生物化学试验基本操作
生物化学的基本操作与血清尿素测定实验报告
生物化学的基本操作与血清尿素测定实验报告
一、实验原理：
二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的二甲基氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。
因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰与强酸作用产生二乙酰。
二、实验试剂：
1、酸性试剂：在三角烧瓶中加去离子水约100ml，然后加入浓硫酸
44ml、85%磷酸66ml。
冷至室温，加入氨基硫脲50mg及硫酸镉2g，溶解后用去离子水稀释至IL。
置棕色瓶中，4℃可保存半年。
三、基本操作及注意事项：
1、试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象，（每小时小于5%）。
煮沸显色经冷却后，应及时比色。
2、尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离子水作50倍以上稀释。
四、评价：
1、本法试剂单一，方法简便，但试剂毒性和腐蚀性。
在标本数量多时加热开始难以达到100℃，各管间受热温度也可能不一致，因而本法重复性不佳。
《生物化学实验指导》课件
实验操作问题
实验设备使用不当，导致设备损 坏或实验失败。
解决方法
加强实验材料管理，确保学生正 确使用和管理实验材料。
实验操作问题
实验材料管理不善，导致实验结 果受影响。
解决方法
提供设备使用说明和注意事项， 确保学生正确使用设备。
实验结果异常分析与处理
异常分析
01 实验结果与预期不符，可能存
在误差或错误。
01
02
03
实验技术原理
介绍实验所涉及的基本原 理，包括生物学、化学和 物理学原理等。
实验步骤
详细描述实验的操作流程 ，包括实验前的准备、实 验操作步骤、实验后处理 等。
注意事项
提醒实验中需要注意的事 项，以确保实验的准确性 和安全性。
实验数据分析与处理
数据收集
说明如何收集实验数据， 包括仪器的使用和数据的 记录等。
按照指导老师的安排进行实验 操作，不得擅自更改实验步骤
或使用未经批准的试剂
爱护实验室设备和器材，保持 实验室卫生整洁
02
生物化学实验基本操作
实验器材介绍与使用
实验器材
介绍生物化学实验中常用的实验 器材，如烧杯、量筒、滴管、离 心管等，并说明其用途和特点。
使用方法
详细介绍各种实验器材的使用方 法和注意事项，确保学生正确使 用，避免因操作不当造成实验误 差或安全事故。
04
生物化学实验案例分析
案例一：DNA提取与鉴定
总结词
基础实验，了解DNA提取与鉴定的基本原理和操作步骤。
详细描述
本案例介绍了DNA提取与鉴定的基本原理、实验材料、操作步骤、注意事项和 实验结果分析，旨在让学生了解DNA提取与鉴定的基本过程，掌握相关的实验 技能。
生物化学实验基本操作
生物化学实验基本操作在生物化学研究中，实验操作是非常关键和基础的环节。
正确的实验操作能够确保实验结果的准确性和可重复性。
本文将介绍生物化学实验的基本操作步骤，以及注意事项和常见错误，旨在帮助读者进行高质量的实验。
1. 实验室准备实验前需要充分准备实验室和实验设备。
确保实验室环境整洁，无杂物和污染物。
检查实验设备的完整性和正常运行状态，如酶标仪、离心机、超低温冰箱等。
检查试剂的标签和耐期，确保试剂无污染、完整密封。
准备所需的试剂和溶液，按照实验要求正确称量和稀释。
2. 安全措施生物化学实验涉及到一些有害物质和有毒试剂，因此必须采取相应的安全措施。
佩戴实验手套、眼镜和口罩，避免直接接触化学物质。
对于具有刺激性和致敏性的试剂，应采取适当的通风和排放措施。
在实验操作过程中，注意实验室的安全出口和紧急出口，以应对突发情况。
3. 实验记录实验过程中的记录是非常重要的部分，确保实验结果的可靠性和重复性。
在实验前，准备好实验记录表格，包括实验步骤、试剂使用量、反应时间和实验结果等。
实验过程中，实验人员应及时、准确地记录各项数据和观察结果，不漏一步、一项。
同时，注意记录实验中的异常情况和发现的问题。
4. 实验步骤生物化学实验的步骤根据具体实验目的和方法而定，但一般包括样品处理、试剂制备、反应或分离、结果检测等。
在进行每一步操作之前，确保实验器材和试剂已经准备好，操作空间整洁无杂质。
按照实验步骤的要求依次进行操作，注意操作的顺序和时间控制。
