实验2 分离以尿素为氮源的微生物
2020浙科版生物选修一新素养同步练习：实验2 分离以尿素为氮源的微生物(Word版含解析)
一、选择题1.土壤中有些微生物能利用尿素是因为()A．其体内含有脲酶B．其体内含有氨(NH3)酶C．它能将CO2合成为有机物D．它们不需要氮源解析：选A。
能利用尿素的微生物就是因为体内含有脲酶，可降解尿素为其生长繁殖提供氮源。
2.从土壤中分离以尿素为氮源的微生物时，所用的LB培养基由以下哪一组成分构成()A．蛋白胨、NaCl、水、酵母提取物、琼脂B．蛋白胨、NaCl、水、琼脂糖C．蛋白胨、NaCl、水、酵母提取物、琼脂糖D．葡萄糖、NaCl、水、酵母提取物、琼脂解析：选C。
LB培养基必须含五大营养元素：碳源、氮源、水、无机盐、生长因子。
由于是固体培养基还必须有凝固剂，为与尿素培养基作对比，所用凝固剂不能带来氮源干扰，因此只能选择相对更为纯净的琼脂糖了。
3.用10－4稀释度的细菌悬液分别涂布于LB、尿素培养基上，培养后的结果，以下叙述正确的是()A．LB培养基上未出现任何菌落B．尿素培养基上出现的菌落数量和种类都多于LB培养基上的C．尿素培养基上出现的菌落数量和种类都少于LB培养基上的D．尿素培养基上是不可能出现菌落的解析：选C。
LB培养基为完全培养基，会出现大量菌落。
尿素培养基上只有能以尿素做氮源的微生物能存活，因此其上的菌落数量和种类都将会减少。
尿素培养基上出现的菌落就是能利用尿素的那些微生物菌落。
4.在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应稀释倍数为106的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。
A同学的结果产生原因可能有()①由于土样不同②由于培养基污染③由于操作失误④没有设置对照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④解析：选A。
该同学可能取的土样不同，可取其他同学的土样进行培养，同时将未接种的培养基同时培养，如果结果不是大约50个菌落，可能是培养基污染或操作有误；如果结果和其他同学数据相同，且未接种的培养基没有菌落生成，说明是土样不同。
5.能合成脲酶的微生物所需的碳源和氮源分别是()A．二氧化碳和氮气B．葡萄糖和氨C．二氧化碳和尿素D．葡萄糖和尿素解析：选D。
高考生物一轮复习 第30讲 微生物的利用夯基提能作业本(含解析)-人教版高三全册生物试题
微生物的利用A组基础过关1.根据分离以尿素为氮源的微生物实验,回答下列问题:(1)写出脲酶降解尿素的反应式:。
(2)该实验分离细菌时用浓度为10-4和10-5土壤稀释液接种,更容易形成单菌落的是。
(3)A同学筛选出的菌落为150个,其他同学只筛选出50个,并且他在设计实验时并没有设置对照。
你认为A同学结果产生的原因可能有哪些?。
如何设计对照实验排除可能影响实验结果的因素:。
(4)涂布平板的所有操作怎样保证无菌?。
(5)有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用?。
答案(1)CO(NH2)2+H2O 2NH3+CO2(2)10-5土壤稀释液(3)可能是土样不同,也可能是培养基污染或操作失误方案有二:一是由其他同学用与A同学一样的土壤进行实验,如果结果与A同学一致,则证明无误,如果结果不同,则证明A同学存在操作失误或培养基配制有问题;另一种方案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养,作为空白对照,以证明培养基是否受到污染(4)应从操作的各个细节保证“无菌”,都应在火焰附近进行。
例如,酒精灯与培养皿的距离要合适、移液管头不要接触任何其他物质、移液管要在酒精灯火焰周围等(5)如果土壤中有许多尿素,在自然界较高温度下会被水解,水解后的氨使土壤碱化,氨还与其他阴离子物质如S、C、N等形成化合物,则会使土壤板结。
有脲酶的细菌使植物废弃物和动物尸体降解,并利用了所形成的氨,有利于自然界中氮的循环解析脲即尿素,是蛋白质降解的产物。
有一些细菌含有脲酶可以分解尿素,利用尿素作为其生长的氮源。
本实验使用涂布分离法分离以尿素为氮源的微生物,用浓度为10-4和10-5土壤稀释液接种,更容易形成单菌落的是10-5土壤稀释液。
A同学结果产生的原因可能是土样不同,也可能是培养基污染或操作失误,排除方案有二:一是由其他同学用与A同学一样的土壤进行实验,结果与A同学一致,则证明无误,如果结果不同,则证明A同学存在操作失误或培养基配制有问题;另一种方案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养,作为空白对照,以证明培养基是否受到污染。
微生物的利用与酶的应用——2020年浙江高中生物选考各地模拟试题分类汇编
