血清总蛋白测定 原理 步骤
血清总蛋白定量测定的原理
血清总蛋白定量测定的原理血清总蛋白定量测定是一种常用的检测方法，用于评估人体体液中蛋白质的总量。
血清总蛋白是由多种不同功能的蛋白质组成，包括白蛋白、球蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等。
这些蛋白质在机体的免疫应答、运输物质、调节细胞生理功能等方面起着重要的作用。
血清总蛋白定量测定可以用于评估机体健康状态、疾病的诊断和治疗效果的监测等。
血清总蛋白定量测定的原理是使用光学测量的方法，根据比色反应原理来评估蛋白质的浓度。
具体步骤如下：1. 血清样本制备：将采集的血清样本离心，使其中的细胞和凝固物沉淀，获取清澈的血清液用于后续测定。
2. 比色反应原理：血清总蛋白测定常用的比色反应原理是布拉德福酸染色法。
该法利用布拉德福酸与蛋白质在酸性条件下反应生成组成深蓝色化合物，使其吸光度增加，从而间接测定蛋白质的浓度。
布拉德福酸与蛋白质的反应是一种选择性的酸碱反应，只与氨基酸中的芳香族化合物酚类和酮类结构发生反应。
3. 标定曲线：将不同浓度的标准蛋白溶液制成一系列浓度梯度，使用相同的方法进行比色反应，并测得吸光度值。
根据各浓度标准溶液的吸光度与浓度之间的关系绘制标定曲线。
4. 测定样本吸光度：将血清样本与布拉德福试剂按一定比例混合，并使其在一定时间内反应，然后用特定波长的光源通过试液，测量经过样本后的吸收光强。
根据测得的吸光度值及标定曲线，可以确定样本中总蛋白的浓度。
需要注意的是，在进行血清总蛋白定量测定时，可能会受到一些干扰因素的影响，例如溶液的污染、杂质的存在、乳糜样物质的存在等，这些因素可能会引起测定结果的偏差。
因此，在进行测定时应严格控制实验条件，采用尽可能纯净的试剂和标本，并进行相应的质量控制。
总之，血清总蛋白定量测定是一种常用的检测方法，可以评估人体体液中蛋白质的总量。
其原理是利用布拉德福酸染色法，通过比色反应测定样本中总蛋白的浓度。
这种方法简便快速，对测定结果的敏感性和准确性较高，并可以用于评估机体健康状态、疾病的诊断和治疗效果的监测等。
血清总蛋白测定(双缩脲(精)
实验目的
⒈掌握双缩脲法测定总蛋白的原理及注 意事项。
⒉熟练测定操作步骤。 ⒊了解TP测定的主要临床意义。
实验原理
蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜 离子作用生成紫红色的络合物，产生的颜 色强度在一定范围内与蛋白质的含量成正 比，与同样处理的蛋白标准液比较，经计
潴留。 ②摄入量不足和消耗增加：营养不良、慢性肠胃炎、严
重结核病等。 ③合成障碍：肝脏疾病。 ④蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，肾综合症等。
算或查标准曲线即可求出血清蛋白质含量。
蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜 离子作用生成紫红色的络合物与两分子尿 素缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与铜
离子作用形成的紫色物质的反应相似，故 称之为双缩脲反应。
双缩脲结构: NH2试剂:
H2N—OC—NH—CO—
试剂
双缩脲试剂：称取硫酸铜 (CuSO4·5H2O)3.0g,溶于500mL新鲜制 备的蒸馏水或刚煮沸冷却的去离子水中， 加酒石酸钾纳(NaKC4H4O6·4H2O)9.0g， 碘化钾5.0g，待完全溶解后，加入 6mol/L Na2OH 100ml,最后加蒸馏水 至10白质标准液：市售。
实验操作
加 入 物(mL) 待测血清 蛋白标准液 蒸馏水 双缩脲试剂
U(测) 0.1 -
4.0
S(标) 0.1
4.0
B(空) 0.1 4.0
混匀,置37℃水浴6分钟，以”B”管校”0”, λ=546nm比色,读取A 值计算。
实验结果及报告
3、双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离子，以维 持铜离子在碱性溶液中的溶解性；碘化钾能防止两价铜 离子还原．
4、高脂，黄疸及溶血标本应作清空白对照来校正误差。 含脂类极多的血清，加入双缩脲试剂后会出现混浊，可 用乙醚3ml抽提后再进行比色．
血清总蛋白和白球比值测定
二、血清白蛋白的测定
实验原理： 实验原理：
溴甲酚绿法：在不分离血清中白蛋白的情况下直接测定 溴甲酚绿法 1、溴甲酚绿法 白蛋白的一种方法。白蛋白具有与阴离子染料结合的性质， 在pH=4.2的环境中，带正电荷的白蛋白（pI=4.9）与阴离 子染料溴甲酚绿结合，由黄色变为蓝绿色。 白蛋白+溴甲酚绿
pH=4.2
注意事项： 注意事项：
1、双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是配合铜离子，以维持 铜离子在碱性溶液中的溶解性；碘化钾是抗氧化剂，防止碱 性酒石酸自动还原。 2、由于各种血清蛋白质的相对分子质量不同，古其浓度不 宜用mol/L表示，而用g/L表示。 3、高脂、黄疸及溶血标本应做血清空白对照来校正误差。 4、本法绘制的标准曲线是一条通过原点的直线，在浓度小 于100g/L时呈良好的线性关系。