严格按照实验方法和条件要求操作，避免人为因素对实验结果的影响。
5. 清洁和废弃物处理实验完成后，要及时清洁实验器材和实验台面，避免试剂残留和交叉污染。
使用正规的清洗剂和方法进行清洗，定期对实验室进行无菌处理和消毒。
对于废液和废弃物的处理，要按照实验室的规定和环保要求进行集中收集、处理和处置。
总之，生物化学实验的基本操作包括实验室准备、安全措施、实验记录、实验步骤和清洁处理等环节。
生物化学实验基本操作-实验报告
生物化学实验基本操作一、实验目的1、熟悉化学类实验室的基本常识、规则、安全及防护知识。
2、掌握基本实验操作及常用仪器的使用方法。
3、通过实际操作，进一步掌握理论知识，能独立完成真个实验的设计、操作及计算。
二、实验仪器与试剂1、实验器材仪器名称型号厂家PH计Sartorius PB-10干燥箱101EXB-3型电热鼓风干燥箱上海树立仪器仪表有限公司酶标仪DNM-9602酶标分析仪北京普朗新技术有限公司2、实验试剂试剂名称生产厂家生产批号质量（g）Na2HPO4北京化工厂201007017.16NaH2PO4北京益利精细化学品有限公司20110313 3.12NaCl天津市塘沽化学试剂厂850328 0.9BCA蛋白定量试剂盒北京普利莱基因技术有限公001107三、实验内容（一）蛋白质的定量测定1、实验原理Bicinchoninic acid (BCA)法是近来广为应用的蛋白质测定方法。
即在碱性环境下，蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。
BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm处有高的光吸收值，并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。
2、实验方法（1）、工作溶液（Working Reagent,WR）的配制：将50体积BCA Reagent 与1体积Cu Reagent 混合即为WR工作试剂，呈嫩绿色。
（2）、标准蛋白溶液配制：用双蒸水与待测蛋白样品匹配之缓冲液进行倍比稀释：40μl 4000μg/ml BSA+60μl 稀释溶液（H2O）=100μl（BSA=1600μg/ml）,从中取出50μl连续倍比稀释，得到BSA标准溶液1600、800、400、200、100、50、25μg/ml,各50μl。
（3）、蛋白测定蛋白质浓度线性检测范围为10-2000μg/ml。
微板测定用96孔板，反应终体积225μl，用酶标仪测定。
a.微板测定：用加样器将25μl标准品与200μl WR工作液混合于微板孔中。
《生物化学》实验-评分标准
《生物化学》实验评分标准（供参考）一、基本操作（供实验操作考核参考）：1、玻璃仪器的洗涤①用毛刷蘸去污粉、肥皂粉或去污剂将器皿内外两面彻底刷洗干净（30分）②用自来水将仪器冲洗干净。
洗干净的玻璃仪器应该表面光洁，淋洗的水成片的从仪器上流下来，不应该有水珠（水线）附着在内壁。
（40分）③用少量的蒸馏水淋洗内壁三次（20分）④将洗干净的器皿倒置放在干净的滤纸上或相应的器皿架上（10分）2、刻度吸管①左手控制吸耳球，右手控制吸管，用右手食指控制吸管上口，右手拇指和中指夹持管身。
（30分，左手优势者酌情考虑）②操作者眼睛与要观察的刻度线应该处于同一水平，应该观察液面凹陷处的最低点与刻度线平齐。
（30分）③吸管下方如有液滴附着应该处理掉（20分）④操作是否规范和熟练、善后工作是否做好（20分）3、移液器①更换并安装好移液器头，右手控制移液器，调节移液器上方的罗盘到需要的刻度。
（30分）②按移液器上方活塞到遇到明显阻挡的位置时停止，插入试剂中慢慢吸取溶液。
不应该有气泡或断层出现。
（30分）③移液器头如有液滴附着应该处理掉。
（10分）④将移液器上方活塞按到最低点，排尽移液器头内所有液体（20分）⑤善后工作（10分）4、离心机①将调节转数旋钮归零，时间旋钮应该自然归零。
（10分）②将离心管放入离心套管中，置于天平上加水配平后，对称放入离心机内。
（30分）③接通电源，调节时间选钮（应该比规定时间多1-2分钟，20分）④慢慢调节转数选钮到规定转数停止（20分，依照不同的离心机规格要求可略有不同）⑤善后工作（20分）5、分光光度计①接通电源→预热30分钟（教师预先做好，必要时询问下即可）②调节波长→将空白液、测定液倒入比色杯（液面距杯口约1cm）→擦镜纸擦干净比色杯→置于比色槽中（30分，注意放置的方向及拿比色杯的姿势）③空白管对准光路→开盖调节透光度“0”，闭盖调节透光度“100%”→反复校对一次→关闭盖子情况下将模式调节到“吸光度”→空白管吸光度应该为“0”→拉动拉杆→依次读出各测定管吸光度→每打开盖都要重新调节“0”和“100%”。
