胶回收
胶回收
除了选择合适的方法外,实验中还要注意以下几点:(1)防止抽提过程中污染DNA酶与回收片段接触的试剂与器皿等都应进行灭菌(酶)处理,即使是不能用干热或湿热法灭菌的器皿也要用乙醇浸泡以灭杀活菌与DNA酶,不然可能发生回收片段部分降解的现象,有时甚至一无所获.即使是轻微的降解反应——当发生在粘性末端时也会导致严重的连接困难.(2)紫外照射选择长波段回收过程往往需在紫外等监测下进行,与一般观察电泳结果不同的是这时应用长波紫外灯.因为短波紫外线(254nm)会引起DNA的断裂或是形成TT二聚体,前者会使以后的连接与转化等实验失败,后者可能造成基因突变,给克隆工作带来麻烦.即使是使用了长波紫外照射,回收DNA时也要尽量短时照射,避免连续长时间照射.(3)实验操作要轻柔特别在处理较大片段时应防止机械剪切作用DNA对的破坏,如吸取液体,转动离心管等操作均应缓慢,轻柔.综上所述,只有在合适的回收方法基础上注意具体操作步骤是才能有效回收所需片段,为以后的酶切,连接,标记等工作打下良好基础.3 实验步骤一、试剂盒法(Kit回收法,以上海申能博彩生物科技有限公司生产的试剂盒为例)(1)从电泳板上切割含目的DNA片段的凝胶块(割胶尽可能的小,提供后续回收效率)(2)凝胶称重后并将其放入1.5ml管中,将其适当切小,加速溶解.每100mg凝胶加入400μl solution SN.(若称重省略,一般加入400μl SN)(3)凝胶溶解:55-60℃,保温5-10分钟,每2分钟混匀一下,使凝胶溶解,胶完全融化后每400μl solution SN中加入solution B 100μl,混匀.(4)将3S柱装入2ml洗管,将上述混合液转移至3S柱,室温放置2min.室温10 000 rpm离心1分钟,稳定45秒.(5)取下3S柱,倒掉收集管中的废液,将3S柱放入同一收集管中,加入600μl Wash Solution,室温10 000 rpm离心1分钟.(6)重复步骤5一次.(7)取下3S柱,倒掉收集管中废液,将3S柱放入同一收集管中,室温10 000 rpm离心2分钟.(8)将3S柱放入新的离心管中,在3S柱子膜中央加30μl ddH2O,不加盖室温放置2分钟.(9)盖上离心管,室温10 000 rpm离心1分钟,离心管中的液体即为回收的DNA片段.胶回收一. 提高胶回收量的办法：1) 增加电泳时的上样量。
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理首先，将含有目标DNA片段的琼脂糖凝胶切割出来。
这可以通过电泳将DNA片段从DNA混合物中分离出来，然后在紫外灯下观察到DNA片段的迁移带。
然后，将切割的琼脂糖凝胶用试剂盒提供的缓冲液进行均质化处理。
均质化后的琼脂糖凝胶中含有目标DNA片段。
接下来，使用离心机将均质化后的琼脂糖凝胶离心。
离心的目的是将琼脂糖凝胶上的DNA片段分离出来。
DNA片段会沉积到离心管底部的沉淀中。
上清液中则只含有琼脂糖凝胶、缓冲液和其他杂质。
然后，将离心管中的上清液去除。
去除上清液的目的是除去琼脂糖凝胶的残余和其他杂质，以便纯化DNA片段。
最后，向离心管中加入酶切缓冲液和蛋白酶。
酶切缓冲液包含酶切DNA片段所需的盐和缓冲成分，以及一些防止核酸降解的物质。
蛋白酶则会降解琼脂糖和与其结合的蛋白质。
在将酶切缓冲液和蛋白酶加入后，离心管需要在适当的温度下进行酶切反应。
酶切反应的目的是分解凝胶中的琼脂糖和与其结合的蛋白质，从而释放出目标DNA片段。
在酶切反应完成后，离心管需要再次进行离心，以将琼脂糖和其他残留物沉淀到离心管底部。
上清液中则含有纯化后的DNA片段。
最后，将离心管中的上清液转移至干燥消化DNA纯化膜（试剂盒中提供），并根据试剂盒的说明进行后续的DNA回收操作。
根据不同试剂盒的要求，DNA可以通过洗涤、低温离心或其他方法进行最终的回收。
总的来说，胶回收DNA试剂盒的原理是通过离心法和蛋白酶酶解法将凝胶上的目标DNA片段回收，以获得纯化后的DNA样品。
这一方法简单有效，可以应用于分子生物学和生物医学研究中的DNA分析和操作。
PC产物的回收与鉴定
PC产物的回收与鉴定PCR产物的回收（胶回收试剂盒）1、胶回收的目的（1）去除非特异性扩增的产物（2）去除多余的底物（3）去除多余的Taq酶（4）得到目的片段2、胶回收的过程（1）切胶：紫外下切胶，称重。
之后用枪头将胶块捣碎。
切胶的刀片最好选用一次性刀片，实验台等也尽可能用乙醇擦拭干净。
可通过空EP管与装胶EP管质量的差值计算胶的质量。
注意切胶时尽可能避免切到条带外的凝胶，且避免紫外时间过长。
