MTT实验步骤
MTT实验操作步骤
实验操作规程MTT实验操作步骤（一）MTT溶液的配置：市面上MTT的规格一般为100mg、250mg和1g的包装。
通常MTT配成的终浓度为5mg/ml，采用PBS或生理盐水做溶剂。
对于100mg的小包装，MTT放置在小管中，直接向管中加入0.5-1.0ml PBS，反复吹打若干次后将其转移至50ml离心管中。
重复2-3次上述操作，直至小管中的没有MTT残留，之后向50ml离心管中加入PBS直至离心管内的终体积为20ml。
将MTT溶液完全混匀后，用水相的0.22μm滤膜过滤，分装避光保存于-20℃。
分装的体积根据实验需求进行操作，如以每孔需要加入10μl计算，一般96孔板约需要1ml，因此分装时可每管分装1ml，如此可避免MTT溶液的反复冻融。
（二）化合物配制及稀释：一般化合物使用DMSO溶解配制成浓度为10mM的母液储存于-20℃。
稀释时从-20℃取出所需化合物常温融化，用1640（DMEM）基础培养基稀释化合物浓度至200μM(例如，取4μL浓度为10mM的母液溶于盛有196μL的1640基础培养基的1.5mL的EP管中，使其终浓度为200μM)。
铺板：96孔板的外周孔(绿色所示)由于存在边缘效应一般不进行实验操作，因此作为Blank 组，Blank组每孔加入120μL的1640（DMEM）基础培养基；剩余的中间60孔以实验具体要求分为control组(黄色所示)、阳性对照组(粉色所示)和实验组(蓝色所示)，control组中每孔加入50μL的1640（DMEM）基础培养基，阳性对照组每孔加入50μL的浓度为200μM的阳性药物，实验组每孔加入50μL的浓度为200μM的实验药物，每种化合物及阳性药物均做3个复孔，加完之后将96孔板放置在37℃含5% CO2的培养箱中进行预温。
（三）细胞处理：取对数生长期且已覆盖培养瓶底部面积80~90%的细胞，倒掉培养基，每瓶加入37℃预热的PBS清洗1次，倒掉PBS，加入1ml胰酶，放置37℃含5%CO2的培养箱中消化3min后取出培养瓶，向培养瓶中加入2ml预热的1640（DMEM）完全培养基终止消化反应，并用吸管反复吹打细胞混匀，将其转移至15ml离心管中使用1500rpm离心3min。
MTT法测定实验过程及注意事项
MTT法测定实验过程及注意事项小鼠淋巴细胞增殖及白介素2活性测定1. 动物分组与给药：略2. 药品及试剂：RPMI-1640完全培养液：含10%胎牛血清的1640基础液RPMI-1640基础液：10.4g粉末加入1000ml超纯水中，加2gNaHCO3，加入双抗储液，调pH到7.2左右，过滤除菌，盐水瓶分装，封口膜封口，4℃保存（需较长时间保存则放入-20℃；若4℃保存则放置时间超过一周需补加L-谷氨酰胺）双抗储液：青霉素为80万单位/瓶，用注射器加4ml超纯水；链霉素为100万单位/瓶，用注射器加5ml超纯水，即每毫升各为20万单位。
使用时各取0.5ml加入1L培养基中过滤除菌即可。
（青链霉素的工作浓度为100单位/ml）,如果买的是配好的双抗时,加10ml就可以胎牛血清：-20℃保存，使用前需56℃水浴灭活30min；分装，避免反复冻融；使用时逐步解冻，即先从-20℃转至4℃冰箱过夜，再放至室温。
可以照紫外。
强酸洗液：重铬酸钾120g 浓硫酸200 mL 蒸馏水1 000 mL（按比例配置） MTT：用PBS(pH=7.4)配成5 mg/mL，过滤除菌，1.5ml离心管分装，封口膜封口，-20℃保存，一定要避光保存PBS：NaCl 8.0g， KCl 0.2g，Na2HPO4・H2O 1.56g ，KH2PO4 0.2g 加双蒸水至1000ml，调PH至7.4，高压灭菌，4℃保存DMSO：冬天温度低时形成结晶，需水浴加热后使用，且控制房间温度；离心时注意温度，不要使用低温离心，否则96孔板温度低，DMSO加于其中后会析出晶体需泡酸处理的东西有：培养皿培养瓶离心管(50ml、10ml、1.5ml) 枪头玻璃棒烧杯（1000ml、250ml）盐水瓶量筒（筛网和培养瓶盖子绝对不可以泡强酸！）需高压的东西有：培养皿培养瓶,枪头(三种规格)需准备的其他东西还有： 75%酒精培养皿培养瓶培养板离心管(8ml 1.5ml ) 计数板盖玻片,滤菌器枪头(三种规格) 枪头盒 5ml /10ml注射器烧杯盐水瓶量筒废液缸标签记号笔 1.5ml计数用离心管毛细管生理盐水(计数稀释用) 新洁尔灭桶手套口罩称量纸(灭菌) 酒精棉酒精灯锡箔纸饭盒试管架紫外消毒注意：1. 盐水瓶盖子、培养瓶盖子绝对不可以泡强酸，可泡75%酒精消毒，再用蒸馏水洗干净后放入饭盒或者用牛皮纸包好高压灭菌2. 所有接触细胞的东西包括培养皿、培养瓶等等玻璃仪器均须泡强酸洗液；用于配液及分装的盐水瓶、大小离心管、玻璃棒、烧杯、量筒等等也须泡强酸洗液3. 冷冻离心机须提前预冷4. 每次实验前须注意房间的紫外、过滤装置等等5. 所有带入培养间的东西需紫外，放入超净台的东西需洁净，最好瓶子外表都用75%酒精擦洗 3.方法：做好一切准备工作,取出细胞放入8ml离心管,放入冷冻离心机内离心,1000转6分钟,缓缓倒出上清(或吸出上清),加入新鲜培养基(定量,因为用于计数),.轻轻吹打,制得细胞悬液,取出20μl放入dov管内，dov管内的用于计数，8ml离心管的离心。
