胶回收DNA注意事项
天根切胶回收说明书
天根切胶回收说明书
天根切胶回收试剂盒说明书
一、产品简介
天根切胶回收试剂盒是一种高效的DNA片段回收试剂盒，能够从凝胶中快速、准确地回收目的DNA片段。
该试剂盒采用独特的吸附技术，能够有效地去除凝胶中的杂质，纯化DNA片段。
回收的DNA片段可用于后续的克隆、测序、PCR等实验。
二、产品特点
1. 高效回收：能够从凝胶中快速、准确地回收目的DNA片段，回收率高达90%以上。
2. 纯度高：能够有效去除凝胶中的杂质，纯化DNA片段，提高后续实验的准确性和可靠性。
3. 操作简便：采用独特的吸附技术，无需使用有机溶剂，简化了操作步骤。
4. 稳定性好：试剂盒中的成分稳定，便于长期保存和使用。
三、使用方法
1. 准备凝胶和电泳缓冲液：将凝胶和电泳缓冲液按照要求准备妥当。
2. 切胶：按照实验要求将凝胶切成适当大小的胶块。
3. 洗涤：将切好的胶块放入离心管中，加入适量的洗涤液，充分混匀，洗涤去除凝胶中的杂质。
4. 吸附：将洗涤后的胶块放入吸附柱中，按照说明书要求进行吸附操作。
5. 洗脱：将吸附后的DNA片段进行洗脱，收集洗脱液。
6. 检测：对回收的DNA片段进行检测，如琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测。
四、注意事项
1. 使用前请仔细阅读本说明书，确保按照说明书要求正确操作。
2. 本试剂盒仅供实验室使用，请勿用于食品、药品等领域。
3. 使用过程中请注意安全，避免直接接触眼睛、皮肤和衣物等。
如不慎接触到皮肤或眼睛，请立即用清水冲洗，并及时就医。
4. 本试剂盒中的试剂和耗材均为一次性使用，用后请及时处理废弃物。
琼脂糖凝胶DNA片段回收中的常见问题
原因：洗脱液中含有乙醇
建议：洗脱前，确保柱子中乙醇已无残留乙醇。
琼脂糖凝胶DNA片段回收中的常见问来自 1、未回收到DNA片段或回收效率很低
A、原因：胶块未完全溶解
建议：为加快凝胶的溶解，应将凝胶置于55度水浴中溶解，期间不断上下颠倒，待确定凝胶完全溶解后再进行后续操作。每100 mg凝胶应加入100uL溶胶液，如果胶块过大，应将胶块切成小块，以便于凝胶溶解。
D、原因：洗脱缓冲液不合适
建议：洗脱液的pH值在7.0~8.5时，洗脱效率最高，洗脱液pH超出此范围，将会显著影响收获率，请使用试剂盒配套的Elution Buffer（pH 8.5，10mM Tris-HCl），或者使用使用pH值在此范围的ddH2O。
E、原因：洗脱缓冲液未加到离心柱中间
建议：因为在洗脱时使用较少的洗脱缓冲液，洗脱缓冲液应加在中间位置，并室温放置1~2分钟，然后再离心洗脱。另外，采用65度预热的洗脱Buffer将显著提高回收效率。
F、原因：起始回收量太少
建议：如果起始回收量很好的样品，应富集，最好使用不少于1ug的样品。对于PCR产物，应事先电泳检测产量，在进行回收操作。
2、电泳时，产物漂出点样孔
原因：洗脱时，柱子中残留乙醇
建议：在进行洗脱前，如果柱子上残留乙醇，将会影响洗脱效率，在洗脱前应再次离心，或者空气中放置几分钟，再进行洗脱。
B、原因：加入溶胶液过少
建议：对于PCR产物，或者酶切产物，应加入2倍体积的溶胶液。对于凝胶回收，每100 mg凝胶应加入不少于100uL溶胶液。对小于200bp的片段应加入5倍体积的溶胶液。
C、原因：DNA Wash Buffer 中未加入无水乙醇
胶回收
1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。
2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。
此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。
注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
3. 切碎胶块。
胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 ul进行计算。
5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer。
DR-I Buffer的加量如下表： 6. 均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热)。
此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10分钟)。
注）胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。
7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。
当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。
9. 将上述操作7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。
10. 将500 ul的Rinse A加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