生理盐水：氯化钠0.9g溶于10ml蒸馏水。 • 生理盐水 双缩脲试剂 • 双缩脲试剂：硫酸铜3.0g溶于500ml蒸馏水， 加酒石酸钾钠9.0g，完全溶解后，加入24%氢 氧化钠100ml，用蒸馏水稀释到1L，置于聚氯 乙烯瓶内盖紧保存。 蛋白质标准溶液：收集混合血清，经凯氏定 • 蛋白质标准溶液 氮法定值，用作蛋白质标准液。储存于冰箱中 备用。也可用10mg/mL牛血清白蛋白替代。 • 待测血清用生理盐水按1:10稀释。 生理盐水 双缩脲试剂
蓝绿色复合物
白蛋白含量的测定：蓝绿色的深浅与白蛋白的浓度成正 白蛋白含量的测定 2、白蛋白含量的测定 比，因此可直接测定血清白蛋白的含量。
实验试剂： 实验试剂：
溴甲酚绿储存液： • 溴甲酚绿储存液 BCG 419mg溶于10ml 0.1mol/L NaOH， 加NaN3 100mg，定容至1L，储存于棕色瓶中备用。 柠檬酸缓冲液（ • 0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH=4.2）：分别配制 0.1mol/L柠檬 酸和柠檬酸钠溶液，按体积比 12.3 : 7.7 混合。每1L混合液加 入NaN3 100mg。 聚氧化乙烯月桂醚溶液：取Brij-35 30g，加少量水，60 • 30%聚氧化乙烯月桂醚溶液 度水浴溶解加水至100ml。 应用液： • BCG应用液 BCG储存液 250ml、0.1mol/L柠檬酸缓冲液 (pH=4.2) 750ml、30% Brij-35混合而成。 • 标准蛋白溶液(10mg/ml)：称取人白蛋白 1.00g，用生理盐水 溶解并定容至100ml。
血清总蛋白测定原理步骤
血清总蛋白测定原理步骤一、原理：1. 用具有特定波长的光照射样品时，光束经过样品后会发生吸收。
波长为546nm（黄色光）时，血清总蛋白对光的吸收能力较高。
2. 样品中的蛋白质会吸收部分波长为546nm的光，使光通过样品后强度减弱。
3.把强光通过样品前后的强度差值与已知总蛋白浓度的标准曲线进行比较，可以确定样品中总蛋白的浓度。
二、步骤：1.样品预处理：a.取少量患者血清，放置室温静置一段时间，使其凝固。
b.使用离心机将血液离心分离，得到澄清的血清。
c.将澄清血清转移至干净的试管或离心管中，可进行测定。
2.试剂配制：a. 准备血清总蛋白浓度标准品，通常使用已知浓度的Bovine Serum Albumin（牛血清白蛋白）作为标准品。
b.配制比色试剂，比色试剂可使用五氯酚酚或伯胺蓝溶液。
3.比色测定：a.取一系列含有不同浓度的标准品，称取适量分别加入试管中。
b.每个试管中加入等量的比色试剂，充分混合。
c.把试管放入比色计中，使用光谱分析仪读取光强度差。
d.使用标准曲线，将测量得到的光强度差值转化为总蛋白浓度。
4.计算结果：以标准曲线上所对应光强度差值和总蛋白浓度为坐标，制作图线。
将测试样品的光强度差值代入标准曲线中，并利用线性关系计算出样品中总蛋白的浓度。
总结:血清总蛋白测定是一项常见的临床检验方法，用于评估患者的营养状态、肝功能和免疫功能。
其原理是通过血清中总蛋白对特定波长的光吸收，使用比色法进行测定。
测定过程主要包括样品预处理、试剂配制、比色测定和计算结果。
通过标准曲线，可以根据光强度差值计算出样品中总蛋白的浓度。
这项检测技术广泛应用于临床实验室中，为医生提供了有价值的生化指标。
血清总蛋白测定(双缩脲试剂法)
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称血清总蛋白测定（双缩脲试剂法）实验日期2014-11-21实验地点第五实验室合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1、掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理、操作；2、熟悉血清总蛋白的临床意义；3、了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点和注意事项。
二、实验原理（一）：双缩脲反应在碱性溶液中,双缩脲(H2NOC－NH－CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。
两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2），因分子内含有两个邻接的肽键，在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物；蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），同样能在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应，生成的紫红色络合物，且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10～120g/L范围内有良好的线性关系。
