血清白蛋白测定标准操作规程
血清总蛋白测定标准操作规程
血清总蛋白测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清总蛋白测定(缩写TP)；组合项目申请：血生化中肝功能测定项目组合。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定一周，普通冰箱中（2～8℃）稳定一个月。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
3 方法原理蛋白质是由许多氨基酸通过肽键相互结合而成的，肽键在碱性溶液中，能与铜离子作用产生紫红色络合物，在540nm有吸收峰，并与蛋白含量成正比。
通过与同样处理的标准蛋白比较可求出血清总蛋白含量。
碱性蛋白质 + 铜离子 ------------ 紫红色络合物4 试剂及其他用品4.1试剂：总蛋白试剂盒（货号TP6020，80ｍl*5），由北京利德曼生化技术有限公司出品。
4.2试剂盒保存：保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。
血清前白蛋白测定标准规程
血清前白蛋白测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清前白蛋白（缩写PAB)测定，组合项目申请：血生化中肝功能项目测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
检查体液乳酸脱氢酶的体液标本应用肝素抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定24h。
-20℃保存稳定30天。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，24h不饮酒和12h以上禁食空腹状态。
2.3.2注意有无应用影响测试项目的药物。
2.3.3可以使用肝素抗凝的血液标本。
3 方法原理人血清PA与其相应抗体在液相中相遇，立即形成抗原-抗体复合物，并形成一定浊度。
该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。
通过与同样处理的校准比较，计算未知样品的PA含量4 试剂及其他用品4.1试剂：前白蛋白试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。
4.2试剂盒保存：未开瓶的试剂储存在2～8℃可稳定至有效期。
白蛋白的测定
生理盐水(ml) 生理盐水(ml) 0.20 —— 上述1~4管标 上述1~4管标 —— 0.20 准稀释液（ml) 准稀释液（ml) BCG应用液 BCG应用液 （ml) 5.0 5.0
实验试剂
1.溴甲酚绿（BCG）贮存液 1.溴甲酚绿（BCG）贮存液 取BCG 419mg，用10ml 419mg，用10ml 0.1mol/L NaOH溶解，加NaN3 100mg ，定容至1000mL。 NaOH溶解，加NaN3 ，定容至1000mL。 贮于棕色瓶备用。如用溴甲酚绿钠盐应称取432mg.加水 贮于棕色瓶备用。如用溴甲酚绿钠盐应称取432mg.加水 溶解。 2.0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH 4.2）分别配制0.1mol/L柠 2.0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH 4.2）分别配制0.1mol/L柠 檬酸和柠檬酸钠溶液，然后按12.3：7.7的体积比例混合。 檬酸和柠檬酸钠溶液，然后按12.3：7.7的体积比例混合。 每1000ml混合液加入NaN3 100mg。 1000ml混合液加入NaN3 100mg。 3.30%聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液 3.30%聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液 取Brij-35 30g,加 Brij- 30g,加 少量水，60℃水浴溶解，加水至100ml（此可用Tween少量水，60℃水浴溶解，加水至100ml（此可用Tween-20 或Tween-80代替)。 Tween-80代替) 4.BCG应用液 BCG贮存液250ml，0.1mol/L柠檬酸缓冲液 4.BCG应用液 BCG贮存液250ml，0.1mol/L柠檬酸缓冲液 （pH4.2)750ml,30%Brij-35 8ml(也可以用Tween-20 8ml pH4.2)750ml,30%Brij- 8ml(也可以用Tween或Tween-80 10ml代替）混合而成。 Tween- 10ml代替）混合而成。 5.标准蛋白溶液（10mg/ml) 称取人白蛋白1.00g，用生 5.标准蛋白溶液（10mg/ml) 称取人白蛋白1.00g，用生 理盐水
血清白蛋白测定标准操作规程
血清白蛋白测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清白蛋白测定(缩写ALB)；组合项目申请：血生化中肝功能测定项目组合。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定一周，普通冰箱中（2～8℃）稳定一个月。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