实验一生化实验基本操作(移液管、离心机,分光光度计的使用)
➢ 放置 检查离心机，机内应无异物和无用的套管，并 且运转平稳。将已配平的两管对称地放入离心机的离 心孔内，做好标记，盖好上盖，开启电源。
➢ 离心 顺时针慢慢旋动转速调节钮，增加离心机转速 。当离心机转速达到要求时，记录离心时间。
B：
• A.选用最大刻度的吸管
• B.应选用取液量最接近的刻度吸管
• C.选用最小刻度的吸管
• 3.离心时平衡好放入离心机时
A：Leabharlann • A.对称放置 B.分开放置 C. 紧挨放置
Lambert 定律 lgI0/I=K1L
Beer 定律 lgI0/I=K2C
Lambert-Beer 定律 lgI0/I=KCL
令A= lgI0/I 则 A= -lgT= KCL T为透光度； A为吸光度； K为消光系数
Fingure 1. The main elements of spectrometer
端旁；用橡皮球吸液体至刻度上，眼睛看着液面 上升；吸完后用食指顶住吸管顶端；吸管保持垂 直，尖端与试剂瓶接触，用食指控制液体下降至 所需体积的刻度处，液体凹面、刻度和视线应在 同一水平面上；吸管移入准备接受溶液的盛器中 ，放开食指，使液体自动流出
二、离心机的使用
➢ 装液 将待离心的液体置于玻璃离心管（刻度离心管 ）或短试管中。
➢ 直接计算法： C样=A样/A标*C标
➢ 标准曲线法：浓度为X轴，吸光度为Y轴绘制标 准曲线，在标准曲线上获得未知浓度CoSO4的浓 度。
结果
管号 空白管 1
Abs
0
生化实验的基本操作
生化实验的基本操作（一）搅拌和振荡1.配制溶液时，必须随时搅拌或振荡混合。
配制完了时，必须充分搅拌或振荡混合。
2.搅拌使用的玻璃搅棒，必须两头都烧圆滑。
3.搅棒的粗细长短，必须与容器的大小和所配制的溶液的多少呈适当比例关系。
不能用长而粗的搅棒去搅拌小离心管中的少量溶液。
4.搅拌时，尽量使搅棒沿着器壁运动，不搅入空气，不使溶液飞溅。
5.倾入液体时，必须沿器壁慢慢倾人以免有大量空气混入。
倾倒表面张力低的液体(如蛋白质溶液）时，更需缓慢仔细。
6.振荡溶液时，应沿着圆圈转动容器，不应上下振荡。
7.振荡混合小离心管中液体时，可将离心管握在手中，以手腕、肘或肩作轴来旋转离心管; 也可由一手持离心管上端用另一手弹动离心管；也可用一手大拇指和食指持管的上端，用其余三个手指弹动离心管。
手指持管的松紧要随着振动的幅度变化。
还可以把双手掌心相对合拢，住离心管，来回挫动。
8.在容量瓶中，混合液体时，应倒持容量瓶摇动，用食指或手心顶住瓶塞，并不时翻转容量瓶。
9.在分液漏斗中振荡液体时，应用一手在适当斜度下倒持漏斗，用食指或手心顶住瓶塞，并用另一手控制漏斗的活塞。
一边振荡，一边开动活塞，使气体可以随时由漏斗泄出。
10.研磨配制肢体溶液时，要使杵棒沿着研钵的单方向进行，不要来回研磨。
（二）沉淀的过滤和洗涤1.过滤沉淀一般使用滤纸。
2.应根据沉淀的性质选择不同的滤纸.胶状沉淀,应使用质松孔大的滤纸.一般大小颗粒的结晶形成沉淀,应使用致密孔小的滤纸。
而极细的沉淀，则应使用致密孔最小的滤纸。
滤纸越致密，过滤就越慢。
3.滤纸的大小要由沉淀量来决定，并不是由溶液的体积来决定。
沉淀量应装到滤纸高度的1／3左右。
最多不应超过1／2，通常使用直径为7-9厘米的圆形滤纸。
4.折叠滤纸应先整齐的对折，错开一点再对折，打开后形成一边一层，一边三层的圆锥体。
折叠尖端时不可过于用力，以免容易出洞。
放入漏斗中时，滤纸边缘应完全吻合。
撕去三层一边的外面两层部分的尖端，使滤纸上缘能更好的贴在漏斗的壁上，不留缝隙。
生化实验室基本操作
生化实验室基本操作1 玻璃仪器的清洗实验中所用的玻璃仪器清洁与否，直接影响实验的结果，往往由於仪器的不清洁或被污染而造成较大的实验误差，有时甚至会导致实验的失败。
做生物化学实验对玻璃仪器清洁程度的要求，比一般化学实验的要求更高。
这是因为：①生物化学实验中蛋白质、酶、核酸等往往都是以“毫克”和“微克”计的，稍有杂质，影响就很大。
②生物化学实验对许多常见的污染杂质十分敏感，如金属离子（钙、镁离子等）、去污剂和有机物残基等，因此玻璃仪器（包括离心管等塑料器皿）是否彻底清洗净就是非常重要的。