11. 将700 ul的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
12. 重复操作步骤11。
13. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column 膜的中央处加入25 ul 的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。
DNA凝胶回收方法及常见问题
DNA凝胶回收方法及常见问题琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。
聚丙烯酰胺凝胶电泳片段的回收将在以后的文章中介绍，在这里我先介绍一下琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法，方便大家学习交流。
从琼脂糖凝胶中回收DNA，是一种简单不过的常规实验操作。
但是由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验――比如酶切连接、转化筛选、测序或者PCR扩增、标记乃至显微注射等等，所以这一步的操作也显得非常重要。
胶回收的质量好否直接影响后继实验的成功与否。
现今除了手工回收方法外，许多公司都开发了方便的回收试剂盒系列，但是无论借助何种方式，最基本的评定标准均包括: 回收产物质量：主要指纯度。
常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。
对于大片断DNA回收，质量还包括产物的完整性；而对于较小片断回收，质量还包括回收产物的浓度；此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。
回收率：由于上电泳样品量通常都很少，电泳过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断，提高产物得率，对于后继实验来说是非常重要的。
回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关，比如DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；又如，DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
因此，根据情况选择不同的方法是很重要的。
其他：操作方面，操作简单，快速，应用方便的方法或产品自然比较受欢迎。
如溶胶的缓冲液中添加指示剂，可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计；离心过柱就比离心沉淀要简单方便。
还有要注意载量问题，因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质都有一定的吸附限度，过量的产物吸附不了即被损失掉。
以下是我总结的常见问题，希望对大家有所帮助。
Q1：利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段？A1: 可能有以下几个原因：1. 胶块未完全溶解，溶解凝胶时应置于55℃水浴，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数,确定胶块完全溶解后再进行下一步骤;2. 胶块体积太大,应使用枪头捣碎，还不能充分溶解，则应先将其切为小块，分多次回收或选用大量型回收试剂盒；3.紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内；4. 电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH值（pH≤7.5）时可结合DNA，在低盐及高pH 值（pH≥8）条件下洗脱。
DNA胶回收
关于DNA胶回收的一些东西(2012-08-28 21:01:59)分类：资料标签：杂谈这几次做胶回收的回收率都不高，所以很就纠结啊。
逛论坛的时候发现原来中科大IGEM实验的胶回收也跟我们情况差不多，于是去看了一下他们的论坛，就把中科大师兄师姐的经验拿过来先了，希望我们的后续实验能顺利些，前面时间有点拖得久了....1.切胶时放在不吸水的PE手套上，但是PE手套一旦滑动将导致质量的改变，因为说DNA主要在琼脂糖颗粒的缝隙中，也就是TAE缓冲液里，所以吸水过强会导致DNA损失。
2.胶回收的Eluent要预热这个已经不用多说。
我们平时加入Eluent一般静置1-2min，后来在学姐的建议下我延长了静置时间，后来浓度很高的两次都是在5分钟以上，30ng/ul的那次是5分钟，51ng/ul的那次是在65摄氏度水浴中盖盖静置10分钟。
取得了很好的效果，回收浓度比较高（以前经常是10ng/ul）。
主要就这两点，尤其是第二点，个人认为第二点确实很重要。
因为我们平时会遇到片段小了挂不上（用异丙醇），片段大了洗不下来。
我们有的时候是几kb的，一般属于第二种情况，这时就应该延长加入Eluent的静置时间，以获得更高的回收率。