3 方法原理血清中的白蛋白与溴甲酚绿在PH=4.2的条件下结合生成绿色复合物，溶液由黄色变为绿色，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，通过在630nm处测定其吸光度可得出白蛋白的含量。
PH=4.2白蛋白 + 溴甲酚绿 --------------- 绿色复合物4 试剂及其他用品4.1试剂：溴甲酚绿法测定白蛋白试剂盒，由北京利德曼生化技术XXX出品。
4.2试剂盒保存：保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。
血清前白蛋白测定标准规程(知识资料)
血清前白蛋白测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清前白蛋白（缩写PAB)测定，组合项目申请：血生化中肝功能项目测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
检查体液乳酸脱氢酶的体液标本应用肝素抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定24h。
-20℃保存稳定30天。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，24h不饮酒和12h以上禁食空腹状态。
2.3.2注意有无应用影响测试项目的药物。
2.3.3可以使用肝素抗凝的血液标本。
3 方法原理人血清PA与其相应抗体在液相中相遇，立即形成抗原-抗体复合物，并形成一定浊度。
该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。
通过与同样处理的校准比较，计算未知样品的PA含量4 试剂及其他用品4.1试剂：前白蛋白试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。
4.2试剂盒保存：未开瓶的试剂储存在2～8℃可稳定至有效期。
白蛋白检测操作程序
白蛋白检测操作程序白蛋白（albumin ，ALB ）是一种仅含有氨基酸的单纯蛋白质,在血浆中发挥多种生理功能。
溶于水和中性盐，易与阴离子染料结合，故本试验采用溴甲酚绿（阴离子染料）法测定,在反应中加入丁二酸缓冲液能够避免溶液混浊，降低空白吸光度。
主要用于肝、肾等疾病的诊断。
实验原理在pH4.2条件下，白蛋白与溴甲酚绿结合形成蓝绿色结合物,蓝绿色结合物与样本中白蛋白浓度成正比,在630nm 处测定吸光度值，即可求得样本中白蛋白的浓度。
试剂与仪器1. 试剂1.1. 白蛋白试剂盒（由上海复兴长征医学科学有限公司提供）化学组成：溴甲酚绿0.35mmol/L 丁二酸缓冲液50mmol/L工作参数：在开展项目之前或更换试剂品牌时，将以上工作参数输入到仪器内，并按要求进行调整后，方可进行实验。
技术性能指标:试剂空白起始吸光度（630nm37℃）≤0.20A 。
线性范围：50g/L ±10%。
准确度：相对偏差(RE%)≤±10%。
精密度：批内精密度变异系数(CV%)≤5%；批间精密度相对极差(%)≤5%。
储存条件、有效期：储存于2～25℃，避光可稳定18个月。
以蒸馏水为空白在630nm 处光吸收值高于0.3A时，则不能使用。
计算公式： 白蛋白深度(g/L )= ×校准液浓度(g/L )样品管吸光度校准管吸光度以上是依据化学实验计算测试结果的公式，全自动分析时将校准液浓度值（Conc值）输入仪器即可。
1.2. 英国郎道（RANDOX）质控品，每次采用正常和异常两个水平，并参照质控品测试要求进行。
1.3. 校准液2. 仪器采用日立（HITACHI）7060型全自动生化分析仪。
选择波长340-800nm之间，能对终点、速率、两点、免疫比浊等方法的实验进行测定。
标本测定程序1. 开机：开机前要加清洗液、上打印纸、接蒸馏水等。
然后打开电源及中文计算机信息管理系统。
2. 试剂准备：开机后将所需试剂置于试剂盘相应位置。
血清(浆)总蛋白含量测定操作规程
1.目的和适用范围：1.1.为保证血液检测的结果正确性，规范实验操作，特制定本操作规程。
1.2.适用于本实验室，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语：无3.职责：3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
4.工作程序4.1.操作说明4.1.1.实验原理：不同物质的折射系数是不同的。
折射率随物质浓度的变化而变化。
使用蛋白折射仪，根据光线通过血清中的折射率可以测得一定的值（即血清总蛋白含量）。
4.1.2.实验所需设备和材料：蛋白折射仪、100ul加样器、吸头、柔软一次性纸。
4.1.3.折射仪的零点调节4.1.3.1.使用高质量的放在密封玻璃管中的蒸馏水（如注射用水）。
把折射仪及蒸馏水置于22℃－25℃的室温中。
然后在折射仪上放上蒸馏水。
4.1.3.2.观察结果：准线应在 1.000处（Urine Specific Gravity Scale）或 1.333处（Refractive Index Scale）如误差达1/2格，则应调准零点。
用小螺丝刀调节零点。
