冷，将脂肪组织置于冰冻托头中央，将托头置于速冻台上进行冷冻处理，然后将其固定在冰冻切片机夹头中进行修片、调整组织切片方向、再次速冻、切片等处理；最后进行贴片、固定、染色和封片，完成脂肪组织冰冻切片的制备。
本发明能够制备出完整且平整的脂肪组织冰冻切片。
权利要求书1页 说明书3页CN 111912651 A 2020.11.10C N 111912651A1.一种脂肪组织冰冻切片的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：对冰冻切片机和速冻台进行预冷，将冰冻切片机箱温度设为-35℃，速冻台温度设为-40℃；将脂肪组织置于冰冻托头中央，并于脂肪组织周围的托头上滴加包埋剂，所述脂肪组织尺寸小于冰冻托头尺寸；将托头置于速冻台上进行冷冻处理，当脂肪组织最上部分临近完全冻凝前，采用速冻台上的冻锤放于脂肪组织上，平整脂肪组织表面，当脂肪组织完全冻凝后，取下冻锤，取出托头，并将其固定在冰冻切片机夹头中；将刀口对准脂肪组织，调整切片厚度为30μm，进行粗修片，待脂肪组织暴露最大面积之前，调整托头方向，使脂肪组织的实质组织丰富的灰白区域置于正下方，油性淡黄色脂肪细胞丰富的区域置于正上方；接着，调整切片厚度为10μm，进行细修片，直至脂肪组织暴露最大面积；取出托头，并将其放入速冻台上进行速冻；将冻锤置于脂肪组织上方，4-6分钟后，取下冻锤，取出托头；更换已在-40℃的速冻台进行预冷的新刀片，选择切片厚度为5μm；取出组织托头并将其固定在冷冻切片机中，使脂肪组织的实质组织丰富的灰白区域置于正下方，油性淡黄色脂肪细胞丰富区域置于正上方；进行脂肪组织切片；切片完成后，采用玻璃片进行贴片、固定，然后进行染色，并进行封片，即可得到脂肪组织切片。
制作脂肪组织冷冻切片方法的改良
制作脂肪组织冷冻切片方法的改良发表时间：2015-03-20T09:56:35.407Z 来源：《医药前沿》2014年第30期供稿作者：潘超王灿铭[导读] 需要病理技术人员对制片的各个环节和不同组织的特性有充分的认识和掌握，在日常的工作中不断的摸索、学习和总结，为病理医师的准确诊断提供可靠的科学依据。
潘超王灿铭（浙江省肿瘤医院病理科浙江杭州 310022）中图分类号】R3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）30-0370-01冷冻切片是借助低温冷冻将手术切除标本的组织块快速冷冻达到一定硬度进行切片的一种方法。
术中冷冻切片质量的好坏是诊断正确与否的重要因素，在冷冻制片的过程中，很多因素影响切片质量，这就要求病理技术人员对制片的各个环节和不同组织的特性有充分的了解和掌握。
脂肪组织主要由大量群集的脂肪细胞构成，聚集成团的脂肪细胞由薄层的疏松结缔组织分隔成小叶，可分为黄（白）色脂肪组织和棕色脂肪组织[1]。
因脂肪组织的特殊性，冷冻制片较其他组织困难，这一难题也一直困扰着许多病理技术人员。
笔者在实际工作中，摸索出一种脂肪组织的冷冻切片方法，现介绍如下：1.材料与方法1.1 材料选取本院手术送检的富含脂肪标本（脂肪瘤，富含脂肪的乳腺标本等）。
1.2 设备英国产Thermo FSE型冷冻切片机，Thermo MX35一次性刀片，OCT包埋剂。