3.照胶一定要快，长时间的紫外照射会引起序列的突变。
4.切胶时注意把胶块切得小些，但是要切掉所有目的片段。
胶块太大不容易溶解，而且会使得浓度低，影响回收效率。
没有切干净所有片段会更加严重影响回收效率。
关于切胶和胶回收效率的关系，文献上是这么讲的：“切胶质量比较小时，对回收效率影响不大；但是切胶质量比较大时，将明显降低胶的回收效率。
”也就是说，切胶不是越小越好，但大了肯定不好，具体到我们现在的条件下，若能控制到0.15g~0.1g左右就应该没有问题了。
当然，前提是一定要把所有的目的条带切干净。
5. 关于溶胶的问题，文献中则说太长和太短都不好，推荐时间是 10min。
他们用的试剂盒和我们的不一样，绝对时间不具有可比性，生工的试剂盒说明书上写的是5~10min。
【精品】从琼脂糖凝胶中回收DNA
【精品】从琼脂糖凝胶中回收DNA琼脂糖凝胶是一种常用的生物分子分离纯化技术，它适用于分离分子大小差异较大的DNA、RNA、蛋白质等生物大分子。
在实验过程中，我们通常需要在琼脂糖凝胶中回收目标分子，接下来将以从琼脂糖凝胶中回收DNA为例，介绍琼脂糖凝胶分离和回收DNA的步骤。
I.琼脂糖凝胶电泳分离DNA1.制备琼脂糖凝胶：准备好琼脂糖粉末、TBE缓冲液或者TAE缓冲液、牛奶桶或者其他可用的模具等材料。
将适量的琼脂粉末与缓冲液混合均匀，然后煮沸并搅拌至完全溶解，待温度降至约60℃时，倒入模具内并加入DNA样品。
注意，样品需与样品量较大的样品间留有一定距离，以便于分离。
2.测量DNA迁移距离：在琼脂糖凝胶分离之后，需要用紫外线紫外检测器对每个DNA带进行测量，以确定其迁移距离。
3.切割琼脂糖凝胶：在确定每个DNA条带的位置之后，需要用刀子或切割器从琼脂糖凝胶上切下每个DNA条带，并收集在小管中备用。
切割时需要注意避免污染、损坏DNA。
1.准备回收DNA的缓冲液：一般来说，在回收琼脂糖凝胶中的DNA时，使用的缓冲液类型包括TE缓冲液、纯水、无菌去离子水等。
2.加入缓冲液并恢复DNA：将切下的琼脂糖凝胶条带投入含有缓冲液的离心管中，并在室温下静置10-15分钟，使得DNA从琼脂糖凝胶带上释放出来。
3.离心：恢复DNA的琼脂糖混合物取出后，需要进行离心处理，以使得DNA沉淀到离心管底部。
离心速度一般为12000ppm，离心时间15min。
4.去除上清：离心完毕之后，将上清取出，只保留离心管底部的沉淀。
上清可以用于其他实验。
5.重悬：加入恰当的缓冲液重悬DNA沉淀，例如TE缓冲液、纯水等。
如果需要，可以用比较温和的方法来提取DNA。
6.测量DNA浓度：用分光光度计或者其他光谱仪器，测量DNA的吸收光谱，从而确定DNA的浓度，以便于后续实验的操作。
以上就是从琼脂糖凝胶中回收DNA的步骤。
整个操作需要尽可能在无菌操作室中进行，以避免污染影响结果。
切胶回收DNA
切胶回收DNA（博迈德琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒DR01）
**WB液使用前加入指定量的无水乙醇；
**尽量使胶中的缓冲液减少。
当PH值《7.5时，吸附回收DNA效率最高，正常情况小，溶胶液依旧保持黄色时，说明PH值正常，如果变成橘红或淡紫色说明PH值偏高，可在胶充分溶解时，加入3M醋酸钠5-10ul
实验步骤：
1.40ulPCR反应液琼脂糖凝胶电泳。
在紫外光下切目的片段。
尽量减少胶的体积；
2.将切下的胶放入1.5ml离心管中，称重；
3.加入3倍体积的溶胶液，如果胶的浓度大于2%，则应加入6倍溶胶液DD;
4.56度水浴10分钟至胶完全溶解，2-3分钟涡旋震荡一次加速溶解；
5.将溶解液EC吸附柱中，吸附柱放入收集管中，室温放置1min，12000rpm离心30-60sec，弃收集管中离心液；
6.加入500ul漂洗液WB，12000rpm离心30sec，弃离心液；
7.重复6
8.将吸附柱EC放入空离心管中，12000rpm离心2min，尽量出去漂洗液，以免残留乙醇抑制下游反应；
9.将EC吸附柱放入一个干净的离心管中，在吸附柱中间部位加入50ul洗脱缓冲液EB，（使用前在65-70度水浴中加热效果更好），室温放置2min，12000rpm离心1min，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心1min；
10.取2ul离心液电泳，估计DNA量（250bp marker：5ul，1000bp的相当于150ng，余相当于50ng）。
琼脂糖凝胶回收纯化DNA标准操作规程
琼脂糖凝胶回收纯化DNA标准操作规程（编号：013）
1、目的及适用范围
该SOP用于分离纯化目的DNA片段。
2、主要仪器及试剂
台式离心机、微量移液器、binding buffer、wash buffer、elution buffer，各试剂均来自胶回收提取试剂盒。
3、实验步骤
3.1 琼脂糖电泳，将特异电泳带用刀切下放入到离心管中，称琼脂糖带的重量；
3.2 按照每100mg加400µL的量加入binding buffer，放入到离心管振荡器中，45℃～55℃温育振荡，直到所有的琼脂糖都溶解（大概要5min）；
3.3 取出纯化柱，将上述溶解液转移至柱中，室温下放置2min，8000rpm 离心1min，弃离心管中的液体，将纯化柱放回离心管中；