MTT方法
OD值大概在0.2-1.2范围内与活细胞数有较好的线性关系，但OD值在0.3-0.9范围内可能更佳，若你的OD值不在这个范围内则你实验的细胞数可能不太合适，应调整你的细胞数。
试验步骤：
一、弃去培养基，加入新鲜的培养基制成细胞悬液。
调整细胞密度约5*104/ml。
二、接种于96孔板，细胞数目不少500个每孔，每孔接种100μl。
设3-5个平行
样。
空白组（培养基，MTT、SDS-NHCL），实验对照组（细胞、培养基、相同浓度药物的溶解介质DMSO、MTT、SDS-NHCL），实验组（细胞、不同浓度的药物处理、MTT、SDS-NHCL）。
三、37℃，5%CO2培养箱培养。
待细胞长到贴壁生长长满。
四、实验组加入不同浓度的药物处理细胞。
五、给药处理细胞24h后，取出96孔板，每孔加入5mg/mlMTT溶液10μl，37℃
反应3h。
六、3h后，每孔加入100μl 10%SDS-NHCL溶液，37℃溶解过夜。
七、用酶标仪测各孔的吸光值，波长为570nm。
八、抑制率=（实验对照组吸光度的平均值—实验组吸光度的平均值）/实验对照
组吸光度的平均值*100%。
MTT比色实验步骤及注意事项
MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。
一、原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT 比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法：通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm 滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
MTT实验原理、步骤、注意事项
MTT实验原理；步骤；注意事项；一、原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法：通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
mtt实验原理
mtt实验原理MTT实验原理是一种通过细胞代谢产物还原染色，进而测定细胞活性的方法。
MTT全称为3-(4,5)-二磷酸-5-(2,4-二硝基苯基)-2-四氮唑溴化物，是一种黄色的化学试剂，通过还原反应，可以生成紫色晶体，用于反映细胞的代谢活力。
MTT实验基本原理MTT实验的基本原理是将MTT溶液与脱氧核糖核酸（DNA）和细胞色素c等呈还原态的细胞代谢产物作用，产生紫色的晶体。
通过比色法测定反应产物的吸收值，反映出细胞的代谢活力。
MTT实验原理流程MTT实验的原理流程可以概括为以下几个步骤：1、细胞培养将目标细胞培养于带有适宜培养基的正常生长环境下，使其形成单层细胞。
2、添加MTT试剂将MTT试剂添加入培养基，经过一定时间的反应，并在多孔板中进行细胞培养，MTT会被细胞内的代谢产物还原为紫色晶体。
3、去除细胞体外产物过滤或洗涤的方法去除细胞外的代谢产物和没反应的MTT试剂。
4、添加适宜的溶解剂MTT试剂在细胞中被还原后，需要使用DMSO等适宜的试剂将细胞内MTT晶体溶解，使其在液相中变为可测反应产物。
5、检测反应产物的吸收值使用分光光度计等测量仪器检测溶解后的反应产物吸收值，根据吸收值反映细胞活性。
MTT实验应用范围MTT实验作为一种简单、快捷、可靠的细胞活性检测方法，已被广泛应用在细胞学、药理学、生物技术、毒理学等领域。
MTT实验可在分析化学、医学、生物学等学科中作为一种常用的实验方法。
1、药效评价MTT实验可用于评估药物对细胞的生长抑制和细胞毒性等药效指数，是一种高度敏感的细胞毒性检测方法。
2、细胞增殖力MTT实验可以评估细胞增殖率，了解细胞的生存状态，是细胞培养研究中常用的一种技术。
3、合成物毒性用MTT实验检测化合物对细胞内能量代谢的影响，可以评估不同化合物对细胞的毒性程度。
4、细胞抗氧化能力MTT实验还可用于检测细胞的抗氧化能力和自由基清除能力等。
总结MTT实验是一种常用的细胞代谢活力检测方法，相比其他方法具有操作简便、高度敏感、重复性好等优点。