1.3 试剂甲醇固定液、Gill改良苏木素染色液、醇溶性伊红、梯度酒精和二甲苯等。
1.4 方法①冷冻切片机开启速冻功能，冻头温度调整至—450C，切片厚度调整至30μm；②取材后的标本经OCT包埋，置于速冻台上，并用冻锤轻压，经冻锤轻压后的脂肪组织表面平整；③将组织块置于冷冻头上进行粗修，冷冻脂肪组织至黄白色（如图1）进行切片，此时切出的脂肪切片较为平整（图2），从常温下取清洁的载玻片粘贴该组织片；④入甲醇固定液1min，Gill改良苏木素染色液2min，水洗返蓝后伊红染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
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中图分类号 ： ４ ． ； ３ ． Ｒ４ ６ ８ Ｒ７ ９ ４ 文献标识码 ： Ｂ 文章编号 ：０ １ ３９ ２ １ ） １—１５ ０ １０ —７９ （ ０ １ １ ２ ８— ２
１ １ 材料 ．
收集 ２０ ０ ２～２ １ ００年广 州市妇女 儿童 医疗 中心
孵育 １ ｉ， Ｂ ０ｒ ｎＰ Ｓ洗 ３次 × ｉ。血清 封 闭 １ ｉ， ａ ５ｒ ｎ ａ ０ ｒ ｎ 滴加 一 ａ 抗 Ｄ ４０ １： ０ ， ２ （ ５ ） 室温孵 育 １ｈ Ｐ Ｓ洗 ３次 Ｘ ｉ。滴 加 ，Ｂ ｒｎ ５ａ 二抗室温孵育 １ ｉ ，Ｂ ５ｒ ｎ Ｐ Ｓ洗 ３次 × ｉ。Ｄ Ｂ显 色 ， ａ ５ｒ ｎ Ａ ａ 显微 镜下 控 制 阳 性 细 胞 呈 棕 色 为 止 ， 馏 水 ２次 ×５ ｒｉ。 蒸 ｎ ａ
水， 只有疏松 的结缔组织 含有少 量 的水 分 ， 以脂 肪组 织很 所
难象其它组织一样被冻硬 。一般组织在 一 Ｏ℃左右 都能切 ２
出较好的切片 ， 肪组织却 堆积成 泥状 ， 而脂 根本 不能 满足镜
检要求 。即使在 一３ ５℃的低温 ， 也难 以切 出较理想 的切 片。
脂肪组织的冷冻制片历来是病理技术工作 的难点 ， 在制 片过程 中， 医师 大都尽量 剔除多余 的脂 肪 ， 取材 以期取 得较
牛会林 ， ， 女 主治医师 ， 通讯作 者。Ｅ ｍ ｉ：ｌ ｎｕ ｍ ｉ － ａｌｈｉ ｉ＠ｇ ａ ． ｎ ｌ
ｎｍ
１ｈ Ｐ Ｓ ３次 × ｉ。滴加二抗 室温孵育 １ ｉ， Ｂ ，Ｂ 洗 ５ｍｎ ５ｒｎ Ｐ Ｓ洗 ａ
位细胞重叠较 多 ， 在镜下细胞结构不清楚 。封片时 由于组织 不在一个平 面上 ， 常有气泡形成 ， 或者树胶达不到组织边 缘 。 而用切片 的方式制作 的脂肪 切片 ， 细胞分布均匀 ， 厚薄均 一 ， 镜下组织结构基本完整 ， 细胞形态清晰 ， 便于镜检诊断 。 脂肪组织 的冷冻切 片一 直是 病理技术人员思考 的问题 ，
好的制片效果 。但有时送 检组织本 身就是 脂肪 组织 或大量
［］ 张 健 ， 珏， ２ 王 朱礼 国 ， ． 等 处理不 良的脂肪组织 快速改 良方 法［ ］ 临床与实验病理学杂志 ， ０ ， （ ）４ ６ Ｊ． ２ ６２ ４ ： ． ０ ２ ０ ［ ］ 中华医学会 ， ３ 编著． 临床技术操作 规范 ・ 病理 学分册 ［ ． Ｍ］ 北
我们不能拘泥 于常规 ， 在实践 中要不断摸索 、 创新 ， 于发现 善 问题 ， 问题 ， 解决 努力提 高实验技 能和制片质量 ， 理诊断 为病 提供有力保 障。