3.4 加500µL的wash buffer至柱中，8000rpm 离心1min，弃管中的溶液；
3.5 重复操作4步的操作1次，最后将纯化柱放入EP管中10000rpm离心30s，除去残余的wash buffer；
3.6 将纯化柱放入一个新的离心管。
加30~40µL H2O或者elution buffer至纯化柱膜的中央，在37℃或50℃下放置2min，10000rpm离心1min洗脱DNA，将离心管中的DNA溶液放在-20℃保存。
4、注意事项
若想要不电泳而直接纯化DNA，只需要在第2步中按100µL液量加400µL的binding buffer,其余的步骤不变。
30。
凝胶DNA回收试剂盒使用说明
DNA凝胶回收试剂盒50TCat#：GV-GX-50本试剂盒可从各种浓度琼脂糖凝胶中回收DNA片段，不含盐、蛋白质、RNA等杂质。
500bp以上片段，回收率80%以上，200bp～500bp回收率70%以上，100bp～200bp回收率60%。
可回收单链、双链DNA 片段以及环状质粒DNA。
本试剂盒采用一种独特的平衡液处理吸附膜，该试剂能够激活硅基质膜，改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，专一吸附DNA的作用，同时还可消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。
1试剂盒组成、储存、稳定性成分规格注意事项Buffer GA60mlBuffer BL12mlWash buffer13ml使用前加入52ml无水乙醇Elution4ml离心柱50个单个最大吸附量20μg1.5ml离心管50个说明书1份Buffer GA：溶胶液。
室温密闭贮存。
若出现沉淀，应于65℃温浴溶解并冷却至室温后再使用。
Buffer BL：平衡液，平衡液的加入能够激活硅基质膜，改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，专一吸附DNA的作用，同时还可消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。
Wash buffer：去盐液。
使用前，第一次使用前根据瓶上指定的体积加入无水乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。
Elution：10mM Tris-HCl，pH8.0。
室温密闭贮存。
二、注意事项1：将洗脱液或双蒸水加热至65℃，有利于提高洗脱效率2：DNA呈酸性，建议在10mM Tris-HCl，pH8.0洗脱液中保存3：用平衡液处理过的柱子最好当天使用，放置时间过长会影响效果4：在步骤1中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短溶胶时间（线型DNA长时间暴露在高温条件下易水解），从而提高回收率。
勿将含有DNA的凝胶长时间暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA造成的损伤。
三、实验前试剂准备Wash buffer第一次使用前加入52ml无水乙醇。
dna胶回收实验技术总结
dna胶回收实验技术总结DNA胶回收实验技术主要用于从凝胶中分离之前所分离的DNA片段。
这种技术非常重要，因为它允许研究人员对这些DNA片段进行更多的实验，如测序、限制性酶切等。
这篇文章将总结DNA胶回收实验中使用的主要技术和注意事项。
1. DNA凝胶：DNA凝胶通常由琼脂糖和缓冲液（如TAE或TBE缓冲液）组成。
在加热和冷却之后凝胶会形成。
使用的琼脂糖的浓度和缓冲液的pH值能够影响凝胶的孔径大小。
因此，为了得到不同大小的DNA片段，可以通过改变琼脂糖浓度或缓冲液pH值来制备不同的凝胶。
2. DNA胶切：DNA片段可以通过限制性酶切生成。
这时需要先将DNA样品加入切割酶，然后在37℃的恒温下进行反应。
反应后，DNA片段的大小可以通过凝胶电泳进行检测。
3. DNA电泳：DNA电泳是一种将DNA片段按照大小分离的技术。
首先需要将DNA样品加入凝胶槽中，然后通过通电来将DNA片段转移到电极上。
电泳的时间和电流大小可以根据不同应用需要而进行调整。
4. DNA可视化：DNA片段可以通过荧光染料（如ETHIDIUM BROMIDE）进行可视化。
荧光染料在紫外线下发出荧光，在电泳之后将凝胶放入紫外线转移盒中进行照射即可看到DNA片段的分布。
5. DNA胶回收：DNA胶回收可以通过两种方法实现。
一种是通过直接将DNA片段从凝胶中切出，另一种则是通过使用杂交膜。
对于大分子量的DNA片段，使用直接切割的方法效果较好，而对于小分子量的DNA片段，则建议使用杂交膜。
6. 直接切割法：直接切割法是将琼脂糖梯度离心管放在电影胶片上，通过紫外线照射定位所需片段的位置。
然后使用刀、注射器等工具在凝胶中切开，并将DNA片段取出。
7. 杂交膜法：杂交膜法是将酸性纸或硝酸纤维素薄膜放在凝胶上方，使其与DNA片段杂交，然后将薄膜剪下。
从薄膜上可以提取出DNA片段。