⑴初用玻璃仪器的清洗新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用0.5％的去污剂洗刷，再用自来水洗净，然后浸泡在1％～2％盐酸溶液中过夜（不可少于四小时），再用自来水冲洗，最后用无离子水冲洗两次，在100℃～120℃烘箱内烘干备用。
⑵使用过的玻璃仪器的清洗先用自来水洗刷至无污物，再用合适的毛刷沾去污剂（粉）洗刷，或浸泡在0.5％的清洗剂中超声清洗（比色皿决不可超声），然后用自来水彻底洗净去污剂，用无离子水洗两次，烘干备用（计量仪器不可烘干）。
清洗后器皿内外不可挂有水珠，否则重洗，若重洗后仍挂有水珠，则需用洗液浸泡数小时后（或用去污粉擦洗），重新清洗。
⑶石英和玻璃比色皿的清洗决不可用强碱清洗，因为强碱会浸蚀抛光的比色皿。
只能用洗液或1％～2％的去污剂浸泡，然后用自来水冲洗，这时使用一支绸布包裹的小棒或棉花球棒刷洗，效果会更好，清洗干净的比色皿也应内外壁不挂水珠。
2 塑料器皿的清洗聚乙烯、聚丙烯等制成的塑料器皿，在生物化学实验中已用的越来越多。
第一次使用塑料器皿时，可先用8mol/L尿素（用浓盐酸调pH = 1）清洗，接着依次用无离子水、1 mol/L KOH和无离子水清洗，然后用10—3 mol/L EDTA 除去金属离子的污染，最后用无离子水彻底清洗，以后每次使用时，可只用0.5％的去污剂清洗，然后用自来水和无离子水洗净即可。
生物化学实验的基本操作
一、玻璃仪器的使用及清洁（一）玻璃仪器的洗涤及干燥1、一般仪器：烧杯、试管、离心管等普通玻璃仪器，可直接用毛刷蘸餐洗净刷洗，然后用自来水冲洗，直至容器内不挂水珠即可。
最后用少量蒸馏水冲洗内壁2－3次，倒置晾干即可。
2、容量分析仪器：容量瓶、滴定管及吸管等容量仪器，用后用自来水多次冲洗，如能清洁（壁不挂水珠），再用蒸馏水少量冲洗2~3次晾干即可备用。
若仍不干净附有油污等，则须于干后放入铬酸洗液内浸泡数小时，然后倒净（或捞出）洗液，用自来水充分冲洗至水不显黄色后再冲几次，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次晾干备用。
在做酶学实验时，对仪器的清洁要求更高，因如有极微量的污物（如重金属离子）即可导致整个实验失败。
因此，必要时仪器经上述方法洗涤后，还需用稀盐酸或稀硝酸洗涤，以除去铬及其它金属离子，然后再用自来水、蒸馏水冲洗。
生化实验室常用的洗液有以下几种：（1）铬酸洗液：为最常用的洗液，由重铬酸钾、粗硫酸及水配制而成，去污力强，清洗效果好。
其配制方法有多种，可根据需要进行选择，常用的配方如下表。
重铬酸钾（ｇ）100 60 100水（ｍｌ）750 300 200粗硫酸（ｍｌ）250 460 800清洁性能较弱较强（常用）最强配制方法为：先将重铬酸钾溶于水，再慢慢加入浓硫酸。
因配制过程产生大量热，容器需放入冷水中，边加硫酸边搅动混合。
由于产热量很大，使用玻璃容器有破裂的危险，所以最好用耐高温的陶瓷或耐酸的搪瓷容器。
洗液可多次反复使用，如效力变弱，可加入少量重铬酸钾及浓硫酸继续使用，但如果变为绿色，则不宜再用。
（2）10%尿素液：为蛋白质良好溶剂，帮适用于洗涤盛血的容器。
（3）草酸盐液：用于清洗过锰酸钾的痕迹。
（4）硝酸液：用1：1的硝酸水溶液，用于清洗CO2测定器及微量滴定管。
（5）乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Nａ2）液：5~10%的EDTA－Nａ2液可用于洗涤器皿内无机盐类。
玻璃仪器的干燥方法可根据不同仪器的种类而定。
(可直接使用)生化实验基本操作.ppt
优选
15
2．实验报告
实验结束后，应及时整理和总结实验结 果，写出实验报告。下面列举实验报告的书 写格式，仅供参考。
优选
16
实验报告书写要求：实验名称、实验日期、 目的和要求、原理、实验测定的数据、图纸 及结果、结果分析和讨论。
优选
ห้องสมุดไป่ตู้
17
原理：实验原理简要归纳，一些可用化学反 应式表示。
数据、图纸及结果：将一定实验条件下获得 的实验结果和数据进行整理、归纳、分析和 对比，并尽量总结成各种图表，如原始数据 及其处理的表格、标准曲线图以及实验组与 对照组实验结果的比较图表等。
优选
3
3．注意保持实验室的整洁。实验完毕，须 将药品试剂排列整齐，仪器要放好，将实验 台面抹拭干净。使用后的玻璃仪器要清洗干 净放好。