顺时针方向增加读数，逆时针方向减少读数（即降低分界面的位置）。
最后的调节方向应是顺时针方向的。
4.2.实验操作步骤：4.2.1.从标本中（避开红细胞）吸取血清或血浆50ul。
4.2.2.打开覆盖棱镜的盖板。
4.2.3.将血清滴到棱镜于盖板之间的棱镜表面（靠近后部的地方），切勿使吸管接触到棱镜表面。
4.2.4.盖上盖板。
4.2.5.棱镜对准一光亮的窗口或一光源，使观察镜中亮的和暗的有一明显的对比和一清晰的分界面。
4.2.6.旋转目镜，调节并对准焦距，使分界面清晰。
通过亮暗交界线，直接读出总蛋白数值。
4.2.7.记下供血浆者总蛋白值。
4.2.8.翻起盖在棱镜上的盖板，先用软纸或专用纸吸干血清，然后用蒸馏水及软纸或专用纸洗擦盖板与棱镜的表面，如果棱镜表面潮湿会使下一标本检测时不准确。
不要用硬的东西洗擦棱镜表面及盖板，也不要用酒精洗擦。
白蛋白检测作业指导书
白蛋白检测作业指导书
1 检验目的
规范白蛋白（ALB）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2 测定方法
溴甲酚绿法。
3 检测原理
白蛋白在PH4.2的缓冲液中带正电荷，在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的染料溴甲酚绿（BCG）结合形成蓝绿色复合物，在波长630nm处有吸收峰，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比例。
4 样本
血清、肝素或EDTA抗凝血浆，处理方法见生化标本采集程序。
稳定性：2～8℃稳定6天
5 仪器和试剂
5.1 仪器：美国贝克曼-库尔特DXC800、AU5811全自动生化仪、迈瑞BS800M生化分析仪。
5.2 试剂：由武汉元景商贸公司提供原装贝克曼-库尔特试剂及迈瑞公司提供的生化试剂（详见试剂说明书），超过失效期的试剂不能使用。
白蛋白(Alb)测定标准操作程序SOP文件
贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
5仪器
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-11
白蛋白（Alb）测定
版序：ABCD
页码：第2页，共3页
低。在严重的低蛋白情况下，血浆白蛋白的浓度可以低达2.5g/dl。由于血浆的渗透压将低，水分通过毛细血管渗透进入组织。在白蛋白低于20g/l时，临床出现水肿症状。白蛋白的浓度监测可以提供进行饮食供给的提示和监测肝脏功能。
ALb参数设置表
TEST NAME [ ALB ]
R.VOLUME(R4) [ 0 ]
9注意事项
9.1应该在1小时内分离血浆或者血清。
9.2血清标本出现溶血、脂血、黄疸或抗坏血酸的干扰情况参见抗干扰能力。
9.3换算公式：g/dl×10 = g/l
9.4仅应用于体外诊断。
9.5扔弃废物应符合当地的法规。
10抗干扰能力：
10.1标准：回收率在90％－110％之间。
10.2黄疸：黄胆指数达到21时不会有明显干扰。（直接和间接胆红素浓度约为21mg/dl）。
高白蛋白没有很重要的临床意义，常见于脱水、休克等造成血液浓缩的情况下。
低白蛋白血症可以在很多种疾病和因素下发生：如肾脏疾病，肝脏疾病以及蛋白摄入过少，组织损伤以及蛋白丢失性肠道疾病均可以造成白蛋白水平的降
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-11
白蛋白（Alb）测定
版序：ABCD
页码：第3页，共3页
血清白蛋白测定试剂说明书化学法
血清白蛋白测定试剂说明书化学法## 1. 了解血清白蛋白测定试剂血清白蛋白测定试剂是临床医学中常用的一种化学试剂，用于测定血液中的白蛋白含量。
血清白蛋白是一种重要的蛋白质，它在人体内具有多种功能，包括维持血浆渗透压、运送营养物质和药物、参与免疫反应等。
检测血清白蛋白含量对于评估人体健康状态和诊断疾病非常重要。
## 2. 化学法测定血清白蛋白化学法是测定血清白蛋白含量的一种常用方法，它基于血清白蛋白与特定试剂之间的化学反应进行测定。
常见的化学法包括白蛋白-溴化绿法、白蛋白-溴酚蓝法等。
在这些方法中，试剂的选取和配比对于测定结果的准确性至关重要。
## 3. 试剂说明书化学法的具体步骤### 步骤一：准备样本和试剂需要准备好待测血清样本和白蛋白测定试剂盒中提供的相应试剂。
样本的选择和处理对于后续测定结果至关重要。
试剂的配制和存储也需要严格按照说明书的要求进行。
### 步骤二：进行反应将准备好的样本与试剂按照说明书要求的比例混合，并在特定条件下进行化学反应。
在反应过程中，要根据说明书中的时间要求和温度要求进行精确控制。
### 步骤三：测定光密度反应完成后，使用分光光度计或特定测定仪器测定反应体系的光密度。
根据试剂说明书提供的测定方法和标准曲线，计算出样本中白蛋白的含量。
### 步骤四：结果分析和记录根据测定结果进行数据分析，并按照说明书的要求进行结果的记录和报告。
在结果分析中需要注意对实验条件的准确描述以及可能存在的误差来源。
## 4. 个人观点和理解血清白蛋白测定试剂的化学法作为测定白蛋白含量的重要方法，具有操作简便、准确性高的特点。
然而，在实际操作中，需要严格遵循说明书中的操作步骤和注意事项，以确保测定结果的准确性和可靠性。
对于化学法测定中可能存在的干扰因素和误差源，也需要有一定的了解和应对措施。