MTT实验步骤
MTT实验步骤普通MTT法实验步骤：1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2: 培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3：呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加150ul DMSO，振荡10min，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
药物MTT法实验步骤贴壁细胞：1: 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度 1000-10000 孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。
2: 5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况3: 5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
4: 每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。
若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT 的培养液。
5: 终止培养，小心吸去孔内培养液。
6: 每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。
在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
7: 同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）。
悬浮细胞：1: 收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml，按次序将①补足的1640（无血清）培养基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培养液稀释 (储存液100mg/ml，需预试寻找最佳稀释度，1:10-1:20)；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）。
MTT实验方法
MTT实验
1. 接种细胞，吸出旧培养基，用适量DPBS洗去残留培养基，加入适量胰酶消化，用新鲜培养基重悬细胞并计数（1*10^5个细胞/ml,视细胞大小及生长速度而定），每个孔做3-5个重复。
根据设定的时间梯度确定板的个数
2. 接种4h（0天）之后加入含10ulMTT的培养基100ul，37摄氏度培养1-4小时
3. 吸出培养基，加入100ulDMSO震荡溶解10分钟或37度孵育30min
4. 检测OD490或者570
5. 第二天或第三天（根据自己设定的时间梯度）重复步骤2-4
注意：
接种细胞及加入MTT时可沿着96孔板的侧壁加，尽量减少气泡产生
接种细胞比较多时应注意经常颠倒混匀或吹打混匀，减少人为造成的孔间及板间误差
吸出培养基时可以用小枪头吸干净减少误差
通常35mm的小皿加培养基2ml，DPBS 1ml，胰酶200ul，消化1min（可以减少胰酶用量，延长消化时间）
60mm的小皿加4ml培基，DPBS 2ml，胰酶400ul，消化1min左右
10cm大皿加10-8ml培基，DPBS 3-4ml，胰酶600ul，消化1min左右。
MTT配制、原理、操作步骤、结果分析、注意事项
五、MTT法实验步骤
1: 胰酶消化对数期细胞，终止后离心收集，制成细胞悬液，细胞计数调整其浓度至5-10×104/ml。
细胞详细计数方法请参照易生物实验技术中的相关文章。
对于初学者而言，要使细胞到达5-10×104/ml往往不知从何处着手，我在这里向大家提供一个简单的方法以初步确定细胞数量。
该溶解液因含有SDS，在低温保存的时候易产生结晶，因此在用之前必须提前几小时拿至室温，将SDS结晶全部溶解后再使用。
五、MTT法实验步骤
1:胰酶消化对数期细胞，终止后离心收集，制成细胞悬液，细胞计数调整其浓度至5-10×104/ml。
细胞详细计数方法请参照.biobars.中的相关文章。
对于初学者而言，要使细胞到达5-10×104/ml往往不知从何处着手，我在这里向大家提供一个简单的方法以初步确定细胞数量。
1.2 对于大包装，可按上述方法称取一局部溶解，也有人将粉剂分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加。