优选
4
4．要爱护实验仪器，节约使用各种试剂、 物品。使用仪器时，应小心仔细，防止损坏 仪器。使用贵重精密仪器时，应严格遵守操 作规程，发现故障立即报告教师，不要自己 动手检修。仪器损坏时，应如实向教师报告。
优选
13
实验中使用仪器的类型、编号及试剂的规 格、化学式、分子量、准确的浓度等，也应 如实记录，以便在总结实验时进行核对和作 为查找成败原因的参考依据。
优选
14
如果发现记录的结果有可疑、遗漏、丢失 等，都必须重做实验。因为，将不可靠的结 果当做正确的记录，在实际工作中可能造成 难以估计的损失。所以，在学习期间就应一 丝不苟，努力培养严谨的科学作风。
优选
9
9．使用浓酸、浓碱，必须极为小心地操作， 防止溅失。用吸量管取这些试剂时，必须使 用橡皮球，绝对不能用口吸。若不慎溅在实 验台或地面，必须及时用湿抹布擦洗干净。 如果触及皮肤，应立即治疗。
生物化学实验操作标准流程
生物化学实验操作标准流程实验目的：本实验旨在通过一系列生物化学实验，掌握生物化学实验的基本操作技能，培养实验操作能力，进一步巩固和增强生物化学知识。
实验原理：生物化学实验是利用生物体内某些特定化学反应的原理和方法，在实验室中进行的活动，旨在研究生物体内的生化过程、生化成分及其相互作用。
需要通过实验仪器的使用、试剂的配制、实验步骤的操作等一系列过程来确保实验顺利进行。
实验材料：试管、坩埚、实验动物、试剂、生物化学仪器等。
实验步骤：1. 实验前准备：清洗实验仪器，准备所需试剂，并检查实验动物的状态。
2. 实验操作：a. 锁定实验目标和方法；b. 配制试剂：根据实验要求，精确称量所需试剂，配制标准溶液；c. 进行实验：按照实验操作流程，逐步进行各项实验操作；d. 记录数据：准确记录实验数据，包括实验结果、出现异常情况等；e. 处理实验废物：将实验废物妥善处理，避免对环境造成污染。
实验注意事项：1. 实验操作时要戴好实验手套、口罩等防护用具，确保人员安全；2. 注意实验仪器的使用方法，避免损坏实验设备；3. 严格按照实验流程操作，不得擅自修改实验步骤；4. 学会分析实验结果，及时发现问题并采取措施解决；5. 实验结束后，保持实验室的整洁，及时清理实验废物。
实验总结：通过本次生物化学实验，我掌握了生物化学实验的操作标准流程，充分锻炼了实验技能，增强了对生物化学知识的理解和掌握。
生物化学实验是培养科学素养和实践能力的重要途径，希望通过不断实验实践，提高实验技能，为将来的科研工作做好准备。
以上便是生物化学实验操作标准流程，通过认真学习和实践，相信你会逐渐掌握生物化学实验的操作技能，取得更好的实验成果。
祝愿你在科学领域不断前行，成为优秀的生物化学研究者！。
生化实验基本操作要求
实验数据的记录：准确、完整、清晰、及时
数据处理结果：确保数据的准确性和可靠性
数据处理报告：撰写数据处理报告包括数据处理方法、结果、结论等
数据处理：使用专业软件进行数据处理和分析
实验结果分析和报告撰写
PRT FIVE
实验结果的分析方法
结果比较：将实验结果与预期结果进行比较分析差异原因
审阅结果：通过、修改后通过、不通过等
评价标准：科学性、准确性、完整性、创新性等
实验质量的保证和提高
PRT SIX
实验误差的分析和控制
实验误差的来源：仪比实验等方式进行评估
实验误差的控制：选择高精度仪器、规范操作流程、控制实验环境等
实验误差的修正：通过统计方法进行修正如线性回归、最小二乘法等
实验器材的准备和使用
实验器材的种类：包括试管、烧杯、滴定管、离心管等
实验器材的规格：根据实验需求选择合适的规格
实验器材的清洁：使用前应进行清洁和消毒
实验器材的使用：按照操作规程正确使用实验器材避免损坏和污染
试剂的配制和储存
试剂配制：按照实验要求准确称量、溶解、混合等步骤
试剂储存：根据试剂性质选择合适的储存条件如温度、湿度、避光等
结论总结：根据实验结果和比较分析得出结论并撰写报告
观察实验现象：记录实验过程中的现象和变化
数据处理：对实验数据进行整理、分析和解释
实验报告的撰写规范和要求
实验目的：明确实验的目的和意义
格式要求：按照规定的格式要求撰写实验报告包括字体、字号、页边距等
参考文献：列出参考的文献和资料包括书籍、期刊、网络资源等
实验环境控制：保持实验室清洁避免污染确保实验设备正常运行
实验操作步骤和要点
临床生物化学检验实验指导(医学检验技术专业48学时)
《临床生物化学和生物化学检验》实验指导前言实验教学作为基础医学教学中的一项重要内容，在培养学生分析问题、解决问题及动手能力等方面发挥着十分重要的作用。