血清白蛋白测定试剂的化学法虽然在临床中被广泛应用，但在实际操作中也需要科学严谨的态度和系统的实验训练。
## 总结通过本文的介绍，我们了解了血清白蛋白测定试剂的化学法测定原理和具体步骤。
血清白蛋白测定及紫外分光光度计的使用
10
于空白管中加入蒸馏水10 μl，各管充分混匀。
2、分光光度计测定方法：波长620nm， 空白管调零，测定标准管和测定管吸光度 值，按公式计算测定结果。
计算公式：
C样
A样 A标
C标
（40g/L）
三、参考值：
总蛋白：62~82 g/L 白蛋白：35~55g/L 球蛋白：20~30 g/L 白蛋白/球蛋白=1.5~2.5/1
血清白蛋白（ALB）的测定 (Assays for Serum Albumin)
（溴甲酚绿染色法）
一、原理 二、测定方法 三、参考值 四、临床意义 五、方法学评价 六、注意事项
一、原理
在pH4.2缓冲液中，溴甲酚绿（BCG） 与白蛋白结合形成蓝色复合物（血清白蛋 白在pH4.2的缓冲液中带正电荷，在非离 子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的 染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色复合物）， 在波长620nm处有最大吸收峰，其颜色深 浅与白蛋白浓度成正比。与经过同样处理 的白蛋白校准液进行比较，即可计算出样 品中白蛋白含量。
六、注意事项
1、应保持PH为3.8 2、BCG与多种蛋白呈颜色反应，及与a-球 蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白结合显色， 但血清中BCG在30秒内与白蛋白的反应最 快，且呈主导地位 3、实验小组分批间隔保温。
溴甲酚绿（BCG）与血清蛋白呈非特异性反 应，但是在反应的30秒钟内溴甲酚绿（BCG）与 白蛋白结合形成蓝色复合物呈特异性反应。因此 反应结束后应立刻比色测取吸光度。
二、测定方法
1、加样： 试管三只
试剂 空白管（B）标准管（C）测定管（U）
工作试剂（ml）
2
2
2
标 准 液（μl）
血清白蛋白测定(精)
结果报告： 被检者： TP__________g/L［60～80g/L］
＿＿＿年＿＿月＿＿日 检查者：＿＿＿＿
注意事项：
1、由于各种血清蛋白质的分子量不同，故其浓度不宜用mol/L表 示。
2、双缩脲反应并非蛋白质的颜色反应。凡分子内含有两个或两个 以氮丙上或二氨碳酰基原胺甲 等子酰间基接（连－接Ｃ，Ｏ均Ｎ可Ｈ呈2双）缩，脲不反论应是。直如接缩相二连脲还，是草通酰过二一胺个２，
实验二、血清白蛋白测定
【实验要求】 掌握BCG法测定血清Alb的实验原理与方法；
学习微量加样器的使用方法；能熟练使用分光 光度计。 熟悉实验方法学评价 了解血清白蛋白测定的临床意义
【实验原理】
在pH4.2的缓冲液中，清蛋白作为一种阳离子 与阴离子染料溴甲酚绿（bromocresol green，BCG）结合形成蓝绿色复合物，在波 长630nm处有吸收峰，颜色深浅与清蛋白含 量成正比，与同样处理的清蛋白标准液比较， 可求得血清清蛋白含量。
【操作】
取试管三支，标明测定、标准和空白管，按表 操作。
加入物 / ml 工作试剂 标准液 样品 生理盐水
测定管 4.0
0.02
标准管 4.0 0.02
空白管 4.0
0.02
充分混匀，置室温10min，用630nm波长比色，以空白管调零， 读取各管吸光度。
【计算】
血清清蛋白（g/L）＝ A测/A标×清蛋白标准 液浓度g/L
3、双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离子，以维持铜离子 在碱性溶液中的溶解性；碘化钾能防止两价铜离子还原．
4、高脂，黄疸及溶血标本应作清空白对照来校正误差。含脂类极 多的血清，加入双缩脲试剂后会出现混浊，可用乙醚3ml抽提后再 进行比色．
血清白蛋白测定方法
血清白蛋白测定方法
白蛋白在血液里挺重要的，就像咱们身体里的“小助手”。
想知道白蛋白有多少，就得测一测。
有个简单的方法，就是看颜色。
用专门的试剂跟血液混一混，如果颜色变深了，那就说明白蛋白多了。
这种方法挺直观的，就是得靠眼睛估摸，可能不太准。
还有种方法更高级点，就是用抗体去找白蛋白。
抗体就像个“猎人”，专门找白蛋白这个“猎物”。
找到了就做个标记，然后数数有多少个标记，就知道白蛋白有多少了。
这种方法比较准，但得在实验室里弄。
还有一种方法是看白蛋白在电场里怎么跑。
给血液通个电，白蛋白就会跟着电流跑。
跑得快还是慢，就能看出白蛋白有多少。
这个方法就像看比赛，看哪个跑得快，就知道谁赢了。
不管哪种方法，都是为了知道白蛋白多不多，是不是在正常范围内。
这样医生就知道咱们的身体情况了，该怎么调理就心里有数了。
血清总蛋白测定标准操作规程
血清总蛋白测定标准操作规程1.实验原理：（双缩服法）本试剂采用双缩胭反应，即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与两价铜离子反应生成蓝紫色络合物，其中每个铜离子与五至六个肽键络合。
双缩胭反应被广泛应用于临床检验，具有简便、快速可靠的特点。
在试剂中加入碘化物有助于防止碱性铜络合物的自动还原，反应形成的蓝紫色物质与样本中总蛋白浓度成正比，通过测定520-56Onm处吸光度值的变化，即可计算出样本中总蛋白的浓度。