DNA胶回收实验需要注意以下几个点：1. 实验过程中一定要注意消毒，以避免外界的污染对结果产生影响。
胶回收原理及注意事项
DNA的凝胶回收一、琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法介绍：1.柱回收试剂盒：可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带切下，用溶解Buffer彻底溶解，上包埋有纯化填料的纯化柱，离心，再洗涤一次，离心后用洗脱缓冲液洗脱。
全程不过10多分钟，得到的产物溶液可以直接用于后继实验。
这个方法几乎不需要什么技巧就能得到稳定的结果，也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。
但是这个方法不适合用于大片段的回收。
2.玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒：这个方法比前面的方法更为灵活，可以根据每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量，使得实验不受限于柱子的载量，也不会造成浪费。
前面的操作步骤和上者一样，将电泳凝胶的条带切下，B uffer溶解，(区别在于这里)加入纯化填料吸附混合，快速离心沉淀去上清，洗涤沉淀后，干燥沉淀，最后用洗脱液纯化介质中吸附的片段释放出来，离心，取上清，就是回收的产物。
这个方法适合各种不同大小的片段，特别是大片段的回收，但是操作就较前者复杂一些，涉及到多次离心沉淀和取上清，有可能会误吸了微量的沉淀;另外干燥的程度也有点技巧，干过了不好洗脱，没干透又影响结果。
后来的改进版本有将混合了纯化介质后的凝胶溶解液加入到一种离心过滤柱上，这种柱子不带纯化填料，只有一层过滤膜，离心过滤后，填料在柱子里，溶液被甩掉，这样就避免了上述的问题。
3.低熔点琼脂糖：传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。
这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂，由于乙醇沉淀需时较长，而且低熔点琼脂糖价格较高现在用的人已经不多了，除非用于大片段的回收。
4.透析带电洗脱法。
切下的条带放在充满TAE的透析带中再电泳一段时间，让DNA走出凝胶，走向溶液中，再反向电泳一会儿，将附在透析带上的DNA赶回溶液中，取溶液部分，再用TAE洗洗袋子，合并溶液后传统方法酚抽沉淀，那块胶通常还要再染色看看残留。
DNA凝胶回收操作流程
DNA凝胶回收操作流程
1.材料准备
-手套、口罩和实验室衣物等个人防护装备
-手术刀、多通道移液器和微量离心管等实验仪器
-DNA凝胶电泳仪和紫外线照射器等辅助设备
-DNA回收缓冲液（如TE缓冲液）
2.准备凝胶切割
-在凝胶电泳仪中运行所需检测的DNA样品，通过紫外线照射器观察凝胶图像
-使用手术刀在目标DNA片段两侧切割凝胶，避免接触电极或其他混杂的凝胶
-注意不要弄错目标片段的位置，确保准确地切割
3.DNA片段回收
-使用多通道移液器将凝胶片段切割下来，放入含有DNA回收缓冲液的微量离心管中
-注意避开凝胶上颜色较深的区域，因为这些区域可能含有大量有机染料或其他杂质
- 尽量将回收片段的重量控制在100-500ng以内，以避免后续实验中的浓度问题
4.DNA溶解和回收
-将含有凝胶片段的离心管置于高温、高速离心机中，使凝胶片段充分地溶解
-离心后，将上清液转移到一个新的微量离心管中，避开残留的凝胶碎片或杂质
5.DNA测量和纯化
-使用比色法或其他DNA定量方法，对上清液中的DNA样品进行浓度测量
-根据实验需要，可使用DNA纯化试剂盒或其他纯化方法，进一步提纯DNA样品
6.质检和保存
-可使用DNA电泳或PCR等方法，检测纯化后DNA样品的质量和纯度-将DNA样品保存在-20°C或更低温度的冰箱中
在DNA凝胶回收操作中，需要注意以下几个关键点：
-高度的卫生和无菌操作，以避免DNA样品被污染
-确保凝胶切割和DNA回收操作在无菌环境中进行
-尽量减少DNA样品的损失和杂质的干扰，以提高回收率和纯度
-注意一些可能的潜在的问题，如DNA降解、异物污染等，并尽可能做好记录并及时解决。
琼脂糖凝胶 dna 回收试剂盒说明书
琼脂糖凝胶货号：D1200规格：50T/100T保存：常温干燥保存，复检期为一年。
试剂盒内容：产品说明：本试剂盒采用可以高效、专一结合的DNA硅基质材料和独特的缓冲液系统，从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质、其他有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。
可回收100bp-10kb大小的片段，回收率大于80%（小于100bp和大于100kb的DNA片段回收率为30-50%）。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等试验。
注意事项：在使用本试剂盒前请阅读此注意事项。
1.电泳前最好更换成新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2.如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