微生物的利用与酶的应用——2020年浙江高中生物选考各地模拟试题分类汇编选择题1.(2020.02《名校联盟新高考创新卷》一;19)为了分离某种微生物，实验室配制的培养基成分如下：葡萄糖、氯化钠、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水和尿素溶液。
下列叙述错误的是A．葡萄糖的作用是提供碳源并调节渗透压B．配制该培养基时，必须使用无菌水C．加入尿素溶液之前，需先调好pHD．培养基能用于分离以尿素为氮源的微生物2.(2020.02《名校联盟新高考创新卷》二;20)在细菌培养实验中进行计数时，应计数的是A．各个稀释度样品的培养基上的细菌数 B．合理稀释度样品的培养基上的细菌数C．各个稀释度样品的培养基上的菌落数 D．合理稀释度样品的培养基上的菌落数3.(2020.03全能生B卷;22)在大肠杆菌的培养与分离实验中，下列相关操作正确的是A．在LB固体培养基配制过程中，为防止杂菌污染，需要利用无菌水进行配制B．实验中所需的棉花应使用脱脂棉，因为脱脂棉不易吸水，可以防止杂菌污染C．灭菌后，通常将实验用具放入40~50℃烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分D．倒平板应在无菌超净台进行，将培养基倒入培养皿后先置于水平桌面上，再晃动4.(2020.03杭州二中;2)为从土壤中分离以尿素为氮源的微生物，所配置的固体培养基中不能含有的成分是A．尿素B．氯化钠C．葡萄糖D．琼脂5.(2020.03全能生C卷;10)下列实验操作正确的是A．在LB固体培养基中加入尿素用以分离产脲酶的微生物B．接种环蘸取菌种在固体培养基上进行分离可用于计数C．制作葡萄酒时将葡萄汁装满发酵瓶以保证无氧的发酵环境D．制作泡菜时坛口用水封好，可防止外界空气进入6.(2020.04平湖中学;8)下列关于涂布分离法和划线分离法的叙述错误的是A．涂布分离法使用的接种工具是玻璃刮刀，而划线分离法是接种环B．涂布分离法接种前需配制不同浓度稀释液，划线分离法不需要C．涂布分离法和划线分离法都可以得到单菌落D．涂布分离法和划线分离法都可以对样液中的细菌进行计数7.(2020.04温州二模;22)下列关于多种培养基的叙述，错误的是A．用于“菊花组织培养”的发芽培养基与生根培养基浓度有差异B．尿素固体培养基是将尿素涂布到固体平面培养基上制成的C．醋化醋杆菌扩大培养液中甘露醇的主要作用是提供碳源D．LB培养基中的蛋白腺和牛肉膏既作碳源，又作氮源8.(2020.04台州一模;11)筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。
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实验室守则
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生物技术概述
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第一部分 微生物的利用
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实验1 大肠杆菌的培养和分离
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0002页 0103页 0184页 0186页 0256页 0269页 0319页 0383页 0501页
实验室守则 第一部分 微生物的利用 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 第二部分 酶的应用 实验5 加酶洗衣粉的使用条件和效果 实验7 用蒸气蒸馏法从芳香植物中提取精油 实验9 腐乳的制作 第四部分 浅尝现代生物技术 实验12 乳酸脱氢酶同工酶的分离
浙科版高二生物选修1电子课本课 件【全册】
高中生物浙科版选修一知识点归纳
高中生物浙科版选修一知识点归纳选修一生物技术实践知识点总结第一部分微生物的利用一、微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌：P20-21，灭菌前，试管加棉花塞或塑料盖、三角瓶用封口膜或6层纱布封口……最后各种用品均需用牛皮纸或报纸包好，用高压蒸汽灭菌法（121C，1kg/cm2压力）灭菌15min。
值得注意的是，实验中所需的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易引起污染。
灭菌后，通常将实验用具放入60～80℃的烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分。
在进行实验操作前，将需要使用的用具从烘箱中取出，放到超净台上。
在超净台工作之前，应先打开超净台的紫外灯和过滤风，工作时关闭紫外灯。