本卷须知：
l 在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
l 配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感
l MTT一般最好现用现配，过滤后4度避光保存两周〔个人曾做过4度避光保存4周的MTT溶液，效果仍然不错〕有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，防止反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。
2)每孔参加150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡
10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
另一种方法，用三联溶解液〔见上面MTT甲瓒溶解液〕
MTT实验方法步骤
一．悬浮细胞MTT实验时,由于离心弃上清会造成一定程度的细胞丢失,而且操作又麻烦.请教各位老师,不用弃上清的SDS-DMF,酸化异丙醇的方法的具体步骤和参考文献.谢谢!1．介绍一种巨噬细胞杀伤活性的MTT检测：于24孔培养板中加入1×109/L腹腔巨噬细胞(1ml/孔)，培养2h后洗去未贴壁细胞，加入不同浓度的MDP。
收集对数生长期的UMR106细胞，调整细胞浓度至1×108/L，加入各孔，效靶比（E/T）为10:1，再培养24h，充分振荡。
每孔取100μl的UMR106细胞移入96孔培养板，各孔加入5g/LMTT20μl，培养4h，再加入10％SDS100μl，测定570nm处的A值。
计算公式如下：杀伤活性（％）=(1－实验组UMR106细胞的A值/对照组UMR106细胞的A值)×100％本方法参考文献，Jiao H, Shan WM, Ohe Y, et al. A new MTT assay for testing macrophage cytotoxicity to L1210 and its drug resistant cell lines in vitro. Cancer Immunol Immunother,1992;35:412～4162．SRB是一种活性蛋白染料，能与细胞蛋白的碱性氨基酸结合而显色，在490nm~520nm 波长处其OD值与活细胞数成良好的直线关系。
SRB法已被NCI选定作为筛选抗癌药物的新方法，相对于结晶紫法或目前普遍采用的MTT法，其灵敏度好于结晶紫法，相当或优于MTT法。
除此之外SRB法还有以下优点：(1)操作时间短，细胞固定和染色仅需90分钟左右，而MTT加样后还需培养4小时。
(2)没有严格时间限制，在TCA固定后或SRB结合后的细胞均可存放，Monks指出样品保存7天，测定的OD值下降不超过2％[8]。
（3）可以测定悬浮细胞，采用16% 的三氯乙酸直接加入培养细胞中能完整酸化固定细胞，较之MTT 法或结晶紫法离心取上清的操作，不会带来细胞损失，测定结果更准确。
MTT实验原理和实验步骤
MTT实验原理和实验步骤MTT原理：MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromid e，是一种黄颜色的染料。
活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细胞色素C的作用下，生成蓝色（或蓝紫色）不溶于水的甲�H（Formazan），甲�H的多少可以用酶标仪在570nm 处进行测定。
在通常情况下，甲�H生成量与活细胞数成正比，因此可根据光密度OD值推测出活细胞的数目。
由于死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，因此加入MTT 不会有反应。
MTT 溶液的配制方法：通常，此法中的 MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
实验步骤：（1）接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－1 0000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.（2）培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