三、材料与方法：实验材料样品：大牛血清试剂：双缩脲试剂、蛋白质标准液（70g/L）、生理盐水（%）器材：试管、加样枪、刻度吸管、洗耳球设备：1100分光光度计、水浴锅实验步骤取3支试管，做好标记(B空白对照，S标准液，U为待测大牛血清)，按下表操作：加入物（ml） B (空白）S （标准）U（待测）大牛血清（1：10）--蛋白标准液（1：10）--%氯化钠溶液--双缩脲试剂a.各管混匀，观察各试管颜色b.将各试管置于37℃水浴锅中加热20min，观察颜色c.将试管中的液体倒入比色杯中，置于1100分光光度计的样品槽内，在波长540nm，以空白管调零，测S和U管吸的光度。
d.测定结束后，将比色杯中的样品回收进试管依据公式算出结果四、结果与讨论：（一）：实验结果1、实验现象：a、在实验中首先加入双缩脲试剂，再依次加入%氯化钠溶液、蛋白质标准液、相应的大牛血清后溶液没有明显的颜色变化，呈淡蓝色透明状；b、水浴20分钟之后，B试管试管显淡蓝色；S试管和U试管显浅紫色且S试管的颜色比U试管的颜色稍深。
02 血清总蛋白浓度测定
① 血清中水分增多，血清被稀释。如静脉注射过多低渗溶液或因各 种原因引起的水钠潴留。
② 营养不良和消耗增加，长期食物中蛋白质含量不足，或慢性肠道 疾病引起吸收不良，使体内缺乏合成蛋白质的原料；或因长期患 消耗性疾病，如严重结核病、甲状腺机能亢进或恶性肿瘤等，均 可造成血清总蛋白浓度降低。
－
50l蒸馏水－来自－双缩脲试剂3.0
3.0
混匀。37℃水浴10min后，540nm波长比色。
空白管
－ －
50l
3.0
【结果记录】 A测定＝
A标准＝ C标准＝
【计算】
血清总蛋白(g/L)＝A测/A标×标准总蛋白浓度(g/L)
【结果分析讨论】
【临床意义】
实验时间：
带课教师：
批阅时间： 成绩： .
7
3
2. 蛋白质与双缩脲试剂反应
2. 蛋白质与双缩脲试剂反应
4
操作
【操作】
取三支试管，分别标明测定管、标准管和空白管，然后 按下表加样。
试剂(ml) 血清标本 标准血清(70.0g/L) 生理盐水 双缩脲试剂
测定管
50l
－ －
3.0
标准管 －
50l
－
3.0
空白管 － －
50l
3.0
混匀，置25℃水浴箱30分钟(或37℃水浴箱10分钟)，取出 后在波长540nm处，用分光光度计进行比色，以空白管调零， 读取各管吸光度值。
血清总蛋白浓度测定
(双缩脲法)
河南科技大学医学院 生物化学与分子生物学教研室
【目的】
【目的】
1. 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的 原理。
2. 熟悉操作过程及其临床意义。
血清(浆)总蛋白含量测定操作规程
1.目的和适用范围：1.1.为保证血液检测的结果正确性，规范实验操作，特制定本操作规程。
1.2.适用于本实验室，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语：无3.职责：3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
4.工作程序4.1.操作说明4.1.1.实验原理：不同物质的折射系数是不同的。
折射率随物质浓度的变化而变化。
使用蛋白折射仪，根据光线通过血清中的折射率可以测得一定的值（即血清总蛋白含量）。
4.1.2.实验所需设备和材料：蛋白折射仪、100ul加样器、吸头、柔软一次性纸。
4.1.3.折射仪的零点调节4.1.3.1.使用高质量的放在密封玻璃管中的蒸馏水（如注射用水）。
把折射仪及蒸馏水置于22℃－25℃的室温中。
然后在折射仪上放上蒸馏水。
4.1.3.2.观察结果：准线应在 1.000处（Urine Specific Gravity Scale）或 1.333处（Refractive Index Scale）如误差达1/2格，则应调准零点。
用小螺丝刀调节零点。
顺时针方向增加读数，逆时针方向减少读数（即降低分界面的位置）。
最后的调节方向应是顺时针方向的。
4.2.实验操作步骤：4.2.1.从标本中（避开红细胞）吸取血清或血浆50ul。
4.2.2.打开覆盖棱镜的盖板。
4.2.3.将血清滴到棱镜于盖板之间的棱镜表面（靠近后部的地方），切勿使吸管接触到棱镜表面。
4.2.4.盖上盖板。
4.2.5.棱镜对准一光亮的窗口或一光源，使观察镜中亮的和暗的有一明显的对比和一清晰的分界面。
4.2.6.旋转目镜，调节并对准焦距，使分界面清晰。
通过亮暗交界线，直接读出总蛋白数值。
4.2.7.记下供血浆者总蛋白值。
4.2.8.翻起盖在棱镜上的盖板，先用软纸或专用纸吸干血清，然后用蒸馏水及软纸或专用纸洗擦盖板与棱镜的表面，如果棱镜表面潮湿会使下一标本检测时不准确。
不要用硬的东西洗擦棱镜表面及盖板，也不要用酒精洗擦。
血清总蛋白测定(双缩脲
血清总蛋白测定（双缩脲）1. 简介血清总蛋白是指血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白和球蛋白等。
血清总蛋白测定是一项常见的检验方法，用于评估患者的蛋白质代谢情况，以及某些疾病的诊断和监测。
双缩脲法是一种常用的血清总蛋白测定方法，本文将介绍该方法的原理、操作流程和结果解读。
2. 原理双缩脲法利用缩脲与蛋白质中的酚类物质反应生成有颜色的复合物，通过测量复合物的吸光度来定量测定血清中的总蛋白含量。
该方法具有简单、灵敏、快速等特点，被广泛应用于临床实验室及科研领域。
3. 操作流程3.1 样本处理从被检测者的静脉血中采集适量的血清样本，并放置在离心管中，离心10分钟将血清分离出来。
