降脂片中洛伐他汀的含量测定方法学研究孔德创

降脂片中洛伐他汀的含量测定方法学研究孔德创
发布时间：2021-10-13T07:14:10.229Z 来源：《防护工程》2021年18期作者：孔德创1 刘芳2 [导读] 建立一种降脂片中洛伐他汀的含量检测方法。

方法：将酸性介质中的试样在三氯甲烷中进行提取，挥干提取溶剂，以流动相进行定容，根据高效液相色谱紫外检测器在238nm处的响应进行定性定量。

1河南中检检测技术有限公司河南郑州 450000
2 河南正昌生物医药科技有限公司河南郑州 450000摘要：目的：建立一种降脂片中洛伐他汀的含量检测方法。

方法：将酸性介质中的试样在三氯甲烷中进行提取，挥干提取溶剂，以流动相进行定容，根据高效液相色谱紫外检测器在238nm处的响应进行定性定量。

C18柱或等效色谱柱，室温，检测波长238nm，流动相为甲
醇：水：磷酸=385:115:0.2， 1.0mL/min。

结果：实验结果表明在238nm处,空白辅料对洛伐他汀的测定无干扰,线性考察显示,在洛伐他汀浓度为5ug/mL～80ug/mL范围内,响应值A与浓度C线性关系良好,R2大于0.999。

本方法重现性试验相对标准偏差为1.2%(n=6)，回收率范围99.3%～100.5%。

结论：此方法可用于该降脂片中洛伐他汀的含量测定。

关键词：洛伐他汀；含量测定；方法学
1 前言
红曲是以大米为原料，采用现代生物工程技术分离出优质的红曲霉菌(monascuspurpureus)经液体深层发酵精致而成，是一种纯天然、安全性高、有益于人体健康的食品添加剂。

它应用范围广泛，包括食品类(肉制品、果汁、色酒、果酱、饮料、糖果、糕点、酱油、保健醋等);药品类(药品着色剂、功能性保健品);化妆品类。

人体健康与脂肪、胆固醇的关系非常微妙，太多与太少都是对健康不利的。

过高的血脂防、胆固醇会造成动脉阻塞、硬化、高血压、脑中风、肝功能、肾功能及代谢性疾病等，对健康的伤害非常大。

血脂调节是防治心脑血管疾病的主要手段，而洛伐他汀因副作用小，疗效稳定，被广泛用于降血脂治疗。

红曲因含有高活性的降脂化合物洛伐他汀而成为中药降脂复方药物的主要成分。

2材料与方法
2.1 试剂甲醇，三氯甲烷，磷酸，洛伐他汀标准品（批号：100600-201504，纯度99.4%）。

2.2 仪器设备 Ultimate3000高效液相色谱仪：附紫外检测器（UV），超声波清洗器（JP-040），漩涡混合器，离心机（TDL-40B），真空泵。

2.3 样品 XX牌旨雪新片，由河南正昌生物医药科技有限公司提供。

2.4试验方法
2.4.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：岛津C18柱，4.6×250mm，柱温:室温，检测波长238nm，流动相：甲醇：水：磷酸=385:115:0.2，流速：1.0mL/min，进样量：10μL。

2.4.2标准溶液的配制洛伐他汀标准储备液配制：准确称量洛伐他汀标准品0.0100g，加入检测用流动相并定容至25mL。

此溶液每mL 含0.4mg洛伐他汀。

洛伐他汀标准使用液配制：将洛伐他汀标准储备液用流动相稀释10倍，此溶液每mL含40μg洛伐他汀。

2.4.3取样品20片，精密称定，充分研碎并混合均匀，根据试样中洛伐他汀含量精确称取约1.0g试样于50ml试管中，加入10.0mL pH=3磷酸水溶液。

超声提取10min后再加入10.0mL三氯甲烷，置于漩涡混匀器3min。

静置后去掉上层水相，将三氯甲烷层以3000rpm/min离心3min，准确吸取上清液1.0mL至5mL棕色容量瓶中，将容量瓶置于50℃左右水浴中使用真空泵减压干燥至挥去全部溶剂，向容量瓶中加入流动相并定容至5.0mL，经0.45μm滤膜过滤后待进样。

