丹参酮_A对免疫性血管炎_血小板及凝血功能影响的实验研究_周敏

■基金项目:成都市卫生局科研项目(编号0603)＊通信作者丹参酮ⅡA 对免疫性血管炎、血小板及凝血功能影响的实验研究■周　敏1,李晓静1＊,李晓辉1,徐酉华2,刘　红1,杨　默3(1.成都市儿童医院血液科,成都　610017,2.重庆医科大学儿童医院血液科,3.香港大学李嘉诚医学院儿童及青少年科学系)摘　要:　目的　分析丹参酮ⅡA 对免疫性血管炎、血小板及凝血活性的影响,探讨其抗血小板、抗凝及降低免疫性血管炎炎症反应的机理。

方法　建立免疫性血管炎模型,检测外周血小板数量、血小板聚集功能,流式细胞仪检测血小板活性标志A n n e x i nV ,E L I S A 法检测凝血酶原片断F 1+2,H E 染色、弹力纤维染色及电镜观察血管病理改变。

并设立正常、模型和阿司匹林对照组。

结果　免疫性血管炎急性期血小板数量异常增高,血小板聚集功能、A n n e x i nV 检测的血小板活性以及凝血酶原片断F 1+2活性也有明显增高。

丹参酮ⅡA 治疗后,血小板数量明显降低,为931.33±254.19×109/Lv s 544.00±83.88×109/L ,差异有统计学意义。

A n n e x i n V 检测的血小板活性以及凝血酶原片断F 1+2活性也明显降低,分别为22.55±6.00%v s 12.27±6.25%、215.93±66.04p m o l /Lv s 148.69±14.40p m o l /L ,差异有统计学意义。

与阿司匹林作用相比,除抑制血小板聚集作用稍弱外,其他作用两种药物差异均无统计学意义。

结论　丹参酮ⅡA 可能通过降低血小板活性及凝血活性从而降低免疫性血管炎的炎症反应,减轻血管的病理损害,达到治疗的目的。

关键词:　血管炎;　血小板;　血液凝固;　丹参酮ⅡA[中图分类号]R 543　[文献标志码]A [文章编号]1009-6213(2009)01-08-05E f f e c t s o f T a n s h i n o n e ⅡA o nP l a t e l e t s a n dC o a g u l a t i o ni nI m m u n e V a s c u l i t i sZ H O UM i n ,L I X i a o -j i n g ,L I X i a o -h u i ,X UY o u -h u a ,Y A N GM o ,(D e p a r t m e n t o f H e m a t o l o g y ,C h e n g d uC h i l d r e n 's H o s p i t a l ,C h e n g d u 610017,C h i n a )A b s t r a c t :O b j e c t i v e T o s t u d y t h e e f f e c t s o f t a n s h i n o n e ⅡA o np l a t e l e t s a n dc o a g u l a t i o ni ni m m u n e v a s c u l i t i s .Me t h o d s T h e m o d e l o f i m m u n e v a s c u l i t i s o f r a b b i t s w e r e r e p r o d u c e d b y i n t r a v e n o u s i n j e c t i o no f b o v i n e s e r u ma l b u m i n t w i c e .P e r i p h e r y p l a t e l e t n u m b e r ,p l a t e l e t a g g r e g a t i o n a n d t h e p o p u l a t i o n o f A n n e x i n V i n p l a t e l e t s w e r e d e t e c t e d .P r o t h r o m b i nf r a g m e n t F 1+2w a s d e c t e c t e db y I L I S Am e t h o d .T h eP a t h o l o g i c a lc h a n g e s o f i m m u n e v a s c u l i t i s w e r e a n a l y z ed b y he m a t o x y l i n a n d e o s i n s t a i n i n g ,e l a s t i cf i b e r s s t a i n i ng a n d e l e c -t r o n m i c r o s c o p y .R e s u l t s Th e p l a t e l e t n u m b e r ,p l a t e l e t a g g r e g a ti o n ,t h e p o p u l a t i o n o f A n n e x i n Va n d t h e l e v -e l o f p r o t h r o m b i n f r a g m e n t F 1+2a t t h e a c u t e p h a s e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d i n i m m u n e v a s c u l i t i s m o d e l g r o u p t h a n t h o s e i n c o n t r o l g r o u p .T a n s h i n o n e ⅡA s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d p l a t e l e t n u m b e r f r o m 931.33±254.19×109/L t o 544.00±83.88×109/L .T h e p o p u l a t i o n o f A n n e x i n Va n d t h e l e v e l o f p r o t h r o m b i n f r a g m e n t F 1+2a l s o s i g n i f i c a n t l y d e s r e a s e d f r o m 22.55±6.00%t o 12.27±6.25%,215.93±66.04p m o l /L t o 148.69±14.40p m o l /L .T h e i n h i b i t i o n e f f e c t o f t a n s h i n o n e ⅡA w a s a s t h e s a m e a s a s p i r i n e x c e p t f o r t h e i n h i b i t i o n t o p l a t e l e t a g g r e g a t i o n .A n d b o t h d r u g s c o u l d i m p r o v e t h e v e s s e l s d a m a g e o f i m m u n e v a s c u l i t i s .C o n c l u s i o n s T a n s h i n o n e ⅡA m i g h t i m p r o v e t h e i n f l a m m a t i o n d a m a g e o f v e s s e l s i n i m m u n e v a s c u l i t i s t h r o u g h t h e i n h i b i t i o n o f p l a t e l e t s a n d c o a g u l a t i o n a c t i v i t y .K e y w o r d s :　V a s c u l i t i s ;P l a t e l e t ;C o a g u l a t i o n ;T a n s h i n o n e ⅡA 血管炎是一组原因不明,以非感染性炎症和坏死性血管炎为基本病理改变的结缔组织疾病,包括川崎病、过敏性紫癜等。