将分离得到的血清样本转移到干净的试管中。
3.2 加入试剂取适量的双缩脲试剂，按照其说明书的要求加入到试管中，与血清样本进行充分混合。
注意避免空气泡的形成。
3.3 酶解反应将试管放置于恒温水浴中，根据试剂的要求进行酶解反应。
一般情况下，反应时间为30分钟。
3.4 测定吸光度将反应体放入分光光度计中，设置波长为试剂说明书要求的波长，记录吸光度值。
3.5 统计结果根据标准曲线，计算出血清样本中总蛋白的含量。
4. 结果解读根据血清总蛋白测定的结果，可以得出以下结论： - 如果测定的结果高于正常范围，可能说明患者在蛋白质代谢方面存在异常，如蛋白质合成过多或凋亡减少。
- 如果测定的结果低于正常范围，可能说明患者在蛋白质合成方面存在问题，如肝功能受损或营养不足等。
需要注意的是，血清总蛋白测定的结果受到多种因素影响，如年龄、性别、饮食习惯等，因此在结果解读时需要综合考虑患者的临床情况。
5. 总结血清总蛋白测定是一种常用的检验方法，通过双缩脲法可以快速、准确地测定血清中的总蛋白含量。
该方法操作简单，结果解读可为临床医生提供重要的参考依据。
但需要注意的是，结果的解读需要综合考虑患者的临床情况，以及其他相关检验指标的结果，才能做出正确的诊断。
实验 血清蛋白测定
实验血清蛋白测定
实验：血清蛋白测定
实验介绍
本次实验旨在通过测定血清中的总蛋白和白蛋白浓度，计算出
非白蛋白的含量，并探究人体健康状况与血清蛋白含量之间的关系。
实验步骤
1. 取得样本血液，并离心分离得到血清
2. 使用比色法测定血清总蛋白浓度，并记录结果
3. 使用免疫层析法测定血清白蛋白浓度，并记录结果
4. 计算非白蛋白含量，并记录结果
实验原理
- 比色法：利用生化试剂和光度计对血清中的蛋白质进行量化
测定。
- 免疫层析法：利用免疫学原理选择性地分离出目标蛋白质，
通过测量蛋白与抗体复合物的浓度来计算目标蛋白质浓度。
- 计算公式：非白蛋白含量＝总蛋白浓度−白蛋白浓度。
实验结果分析
通过实验，我们可以得到每个样本的总蛋白质含量、白蛋白含量和非白蛋白含量。
根据实验结果，我们可以探讨人体健康状况与血清蛋白含量之间的关系，并且该方法可以用于临床诊断中，如肝功能不全、肾病综合征等。
结论
本次实验成功地测定了血清蛋白质浓度，并计算出非白蛋白的含量，同时探究了人体健康状况与血清蛋白含量之间的关系。
该方法可以用于临床诊断中，具有重要的临床应用价值。
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
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临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
临床意义
1．血清总蛋白浓度增高 （1）血浆浓缩
凡体内水分的排出大于摄入时，均可引起血浆 浓缩。如急性脱水（如呕吐、腹泻、高烧等），外 伤性休克（毛细血管通透性增大），慢性肾上腺皮 质功能减退（尿排钠增多引起继发性失水）。
－
－
蛋白标准液
－
－
－
0.10 0.10
蒸馏水
0.10 －
－
双缩脲空白试剂 －
5.0
－
－
－
5.0
－
双缩脲试剂
5.0
－
5.0
－
5.0
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临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
计算
血清总蛋白(g/L) AU ARB AB 蛋白标准液浓度 As ARB ASB
当肝功能严重受损时，蛋白质合成减少，以清蛋白降 低最为显著。
（4）蛋白质丢失
严重烧伤，大量血浆渗出；大出血；肾病综合征尿中 长期丢失蛋白质；溃疡性结肠炎可从粪便中长期丢失一定 量的蛋白质。
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临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
注意事项
这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，其 吸光度与血清蛋白含量在一定范围内呈正比关系，经
与同样处理的蛋医药院校医学检验专业规划教材
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临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
试剂与器材
实验四、血清中总蛋白的测定
充分混匀，37℃ 水浴中保温15min； 冷却至室温后，546nm处比色 比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品管光密度值。
（2）计算： 依据朗伯-比尔定律： A=KLC
标准管总蛋白浓度：70g/L
A样 C样= × C 标 A标
样品管光密度值 ×70 样品管总蛋白浓度 ＝ 标准管光密度值 （g/L）
三、实验器材
材料：人血清
试剂：总蛋白测定试剂盒 用具：分光光度计，微量移液枪，试管，试管架， 恒温水浴锅
四、实验步骤
（1）取3支试管，按下表加入试剂:
