酵母菌、霉菌的观察

酵母菌、霉菌的观察

酵母菌是一类单细胞真菌，一般呈圆形、椭圆形，无性繁殖以芽孢为主，也有少数是裂殖，有些酵母菌能产生囊孢子，有的能形成假菌丝。酵母菌的菌落似细菌菌落，但较大且厚，多呈白色，少数为红色。酵母菌在液体中生长可形成菌膜、菌环、沉淀和浑浊。酵母菌的细菌结构较完善，即有壁、膜、质、核等结构。酵母菌的细胞形态、繁殖方式和培养特征均为菌种鉴定的依据。

酵母活细胞新陈代谢旺盛，活力强，还原力也强，若无毒的染料进入细胞，既被还原脱色，但死细胞及代谢作用缓慢的老弱细胞无此还原力。美兰是无毒染料，且能被活细胞还原成无色，故可用来区别细胞的死活。

霉菌是一些小型丝状真菌、单细胞（根霉、毛霉）或多细胞（曲霉、青霉），其细胞结构与酵母类似，同属真核细胞。

霉菌形态较复杂，个体较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。其菌丝分为气生菌丝与营养菌丝（菌丝比放线菌粗得多）观察时请注意菌丝是否具有横膈膜、有无假根、无性繁殖时形成何种孢子，孢子着生方式以及孢子头的构造等，以区别各种不同霉菌的形态。

霉菌菌落由分枝状菌丝组成，较疏松，呈毛状、棉絮状、绒毛状或毡状。由于不同霉菌形成的孢子均有不同颜色、构造、性状，故菌落表面呈现出不同的结构和色泽特征。菌丝一般呈白色或灰白色，菌落中心的菌丝较老，先产生孢子，故常形成同心圆。

实验材料和方法：

材料：

（1）试剂：美蓝染色液，乳酸苯酚油固定液；

（2）菌种：Saccharomyces cerevisiae (酿酒酵母) Candida tropicalis（热带假丝酵母）Penicillium chrysogenum(产黄青霉) Aspergillus niger (黑曲霉)

Rhizopus nigricans (黑根霉) Mucor racemosus (总状毛霉)

（3）其他：显微镜、载玻片、盖玻片等

1、酵母菌活体观察及死亡率的测定：

（1）取洁净载玻片一片，于中央位置处滴加一滴蒸馏水。用经火焰灼烧后的接种环冷却后取少量菌种于蒸馏水中，盖上盖玻片，在显微镜下观察活体状态下的酵母菌；

（2）在盖玻片一侧滴加美蓝水染液，在另一侧用吸水纸吸，使美蓝水均匀分布在盖玻片内。在显微镜下观察酵母菌染色情况，并计算死亡数目。

2、子囊孢子观察

从产孢子的培养基上挑取少量菌苔于载玻片的水滴中，经过涂片、干燥和热固定后，加数滴孔雀绿染液，染色1min，水洗去染液；加95%的乙醇脱色30s，水洗去乙醇溶液；最后用0.5%沙黄染液复染30s，水洗去染液，用吸水纸吸去载玻片上的水分，待制片干燥后镜检。

3、假菌丝观察（假丝酵母）

经火焰灼烧后的接种环冷却后取少量菌悬液于载玻片上，用盖玻片盖上并镜检。

4、假根观察、孢子囊的观察（黑根霉）

取洁净载玻片一片，于中央位置处滴加一滴乳酸苯酚固定油，用经火焰灼烧后的镊子取少量菌苔（连带培养基）于固定油中，用盖玻片盖上，并用镊子头部轻压盖玻片制成片，在显微镜下观察黑菌霉的假根、孢囊孢子。

5、孢子头结构（产黄青霉、黑曲霉）、足细胞观察（黑曲霉）

方法步骤同4。

视野存活数死亡数总数

1 5 68 73

2 9 12 21

3 5 35 40

4 4 51 55

5 1 17 18

总数24 183 207

死亡率：183/207*100%=88.42%

（表一：酿酒酵母死亡率的测定）

（酿酒酵母的活体观察）（酿酒酵母子囊孢子的观察）

（黑根霉的假根及空的孢子囊）（产黄青霉的孢子头）

（黑曲霉的孢子头）（黑曲霉的足细胞）

分析讨论：

1、由于霉菌菌丝较粗大，孢子很容易飞出，如果放在水中观察时容易收缩变形，所以在制标本时不用水，而用乳酸苯酚固定油，使细胞不致变形，并有杀菌作用。

2、在测定酿酒酵母死亡率的时候，染了美蓝水的酵母需要过一段时间（大约5min）后、或者载玻片过几下酒精灯火焰再测定死亡率，这是为了提高酵母菌死亡的速率。

3、酵母菌有两种生殖方式：有性生殖和无性生殖。在外界条件适宜生存的时候，酵母菌往往采用无性生殖，主要是出芽生殖，即芽殖。芽殖的特点是：在成熟的酵母细胞上长出芽体，并生长发育形成新的个体。但是在新的个体还没有完全和母体分离时，新个体又通过芽殖的方式产生了新个体，这种“芽上长芽”的生殖方式形成了假菌丝。在假丝酵母的观察中，我们可以看到，几个细胞（视野中发现有4个的情况）叠在一起形成了假菌丝。当然，这也可能和几个相互靠的很近的单细胞弄混淆，故实验中需仔细观察细胞联系的紧密程度。

在环境恶劣时，酵母菌往往采用有性生殖的方式，子囊孢子就是有性孢子。两个形态相同，性别不同的细胞（a和α细胞）相互靠近，通过细胞壁、细胞膜的溶解，细胞质融合，此时称为质配，未融合的两个细胞核在一个细胞中的阶段称为异核体阶段。之后会发生核配，形成二倍体的核。二倍体细胞移入营养贫乏的产孢培养基后，细胞便停止营养生长而进入有性繁殖阶段，营养细胞转变为子囊。子囊内的核经过减数分裂，最终形成子囊孢子（酿酒酵母为4个）。在观察子囊孢子时，子囊孢子为绿色，子囊为粉红色。一个子囊中往往观察不到4个子囊孢子的情况，这是因为制片时子囊孢子为立体的，但我们观察到的只是一个面。4、黑根霉的假根之所以称为“假根”，是因为它只具备根的形态，而不具备根吸收营养的功能。在观察时，我们发现黑根霉的孢子囊有的呈现黑色，有的呈现黄色，视野里有很多弥散的无性孢子，呈现黄色的是因为孢子囊破裂，孢子流出囊外。

5、青霉的孢子头是节上生枝，枝上又生枝的，枝上的最末端长有一串串的分生孢子，呈现“扫把状”。而黑曲霉的孢子头是围绕着同一个圆四周长出一圈圈的分生孢子。

6、足细胞是黑曲霉所特有的结构，它长在黑曲霉孢子丝的孢子杆和营养细胞的交届处，在视野中呈现“倒T字形”，“倒T字形”的两端即为足细胞。