3 结果与讨论
3.1 专属性试验
按配方比例称取除红曲外其它原辅料同法制成阴性样品，并按照供试品的处理方法制备阴性样品溶液，按要求精密量取10μl注入高效液相色谱仪中，并记录色谱图。

结果表明，阴性溶剂色谱中在与洛伐他汀相应的保留时间没有色谱峰，表明其它原辅料对洛伐他汀的测定无干扰。

3.2 线性关系的考察
精密称取洛伐他汀标准品9.51mg置于25ml的棕色容量瓶中，加入流动相溶解。

精密量该溶液0.125 ml、0.25 ml、0.50 ml、1.00 ml、1.50ml、2.00ml，分置于10mL棕色容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，配制成浓度分别为4.73μg/ml、9.45μg/ml、18.91μg/ml、37.81μg/ml、56.72μg/ml、75.62μg/ml的标准品溶液，按照要求进样分析。

以进样量浓度（μg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

可得到其标准曲线方程：y=0.5571x-0.0237，相关系数：R2=0.9996结果表明，在5ug/mL～80ug/mL范围内洛伐他汀线性关系良好。

3.3 样品溶液稳定性试验按要求制备供试品溶液。

分别在制备后放置0、2、4、6、8、10、12、14、16小时进样测定，记录图谱。

结果表明，供试品溶液的峰面积随时间增长，有减小趋势，RSD%值为1.42%，说明供试品溶液16小时内的稳定性良好。

但是为了保证结果的准确性，试验所用供试品溶液应临用新制。

3.4 重复性试验取同一充分研磨并混合混匀的样品粉末，精密称取6份，按要求制备供试品溶液，测定其含量结果。

6次含量测定结果平均值为209.5mg/100g,相对标准偏差RSD（%）=1.20%，本方法的重复性良好。

3.5 准确度试验本试验采用加标回收法。

取重复性项下混合均匀含量为209.5mg/100g的样品粉末约0.5g，共9份，分置棕色容量瓶中，另精密称取洛伐他汀对照品9.36 mg，置25ml容量瓶中，加入流动相溶解后得0.3722mg/ml的洛伐他汀标准品溶液。

分别精密吸取2.00ml、2.50ml、3.00ml（各3份），分置上述9份溶液瓶中，摇匀，滤过，取滤液，即得。

上机测定。

回收率范围99.3%～100.5%，平均回收率为99.8%，RSD为0.43%，本方法准确度较好。

此外通过调整流动相比例及更换不同型号规格的C18色谱柱后，除了主峰保留时间相对提前或延后，样品中洛伐他汀的含量测定结果无显著差异。

4结论
通过以上对所选含量测定方法的专属性、线性、重复性、溶液稳定性、回收率和耐用性等各项试验的验证，结果均符合要求。

表明所确定的含量测定方法准确，重复性良好，降脂片中洛伐他汀的含量测定。

参考文献：
[1]中华人民共和国卫生部，《保健食品检验与评价技术规范》（2020年版）；
[2]王玲，吴军林，吴清平，《红曲降血脂功能的研究及应用概况》，食品工业科技
[3] 罗仁才，孙开奇，谢申猛，韩英，赵妍平，《红曲中洛伐他汀总量的测定方法》，卫生研究，第32卷第2期，2003年 3月
[4] 赵海珍，曹坤，《红曲保健食品中洛伐他汀的含量测定研究》，《健康之路（医药研究）》2014年第01期
[5]张树丹，李海涛，《以红曲为原料保健食品中洛伐他汀的含量测定》，《中国当代医药》2012年第29期。