近年研究显示,血小板除参与机体止血、凝血过程外,还具有炎性细胞的作用。

血小板数量增高和异常活化理论在血管炎的发生发展及病理生理中起着重要作用。

丹参酮ⅡA (t a n s h i n o n e ⅡA ,T a n ⅡA )是中药丹参的主要成分之一,其在生物体内的代谢产物参与机体的生物化学反应,表现出多种药理作用,如抑制血小板聚集、抗炎、抗菌、抗肿瘤等。

本实验拟在建立免疫性血管炎动物模型的基础上,探讨免疫性血管炎是否存在血小板和凝血系统的活化,以及T a n ⅡA 能否通过降低血小板或凝血活性从而减轻血管炎症的病理损害,达到治疗目的。

并与抗血小板药阿司匹林作比较。

1　材料与方法1.1　实验动物及主要试剂　日本大耳幼年家兔(简称幼兔),周龄3～4周,体重800g以下,雌雄不拘,由重庆市中药研究所提供。

牛血清白蛋白购自上海华美生物工程有限公司。

T a nⅡA购自上海第一生化药业有限公司。

阿司匹林泡腾片(商品名:巴米尔)购自阿斯利康制药有限公司。

F I T C标记的A n n e x i n-V购自深圳晶美生物工程有限公司。

兔凝血酶原片段F1 +2E L I S A检测试剂盒试剂由武汉中美科技有限公司提供。

1.2　动物模型的制作　参考O n o u c h i及韦等[1,2]方法,给予幼兔以10%牛血清白蛋白2.5m l/k g静脉缓慢推注,正常对照组给予生理盐水2.5m l/k g静脉缓慢推注。

2周后,再次依上述方法给药,从而诱发动脉炎,形成血管炎模型。

1.3　实验分组　①正常对照组(N o r m a l),②模型对照组(C o n t r o l),③T a nⅡA治疗组(T a nⅡA):T a nⅡA5 m g/k g·d-1,i v,④阿司匹林治疗组(A s p i r i n):阿司匹林泡腾片100m g/k g·d-1(相当于人30～50m g/k g·d-1),灌胃,7d后改10m g/k g·d-1,q d(相当于人3～5m g/k g·d-1),至实验结束。