塞子制作的好坏是控制污染发生的关键。
2、培养基的配制：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
①培养基种类尺度培养基类型固体培养基液体培养基合成培养基天然培养基鉴别培养基配制特点加入琼脂不加入琼脂由已知成分配制而成由天然身分派制而成添加某种唆使剂或化学药剂主要应用菌种分离,鉴定,计数、保存菌种的扩大培养菌种的鉴别菌种的分离按物理性质分按化学组身分按用途分②微生物培养的培养基：LB培养基。
配制培养基时需考虑营养物质的配比外，还需要考虑微生物生长对pH、氧气、渗透压等的要求。
“细菌喜荤，霉菌喜素”，通常细菌培养基要用卵白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。
此外．细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，霉菌要求在中性偏酸的环境中生长。
选择培养基添加（或短少）某种化学身分3、培养基的灭菌：通常用高压蒸汽灭菌法灭菌。
但假如培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm压力（90C以上）灭菌30min。
有些不能加热灭菌的化合物，如尿素（加热会分解）等，只能用G6玻璃砂漏斗过滤，但玻璃砂漏斗使用前也要在121℃下用纸包好灭菌。
2019-2020学年浙科版生物选修一新素养同步学案：实验2 分离以尿素为氮源的微生物 Word版含答案
实验2 分离以尿素为氮源的微生物[学考报告]知识内容 考试属性考情解读分离以尿素为氮源的微生物 加试 1.进行微生物分离。
使用含有尿素的培养基，采用涂布分离法，分离有脲酶的细菌。
2.使用酚红指示剂检测以尿素为氮源的细菌的存在。
3.说明分离以尿素为氮源的细菌的实验原理。
4.举例说明本实验分离出来的细菌不一定都是以尿素为氮源的细菌一、以尿素为氮源的微生物1.尿素 又称脲，是蛋白质降解的产物。
在人和其他哺乳动物如家畜的尿中都含有尿素，植物不能直接吸收尿素，因此大量尿素的存在将对环境造成污染。
2.以尿素为氮源的微生物这些细菌可以尿素为氮源，是因为其含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。
其利用尿素的反应式为：(NH 2)2C ＝O ＋H 2O ――→脲酶2NH 3＋CO 2。
3.分离以尿素为氮源的微生物所依据的原理在氮源只有尿素时，这些微生物能利用尿素获得氮源而存活；而其他微生物却不能利用尿素，最终因为缺乏氮源而死亡。
二、从土壤中分离出以尿素为氮源的微生物实验1.实验目的(1)使用以尿素为唯一氮源的培养基分离含有脲酶的细菌。
(2)通过指示剂颜色的变化检知酶(脲酶)所催化的化学反应(培养基pH 的变化)。
(3)统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生物的数量。
2.实验原理(1)用选择培养基(培养基类型)可分离出以尿素为氮源的微生物。
(2)在细菌分解尿素的化学反应中，细菌产生的脲酶将培养基中的尿素分解成氨，使培养基变碱，pH 升高，酚红指示剂变红。
(3)根据培养基中的菌落数，可统计土壤样品中含有的这种微生物的数量。
3.实验步骤(1)倒平板：在60 ℃左右时，将两只三角瓶中已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基，在酒精灯旁分别倒入两个培养皿中，在水平的超净台上摇匀，平放至凝固。
(2)制备细菌悬浮液将土样1 g，在无菌条件下加到有99 mL无菌水的三角瓶中，振荡10 min，制成10－2稀释液；从该稀释液中取0.5 mL悬液加到4.5 mL无菌水的三角瓶中，经振荡就制成10－3稀释液；再从10－3稀释液中取0.5 mL悬液加到4.5 mL无菌水的三角瓶中，经振荡就制成10－4稀释液；依此法可依次制备出10－5、10－6……土壤稀释液。
高中生物 课时跟踪检测(二)分离以尿素为氮源的微生物(含解析)浙科版选修1-浙科版高中选修1生物试题
课时跟踪检测（二）分离以尿素为氮源的微生物1．从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如图所示：(1)图中物质A为________________，若要统计每克土壤样品中以尿素为氮源的细菌的活菌数目，宜采用________________法接种到尿素培养基上，对照组配制的培养基为____________培养基，若用同浓度的土壤稀释液接种，实验组培养皿中菌落数____________(填“大于”“等于”或“小于”)对照组。
在能利用尿素的细菌菌落周围，有红色环带出现的原因是_______________________________________________。