临床生物化学检验实验教学是临床生物化学检验课程的重要组成部分，本教研室根据中医本科专业的特点，并依据《临床生物化学检验》实验大纲要求，结合多年的教学实践，组织编写了《临床生物化学和生物化学检验》实验指导。
本实验指导内容共12项实验。
每项实验包括实验目的、实验原理、实验内容（材料、方法、结果分析及注意事项）等项目，同时后附思考题，以供学生独立思考、加深理解。
实验学时：48学时实验一基本操作（综合性实验，4学时）【实验目的】1.掌握移液管、微量加样器正确使用方法。
2.掌握721分光光度计的正确使用方法及简单维护3.熟悉试验结束后试管、移液管的清洗方式【实验仪器、器材与试剂】1.实验仪器和器材：721分光光度计、玻璃试管、微量加样器、移液管、试管架、洗耳球、记号笔等。
2.实验试剂：蒸馏水、生理盐水等。
【实验项目、方法与步骤】1、微量移液器使用（1）根据取用溶液体积选用适当量程的微量移液器a)P20 2 ~ 20b)P200 21 ~ 200c)P1000 201 ~ 1,000（2）容量设定从大值调整到小值时，刚好即可。
从小值调整到大值时，需要调超过三分之一圈后再返回，这是因为计数器里面有一定的空隙，需要弥补。
不要将按钮旋出量程，这将导致移液器损坏。
（3）吸液头安装正确的安装方法是：把白套筒顶端插入吸液头，在轻轻用力下压的同时，把移液器按逆时针方向旋转180度。
切记用力不能过猛，更不能采取剁吸液头的方法来进行安装，那样做会对移液器造成不必要的损伤。
（4）预洗吸液头安装了新的吸液头或增大了容量值以后，应把需要转移的液体吸取、排放两到三次。
这样做是为了让吸液头内壁形成一道同质液膜，确保移液工作的精度和准度，使移液过程具有重现性。
（5）吸液先将移液器排放按钮按至第一停点，再将吸液头垂直浸入液面。
生物化学实验-实验的基本操作及要求
实验器材的干燥
实验前确保所有实验器材都已彻底干 燥，以防止实验过程中出现意外。
实验试剂的准备
01
02
03
试剂的储存
根据试剂的特性选择合适 的储存方式，确保试剂稳 定且有效。
试剂的配制
按照实验要求准确配制试 剂，并记录详细的配制过 程和结果。
试剂的纯度与质量
确保所使用的试剂纯度高、 质量好，以获得准确的实 验结果。
实验环境的准备
实验室安全
确保实验室具备必要的安全设施，如灭火器、急救箱等。
实验室清洁
保持实验室整洁，定期清理和消毒实验台面和地面。
实验室温度和湿度的调节
根据实验需求，调节实验室温度和湿度，以确实验条件的一致性。
02
实验操作
实验操作流程
实验前准备
明确实验目的、原理和步 骤，准备好所需的仪器、 试剂和材料。
实验结果交流与讨论
小组讨论
在实验结束后，组织小 组讨论，分享实验结果 和心得体会，促进相互 学习。
学术交流会议
参加学术交流会议，向 同行展示自己的实验结 果，听取他人的意见和 建议。
论文发表
将实验结果整理成学术 论文，发表在学术期刊 上，供同行参考和评价。
实验结果的应用与推广
实际应用
将具有实际应用价值的实验结果应用于生产 实践或解决实际问题。
03
实验要求
实验结果的要求
准确性
实验结果应准确反映实验过程和 现象，数据应真实可靠，误差在
可接受范围内。
重复性
实验结果应可重复，即相同条件 下，其他人或团队应能得出相同
的结果。
可比性
不同实验之间的结果应具有可比 性，以便进行比较和分析。
实验报告的要求
生物化学实验southwestern blotting实验步骤
生物化学实验southwestern blotting
实验步骤
Southwestern blotting 是一种用于检测蛋白质与 DNA 相互作用的技术，以下是该实验的基本步骤：
1. 制备 DNA 探针：选择你感兴趣的 DNA 片段，并使用放射性同位素（通常是 32P）或荧光标记对其进行标记。
2. 制备蛋白质样品：将待检测的蛋白质样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离，并通过电转移将蛋白质转移到硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上。
3. 膜的预处理：将转移后的膜在Blocking buffer 中孵育，以封闭非特异性结合位点。
4. 杂交：将标记的 DNA 探针与膜上的蛋白质进行杂交。
可以在杂交缓冲液中进行，通常在 42°C 下孵育过夜。