Cu"+蛋白质3→Cu蛋白质复合物2〜8C保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释6.1线性范围：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，本试剂线性范围可样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本。
达100g∕Lo最大稀释5倍。
6.2单位换算:g∕dL=g∕L×O.17检验结果的局限性6.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在540nm处吸光度大于0.200时不能使用。
8.产品性能指标8.1试剂外观：蓝色透明液体，无悬浮物及沉淀物。
8.2装量：不低于标识值8.3空白吸光度：在54Onm处，光径ICm时，空白吸光度AWO.200。
8.4分析灵敏度：在540nm处，光径ICm时，测量70g∕L的总蛋白，吸光度差4A20.1509.5线性区间：试剂的线性区间为[30.0T00.0]g∕L,在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.995；b）线性相对偏差不超过±6.0机8.6精密度8.6.1重复性：重复测试（70.0÷10.0）g/L的样本,所得结果的变异系数（CV）应W2.0%8.6.2批间差：重复测试（70.0±10.0）g/L的样本，所得结果批间相对极差（R）应W5.0%8.7准确性：相对偏差应不大于±5.0机8.8稳定性：（2-8）C下，原包装存放的试剂有效期为18个月.取到期后一个月的试剂进行测试，应满足-6.1、7的要求。
血清白蛋白的分离与纯化、蛋白定量测定
实验ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ的
掌握DEAE纤维素层析法分离纯化蛋白的方 法
掌握考马斯亮兰法测定蛋白质的原理
DEAE纤维素层析法分离纯化 白蛋白
离子交换层析基本原理
根据待分离物质带电性质不同的分离纯化 方法 以离子交换剂为固定相，特定的离子溶液 为流动相，依据各种离子或离子化合物与 离子交换剂的结合力不同进行分离纯化的 层析方式
β-球蛋白 γ-球蛋白
5.06
5.12 6.85-7.50
300000
9000-150000 156000-300000
实验原理
除去硫酸铵后的白蛋白在0.02mol/L醋酸铵缓冲液（pH 6.5）条件下，加 到DEAE纤维素柱上，此pH时， DEAE纤维素带正电荷。 改用0.06mol/L醋酸铵缓冲液（pH 6.5）后。在此pH与离子强度时， DEAE-纤维素带有正电荷，能吸附带负电荷的蛋白质如白蛋白（pI 4.9）。 带正电荷蛋白质如γ-球蛋白（pI约7.3），不被吸附故直接流出。用 0.06mol/L醋酸铵缓冲液洗脱吸附在离子交换柱上的少量β-球蛋白及α-球 蛋白。 将醋酸铵浓度提高至0.3mol/L，白蛋白被洗脱下来（尚混有少量α-球蛋 白）。 整个层析过程用紫外检测仪监测流出蛋白组分，用自动部分收集器收集， 用记录仪记录整个洗脱过程。
1标准方法1具体测定按下表操作待测样品的加样量见下表的第8910管加入物ml001002004006008010002004006蒸馏水01009008006004002008006004考马斯亮蓝试剂50505050505050505050边加边混匀23分钟后以1号管为空白对照测定各样品在595nm处的光吸收值a595最好在试剂加入后的520min内测定吸光值因为这段时间内颜色最稳定测定中蛋白染料复合物会有少部分吸附在比色杯壁中不可使用石英比色皿因不易洗去染色可用塑料或用玻璃比色皿使用后用95的乙醇荡洗以洗去染色
检验科生化白蛋白测定的标准程序
白蛋白测定的标准程序【目的】体外检测血清白蛋白（ALB ）的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况。
孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。
此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理本试剂采用澳甲酚绿染料结合法，即在PH4.2条件下，白蛋白与澳甲酚绿结合形成蓝绿色络合物。
反应形成的蓝绿色络合物与样本中白蛋白浓度成正比。
通过在630nm处测定吸光度值的变化值，即可测得样本中白蛋白的浓度。
二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司ALB试剂盒，为液体单试剂，其各组分如下：试剂组分澳甲酚绿0.35 mmol/L丁二酸缓冲液50 mmol/L2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号:449 5 0/4 5 9 5 0对测定进行校准。
2. 2校准间隔2. 2. 1试剂批号变更时使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准后再对临床病人样本进行测定。
2. 2. 2室内质量控制出现问题时使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准并确认问题得到解决后方可对临床病人样本进行测定。