别忘记胶条有厚度，前后多余的部分也尽量切除。
如果感觉手感不好，可以试试切胶神器：（2）溶胶：每1mg胶加入1μL膜结合液（MB），按比例1:1加入MB，55℃水浴溶解。
每1—2min震荡混匀，待溶解后至少在水浴中保持1—2min，保证胶块完全溶解。
在电泳过程中，DNA会与大分子的多糖紧密结合，凝胶的种类和质量不同，DNA与之结合力也不同，只有凝胶充分溶解DNA才能充分释放。
否则，凝胶将与DNA一起沉淀下来，洗脱后将影响回收结果的纯度。
（3）结合：将溶胶转移至纯化柱内，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将纯化柱重新插回收集管中。
胶块完全溶解后最好将胶液温度降至室温再上柱，因为纯化柱在温度较高时结合DNA的能力较弱。
离心时注意对称放置离心管。
（4）漂洗：向纯化柱正中加入600μL漂洗液（预先加过无水乙醇），12000rpm离心30s，去除废液。
重复一次后，将纯化柱开盖离心2min，彻底去除残余漂洗液中的乙醇。
纯化柱正中为硅基材料，在高盐环境下能够吸附DNA，在低盐环境下能够释放DNA。
漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR等实验。
（5）洗脱：将纯化柱置于1、5mL离心管中，向纯化柱正中加入30μL洗脱缓冲液或无菌水，放置1min后，12000rpm离心1min，洗脱DNA。
务必将洗脱缓冲液或无菌水加入纯化柱正中，若沾在管壁上，一定要震动离心管，使液体滑落到管底，以便被纯化柱吸收。
（6）保存：将获得的DNA片段于-20℃保存，或直接用于后续实验。
切胶回收的原理
切胶回收的原理咱来聊聊切胶回收这事儿。
这就像是从一堆宝藏里挑出咱想要的那一件宝贝，然后把它单独拿出来好好保存起来。
先说说凝胶电泳吧。
想象一下，各种大小的分子就像一群小伙伴在参加一场马拉松比赛，跑道就是琼脂糖凝胶。
那些小的分子啊，它们身子轻，跑起来就快，能在凝胶里跑得老远；而那些大的分子呢，就像背着重重行囊的人，跑得慢，没跑多远就被落下了。
这样一来，不同大小的分子就按照自己的速度在凝胶里拉开了距离，形成了一条条不同的条带。
这就好比是小伙伴们按照不同的速度在跑道上分散开来，各自在自己的位置上。
然后呢，咱就看到了那凝胶里的条条带带，这里面就有我们感兴趣的那部分。
这时候切胶回收就登场了。
就好像我们在那跑道上，看到了那个我们一直在找的小伙伴，然后把他所在的那一小段跑道给切下来。
那凝胶里的目标条带就像是藏着宝藏的那一小块地方。
那切下来的胶块里可都是宝贝啊。
可是怎么把这宝贝拿出来呢？这就涉及到切胶回收的核心原理啦。
有一种办法呢，是利用溶胶液。
这溶胶液就像是一个超级魔法溶剂。
把切下来的胶块放到溶胶液里，就像把那藏着宝贝的小盒子放到一个能打开它的魔法池子里。
溶胶液会把凝胶慢慢溶解掉，那些原本被困在凝胶里的DNA分子就被释放出来了。
这就好比是把宝贝从那个锁住它的小盒子里解救出来了。
还有一种情况呢，是和吸附有关的。
就像小磁石吸引小铁屑一样。
有些材料可以专门吸附DNA分子。
当把切下来的胶块处理后，那些DNA 分子就被吸附到特定的材料上了。
这时候其他的杂质就被留在一边了，就像把沙子和金子分开一样。
然后再通过一些特殊的溶液把吸附着的DNA 分子从材料上洗脱下来，这样就得到了比较纯净的我们想要的DNA分子啦。
在这个过程中，温度有时候也很关键。
就像不同的花朵需要不同的温度来生长一样。
合适的温度能让溶胶的过程更顺利，也能让吸附和洗脱的效果更好。
如果温度不合适，就像花儿在不合适的温度下长不好一样，切胶回收的效果可能就会大打折扣。
咱再从一个更形象的角度看。
切胶回收注意事项
切胶回收注意事项
以下是 6 条关于切胶回收注意事项：
1. 千万要选对工具啊！就像你去砍柴不能拿个小勺子一样，切胶得用合适的刀片啊。
比如你要是用个钝的不行的刀片去切，那能切得动吗？肯定不行呀！所以选择锋利的工具很重要，可别小瞧这个哦。
2. 切胶的时候可得细心点哟！这可不是开玩笑的，你想想，要是马马虎虎的，把需要的部分没切好或者切坏了，那不就白忙活啦！就好比搭积木，小心翼翼才能搭得稳当，对吧。
3. 做好防护措施呀！难道你不怕胶沾到手上或者其他地方吗？戴手套、穿实验服，这些都要准备好呀！不然万一沾到皮肤上，那多麻烦呀！
4. 操作环境要注意呀！你总不能在乱糟糟的地方切胶回收吧，就像你吃饭也不会在垃圾堆旁边吃呀。
找个干净整洁的地方，才能保证操作顺利呀。
5. 控制好力度啊！别太使劲了把胶都压坏了，也别太轻了切不下来。