3.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
4.回收小于100bp和大于100kb的DNA片段时，应加大溶胶液的体积，延长吸附和洗脱的时间。
5.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越小，回收率越低。
6.如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤:（使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
）1、琼脂糖凝胶电泳后，将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入干净的离心管中，称取重量。
2、向胶块中加入3倍体积溶胶液（如果凝胶重为0.1g，其体积可视为100ul,则加入300ul溶胶液），50-55℃水浴放置10min，期间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
注意：溶胶时，如果溶胶液变为红色（正常情况下为淡黄色），可向含有DNA的胶溶液中加入10-30ul 3M醋酸钠（pH5.2）将胶溶液调为淡黄色，否则将会影响DNA与吸附柱的结合，影响回收效率。
3、将上一步所得溶液加入一个吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。
dna凝胶纯化回收的注意事项
dna凝胶纯化回收的注意事项
1. 嘿，一定要选对合适的凝胶呀！就像你挑衣服得挑合身的一样，不然可没法完美回收哦！比如说，要是选的凝胶不适合样本，那不是白折腾啦。
2. 回收过程得细心啊！这可不能马虎，就跟照顾小婴儿似的，得时刻关注着。
要是一不小心操作失误，那不就糟糕啦，之前的努力可都白费咯！
3. 注意操作的环境呀！得干净、整洁，别像个乱糟糟的杂物间。
你想想，要是环境脏兮兮的，能保证回收的质量吗？肯定不行啊！
4. 量的把控要精准哦！就好像做菜放盐一样，多了少了都不行。
如果加的试剂太多或太少，那回收效果肯定大打折扣呀，这可不行呢！
5. 操作手法要温柔点呀！这可不是粗暴对待就能搞定的。
好比对待易碎的宝贝，你得轻拿轻放呀，不然损坏了怎么办呢？
6. 每次操作完都要好好检查一遍呀！别马马虎虎就过去了。
就像做完作业要检查一样，不检查怎么知道有没有问题呢？最后我想说，这些注意事项真的很重要啊，一定要认真对待，这样才能做好 dna 凝胶纯化回收呀！。
凝胶DNA回收试剂盒使用说明
凝胶DNA回收试剂盒使用说明一、试剂盒组成1.碱性ELUTION缓冲液：用于回收DNA片段。
2.DNA绑定胶柱：用于吸附DNA片段。
3.洗涤缓冲液：用于去除琼脂糖凝胶残渣和其他杂质。
4.电子式试剂盒设备：用于快速洗脱DNA片段。
二、凝胶DNA回收试剂盒使用步骤1.准备工作：a.将碱性ELUTION缓冲液加热至65℃，并保存在试剂盒中。
b.手套和面具是使用过程中必需的，以确保实验环境的干净。
c.严格遵守实验室的安全操作规程。
2.凝胶切割：a. 切割需回收的DNA片段：将琼脂糖凝胶切割为片段大小约为50-5000 bp的目标DNA。
b.将切割好的琼脂糖凝胶片段放入微量离心管中，注意不要弄混不同大小的DNA片段。
c.记录每个DNA片段的位置和大小。
3.DNA回收：a.将切割好的琼脂糖凝胶片段放入DNA绑定胶柱中。
b.将绑定胶柱放入收集管中，通过离心将DNA片段吸附到胶柱上。
c.倒掉废液，并使用洗涤缓冲液洗脱胶柱上的残驻琼脂糖凝胶和其他杂质。
重复此步骤1-2次以确保彻底洗脱。
4.DNA洗脱：a.将洗柱放回空的收集管中。
b.加入预热的碱性ELUTION缓冲液（65℃），封闭试管盖，并放入电子式试剂盒设备中。
c.按照设备操作说明进行启动，并设置相应的洗脱温度和时间。
d.在洗脱完成后，将洗脱液转移到新的离心管中。
可以使用适当的方法（如乙醇沉淀或其他纯化方法）进一步纯化DNA。
5.质量检测：a.使用电泳进行质量检测，以确认回收的DNA片段大小和纯度。
b.如果需要，可以定量将DNA溶液保存在冰箱中以备后续实验使用。
三、注意事项1.使用前确保熟悉试剂盒的组成和使用步骤。
2.使用过程中务必佩戴手套和面具，确保操作环境的洁净。
3.严格按照试剂盒的说明进行操作，并遵循实验室的安全操作规程。
4.需要注意的是，琼脂糖凝胶切割和回收过程极易受到外源DNA污染，因此要确保实验环境的洁净，并尽量避免不必要的接触。
5.回收的DNA片段应尽快进行下一步的实验处理，以避免DNA降解和污染。
切胶回收注意事项
胶回收DNA注意事项胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA 污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
胶回收dna注意事项
胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
凝胶回收
AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中回收多至8μg DNA（70bp-10Kb），回收率为60-85%。
琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A 溶液)中熔化，其中的保护剂能防止线状DNA 在高温下降解，然后在DE-B 溶液的作用下使DNA 选择性结合到膜上。
纯化的DNA 纯度高，并保持片断完整性和高生物活性，可直接用于连接、体外转录、PCR 扩增、测序、微注射等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性2ml离心管1.5ml离心管说明书Buffer DE-A：凝胶熔化剂，含DNA 保护剂，防止DNA 在高温下降解。
室温密闭贮存。
Buffer DE-B：结合液（促使大于70bp 的DNA 片段选择性结合到DNA 制备膜上）。
室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液，使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（用100%乙醇或95%乙醇），混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：洗脱液，室温密闭贮存。
二、注意事项1. Buffer DE-A(含有β-巯基乙醇)、Buffer DE-B 和Buffer W1 含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
2. 在步骤1 中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间（线型DNA 长时间暴露在高温条件下易于水解），从而提高回收率。
勿将含DNA 的凝胶长时间地暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA造成的损伤。
3. 在步骤2 中凝胶必须完全熔化，否则将严重影响DNA 回收率。
4. 将Eluent 或去离子水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。
5. DNA 分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH 7.0-8.5 洗脱液中保存。
三、实验准备1. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
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胶回收DNA注意事项
①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，
其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项
1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。
3. 关于防护，在一般有机玻璃后就足够了，戴上防护面具以保护眼睛，如果戴树脂眼镜就可以了。
要是非常害怕紫外照射，或者对于胶有特殊要求，例如要求不含EB，可以采用点marker和带刻度的尺子一起照相的方法来确定目的条带在胶上的位置进行切胶。
4. 按照正常程序点marker跑胶，然后切下有marker的胶，EB染色，紫外灯下与带刻度的尺子一起照相。
由于要回收的带与marker间的相对位置已知，根据尺子来衡量未染色胶上目的带的位置即可。
如果觉得很难判断，可以直接在marker边点少量的样，这样位置就容易确定了。
胶回收
一. 提高胶回收量的办法：
1) 增加电泳时的上样量。
2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。
3) 切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。
4) 把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。
5) 溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。
6) 胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L的NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。
7) 加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需10分钟），以使乙醇充分挥发。
最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30-50μl洗脱液洗
脱（不能太少，否则无法浸湿膜反而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充分洗脱结合在膜上的DNA。