(2)下列培养基中，能分离出分解尿素的细菌的是( )A．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水B．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水、尿素C．NaCl、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物、尿素D．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物(3)欲将分离得到的以尿素为氮源的细菌进行扩大培养，应使用________培养基。
答案：(1)无菌水涂布分离LB全营养小于能利用尿素的细菌产生的脲酶，将培养基中的尿素分解，产生的氨使指示剂呈红色(2)B (3)LB液体2．苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。
某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。
请回答下列问题：(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入______作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基________(填“影响”或“不影响”)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用____________________法。
(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于__________________________________；使用________________________________法可以在⑥上获得单菌落。
微生物的利用-大肠杆菌的培养与分离
实验原理
① 培养基 ② 大肠杆菌 ③ LB液体培养基和LB固体培养 基 ④ 划线分离法 ⑤ 菌种的低温保存 ⑥ 无菌技术
一、培养基定义及营养成分
1、定义 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长 繁殖的营养基质，称为培养基。 2、营养成分 培养基中的营养物质包括水、无机盐、碳源、氮源、生长 因子等
• 主要方法：无菌室 无菌柜 超净工作台
• ② 无菌实验器材： 凡是实验中使用的器材，能灭菌处理的必须 灭菌。 • 如玻璃器皿 （包括注射器、吸管、滴管、三角瓶、试管等）、培 养基、无菌衣 、口罩等，无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处 理，例如无菌室内的凳、试管架、天平等，这些虽然无法灭菌， 但是可以消毒，可用化学药品熏蒸、喷洒或擦拭。
• 2、营养成分 • ① 碳源 • 为微生物提供碳元素的物质，可分为有机碳源和无机碳源 • 。如 CO2、NaHCO3 等无机碳源； • 糖类、石油、花生粉饼等有机碳源，异养微生物只能利用有机碳 源；单质碳不能作为碳源。 • 注意：碳源&能源的辨析
• 2、营养成分 • ② 氮源 • 为微生物提供氮元素的物质，可分为有机氮源和无机氮源 • 。有机氮源包括牛肉膏，蛋白胨等， • 无机氮源包括 N2、NH3、NH4+、NO3-等，只有固氮微生物才能利 用 N2。
微生物的利用
1大肠杆菌的培养和分离 2分离以尿素为氮源的微生物
大肠杆菌的培养和分离
• 实验目的 • 实验原理 • 实验器具与材料 • 实验步骤 • 实验结果和结论 • 知识拓展
实验目的
• 利用LB液体培养基进行大肠杆菌的扩增培养的操作 • 利用LB固体平面培养基划线培养进行大肠杆菌的分离 • 说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理
生物学科教学指导意见-选修1(浙科版必修2009版)(适用2013届毕业生)
选修Ⅰ生物技术实践该模块是实验课，要求学生在自学有关知识的基础上，在教师的指导下自己设计并进行实验，然后收集和整理资料，写出报告，进行口头交流，相互讨论，有助于学生较深入地认识微生物的利用、酶的应用、生物技术在食品加工中的应用和在其他方面的应用；培养学生的动手能力与实践能力，领悟观察、实验、比较、分析和综合等科学方法及其在科学研究过程中的应用。
第一部分微生物的利用一、课标内容进行微生物的分离和培养。
二、教学要求本部分“实验3 观察土壤中能水解纤维素的微生物”不作要求，只要求学生做2个实验，即“实验1 大肠杆菌的培养和分离”与“实验2 分离以尿素为氮源的微生物”。
实验1 大肠杆菌的培养和分离基本要求1．进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2．进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。