就像骑自行车，太用力踩会累，太轻了又不走，得掌握好那个度。
6. 切完之后要妥善处理呀！别随手一扔就不管了。
就像你玩完玩具要收好一样，把切胶后的东西整理好，该放哪里放哪里，这样下次用起来也方便呀！
我觉得切胶回收一定要谨慎仔细，每个步骤都不能马虎，不然很可能前功尽弃呀！。
胶回收
1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。
2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。
此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。
注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
3. 切碎胶块。
胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 ul进行计算。
5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer。
DR-I Buffer的加量如下表： 6. 均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热)。
此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10分钟)。
注）胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。
7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。
当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。
9. 将上述操作7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。
10. 将500 ul的Rinse A加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
11. 将700 ul的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
12. 重复操作步骤11。
13. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column 膜的中央处加入25 ul 的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。
胶回收原理
胶回收原理
胶回收是一种回收和再利用废旧橡胶的过程，包括了废旧轮胎、废胶管、废胶片和其他废橡胶制品。
胶回收原理如下：
1. 收集和分类：收集各种废旧橡胶制品，按照材质、颜色和硬度等特点分类。
2. 破碎和粉碎：将收集的废旧橡胶制品进行破碎和粉碎，使其成为适合进行加工和再利用的颗粒状物质。
3. 加工和制备新的产品：将粉碎后的橡胶加工成各种新产品，如橡胶地板、橡胶密封圈、橡胶管等。
4. 热加工和再生：将废旧橡胶加热处理，使其软化并转化为可再生性的橡胶物质。
这些再生物质可以用于制备新的橡胶制品。
5. 环保和节能：胶回收可以减少废弃橡胶制品对环境的污染，降低对原材料的需求，节约资源和能源。
总之，胶回收原理是将废旧橡胶制品进行分类、破碎、粉碎、加工和再生，以达到节约资源、环保和节能的目的。
丁苯橡胶回收方法
丁苯橡胶回收方法橡胶是一种重要的工业原料，广泛用于汽车轮胎、工业胶管、橡胶板、鞋底等。
而丁苯橡胶是一种特殊的橡胶，具有优异的抗老化、抗水解和耐油性能，被广泛用于汽车领域。
然而，随着橡胶制品的大量使用和生产，废弃橡胶的处理问题也越来越凸显。
为了减少资源浪费和环境污染，丁苯橡胶的回收和再利用变得尤为重要。
丁苯橡胶回收的方法有很多种，包括机械回收、化学回收和能源回收等。
下面将介绍几种常见的丁苯橡胶回收方法。
机械回收机械回收是一种比较常见的丁苯橡胶回收方法，主要通过物理力量将废弃橡胶进行粉碎、破碎和分离，最终得到可再利用的橡胶颗粒。
机械回收的流程包括废橡胶的预处理、粉碎、破碎、筛分和再生橡胶的生产。
在粉碎和破碎过程中，可以采用橡胶粉碎机和橡胶破碎机等设备，将废弃橡胶进行破碎。
然后再通过筛分设备将破碎后的橡胶颗粒进行分类，得到不同粒径的再生橡胶颗粒。
最后，再通过再生橡胶的生产设备将再生橡胶颗粒进行加工，制成再生橡胶制品。
化学回收化学回收是利用化学方法将废弃橡胶进行分解、再生的一种回收方法。