三、操作按生化分析仪操作要求结合长征试剂说明书输入测定参数，并按校准、质量控制、样本测定的顺序进行常规测定。
四、计算白蛋白浓度（g/L ） 五、质控程序1. 建议采用朗道水平2（正常范围质控）和 水平3 （病理范围质控）两个水平的血清进行室内质控。
白蛋白项目SOP
白蛋白项目SOP1. 检测目的在罗氏cobas c701生化分析仪上定量检测人血清的白蛋白，确保检测结果的准确性及重复性。
2. 检测方法溴甲酚绿比色法法3. 检测原理pH 4.1白蛋白BCG复合物白蛋白＋BCG当pH值达到4.1时白蛋白充分显示出阳离子特征，能与阴离子染料溴甲酚绿（BCG）相结合，形成蓝绿色复合物。
蓝绿色的颜色强度与白蛋白浓度成正比，可使用光度计来判定。
4. 样本要求4.1抽取患者静脉血3-5ml,加入一次性含分离胶的试管内，试管粘贴标注患者姓名、科别、床号等信息的条形码并送检。
4.2 标本采血后尽快送检，送检后放入离心机，离心转速3500转/分离心10分钟，或参阅cobas 前处理标准操作程序，分离出血清准备检测。
如因仪器或其它原因不能及时检测标本，可将标本置于2-8℃冰箱暂存，并尽快检测标本。
5. 仪器：罗氏cobas c701生化分析仪6．试剂：罗氏原装配套试剂，试剂无需任何处理，可直接使用6.1 试剂成分：R1:枸橼酸盐缓冲剂：95mmol/l，pH 4.1；防腐剂R3:枸橼酸盐缓冲剂：95mmol/l，pH 4.1；溴甲酚绿：0.66mmol/l；防腐剂6.2试剂存储及稳定ALB: 15-25°C下保存期限：见cobas c pack标签上的有效期机上稳定期：4周Nacl 稀释液9％:2-8°C下保存期限: 见cobas c pack标签上的有效期机上稳定期: 4周7. 校准程序7.1 校准材料：S1:H20，S2:C.f.a.s(罗氏多项生化校准品）7.2 校准模式：线性7.3 校准方法：2点校准7.4 校准频率：－试剂批次改变之后－如有需要，遵循质控步骤8. 质量控制程序8.1 质控材料：PRECINORM U (罗氏通用正常值质控品，复溶后使用)；PRECIPATH U (罗氏通用病理值质控品，复溶后使用)8.2 质控周期：每工作日一次，于每日标本检测前进行。
白蛋白测定标准操作程序
白蛋白测定标准操作程序1. 摘要白蛋白试剂盒适用于体外临床检验，用于测定人血清中白蛋白的含量。
2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中白蛋白的浓度。
3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定白蛋白浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的白蛋白试剂盒采用的是溴甲酚绿法。
5. 原理在PH4.2环境中，在有非离子型表面活性剂Brij-35存在同时，血清中的白蛋白可以与溴甲酚绿形成蓝绿色复合物，并且引起630nm 处吸光度的上升。
由于反应所产生的化合物在波长630nm 处有吸收峰，所以在一定底物浓度范围内， 630nm 处吸光度的变化值与样本中白蛋白的含量成正比。
白蛋白溴甲酚绿复合物）溴甲酚绿（白蛋白−−−−→−+35-rij 2.4p B H BCG6. 仪器日立7600自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：溴甲酚绿、Brij-35、丁二酸7.3 试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4 试剂准备：试剂为即用式。
8. 标准品和质量控制8.1 校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L 氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2 质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一 次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml 去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
白蛋白的测定
白蛋白的测定1.原理:在PH4.2环境中，溴甲酚绿在有非离子去垢剂聚氧乙烯月桂醚存在时，可与蛋白形成蓝绿色复合物。
2.标本采集与处理：2.1受检者准备：病人必须空腹12小时，不饮酒24小时后采集血样。
2.2静脉采血：除非是卧床的病人，一般采血取坐位，从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带；2.3标本应无溶血，如不符合要求，应重新采集。
2.4采血管要求:采血时要求使用一次性无菌注射器，一人一管，用后毁形，用500mg/L有效氯浸泡消毒３０分钟，回收、焚烧、做好登记。
3.试剂：3.1试剂组成：（柏定生物工程（北京）有限公司）琥珀酸缓冲液75 mol/L溴甲酚绿0.15mmol/L3.2标准液：40g/L3.3质控血清：应在测量未知样本的同时检测质控物并确保质控在可接受的范围内，并且结果必须在三个标准差范围内。
3.2.1质控品批号及范围:批号022431，范围*±2st和*±3s。