9) 可以在加入洗脱液之后，可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱，或用封口膜密封4度过夜，第二天再离心回收，效果不错。
10) 将离心后的洗脱液加回吸附柱，再次离心。
二. 几种PCR 产物回收的详方法和步骤
1) 普通胶回收
如果要胶回收，最好还是用试剂盒，方便，回收率也略高，实在要手工回收，可以切胶后加入3倍体积TE，水浴熔化后，酚、酚／氯仿抽提干净，乙醇沉淀即可。
另外好像还有冷冻法，没作过，不是很清楚。
2) 从低熔点凝胶回收DNA
纯化DNA片段加与凝胶体积相等的TE（10mmol/l Tris-HCl pH8.0，0.1mmol/l EDTA），置65℃水浴5分钟保温，使凝胶完全溶解。
待放至室温，加等量酚（TE饱和，TE封在上层，取下层酚），轻轻混匀（不用混匀），12000rpm，3分钟离心。
反复1-2次。
取上层液，加0.1体积3mol/L醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积无水乙醇，进行乙醇沉淀。
将纯化的DNA加适量TE溶解，测定含量，备用（可用于目的基因结构分析，探针制备等）。
3) 扩增特异性好的PCR回收
如果PCR扩增特异性好，只是简单的PCR产物纯化回收，可以在PCR 产物中加入50ug／ml 的蛋白酶K，37度1h，酚／氯仿抽提一次，氯仿抽提一次，上清加入0.1体积的醋酸钠，2.5体积的无水乙醇沉淀回收。
三. 不需胶回收就可直接连接的方法
1) 低温冷冻析出法
跑电泳时用低熔点的agarose胶，跑到一定时候，将目的条带所在的
那一段胶切下，尽量切干净，让核酸直接暴露在胶的表面，并且，把底下没有脱氧核酸的那点胶也尽量切掉，然后放入1.5ml EP管中，然后放在负75度冰箱中10－30分钟，接着1，300rpm离心5－10分钟，取10ul上清，加入连接体系中。
将其余的液体也吸出，储存在另一个管子中，做好标记，放在－20度备用。
2) 酶切后的直接连接
在你酶切后可以直接的加入连接酶和另外的片断进行连接是可以筛选出连接好的片断的.
四、一些注意事项
1.电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源DNA污染。
2.切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。
3.关于防护，在一般有机玻璃后就足够了，戴上防护面具以保护眼睛，如果你戴树脂眼镜就可以了。
4.琼脂糖对回收率有一定影响，如果琼脂糖较多，可以增加溶胶液，保证体系盐浓度。
影响回收率的因素主要是柱子填料必须在适宜的缓冲环境中（如果用柱子的话）。
对于小于１００ｂｐ的片段回收，可加至30%异丙醇。
5.如果是用PAGE回收，用水或TE溶解，枪头捣碎，过夜浸泡，即可。
当然你要将100bp在胶中位置定好切下。
已标记的探针用X片，未标
记的用EB。
6.选用回收效率较高的柱子，比如进口的Qiaquick spin column。
7.参照分子克隆用低熔点胶回收。
除低熔点凝胶回收法外，如用一般凝胶可用透析带短暂电泳，离心管低部加玻璃棉，高速离心等方法回收DNA片段。
附注：
1．影响DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素：
1)DNA分子大小迁移速率U与logN成反比（N为碱基对数目）。
分子大小相等，电荷基本相等（DNA结构重复性）。
分子越大，迁移越慢。
等量的空间结构紧密的电泳快（超螺旋>线性DNA）
2) 琼脂糖浓度：logU=logU0 Krt 胶浓度，U为迁移率，U0 为DNA的自由电泳迁移率，t为胶浓度，Kr为介质阻滞系数。
不同的凝胶浓度，分辨不同范围的DNA
Agarose：0.5%：1-30 kb；0.7%：0.8-12 kb
1.2%：0.4-7 kb；1.5%：0.2-3 kb.
3)DNA构象：一般迁移速率超螺旋环状>线状DNA>单链开环。
当条件变化时，情况会相反，还与琼脂糖的浓度、电流强度、离子强度及EB 含量有关。
4)所加电压：低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。
使分辨效果好，凝胶上所加电压不应超过5V/cm
5)碱基组成与温度：一般影响不大4 -30 ℃
6)嵌入染料的存在：降低线性DNA迁移率，(不提倡加在电泳液中)
7)电泳缓冲液（0.5×TBE）的组成及其离子强度影响DNA的迁移率，无离子存在时，核酸基本不泳动，离子强度过大产热厉害，熔化凝胶并导致DNA变性，一般采用1×TAE，1×TBE，1×TPE（均含EDTA pH8.0）。
2．溴化乙锭（EB）为致癌剂，操作时应戴手套，尽量减少台面污染。
3．电泳指示剂：核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚蓝（bromophenol blue, Bb）呈蓝紫色；二甲苯晴（xylene cyanol, Xc）呈蓝色，它携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中的的迁移率比溴酚蓝慢。