5. 洗膜：在杂交后，用 washing buffer 洗涤膜，以去除未结合的 DNA 探针。
6. 检测：使用放射性自显影或荧光检测方法，检测膜上结合的 DNA 探针。
7. 结果分析：通过观察膜上的杂交信号，确定哪些蛋白质与标记的 DNA 探针发生了相互作用。
需要注意的是，Southwestern blotting 实验步骤可能因具体的实验条件和目的而有所不同。
在进行实验之前，建议仔细阅读相关的实验手册和文献，并根据实际情况进行适当的调整和优化。
生物化学实验操作手册(生物科学专为业)
总论21世纪是生命科学的世纪,生物化学与分子生物学是当代生命科学领域中一门重要的基础学科,它涵盖的基础理论,基本知识,基本技术与医学研究各学科领域密切相关,其理论与技术的发展,推动了生命科学的发展,对人类的科技进步与文明产生巨大影响。
生物化学实验是医学院校学生必修的一门独立的基础实验技术课程，其研究技术的发展与应用是依据物理学、化学及生物学的基本理论和实验方法而建立起来的。
20世纪20年代微量分析的发展，30年代电子显微镜的出现，40年代层析技术和电泳技术的兴起，以及同位素示踪技术、各种光谱技术、核磁共振技术的应用，激光、超导等新技术的出现，电子计算机技术的突飞猛进，使生物化学实验手段提高到一个崭新的水平，掌握生物化学实验方法和研究技术，对医学院校学生来说是十分重要的。
本门课程主要侧重于给学生以基本的实验方法和技能的训练，让学生了解并掌握生物化学的四大基本实验方法，即：分光光度法、离心法、层析法和电泳法。
同时也注意引进一些新近发展起来的、重要的生物化学及分子生物学研究技术，作为学生学习其他专业课程和进入科学研究领域的准备。
一、实验要求1．实验前必须预习实验指导和有关理论，明确实验目的、原理、预期的结果，操作关键步骤及注意事项。
2．实验时要严肃认真专心进行操作，注意观察实验过程中出现的现象和结果，结果不良时，必须重做。
3．实验中，应及时将实验结果如实记录下来，并请老师当场审核。
根据实验结果进行科学分析，按时将实验报告交教师评阅。
二、实验时注意事项1．进实验室要穿好实验服，以免酸碱腐蚀衣服。
2．进实验室前准备好实验指导、课本、笔记、实验记录本、报告本、文具等。
3．要保持实验台整洁，试剂、仪器应整齐,按次序放置。
实验完毕要按各类仪器的清洗方法和要求将仪器清洗干净。
4．实验室是培养学生独立思考、独立工作能力及良好科学作风的重要场所，操作务必认真不得敷衍，室内应保持肃静，不得吸烟、玩闹，不得随地吐痰，乱丢纸屑。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
②按“零”点位置来分，有“O”点在吸量管 上端的（即读数从上而下逐渐增大），也有 “O”点在吸量管下端的（读数从下而上逐渐 增大)。两种标示方法，在使用时各有方便之 处。 ③按刻度方法来分，刻度吸量管也有两种，一 种是刻度刻到尖端的，将液体放出时，应吹出 残留在吸量管尖端的少量液体(我实验室的刻 度吸量管全部是这一种)，另一种是刻度不刻 到尖端的。
4.洗液的酸性和氧化性很强，使用时应格外注 意，千万不要滴落在皮肤或衣物上，以免灼伤 或烧坏。 5.洗液颜色由深棕色变为绿色时，说明洗液已 经失效，应停止使用，更换新液。因重铬酸变 成硫酸铬后不再具有氧化性。
重铬酸钾洗液的配制: 取重铬酸钾20g溶于20ml蒸馏水中，加热至 沸。冷却后再将200ml浓硫酸慢慢加入，边加 边搅拌。注意：此时可产生高热。为防止容器 破裂，应选用耐酸搪瓷缸或耐高温的玻璃器皿， 切忌用量筒及试剂瓶等配制。为防止洗液吸收 空气中的水分而被稀释变质，洗液应贮存于带 盖的容器中。当清洁效力降低时，再加入少量 重铬酸钾及浓硫酸就可继续使用。
⑵刻度吸量管的正确使用方法： 用右手拇指和中指夹住管身，将吸量管的尖端伸入试 液深处，左手持洗耳球把试液吸入管内至高过刻度 以上时，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控 制试液的泄放。吸液后应尽量使吸量管保持垂直， 使右眼与刻度等高，稍微轻抬食指或轻轻转动吸量 管，使试液面缓慢降落，至管内试液弯月面的最低 点与吸量管的刻度线相齐为止。然后将吸量管插到 需加试剂的容器中，让尖端与容器内壁靠紧，松开 食指让液体流出。液体流完后再等15秒钟，捻动一 下吸量管后移去（如需吹的吸量管，则吹出尖端的 液体后再捻转一下吸量管移去）。
3.奥氏吸量管：准确度最高，使用时必需吹出 留在尖端的液体。