试剂 工作试剂(mL) 标准液(uL) 血清样品(uL) 试剂空 标准 样品管 样品管 样品管 1 2 3 白管 管 1.0 – – 1.0 25.0 – 1.0 – 25.0 1.0 – 25.0 1.0 – 25.0
实验四
血清中总蛋白的 测定
（双缩脲法）
一、实验目的
学习双缩脲法测定血清总蛋白的原理。
掌握血清总蛋白测定的临床意义。
二、实验原理
血清中蛋白质分子的肽键与双缩脲试剂中的铜结 合，并在碱性环境下可形成紫色化合物，在546nm 波长处测定吸光度值，计算其含量。
546nm
相对血清总蛋白浓度
光吸收法测定
参考值
总蛋白
血清参考值：62~82g/L
注意事项
正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比 色液应占比色皿的2/3。
每次测定时都需用试剂空白溶液调零，不能 用蒸馏水代替
微量移液枪的正确使用
思考
1、血清总蛋白测定的临床意义？
血清总蛋白实验报告
一、实验目的1. 了解血清总蛋白在人体生理和病理过程中的作用。
2. 掌握血清总蛋白测定的原理和方法。
3. 通过实验操作，提高实验技能和数据分析能力。
二、实验原理血清总蛋白是血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白、球蛋白和纤维蛋白原等。
血清总蛋白含量的测定对临床诊断具有重要意义，如肝脏疾病、肾脏疾病、营养不良等。
实验原理：血清（浆）中蛋白质的肽键（-CO-NH-）在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。
这种紫红色络合物在540nm处的吸光度与血清蛋白含量在一定范围内呈正比关系。
三、实验材料1. 实验试剂：6.0mol/L NaOH溶液、双缩脲试剂（硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾）、蛋白质标准液、血清样品等。
2. 实验器材：分光光度计、移液器、试管、试管架、吸管等。
四、实验步骤1. 标准曲线绘制（1）取6个试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL蛋白质标准液，然后加入2.0mL 6.0mol/L NaOH溶液。
（2）在每支试管中加入0.4mL双缩脲试剂，摇匀。
（3）室温放置10分钟。
（4）在540nm波长下，以空白管调零，测定各管吸光度。
（5）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定（1）取3个试管，分别加入0.2mL血清样品、0.2mL蒸馏水和0.2mL 6.0mol/L NaOH溶液。
（2）按照标准曲线绘制步骤进行操作。
（3）在540nm波长下，以空白管调零，测定各管吸光度。
3. 结果计算（1）根据样品测定吸光度，从标准曲线上查得蛋白质浓度。
（2）计算血清总蛋白含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制根据实验数据绘制标准曲线，得到线性方程：y = 0.062x + 0.015，R² = 0.99。
2. 样品测定血清样品1、2、3的吸光度分别为0.60、0.55、0.50，查得蛋白质浓度分别为60.0mg/L、55.0mg/L、50.0mg/L。
血清总蛋白测定 原理 步骤
3.60～70g/L蛋白质标准液可用定值参考血清或标准白蛋白作标准。
操作
取试管3支，混匀，置25℃30min或37℃10min，在波长540mm处比色，用空白管调零，测各管吸光度。
参考范围
正常成人参考范围为60～80g/L。长久卧床者约低3～5g/L，60岁以上约低2g/L，新生儿总蛋白浓度较低，随后逐月缓慢上升，大约1年后达成人水平。
3.唯一的缺点是灵敏度较低，比酚试剂法低约100倍。但本法的检出限为0.2～1.7g/L，这相当于70g/L的血清3～24μl，已能满足临床生化检验的需要。
4.本法是临床测定血清总蛋白质首选最方便、最实用的常规方法。
5.临床上常见的血清蛋白定量法主要有双缩脲法、临床折射计法、染料结合法、BCA法和免疫比浊法。
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
一、实验目的1. 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的基本原理和操作步骤；2. 了解双缩脲试剂的配制方法和使用注意事项；3. 熟悉血清总蛋白的临床意义；4. 通过实验，提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理双缩脲法是一种测定蛋白质含量的方法，其原理是：在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与铜离子（Cu2+）发生反应，形成紫红色络合物。
该络合物在特定波长（如540nm）下的吸光度与蛋白质含量呈线性关系。
通过测定吸光度，可以计算出样品中蛋白质的含量。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：牛血清、生理盐水、双缩脲试剂、蛋白质标准液、试管、加样枪、刻度吸管、洗耳球、水浴锅、分光光度计。