参 考文献
［ ］ 罗灿峤 ， １ 莫木琼 ， 钟觉 民． 病理 Ｈ Ｅ切片常见的质量 问题及 处理
方法［ ］ 中国实用医药 ，０ ０，（ ）３ ４ ． Ｊ． ２ １ ５ １ ：９— Ｏ
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临床与 实验病理 学杂志 Ｊｃ ＥｐＰ ｔｏ ０ １Ｎ ｖ２ （ １ ２ ｘ ａ ｌ １ ｏ ；７ １ ） ｈ ２
小 儿 神经 母 细 胞 瘤 Ｄ —０与 Ｃ ５ 重 免疫 ２４ Ｄ ６双 组 化 染 色 分 析
曾荣新 ， 夏健清， 毅 ， 曹 李丽萍， 牛会林
外科 手术 及活检神经母细胞瘤 ４ 例 ， １ 挑选病理科存 档蜡块 ， 复诊 Ｈ Ｅ染色切片 ， 重新按 国际神 经母 细胞 瘤病 理学 （Ｎ Ｃ ＩＰ ２０ ） ０ ３ 进行分 型。所 有病例术 前均 未行化疗 ， 免疫组 化染 色 抗 体 Ｄ ４０ Ｃ ５ ２ 、 Ｄ ６及 即用型快捷 免疫组化 ＭａＶｓ ｎ二抗 试 ｘ ｉｏ ｉ 剂盒均购 自福州迈新公司 。
神经母细胞瘤是ｄ Ｊ 最 常见 的颅外实体瘤 ， 内有淋 巴 ，Ｌ 其 管生成 的研究在小儿神经母 细胞瘤 的文 献 中少有 报道 。
由于淋 巴管 内皮细胞特异性抗体 Ｄ ４０的广泛应用 ， 区分 ２ 使
血管与淋 巴管成 为可能。本 文应用 Ｄ ＿ ２４ ０与 Ｃ ５ Ｄ ６双重免疫 组化染色法 ， 探讨ｄ Ｊ 神经母细胞瘤 中淋 巴管生成 的意义 。 ，Ｌ 结 成
微小 冰晶 ， 细小 的冰 晶使 整个 组织具有 一定 的硬度 ， 以像 可 石蜡 或树 脂包埋的组织一样 ， 出可供诊断 的切 片。脂肪组 切 织 由脂肪 细胞 和极 少的结缔组织构成 ， 疏松结缔组织 将脂肪 组织成分 割成 脂肪小叶 ， 脂肪小 叶由大量群集 的脂肪 细胞构 成， 脂滴 占据 了整个脂 肪细胞 的大部分 ， 肪细胞 几乎 不含 脂
１ 材 料与方法
１２ 方法 ．
石 蜡组 织 ４ ｍ厚切 片 ， 蜡至 水 。高 压热 修 脱
复： 取一定量 的柠檬 酸盐缓 冲液 （ Ｈ ６ ０ 于高压锅 中 ， 在 ｐ ． ） 放 电磁炉上加热至沸腾 ， 将水 化后 的组织切 片置 于切 片架上 ，
放入缓冲液 中， 高压 锅喷气 计时 １ｍｎ后冷却 至 室温 ， 出 ｉ 取 切片蒸馏水 冲洗 ２次 ，Ｂ Ｐ Ｓ洗 ３次 ×５ｒｉ。３ Ｈ Ｏ 室 温 ｎ ％ ２： ａ
收 稿 日期 ：０ １— ３—０ ２１ ０ ３
基金项 目： 广州市医药卫生科技 （０ ９ＹＢ ３ ２０ 一 ￣８ ） 作者单位 ： 广州市妇女儿童医疗中心病理科 ５ ０２ １６３ 作者简介 ： 曾荣新 ， ， 男 主管技师。Ｔ ｌ（ ２ ３０ ６ ７ ， － ａｌｍｎ） ｅ：００）８ ７ ５ １ Ｅ ｍ ｉ ｇ－ ： 【
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０ ０ ％盐 酸（ Ｈ ２ ０ 洗脱 ， ．５ ｐ ． ） 室温孵 育 ３ ｉ， 分水洗 ，Ｂ ０ｒ ｎ 充 ａ ＰＳ
洗 ３次 Ｘ ｉ。第 ２次染 色 ， ５ｍ ｎ 滴加 Ｃ ５ （ Ｄ ６ 即用 型） 温孵 育 室