㈡ 定量吸(移)液器(微量加样器)：定量吸液器是 吸量管的革新产品。由塑料制成。目前，因产 地厂家不同其质量、价格差异十分悬殊。 1.定量吸液器的优点：使用方便，取、加样迅 速，计量准确，不易破损，能吸取多种样品 （只换吸嘴即可）。
⑥吸取粘滞性大的液体(如血液、血浆、血清 等)时，除选用合适的吸管(奥氏管)外，应注意 拭净管尖附着的液体，尽量减慢放液速度(用 食指压力控制)，待液体流尽后吹出管尖残留 的最后一滴液体。 ⑦使用的吸量管应干净、干燥无水。如急用而 又有水时，可用少量欲取试剂冲洗3次，以免 试剂被稀释。
2.移液吸量管：也有两种，常见的一种是吸量 管的上端只有一个刻度，另一种是除了在吸量 管上端有刻度外，在吸量管下端狭窄处也有一 刻度线。无论哪一种，在使用时将量取的液体 放出后，只需将吸量管的尖端触及受器壁约半 分钟即可，不得吹出尖端的液体。
⑶使用刻度吸量管的注意事项： ①选择适当规格的吸量管：吸量管的最大容积 应等于或略大于所需容积（ml数）。 ②仔细看清吸量管的刻度情况：刻度是否包括 吸量管尖端的液体？读数方向是从上而下，还 是从下而上？ ③拿吸量管时，刻度一定要面向自己，以便读 数。
④吸取试剂时应注意三点：一是先吹去吸量管 内可能存在的残留液体，二是将吸量管插入试 剂液面深部(以免吸液过程中因液面降低而吸 入空气产生气泡或管内试剂进入洗耳球)，三 是使用洗耳球(不可直接用口吸)。 ⑤按吸量管上口时应该用食指，不能用拇指。
3.粘附有血浆的刻度吸量管等，有三种洗涤方 法： （1）先用45%尿素溶液浸泡，使血浆蛋白溶解， 然后用自来水冲洗； （2）也可用1%氨水浸泡，使血浆溶解，然后 再依次用1%稀盐酸溶液、自来水冲洗； （3）以上二法如达不到清洁要求，可浸泡于重 铬酸钾洗液4~6小时，再用大量自来水冲洗， 最后用蒸馏水冲洗2~3次。
4.新购置的玻璃仪器，应先置于1~2%稀盐酸 溶液中浸泡2~6小时，除去附着的游离碱，再 用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗洗涤，久置干 涸后洗涤十分困难。如不能及时洗涤，先用流 水初步冲洗后浸泡在清水中，待后按常规处理。
㈡ 使用重铬酸钾洗液（以下简称洗液）时应注意 以下几点： 1.需用洗液浸泡的容器，在浸泡前应尽量沥干。 否则会因洗液被稀释而降低洗液的氧化力。 2.Hg2+、Ba2+、Pb2+等离子可与洗液发生化学 反应，生成不溶性化合物沉积在容器壁上。因 此，凡接触过上述离子的容器，应先除去上述 离子（可用稀硝酸或5~10%EDTA钠清除）。 3.油类、有机溶剂等有机化合物可使洗液还原 失效。因此，容器壁上附有大量油类、有机物 时，应先除去。
生物化学实验基本操作
一. 玻璃仪器的洗涤 在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的 重要环节。洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无 水珠附着在玻壁上。 ㈠ 常用的洗涤方法： 1.一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合 成洗涤剂仔细刷洗。然后用自来水反复冲洗，最后用 少量蒸馏水冲洗2~3次，倒置在器皿架上晾干或置于 烘箱烤干备用。
二. 吸量管的使用 吸量管和定量吸(移)液器(微量加样器)均为用来 转移一定体积溶液的量器。 ㈠ 吸量管：生化实验中常用的有三种，最常用 的是刻度吸量管。 1.刻度吸量管： ⑴刻度吸量管的种类：
①按容量规格来分，有0.1、0.2、0.25、0.5、 1、2、5、10ml等数种。其精密度按不同的容 积可达移取量的0.1~1%。通常将管身标明的 总容量分刻为100等分。因此，10ml的吸量管 一格代表0.1ml；1ml的吸量管一格代表 0.01ml,其余类推。
2.容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能 用毛刷刷洗。用后应及时用自来水多次冲洗，细心 检查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。 （1）如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上； （2）如挂水珠，则应沥干后用重铬酸钾洗液浸泡 4~6小时，然后按上法顺序操作，即先用自来水冲洗， 再用蒸馏水冲洗，最后干燥。