3.2.2保存环境:在2—8℃保存，有效期内稳定。
3.4试剂的贮存与稳定性：试剂在2—8℃保存，有效期内稳定。
4.仪器：上海迅达公司的半自动生化分析仪XD811。
5.操作程序：5.1分析参数：：方法: 终点法波长：630nm5.2操作步骤：6.计算方法:测定管吸光度/标准管吸光度×标准白蛋白浓度7.操作性能：如浓度﹥60g/L ，用生理盐水稀释样品后,重新测定,结果乘以稀释乘倍数。
8.参考值：35——55g/L 9.结果审核：9.1室内质控结果的判断：对质控结果进行分析是否在控。
9.2对检验结果进行审核，包括检验项目是否漏项，打印是否清楚。
10.临床意义：严重失水、血浆浓缩所致急性浓度 多因严重灼伤、 慢性浓度 见于肝肾疾病。
11.参考文献：全国临床检验操作规程 中华人民共和国卫生部医政司。
血清蛋白质浓度定量测定
【计算】 （一） 绘制标准曲线。 （二） 以测定管吸光度值，查找标准曲线， 求出待测血清中蛋白质浓度(g/L)。 （三） 再从标准管中选择一管与测定管光密 度相接近者，求出待测血清中蛋白质浓度 (g/L)。
【试剂】 1、 试剂A：1％BCA二钠盐 2％无水碳酸钠 0.16%酒石酸钠 0.4％氢氧化钠 0.95％碳酸氢钠 混合调PH值至11.25。 2、 试剂B：4％硫酸铜。 3、 BCA工作液：试剂A 100ml ＋ 试剂B 2ml混合。 4、 蛋白质标准液：用结晶牛血清白蛋白根据其纯度用生理盐水配制成 1.5mg/ml的蛋白质标准液。（纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确 定） 5、 待测样品：用双缩脲测定法的样品稀释而成。 此法测定蛋白质浓度，近些年被科研工作者广泛选用。目前BCA法的试 剂盒市面有售。 总之，虽然蛋白质含量的测定方法很多，但是，还没有一个完美的方法 。在选择测定方法时，可根据实验要求和实验室条件决定。
孔号 试剂（μ L） 标准蛋白溶液 （0.5mg/ml） PBS 缓冲液 待测样品 BCA 工作液 蛋白质含量（μ g）
空白孔 — 20 — 200
1 2 18 — 200 0.05
2 4 16 — 200 0.1
3 8 12 — 200 0.2
4 16 4 — 200 0.4
5 20 — — 200 0.5
空白孔 0 0.1 — 2.0
1 0.02 0.08 — 2.0 0.05
2
3
4
5 0.1 0 — 2.0 0.5
实 验 步 测定孔 骤
— 0.1 2.0
0.04 0.06 0.08 0.06 0.04 0.02 — 2.0 0.1 — 2.0 0.2 — 2.0 0.4
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血清白蛋白测定标准操作规程
1 检验申请
单独检验项目申请：血清白蛋白测定（缩写ALB）;组合项目申请：血生化中肝功能测定项目组合。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理
2。
1标本采集
2。
1.1常规静脉采血约2ml,不抗凝,置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2。
1。
2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2。
1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2。
1。
5下列标本为不合格标本
2。
1。
5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本,或少于0。
1ml的血清或血浆。
2。
1。
5。
2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2。
1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的.
2。
1。
5。
4其他如标识涂改、标本试管破裂等.
2。
2标本保存
2.2。
1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清.
2.2.2标本保存时间：室温(15～25℃)下可稳定一周，普通冰箱中（2～8℃）稳定一个月。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.3标本采集的注意事项
2.3。
1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
2。
3.2不建议采集抗凝血标本,如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
3 方法原理
血清中的白蛋白与溴甲酚绿在PH=4.2的条件下结合生成绿色复合物，溶液由黄色变为绿色，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，通过在630nm处测定其吸光度可得出白蛋白的含量。
PH=4.2
白蛋白 + 溴甲酚绿—-—-—-------———绿色复合物
4 试剂及其他用品
4.1试剂:溴甲酚绿法测定白蛋白试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品.