（3）呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS <ph=7.4>配)20ul.（4）继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
（5）比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
注意事项：（1）选择适当得细胞接种浓度。
（2）避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。
mtt细胞实验步骤
mtt细胞实验步骤
MTT细胞实验是一种常用的细胞生存率和细胞增殖能力测定方法，以下是MTT细胞实验的基本步骤：
1. 显微镜下观察细胞形态与结合情况：将需要进行实验的细胞取出，通过显微镜观察细胞形态与结合情况以确保细胞质量正常。
2. 细胞的处理：将细胞以适当的密度悬浮在含有培养基的培养皿中，并放入恒温培养箱中培养一段时间，使细胞黏附于培养皿底。
3. 处理试剂：根据实验设计的需要，如调节药物浓度、添加化合物等，处理培养皿中的细胞。
4. MTT溶液的制备：取适量的MTT混合粉末，加入生理盐水或者PBS缓冲液中，溶解后过滤灭菌。
5. MTT染色：将处理后的细胞培养皿加入预先准备好的MTT 溶液中，使其充分与细胞接触，然后将培养皿放回恒温培养箱中孵育适当的时间。
6. 细胞摄取MTT：将MTT孵育后的培养皿从恒温培养箱中取出，轻轻吸去残留的MTT溶液，并加入适量的溶解剂（如二甲基亚砜）使细胞摄入的MTT完全溶解。
7. 光度计测定：将溶解后的MTT液吸取到96孔板中，通过
光度计测定吸光度值，即MTT代谢产物形成的紫色产物的吸光度。
8. 数据分析：根据光度计测定的数据，计算细胞生存率或增殖能力并进行统计分析。
注意事项：
- 实验过程中需要严格执行无菌操作，以确保实验结果的准确性。
- 实验前需准备好试剂和培养皿等相关材料，保证实验顺利进行。
- 实验设计时应考虑到对照组设置、重复次数等因素，以增加实验的可靠性。
MTT配制原理操作步骤结果分析注意事项
MTT配制原理操作步骤结果分析注意事项MTT（3-(4,5-二苯基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-四唑）是一种常用的细胞增殖试验试剂，用于评估化合物对细胞生长和代谢的影响。
本文将详细介绍MTT配制、原理、操作步骤、结果分析以及注意事项。
一、MTT配制MTT的化学名称为3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，是一种黄色的晶体粉末。
配制MTT试剂的步骤如下：1.称取适量的MTT粉末，并通过过滤器将其溶解于生理盐水或无菌培养基中。
溶液应均匀搅拌，直至溶解完全。
2.过滤清洁，并将溶液分装至无菌试管中。
可以根据实验需要制备不同浓度的MTT溶液。
3.将试管密封，并在4°C保存。
二、MTT原理MTT试验是通过测定细胞内线粒体的还原能力来评估细胞代谢和活力。
MTT溶液可以被细胞内的还原酶（如线粒体呼吸链酶）还原为紫色的形式中间产物，称为甲基紫（formazan）。
甲基紫是水不溶性的，需要使用溶解剂（如二甲基亚砜）将其溶解后，通过分光光度计测量吸光度来反映细胞数量和代谢活力。
三、MTT操作步骤MTT实验的主要操作步骤如下：1.细胞培养：将需要进行实验的细胞培养至对数生长期，保证细胞状态良好。
2.细胞处理：将细胞按照需要的实验条件进行处理，例如不同浓度的化合物处理、不同时间的处理等。
3. MTT加入：将细胞处理完后，向培养基中加入适量的MTT溶液，使其终浓度为0.5mg/mL。
将培养皿放入细胞培养箱，继续培养一段时间（一般为3-4小时）。
4.MTT溶解：MTT溶液和培养基混合后形成甲基紫，需要加入适量的溶解剂（如二甲基亚砜）进行溶解，使甲基紫完全溶解。
5. 吸光度测定：使用分光光度计在570nm波长下测量甲基紫的吸光度。
吸光度值越高，表示细胞生长和代谢活力越强。
四、MTT结果分析MTT实验的结果分析主要根据细胞的吸光度值来评估细胞的代谢和增殖能力。
MTT配制、原理、操作步骤、结果分析、注意事项
四、MTT配制、原理、操作步骤、结果分析、注意事项1、MTT：MTT是一种粉末状化学试剂，全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
2、MTT用途：（1）药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；（2）细胞增殖及细胞活性测定。