化学回收的过程主要包括废橡胶的预处理、溶解、分离和再生。
在溶解过程中，可以采用溶剂的浸泡、高温热解等方法将废橡胶分解成溶液。
然后通过分离设备将橡胶溶液进行分离，得到可再利用的再生橡胶。
化学回收的优点是能够将废弃橡胶进行高效、全面的回收，但是对设备要求较高，成本也较高。
能源回收能源回收是一种将废弃橡胶作为能源利用的回收方法。
废弃橡胶可以作为垃圾焚烧的燃料，通过热能转化为能源。
而且废橡胶可以进行热解等处理，得到燃料油、煤焦油和焦炭等能源产品。
能源回收能够有效减少废弃橡胶的数量，降低环境污染，但是也存在能源利用效率低和环境影响的问题。
总结丁苯橡胶回收是一个重要的环保问题，各种回收方法都有其独特的优缺点。
在实际应用中，可以根据废弃橡胶的特性、回收成本和再利用需求等因素选择合适的回收方法。
未来，随着技术的不断发展和创新，相信丁苯橡胶的回收和再利用将会更加高效和可持续。
胶回收攻略
胶回收攻略一、这个回收小片断,我还比较在行,我以前的片断只有100bp市售的试剂盒常常有小片断回收效率很低的问题。
PCR产物经过酶切、回收等步骤后，损失太大。
进入连接反应的PCR片断量太小常常是试验失败的原因。
我的做法是，简化步骤、减少核酸在处理过程中的损失，让较多量的PCR产物和质粒片断进入酶连反应——以量取胜。
我的做法是很粗放型的，但是成功率很高。
如果愿意，你可以试试。
大致的做法是：制作100微升PCR产物；酒精沉淀回收PCR产物；PCR产物及载体酶切；跑回收胶；将回收胶上的PCR产物和载体片断切下，回收到一个试管中；冰冻、碎胶，酚、氯仿抽提，酒精沉淀；加入8微升水、1微升连接酶和1微升连接buffer，4度过夜；转化涂板。
具体的操作：PCR产物回收1. 制备100μL PCR产物。
2. 将100μL PCR产物加入一1.5mL离心管中，再加入400μL双蒸水，颠倒混匀。
加入 900μL 预冷无水乙醇、20μL 3M的醋酸钠。
颠倒数次混匀。
（提示本方法使用的醋酸钠量较小，但足够沉淀核酸，并且无需洗盐。
）3. 4℃静置30分钟，以利于核酸沉淀。
4. 12000rpm 4℃离心15分钟，沉淀核酸。
5. 弃上清，将离心管倒置于干净吸水纸巾上5分钟。
室温下吹风干燥。
（提示可将试管至于超净台吹风干燥。
如果管底有较多液体聚集，可盖好管盖后，轻弹管底数次，将液体分散挂在管壁上，再打开管盖吹风。
）酶切直接在回收PCR产物的试管中配置酶切体系：PCR产物酶切－制作插入片断10×Buffer 6μLSal I 5μLPCR产物——双蒸水 49μL合计 60μL要将PCR产物接入的质粒载体A，取A质粒（小提的质粒即可）3μL进行酶切。
A质粒酶切－制作载体片断10×Buffer 3μLSal I 1μL质粒 3μL双蒸水 23μL合计 30μL混匀。
37℃，酶切3小时。
1%琼脂糖回收胶回收（碎胶、酚氯仿抽提法）1. 酶切产物加入10％量的上样Buffer，混匀。
DNA胶回收操作步骤
DNA胶回收操作步骤
1.称重：①空EP管；②EP管+胶；③算胶重=②－①。
2.按OMEGA Gel Extration kit操作说明进行胶回收，毫克数=微升数。
①按胶的重量（毫克数）加对应体积的Binding Buffer；
②离心一下，将胶甩至EP管底，与Binding Buffer充分接触；
③将混合物放在60℃水浴10min，使其完全溶解，每隔2~3min摇晃一次；
注意：要观察胶完全溶解后Gel Binding Buffer混合物的pH值，当pH大于8.0时DNA易溶解，混合物呈淡黄色才属于正常，若橙色/红色需调节。
④转入HiBind柱中，室温10000g×1.3min，弃掉液体；
⑤加300μl Binding Buffer洗柱，室温10000g×1.3min，弃掉液体；
⑥加700μl SPW Buffer，室温放置2~3min后，室温10000g×1.3min，弃掉液
体；
⑦重复⑥；
⑧空柱离心10000g×1.3min，使柱上DNA充分干燥，弃液；
⑨把柱子移入1.5ml EP管，加入20~30μl DNA Elution Buffer，以溶解DNA，
室温10000g×1.3min，收集DNA溶液；
⑩4℃短期保存。
胶回收
吸附柱CA2（Spin Columns CA2）
收集管（2mL）（Collection Tubes 2mL)
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3.2 耗材
各种规格移液枪、枪头 离心管