2. 实验试剂：（1）双缩脲试剂：硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾；（2）蛋白质标准液：70g/L；（3）生理盐水：0.9%。
四、实验步骤1. 准备工作：将牛血清、生理盐水、双缩脲试剂、蛋白质标准液等实验材料准备好，并检查仪器设备是否正常。
2. 标准曲线的制作：（1）取6支试管，分别编号为1-6号；（2）向1-5号试管中加入不同浓度的蛋白质标准液，6号试管为空白对照；（3）向每支试管中加入适量的双缩脲试剂；（4）将试管放入水浴锅中，室温放置30分钟；（5）用分光光度计测定540nm处的吸光度，记录数据；（6）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：（1）取3支试管，分别编号为A、B、C；（2）向A、B、C号试管中加入适量的牛血清；（3）向A、B号试管中加入适量的双缩脲试剂，C号试管为空白对照；（4）将试管放入水浴锅中，室温放置30分钟；（5）用分光光度计测定540nm处的吸光度，记录数据；（6）根据标准曲线，计算A、B号试管中蛋白质的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：根据实验数据，绘制标准曲线，横坐标为蛋白质浓度（g/L），纵坐标为吸光度。
曲线线性良好，相关系数R2=0.99。
2. 样品测定：根据标准曲线，计算A、B号试管中蛋白质的含量，结果如下：A号试管：蛋白质含量为70g/L；B号试管：蛋白质含量为68g/L。
血清总蛋白测定标准操作规程
血清总蛋白测定标准操作规程1.实验原理：（双缩服法）本试剂采用双缩胭反应，即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与两价铜离子反应生成蓝紫色络合物，其中每个铜离子与五至六个肽键络合。
双缩胭反应被广泛应用于临床检验，具有简便、快速可靠的特点。
在试剂中加入碘化物有助于防止碱性铜络合物的自动还原，反应形成的蓝紫色物质与样本中总蛋白浓度成正比，通过测定520-56Onm处吸光度值的变化，即可计算出样本中总蛋白的浓度。
Cu"+蛋白质3→Cu蛋白质复合物2〜8C保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释6.1线性范围：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，本试剂线性范围可样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本。
达100g∕Lo最大稀释5倍。
6.2单位换算:g∕dL=g∕L×O.17检验结果的局限性6.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在540nm处吸光度大于0.200时不能使用。
8.产品性能指标8.1试剂外观：蓝色透明液体，无悬浮物及沉淀物。
8.2装量：不低于标识值8.3空白吸光度：在54Onm处，光径ICm时，空白吸光度AWO.200。
8.4分析灵敏度：在540nm处，光径ICm时，测量70g∕L的总蛋白，吸光度差4A20.1509.5线性区间：试剂的线性区间为[30.0T00.0]g∕L,在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.995；b）线性相对偏差不超过±6.0机8.6精密度8.6.1重复性：重复测试（70.0÷10.0）g/L的样本,所得结果的变异系数（CV）应W2.0%8.6.2批间差：重复测试（70.0±10.0）g/L的样本，所得结果批间相对极差（R）应W5.0%8.7准确性：相对偏差应不大于±5.0机8.8稳定性：（2-8）C下，原包装存放的试剂有效期为18个月.取到期后一个月的试剂进行测试，应满足-6.1、7的要求。
第二篇 血清总蛋白测定
血清总蛋白测定(双缩脲法)1.实验原理：凡分子中含有两个甲酰氨基( -CONH2- )的化合物都能与碱性铜溶液作用，形成紫色复合物，这一反应称双缩脲反应。
蛋白质分子中有许多肽键( -CONH-），都能起此反应，而且各种血浆蛋白显色程度基本相同.紫色复合物在540 nm 有吸收峰，并与蛋白含量成正比，通过与同样处理的标准蛋白比较可求出血清总蛋白含量。
因此，在严格控制条件下，双缩脲反应可作为血浆蛋白总量测定的理想方法，从测定的吸光度值计算出蛋白质含量。
吸光度的大小与试剂的组分、pH值、反应温度有关。
蛋白质+ 铜离子NaOH紫红色络合物2.标本采集及存放：无特殊要求，最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
离心后采集血清或肝素抗凝的血浆。
血清标本20～25℃保存可稳定6天；4～8℃保存可稳定4周；-20℃保存至少可稳定1年。
3.实验试剂及仪器：3.1 试剂：使用北京利德曼总蛋白试剂盒。
试剂组成如下3.2仪器及参数：3.2.1使用凯美雅生化分析仪，具体的操作详见生化分析仪作业指导书.3.2.2 分析参数：4.质量控制：在测定每一批标本前先做正常值和异常值来两个水平的质控品，以2S 为质控警告限，3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控（质控规则见生化室室内质控操作规程）。