3、原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）颗粒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒颗粒，用酶标仪在490nm波长处（也有测D570nm）测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。
4、实验材料：（1）MTT的配制：通常MTT 配成的终浓度为5mg/ml，须用无菌PBS或生理盐水做溶剂。
注意事项：厂家都是将MTT放入小管中的，建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液。
细节如下：预先在50ml离心管加入20ml PBS（PH=7.4），从中先吸取500-1000ul PBS装入含MTT的小管中，吹打若干次后将其移入50ml离心管，然后再混匀。
可以重复几次，以使小管中的MTT不残留于管内。
将MTT完全混匀后，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)，可长期保存于-20℃，避免反复冻融。
当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。
MTT有致癌性，用的时候小心，有条件最好带那种透明的簿膜手套。
（2）MTT甲瓒溶解液：DMSO（二甲基亚砜）：可以直接溶解，无需配制，使用方便，溶解速度快，但对人体毒性较大，且需去除原培养液，在去除培养液的过程中，可能会把结晶去掉，导致结果不稳定。
MTT实验方法
一、原理黄色的噻唑兰，简称MTT，可透过细胞膜进入细胞内，活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的针状Formazan结晶并沉积在细胞中，结晶物能被二甲基亚砜（DMSO）溶解，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。
二、实验步骤（实用于贴壁细胞）1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，分于96孔板，每孔180μl，3000-10000个/孔。
2）置37℃、5%CO2温箱培养使细胞贴壁，培养6-24小时。
3）加入待筛样品20μl，继续培养44小时。
4）小心吸去上清，加入80μl新鲜RPMI 1640培养液，再加入20 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4 h。
6）然后吸掉上清，每孔加入150 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。
在酶联免疫检测仪490 nm处测量各孔的吸光值。
7）同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定3复孔。
8）计算抑制率＝[(对照-空白)-(给药-空白)]/(对照-空白)X100%.有依据吗MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。
MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。
还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm 处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
mtt实验报告
mtt实验报告MTT实验报告MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物）是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性实验中的化合物。
它可以通过颜色反应的方式来检测细胞代谢活性，从而评估细胞的增殖情况和毒性作用。
本实验旨在利用MTT实验方法，研究不同药物对细胞增殖和毒性的影响。
实验方法：1. 细胞培养：选取人类肝癌细胞株HepG2，进行细胞培养，细胞密度控制在5×10^4/ml。
2. 药物处理：将不同浓度的药物溶液加入培养基中，与细胞一起培养。
3. MTT实验：培养一定时间后，加入MTT试剂，使其与细胞代谢产物形成可溶性紫色产物。
4. 溶解产物：去除培养基，加入DMSO将产物溶解。
5. 测定吸光度：用酶标仪测定产物的吸光度，以评估细胞的代谢活性和药物的毒性作用。
实验结果：通过MTT实验，我们发现不同药物对HepG2细胞的影响存在一定差异。
在低浓度下，某些药物能够促进细胞的增殖，而高浓度下则表现出明显的毒性作用。
其中，药物A在低浓度下对细胞的增殖有一定促进作用，但在高浓度下表现出明显的细胞毒性；而药物B则在低浓度下对细胞增殖无明显影响，但在高浓度下能够抑制细胞的增殖。