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胶回收基础知识 方法及应用
1. 分类
2. 应用
试剂耗材与设备
四 五
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操作流程
常见问题解答
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2.1 分类
1
• 硅胶柱法
2
• 玻璃奶/纯化填料法
• 低熔点琼脂糖法 • 透析带电洗脱法 • DEAE纤维素膜纸片法
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4.1 实验流程
琼脂糖凝胶制作
上样
电泳
①
在锥形瓶中加入 1mL 50xTAE 、 49mL 蒸馏水、 0.4g 琼脂糖，混匀；
①
取 1μ L 上 样 缓 冲 液 与 5μ L 产 物混匀
电泳条件： 140V ， 20min 。
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4.1 实验流程
1
2
3
将目的条带从 琼脂糖凝胶中 切下
放入干净的 离心管中
称取重量
21
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课验流程
1
2
向胶块中加入 等体积溶液PN
早期实验室最常用方法之一。
[转载]胶回收注意事项
![[转载]胶回收注意事项](https://img.taocdn.com/s3/m/4424a4c158f5f61fb73666d1.png)
[转载]胶回收注意事项已有735 次阅读2010-7-7 20:37|个人分类:从零开始学技术|系统分类:科研笔记胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
PCR产物的胶回收分离纯化
PCR产物的胶回收分离纯化一、实验仪器1、琼脂糖凝胶电泳系统2、紫外观察分析仪3、离心机4、单面刀片5、恒温水浴锅二、试剂1、DNA回收试剂盒2、50×TAE3、ddH2O三、步骤1 在紫外灯下切分含DNA的琼脂糖块，尽可能除去多余的琼脂糖．放入1.5ml离心管中。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 μl 进行计算。
5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer，DR-I Buffer 的加量如下表：凝胶浓度DR-I Buffer 使用量1.0％ 3 个凝胶体积量1.0％～1.5％ 4 个凝胶体积量1.5％～2.0％ 5 个凝胶体积量6. 均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热）。
此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10 分钟）。
注）胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA 的回收率。
7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。
当分离小于400 bp 的DNA 片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20% 的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column 安置于Collection Tube 上。
9. 将上述操作7 的溶液转移至Spin Column 中，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃滤液。
注）如将滤液再加入Spin Column 中离心一次，可以提高DNA 的回收率。
10. 将500 μl的漂洗液Rinse A加入Spin Column中，12,000 rpm 离心30 秒钟，弃滤液。
11. 将700 μl的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm 离心30 秒钟，弃滤液。
注）请确认Rinse B中已经加入了指定体积的100%乙醇。
12. 重复操作步骤11。