在控后方可进行标本测定，若失控，查明原因并采取措施。
5. 计算方法：样本总蛋白含量＝×C0△At----------标本管的吸光度变化；△As----------标准管的吸光度变化；C0-----------标准液的浓度；6. 参考值范围：健康成人走动后血清总蛋白浓度为 64～83 g/L ，健康成人静卧时，血清总蛋白浓度为60～78 g/L。
7. 临床意义:血清总蛋白有生理性波动，直立体位由于体液分布的原因，血液相对浓缩，而长久卧床者血液较直立体位相对稀释。
因此长久卧床者血清总蛋白比直立活动时约低3～5g/L；新生儿血清总蛋白可比成人低5～8g/L；60岁以上老人约比成人低2g/L。
实验二血清总蛋白测定_图文
血清TP常用双缩脲法测定，凯氏定氮法 可作为血清总蛋白二级标准品的定值方法。 其他方法可用于尿液、脑脊液、胸腹腔积液、 组织提取液、纯化蛋白等样品中TP的测定。
本实验采用双缩脲法测定血清中总蛋白含量。
实验原理
试剂与器材
试剂与标本 1、6 mol/L NaOH 溶液 2、双缩脲试剂（硫酸铜结晶、酒石酸钠钾、碘化钾） 3、双缩脲空白试剂 4、60~70 g/L 蛋白质标准液 5、血清
参考区间
测定管 吸光度
标准管 吸光度
× 标准液浓度
正常成人血清总蛋白浓度： 立位行走：64~83 g/L
静 卧： 60~78 g/L 新生儿总蛋白浓度较低，随后逐月上升，1年后达成人水平。
临床意义
血清TP浓度下降：
常见于血清白蛋白含量下 降，少数由免疫球蛋白含 量的明显下降引起；其他 血清蛋白质减少，一般不 能在TP浓度中得到反映。
主要器材 分光光度计
操作步骤
加入物 空白管 标准管×2
蒸馏水 0.05
－
标准液
－
0.05
血清
－
－
双缩脲试剂 4.0
4.0
测定管×2 － － 0.05 4.0
混匀后于37℃水浴15 min，以蒸馏水调零， 540 nm处测定各管吸光度。
标准液浓度：70.0g/L。
结果计算
血清总蛋 白浓度（g/L） =
特点
操作简便、灵敏度高，可用于尿液和脑脊液 蛋白质浓度低的样品测定。 但各种蛋白质形成的浊度有较大的差别，影 响浊度形成的干扰因素多。
方法
双缩脲法
原理
蛋白质中的连续肽键在碱性溶液中可与铜离 子作用产生紫色的络合物，再进行比色测定。
特点
总蛋白定量测定-原理-方法
总蛋白定量测定/原理/方法1、原理磺基水杨酸为生物碱试剂，能沉淀蛋白质，但对白蛋白的沉淀能力比球蛋白强，加适量硫酸钠后，沉淀白、球蛋白的能力趋于一致，与标准蛋白浊度对比进行定量测定。
2、试剂磺基水杨酸-硫酸钠试剂（SS-S）磺基水杨酸3.0g无水硫酸钠7.0g蒸馏水加至100ml过滤后，储存于棕色瓶中，如显色或混浊则不能用。
3、方法（1）制备标准曲线含蛋白200、400、800、1200、1600mg/L的稀释混合人血清标准系列各0.5ml，加SS-S试剂4.5ml，搜|索整理充分混匀，7～15分钟后，用420nm波长比浊，以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
（2）样品检测取待测脑脊液标本各0.5ml于两只试管中，其中一只试管加SS-S试剂4.5ml，另一试管加154mmol/L的NaCl溶液4.5ml作为标本空白管。
在与标准曲线相同的条件下比浊，所得得吸光度可从标准曲线上求得蛋白质浓度。
4、注意事项（1）脑脊液如有多量细胞或混浊，应先离心以除去。
如蛋白质浓度过高，应先行用生理盐水稀释后重新测定。
（2）加入SS-S试剂的操作手法和速度、室温及比浊前的放置时间都会影响实验结果。
故操作时应注意控制加入试剂的方式和比浊时间与标准管一致。
应随气温改变，勤作标准曲线。
5、正常参考值腰穿CSF蛋白含量：0.2～0.4g/L池穿CSF蛋白含量：0.1～0.25g/L侧脑室穿刺CSF蛋白含量：0.05～0.15g/L脑脊液蛋白质含量与年龄成正比，儿童含量较低，成人稍高，老年人又比成年人高。
6、临床意义脑脊液蛋白质含量增高，为血脑屏障被破坏的标志。
颇受临床工作者的重视。
蛋白质含量增高常见于下列情况：（1）中枢神经系统炎症。
脑部感染时，脑膜和脉络丛毛细血管通透性增加，蛋白质分子容易透过，首先是白蛋白增高，随后是球蛋白和纤维蛋白增高。
（2）神经根病变。
如急性感染性多发性神经炎（Guillain-Barre综合征），多数病例有蛋白质增高，而细胞数正常或接近正常，即蛋白-细胞分离现象。
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目的：掌握血清蛋白质测定的方法。
原理：血清(浆)中蛋白质的肽键(-CO-NH-)在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。此反应和2个尿素分子缩合后生成的双缩脲(H2N-OC-NH- CO-NH2)在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。
注意事项
1.黄疸血清，严重溶血，葡萄糖，酚酞及溴磺酞钠对本法有明显干扰，故用标本空白管来消除。但如标本空白管吸光度太高，可影响测定的准确度。