这些结果为我们进一步研究药物的毒性和治疗效果提供了重要参考。
结论：MTT实验是一种简便、可靠的细胞代谢活性检测方法，能够快速评估药物对细胞增殖和毒性的影响。
通过本次实验，我们发现不同药物在不同浓度下对细胞的影响存在一定差异，这为药物的临床应用提供了重要参考。
希望通过进一步研究，能够发现更多具有治疗潜力的药物，并为临床治疗提供更多选择。
mtt实验操作流程
mtt实验操作流程
MTT实验操作流程如下：
1. 细胞接种：将细胞接种在含有不同浓度的药物的培养基中，并进行培养。
2. MTT添加：将MTT添加到培养基中，使其浓度为/ml。
3. 细胞处理：将培养基中的MTT和细胞共同处理，一般处理时间为2-4小时，处理后可以观察到细胞内有紫色晶体的形成。
4. 溶解晶体：将细胞处理后的培养基去掉，加入DMSO（二甲基亚砜）溶解晶体，离心收集上清液。
5. 检测吸光度：将上清液放入96孔板中，用酶标仪检测吸光度，计算细胞的存活率。
通过上述步骤，就可以完成MTT实验。
希望对您有帮助。
MTT实验步骤
MTT实验步骤详细流程最后更新：2011-1-11 阅读次数：6655 【字体：小中大】MTT常用浓度为5mg/ml。
1、药物的细胞毒性四唑盐（MTT）比色法操作步骤接种细胞（1）用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。
（2）离心细胞悬液，使细胞沉积下来。
用培养基重悬细胞，计数。
（3）将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml，每个微滴定板可容纳20ml细胞重悬液。
（4）用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μl细胞悬液，每孔加0.5×103-10×103 个细胞。
（5）将200μl培养基加至第1列和第12列的8个孔中。
第1列作读板议的空白对照。
（6）将培养板放至塑料饭盒中，于37℃湿润环境中温育1-3天，等细胞进入指数生长期时可加入药物。
添加药物（7）用培养基将细胞毒性药物5倍系列稀释，共制备8个浓度。
（8）对于贴壁生长的细胞，去除第2-11列各孔的培养基。
（9）在第2列和第11列的8个孔中加入200μl新鲜配制的培养基，这些细胞作为对照。
（10）在第3-10列的细胞中加入细胞毒性药物。
每个药物浓度仅需4个孔，这样A-D行可用于第一种药物，E-H行用于第二种药物。
（11）向每组4 孔中各加入200μl药物溶液。
（12）将培养板放回塑料盒中，温育至确定时间。
生长期（13）在药物作用期结束时，去除所有含有细胞的孔中的培养基，加入200μl新鲜的培养基。
（14）每日换液至2-3个PDTs[群体倍增时间]。
存活细胞数的估算（15）在生长期末，每孔中各加入200μl新鲜的培养基，在第1-11列所有孔中各加入50μl MTT。
（16）用铝箔包裹培养板，于37℃湿润环境中温育4 h。
（17）弃去孔中的培养基和MTT，在第1-11列所有孔中各加入200μl DMSO，以溶解残留的MTT-甲臜结晶。
（18）在含有DMSO的各孔中加入甘氨酸缓冲液（每孔25μl）。
MTT实验原理、步骤、注意事项
MTT实验原理；步骤；注意事项；一、原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法：通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT原理步骤结果分析方法及注意事项
MTT原理步骤结果分析方法及注意事项MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四氮唑溴化物）是一种常用的细胞增殖和存活试剂，用于评价细胞对药物、毒物和其他因素的影响。
MTT法通过检测细胞色素C还原酶的活性来间接测定细胞数量或细胞增殖情况。
下面将详细介绍MTT法的原理、步骤、结果分析方法及注意事项。
1.MTT法的原理：MTT法的基本原理是细胞内的色素C还原酶（mitochondrial dehydrogenase）能够将易溶性的MTT（黄色体层）还原成形成紫色的难溶性甲基紫晶体（formazan）。
甲基紫晶体会沉积在细胞内部，形成紫色的染色体层。
细胞数量或细胞增殖情况与形成的紫色染色体层的光密度成正比。
2.MTT法的步骤：步骤一：细胞培养：将待测的细胞分装到孔板中，根据实验需要，每口孔中大约加入1-2×104个细胞。
步骤二：细胞处理：给予相应的药物处理，并培养合适的时间。