13. 将Spin Column 安置于新的1.5 ml 的离心管上，在Spin Column 膜的中央处加入25 μl 的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置 1 分钟。
废胶回收协议书模板
废胶回收协议书模板甲方（废胶提供方）：____________________乙方（废胶回收方）：____________________鉴于甲方拥有废胶的处置权，并愿意将其出售给乙方；乙方作为专业的废胶回收企业，愿意购买甲方的废胶，并承诺按照环保法规进行处理。
双方本着平等互利、诚实信用的原则，经友好协商，达成如下协议：第一条废胶的定义本协议所称废胶，是指甲方在生产过程中产生的，不再具有使用价值的胶类物质，包括但不限于废弃的橡胶、塑料、合成材料等。
第二条废胶的交付1. 甲方应保证所提供的废胶符合乙方的要求，并在交付前进行适当的分类和包装。
2. 交付地点为甲方指定的地点，乙方负责运输至其回收处理场所。
3. 交付时间由双方协商确定，甲方应提前通知乙方，以便乙方安排运输。
第三条价格及支付方式1. 废胶的价格根据市场行情和废胶的质量、数量等因素确定，双方应定期协商调整。
2. 乙方应在收到废胶后的____天内，按照约定的价格向甲方支付货款。
3. 支付方式为银行转账，甲方应提供有效的银行账户信息。
第四条环保要求1. 乙方应保证其废胶回收处理活动符合国家和地方的环保法规。
2. 乙方应采取必要的措施，防止废胶在运输、处理过程中对环境造成污染。
3. 甲方有权要求乙方提供废胶处理的环保证明文件。
第五条违约责任1. 如甲方未能按时交付废胶，应向乙方支付违约金，违约金的金额为未交付废胶价值的____%。
2. 如乙方未能按时支付货款，应向甲方支付违约金，违约金的金额为逾期支付货款金额的____%。
3. 任何一方违反本协议的其他条款，均应承担相应的违约责任。
第六条争议解决本协议在履行过程中如发生争议，双方应首先通过友好协商解决；协商不成时，任何一方均可向甲方所在地人民法院提起诉讼。
第七条协议的变更和解除1. 本协议的任何变更和补充，必须经双方协商一致，并以书面形式确认。
2. 任何一方均可在提前____天书面通知对方的情况下解除本协议。
胶回收的原理
胶回收的原理
胶是一种常见的塑料制品，由于其在生产和使用过程中会产生
大量的废弃物，对环境造成了严重的污染。
因此，胶的回收和再利
用成为了当前环保领域的热点问题。
那么，胶回收的原理是什么呢？
首先，胶的回收可以通过物理方法进行。
物理方法主要包括破碎、洗涤、干燥等步骤。
首先，将废弃的胶制品进行破碎，将其打
成小颗粒状，以便后续的处理。
然后，通过洗涤的方式去除胶表面
的污物和杂质，使胶颗粒变得干净。
最后，将洗净的胶颗粒进行干燥，去除其中的水分，以便后续的加工和再利用。
其次，胶的回收也可以通过化学方法进行。
化学方法主要包括
溶解、聚合等步骤。
首先，将废弃的胶制品投入相应的溶剂中，使
其溶解。
然后，通过控制溶解液的温度和压力，将溶解的胶分离出来。
最后，将分离出来的胶进行聚合反应，使其重新形成新的胶制品。
另外，胶的回收还可以通过生物方法进行。
生物方法主要包括
微生物降解、生物质转化等步骤。
首先，利用特定的微生物对废弃
的胶制品进行降解，将其分解成简单的有机物。
然后，利用生物质
转化的方式，将分解后的有机物转化为生物质能源或者其他有用的化合物。
总的来说，胶的回收原理主要包括物理方法、化学方法和生物方法。
通过这些方法，可以将废弃的胶制品进行有效的回收和再利用，减少对环境的污染，实现资源的循环利用。
同时，这也需要社会各界的共同努力，包括政府、企业和个人，共同推动胶回收工作的开展，为建设美丽的地球作出贡献。
胶回收的原理
胶回收的原理胶是一种常见的粘合材料，广泛应用于各个领域，如包装、建筑、家具等。
然而，随着胶制品的使用量不断增加，胶废弃物也在不断增加，给环境带来了很大的压力。
因此，胶的回收和再利用变得尤为重要。
那么，胶回收的原理是什么呢？首先，胶的回收可以通过物理方法进行。
比如，利用溶剂将废弃的胶制品溶解，然后通过蒸发或其他方法将溶剂分离出来，最终得到原料胶。
这种方法的优点是操作简单，但也存在着溶剂回收困难、成本高等缺点。
其次，胶的回收也可以通过化学方法进行。
例如，利用酸碱或其他化学试剂将废弃的胶制品进行降解，再经过一系列的处理步骤得到原料胶。
这种方法的优点是可以高效地将废弃的胶制品转化为原料胶，但也存在着化学试剂的回收和处理难题。
另外，生物方法也可以用于胶的回收。
通过利用微生物或酶类对废弃的胶制品进行降解，最终得到原料胶。
这种方法的优点是环保、能耗低，但也存在着降解速度慢、操作条件苛刻等问题。