2.高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用下述方法消除：取2支带塞试管或离心管，各加待测血清0.1ml，再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml，塞紧并颠倒混匀10次后离心，倾去上清液，将试管倒立于滤纸上吸去残余液体。向沉淀中分别加入双缩脲试剂及双缩脲空白试剂，再进行与上述相同的其他操作和计算。
对于肝炎和肝硬化肝硬化是一种常见的慢性肝病，是由一种或多种病因长期或反复作用，引起肝脏弥漫性损害。临床上早期由于肝脏功能代偿较强，可无明显症状;后期则有多系统受累，以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并常出现消化道出血、肝性脑病、继发感染、癌变等严重并发症。引起的总蛋白血清蛋白质是血清固体成分中含量最多的一类物质。低，则应尽快治疗，才能将危害降低到最小
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最主要的是肝细胞受损，肝功能出现障碍，肝脏合成蛋白质减少，白蛋白由肝脏合成，是正常人体血清总蛋白中的主要蛋白质成分。白蛋白在维持血液胶体渗透压、体内代谢物质运输。下降明显，造成总蛋白血清蛋白质是血清固体成分中含量最多的一类物质。低。一般是因为肝炎引起的；
评价
1.双缩脲显色反应仅和蛋白质中肽键数成正比关系，与蛋白质的种类、分子量及氨基酸的组成无明显关系，各种蛋白质的显色程度基本相同。
2.本法重复性好，RCV为4%，CCV为3.9%；线性范围为0～140g/L；本法干扰少，并且大多可以避免；使用单一的稳定试剂，操作简便、快速，既适于手工操作，也便于自动化分析，已被推荐为测定血清总蛋白的参考方法。
其次，蛋白质丢失，如严重大面积烧伤烧伤一般是指由热力（包括热液、蒸汽、高温气体、火焰、灼热金属液体或固体等）所引起的组织损害。主要是指皮肤和/或黏膜的损害，严重者也可伤及其下组织。此外由于电能、化学物质、放射线等所致的组织损害及临床过程类似于热力烧伤，临床上均将其归于烧伤一类。也有将热液、蒸汽所致之热力损伤称为烫伤，火焰、电流等引起者称为烧伤。、大量血浆渗出、大出血；肾病综合征肾病综合征（nephrotic syndrome，NS）它不是一独立性疾病，而是肾小球疾病中的一组临床症候群。时，尿液中蛋白质长期被丢失；溃疡性结肠炎溃疡性结肠炎是一种原因不明的慢性结肠炎，病变主要限于结肠的粘膜，表现为炎症或溃疡，多累及直肠和远端结肠，但可向近端扩展，以至遍及整个结肠。时，可随粪便排出一定量的蛋白质。
最后，营养不良广义的营养不良(malnutrition)应包括营养不足或缺乏以及营养过剩两方面，现只对前者进行论述。营养不良常继发于一些医学和外科的原因，如慢性腹泻、短肠综合征和吸收不良性疾病。营养不良的非医学原因是贫穷食物短缺。缺乏营养知识，家长忽视科学喂养方法。在发达国家营养不良的病人通常可以通过治疗原发病、提供适当的膳食，对家长进行教育和仔细的随访而治疗。但在许多第三世界国家，营养不良是儿童死亡的主要原因。在营养不良、社会习惯、环境和急、慢性感染之间存在着复杂的交互影响，以至治疗是非常困难，并不是单单提供适当的食物即可解决。或消耗增加，如长期食物中蛋白质含量不足或慢性肠道疾患所致吸收不良，患有慢性消耗性疾病如结核病、恶性肿瘤、肝硬化肝硬化是一种常见的慢性肝病，是由一种或多种病因长期或反复作用，引起肝脏弥漫性损害。临床上早期由于肝脏功能代偿较强，可无明显症状;后期则有多系统受累，以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并常出现消化道出血、肝性脑病、继发感染、癌变等严重并发症。等。
3.唯一的缺点是灵敏度较低，比酚试剂法低约100倍。但本法的检出限为0.2～1.7g/L，这相当于70g/L的血清3～24μl，已能满足临床生化检验的需要。
4.本法是临床测定血清总蛋白质首选最方便、最实用的常规方法。
5.临床上常见的血清蛋白定量法主要有双缩脲法、临床折射计法、染料结合法、BCA法和免疫比浊法。
3.60～70g/L蛋白质标准液可用定值参考血清或标准白蛋白作标准。
操作
取试管3支，混匀，置25℃30min或37℃10min，在波长540mm处比色，用空白管调零，测各管吸光度。
参考范围
正常成人参考范围为60～80g/L。长久卧床者约低3～5g/L，60岁以上约低2g/L，新生儿总蛋白浓度较低，随后逐月缓慢上升，大约1年后达成人水平。
器材
分光光度计
ห้องสมุดไป่ตู้试剂
1.6mol/L NaOH溶液称取NaOH240g，溶于新鲜制备的蒸馏水约800ml中，定容至1L，贮于有盖塑料瓶中。
2.双缩脲试剂称取硫酸铜结晶(CuSO4·5H2O)3g溶于新鲜制备的蒸馏水500ml中，加入酒石酸钾钠(NaKC4H406·4H2O，用以结合Cu2+，防止CuO在碱性条件下沉淀)9g和KI(防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu2O的离析)5g。待完全溶解后，在搅拌下加入6mol/L NaOH溶液100ml，并用蒸馏水定容至1L，置塑料瓶中盖紧保存。此试剂室温下可稳定半年，若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。