步骤三：MTT染色：在每口孔中加入MTT溶液，使其浓度为0.5mg/ml，离心培养盘，孔中细胞会吸收MTT溶液。
步骤四：MTT溶解：将上一步中吸收MTT溶液的细胞加入DMSO中，溶解甲基紫晶体，使之溶于溶剂中。
步骤五：测量吸光度：将溶解后的MTT溶液转移到96孔板中，使用酶标仪测量在570nm波长下所吸光度来反映细胞存活情况，光密度越高，细胞数量越多或细胞增殖情况越好。
3.MTT法的结果分析方法：三个相邻的实验孔之间的平均值将被视为一个的A值，用于比较不同处理的细胞存活情况。
根据实验设计，可以计算药物对细胞的抑制率、活化率、半抑制浓度（IC50）等参数。
常见的结果分析方法包括：(1)药物对细胞的抑制率计算公式：抑制率（%）=（A值（对照）-A值（药物处理））/A值（对照）×100%(2)药物对细胞的活化率计算公式：活化率（%）=（A值（药物处理）-A值（对照））/A值（对照）×100%(3)IC50计算公式：以药物浓度为自变量，细胞存活率为因变量，绘制药物浓度-细胞存活率曲线，通过拟合直线或曲线来计算药物半抑制浓度，即细胞存活率为50%时的药物浓度。
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MTT实验步骤详细流程
最后更新：2011-1-11 阅读次数：6655 【字体：小中大】
MTT常用浓度为5mg/ml。
1、药物的细胞毒性
四唑盐（MTT）比色法操作步骤
接种细胞
（1）用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。
（2）离心细胞悬液，使细胞沉积下来。
用培养基重悬细胞，计数。
（3）将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml，每个微滴定板可容纳20ml细胞重悬液。
（4）用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μl细胞悬液，每孔加0.5×103-10×103 个细胞。
（5）将200μl培养基加至第1列和第12列的8个孔中。
第1列作读板议的空白对照。
（6）将培养板放至塑料饭盒中，于37℃湿润环境中温育1-3天，等细胞进入指数生长期时可加入药物。
添加药物
（7）用培养基将细胞毒性药物5倍系列稀释，共制备8个浓度。
（8）对于贴壁生长的细胞，去除第2-11列各孔的培养基。
（9）在第2列和第11列的8个孔中加入200μl新鲜配制的培养基，这些细胞作为对照。
（10）在第3-10列的细胞中加入细胞毒性药物。
每个药物浓度仅需4个孔，这样A-D行可用于第一种药物，E-H行用于第二种药物。
（11）向每组4 孔中各加入200μl药物溶液。
（12）将培养板放回塑料盒中，温育至确定时间。
生长期
（13）在药物作用期结束时，去除所有含有细胞的孔中的培养基，加入200μl新鲜的培养基。
（14）每日换液至2-3个PDTs[群体倍增时间]。
存活细胞数的估算
（15）在生长期末，每孔中各加入200μl新鲜的培养基，在第1-11列所有孔中各加入50μl MTT。
（16）用铝箔包裹培养板，于37℃湿润环境中温育4 h。
（17）弃去孔中的培养基和MTT，在第1-11列所有孔中各加入200μl DMSO，以溶解残留的MTT-甲臜结晶。
（18）在含有DMSO的各孔中加入甘氨酸缓冲液（每孔25μl）。
（19）立即在570nm处记录吸光值。
读板仪用第1 列中含培养基和MTT但不含细胞的各孔调零。
结果分析
以药物浓度为横坐标（X轴），吸光值为纵坐标（Y轴）绘制曲线图。
第2列和第11列各孔中得出的平均吸光值作为对照吸光值，对照组吸光值减少一半时所需的药物浓度为IC50 浓度。
2、四唑盐（MTT）商品名为噻唑蓝
四唑盐比色法的原理：活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。
二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。
再用酶标仪测定OD值。
无菌材料：生长液；胰蛋白酶（0.25%+EDTA，1mmol/L，溶于PBSA中）；MTT：3- (4，
5) -双甲基- 2 -噻唑- (2 ，5) -二甲苯基溴化四氮唑，50mg/ml，滤过除菌; Sorensen 甘氨酸缓冲液（0.1mol/L甘氨酸，0.1mol/L NaCl，用1mol/L NaOH将PH调至10.5 ）;微滴定板（Linbro，ICN）; 微吸头，最好放在高压灭菌的吸头盒中。
非灭菌材料的准备：塑料盒（无毒的聚苯乙烯，装培养板用）；加样。
原文地址:/biotech/exp/Cell/2011/h818452395.html。