除了以上几种方法，还有一些新型的胶回收技术不断涌现。
比如，利用超临界流体技术、离子液体技术等进行胶的回收，这些新技术在提高回收效率的同时也减少了对环境的影响。
总的来说，胶回收的原理是通过物理、化学或生物方法将废弃的胶制品转化为原料胶，以实现资源的再利用。
在实际操作中，可以根据胶制品的性质和回收条件选择合适的回收方法，以达到高效、环保的目的。
综上所述，胶回收的原理涉及到物理、化学、生物等多个方面，需要综合考虑各种因素，以实现胶的有效回收和再利用。
希望随着科技的不断进步，胶回收技术能够不断完善，为环境保护和资源节约做出更大的贡献。
胶片是否可回收利用的原理
胶片是否可回收利用的原理
胶片是一种由多种材料组成的塑料薄膜，包括聚酯等。
回收利用胶片的原理是通过将废旧胶片进行物理或化学处理，将其分解成原料或再生材料，再重新制造成新的胶片产品。
具体原理可以是以下几种：
1. 物理处理：废旧胶片经过集中收集后，可以通过物理方法，如破碎、熔化、挤出等，将其转化为颗粒状或片状的原料，然后经过洗涤、干燥等步骤，得到纯净的塑料颗粒或片材。
这些原料可以用来制造新的胶片产品。
2. 化学处理：废旧胶片可以通过化学方法进行处理，例如溶解、热解等，将其分解成化学原料或液体状的产品。
分解后的化学物质可以用于制备新的塑料原料或其他化工产品。
3. 熔融再生：废旧胶片可以经过熔融处理，将其熔化成塑料熔体，然后通过挤出、拉伸、切割等工艺，将熔体形成新的胶片。
这种方法可以有效地节约原材料，并减少环境污染。
需要注意的是，不同类型的胶片可能有不同的回收利用方法，因此在胶片回收利用过程中，需要对不同类型的胶片进行分类处理，以便更好地实现回收利用。
此外，胶片的回收利用过程中还需要进行工艺优化，以提高回收利用率和成品质量。
胶回收注意事项以及感受态细胞的制作
胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度，如果DNA浓度不够，想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA 完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
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pGEM-T vector有个 突出端，以rTaq催化扩增的 有个T突出端 催化扩增的PCR产物有个 突 产物有个A突 有个 突出端， 催化扩增的 产物有个 出端，二者依据碱基互补配对原则配对连接。 出端，二者依据碱基互补配对原则配对连接。
转化
• 转化(Transformation)：是将外源DNA分子引入受 体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段，它 是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域 的基本实验技术。 • 转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺 陷的变异株，即不含限源DNA分子进入体 内并稳定地遗传给后代。
质粒提取 -E.Z.N.A® Plasmid Miniprep Kit I
原理： 原理：
• 在pH 12.0 ~ 12.6碱性环境中，细菌的线性大分子 量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA 虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性 并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体 DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的 作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。 通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、 RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清中，然后用酚、 氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。
酶切鉴定