4。
2试剂盒保存：保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。
开盖后放于仪器的冰箱中至少稳定14天.开盖后避免污染。
变质指示：当试剂有浊度时,表明有细菌污染，不能继续使用.
4.3试剂盒准备：液态单试剂型，即开即用，无特殊准备
4.4试剂盒主要成分:缓冲液（pH 4.2）50 mmol/L，溴甲酚绿0.25 mmol/L,其中含有稳定剂与保护剂＜0.1%。
5 校准品与校准模式
5.1校准品： Beckman-Coulter SYNCHRON LX MULTI 校准液（P/N 442600),其白蛋白浓度值可溯源至美国国家标准技术研究所(NIST)标准参考材料。
5。
2校准类型和校准点数目:线性模式，1个校准点.
5。
3校准周期：校准间隔时间不限。
但在:①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器
进行全面保养后;③仪器的重要零件更换后；均须进行一次校准.
5.4 校准液重建方法：Beckman —Coulter SYNCHRON LX MULTI 校准液即开即用,无需特殊准备。
6 质控品与室内质控规则
6。
1 质控品采用由Beckman-Coulter 公司提供的两个不同水平未定值质控血清。
6。
2 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。
6.3 质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。
6.4 质控规则：采用Westgard 多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。
7 适用仪器
适用AEROSET 和C16000全自动生化分析仪器。
8 标本检测步骤:装载试剂 → 进行校准 → 进行质控 → 输入标本检测项目 → 加载标本 → 标本测定 → 结果复核 → 报告。
9 主要分析参数
参见说明书. 10 结果计算
计算公式：白蛋白浓度(g/L ）＝
g/L)A nm
800600nm
800600校准液白蛋白浓度（校准液标本）（）（⨯--A
仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。
11 检验结果的报告及范围 11。
1 结果的报告
11。
1。
1 结果经审核确认准确无误后发出报告.
11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签
名,并有与申请单相同的医学信息。
11。
1。
3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。
11。
2报告范围：10~60g/L,超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。
12 操作性能
12。
1精密度：批内CV为〈3。
0％，总CV <3.0％。
12.2线性范围：10～60g/L。
12。
3方法的有限性及干扰因素:甘油三酯达11。
3mmol/L时影响小于10％，血红蛋白达4.5g/L时影响小于10％，胆红素达684umol/L时影响小于2%.
13 参考范围及医学决定水平
参考范围:40～55 g/L。
医学决定水平：
20 g/L:低于此值,肝病患者提示严重预后不良.还应测定尿蛋白,以查明有无过多的蛋
白丢失。
35g/L:此亦为参考值下限，凡低于此值时，各种引起白蛋白降低的因素均应列入考虑范围，如肾病、肝功不全、严重的营养不良、急、慢性炎症、恶性肿瘤等。
55g/L:在此值以上的，应考虑脱水的可能性，并进行红细胞比积测定，以检查其是否增高。
14 临床意义
14.1血浆白蛋白的生理功能很多,包括营养、维持渗透压、是血管内多种物质的运输载体等。
白蛋白在肝脏中合成，是监测肝脏疾病的一个重要指标。
14。
2肝脏疾病使白蛋白的合成减少表现为血清白蛋白降低浓度，并与肝脏病变的严重
程度成比例，白蛋白是对肝功能作分级的评价指标之一。
14。
3血清白蛋白降低还见于严重的吸收不良、肠梗阻、风湿热、恶病质、以及多种全身性疾病。
14。
4当有蛋白质丢失过多的情况，如大面积烧伤、肾病综合征、慢性肾炎、糖尿病、慢性肠炎、肿瘤、充血性心力衰竭等,血清白蛋白也常降低。
14。
5血清白蛋白增高的情况较少见，高白蛋白血症偶见于脱水所致的血液浓缩。
15 结果审核以及分析与相关项目的联系
15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。
15。
2认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名.
15.3相关项目：审核与总蛋白、血清蛋白电泳、丙氨酸氨基转移酶等的关系,如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。
.
16威胁生命的“紧急值”及报告规定
(本项不作规定)
17 有关引用程序与文件
17.1 Abbott自动生化分析仪仪器标准操作规程。
17.2生化检验室内质控标准操作程序。
17.3检验结果审核程序。
17.4标本送检和接收程序。
18 参考文献
18。
1陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程。
杭州:浙江大学出版社， 2004. 18。
2北京利德曼生化技术有限公司白蛋白测定试剂盒说明书。
行业标准WS/T404.2—
2012。