• 1. 建立酶切反应体系： 建立酶切反应体系： DNA 5.0µl（约1µg） 10×EcoRI buffer 1.0µl EcoRI 0.5µl ddH2O 3.5µl Total 10µl • 2. 37°C酶切2h。 • 3. 电泳检测
连接
1. 在微型离心管中制备下述连接反应液，全 量为10 µl： pGEM-T Vector 0.5 µl GAPDH基因 3.5µl ligase 1.0µl 2×ligase buffer 5.0 µl Total: 10.0µl 2. 室温连接2小时，或者16℃连接过夜。
pGEM-T vector图谱
CaCl2转化原理
• 正在生长的大肠杆菌在0°C下加入到低渗的冰冷 的CaCl2溶液中，便会造成细胞膨胀成球（感受 态细胞）。 • 感受态细胞与外源质粒DNA形成一种黏着在细胞 表面上的对DNA酶抗性的羟基钙磷酸复合物。 • 42°C下作短暂的热刺激期间，这种复合物便会 被细胞吸收。 • 进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗 传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。 将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可 筛选出转化子。
转化步骤
• 1. 于超净台中取连接产物10µl与100µl大肠杆菌感受态细胞 混合，置冰浴中30分钟。 • 2. 42℃热休克90秒，置冰浴中3-5分钟。 • 3. 于超净台中加LB培养基900µl，37℃水浴1小时。 • 4. 4000rpm离心3分钟，弃上清，取残余液体重悬细菌。 • 4. 取l上述混合物均匀涂布于含100µg/ml氨苄青霉素的LB琼 脂平板上。 • 5. 37℃孵箱培养12~16小时，可见长出单菌落。 • 6. 挑选单菌落，使用PCR法确认T载体中插入片段的长度 大小，或提质粒酶切、测序鉴定。
胶回收
-E．Z．N．A．Gel Extraction Kit
实验原理
• 回收柱（硅胶膜）在高盐、低PH值的情况 下吸附DNA，在低盐、高PH值的情况下释 放DNA。 • 我们知道原理，就知道了影响胶回收的几 个影响因素，PH值、高盐试剂、低盐洗脱 试剂。
实验步骤
• 1. RT-PCR的产物经琼脂糖凝胶电泳分离后，紫外灯下观察。为防DNA 损伤，避免长时间的紫外光照射。 • 2. 用刀片或凝胶尺切下含有所需DNA带的凝胶，置于1.5ml离心管中， 称重。 • 3. 往离心管中加入胶重的等量体积的Binding Buffer（即每100mg胶加 入100 ul Binding Buffer）. • 4. 50℃水浴10分钟，使凝胶完全熔解，在水浴过程中每2~3分钟漩涡震 荡混匀一次。 • 5. 将离心柱放入2ml收集管中，将上一步熔解的凝胶导入离心柱中， 10,000g离心1分钟。弃残液。 • 6. 将离心柱重新放回收集管；加入300ul Binding Buffer，10,000g离心1 分钟。7. 弃去收集管中的液体，将柱子放回收集管，再加入700 ul SPW Wash Buffer，静置2-3分钟，10,000g离心1分钟。 • 8. 重复步骤7一次。 • 9. 弃去收集管中的液体，空柱放回收集管，再10,000g离心1分钟。 • 10. 将离心柱放入一个干净的1.5ml离心管，加入20~50ul去离子水到柱 子内部中央，放置2分钟，离心1分钟。收集管中的溶液即为已纯化的 GAPDH基因DNA片段。
步骤： 步骤：
• • • • • • • • • • • • • 挑选一个单菌落,37℃过夜培养14~16小时。 取1.5~5ml 菌液，10,000g 离心1分钟。 弃上清，加入250µl 溶液I/RNase，漩涡震荡重悬细胞。 加入250µl溶液Ⅱ，轻柔上下颠倒旋转混匀4~6次，室温放置2分钟。 加入350µl溶液Ⅲ，轻柔上下颠倒混匀得到白色沉淀。 10,000g 离心10分钟。 将上清转移到HiBindTM DNA柱上,置于2ml离心管上。注意不要吸到 沉淀。 10,000g 离心1分钟，弃残液。 用500µl HB buffer 洗柱，10,000g 离心1分钟，去残液。 用700µl DNA wash buffer (乙醇稀释)洗柱，10,000g离心1分钟，去 残液。 用700µl DNA wash buffer第二次洗柱10,000g离心1分钟，去残液。 空柱子10,000g离心1分钟。 将HiBindTM DNA转移至一干净的1.5ml离心管，于膜中央加入50µl ddH2O或TE溶解质粒。10,000g 离心1分钟收集质粒。