发展要求说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
说明实验2 分离以尿素为氮源的微生物基本要求1．进行微生物分离，使用含有尿素的培养基分离有脲酶的细菌。
2．使用酚红指示剂检测以尿素为氮源的细菌的存在。
发展要求1．说明分离以尿素为氮源的细菌的实验原理。
2．举例说明本实验分离出来的细菌不一定都是以尿素为氮源的细菌。
说明三、教学建议1．课时建议（共计12课时）实验室守则的学习1课时生物技术概述3课时大肠杆菌的培养和分离2课时分离以尿素为氮源的微生物3课时复习与检测3课时2．实验建议选修Ⅰ内容主要由各种实验组成，强调对学生动手能力的培养与实验操作过程的体验，与必修内容的知识性学习有明显的不同。
学生刚接触时，教师应通过生物技术概述内容的讲解，先让学生对生物技术有一初步的了解，在思想上有充分的准备，使学生形成勤动手、勤实验的意识与习惯，促进学生对本模块的学习与体验。
（1）在“大肠杆菌的培养和分离”的实验中，要特别强调无菌操作，这是进行微生物实验中必备的操作要求，也是本模块多数实验的基本要求，应该让学生形成无菌操作的行为习惯。
高中生物选修一现代生物技术实践必背知识点
高中生物选修一《生物技术实践》必背知识点实验一大肠杆菌的培养和分离【考点一】培养基1、培养基配置①微生物的生命活动需要五大营养要素：水、无机盐、碳源、氮源、生长因子；②有的物质既是碳源又是氮源（为微生物生长提供碳元素和氮元素），如：蛋白质、蛋白胨；③有的既是碳源又是生长因子（是微生物生长不可缺少的微量有机物），如：酵母提取物；④“细菌喜荤，霉菌喜素”；细菌喜37℃的温度；霉菌喜25-30℃的温度；⑤细菌的培养基：蛋白胨、酵母提取物、一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压；通常在中性偏碱的环境中生长；⑥霉菌的培养基：一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可；通常在中性偏酸的环境中生长；⑦在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要适宜的pH、温度以及特殊营养物质，以满足微生物生长对的要求。
2、培养基的种类及用途：①液体培养基：呈现液态，用于扩大培养和工业生产；②固体培养基：配制时需加入琼脂（凝固剂），呈固态，用于菌种分离、鉴定、计数等；③我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌，用LB固体培养基来分离大肠杆菌。
【考点二】灭菌和消毒1、无菌技术：人们利用微生物完成一定的反应，必须要求某种微生物是没有被其他微生物污染的，因此，在培养微生物时必须进行无菌操作；2、灭菌是用物理或化学的方法，杀死或除去环境中的一切微生物的方法。
杀死病原菌的方法叫消毒。
如：实验室要对使用前和使用后的培养基、各种容器进行灭菌；要对实验服、对病人的排泄物和衣物进行消毒。
3、干热灭菌法：是利用火焰将接种环和试管上的微生物烧死（又称灼烧灭菌法），或在140-160℃的烘箱中加热2-3h，将微生物的营养体和芽孢杀死。
4、加压蒸气灭菌法（高压蒸气灭菌法）：这是生产和实验室常用的灭菌法，将灭菌锅内通入压力达到1000g/cm2的高压蒸气，锅内温度达121℃，持续15-30min，即可达到灭菌目的；注意：当培养基内有葡萄糖时，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2压力（90℃以上）灭菌30min。
实验2 分离以尿素为氮源的微生物答案详解
一、选择题1.A。
解析：能利用尿素的微生物就是因为体内含有脲酶，可降解尿素为其生长繁殖提供氮源。
2.C。
解析：LB培养基必须含五大营养元素：碳源、氮源、水、无机盐、生长因子。
由于是固体培养基还必须有凝固剂，为与尿素培养基作对比，所用凝固剂不能带来氮源干扰，因此只能选择相对更为纯净的琼脂糖了。
3.C。
解析：LB培养基为完全培养基，会出现大量菌落。
尿素培养基上只有能以尿素做氮源的微生物能存活，因此其上的菌落数量和种类都将会减少。
尿素培养基上出现的菌落就是能利用尿素的那些微生物菌落。
4.A。
解析：该同学可能取的土样不同，可取其他同学的土样进行培养，同时将未接种的培养基同时培养，如果结果不是大约50个菌落，可能是培养基污染或操作有误；如果结果和其他同学数据相同，且未接种的培养基没有菌落生成，说明是土样不同。
5.D。
解析：能合成脲酶的微生物主要是分解尿素的细菌，其碳源为葡萄糖，氮源为尿素。
6.B。
解析：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M＝(234÷0.1)×106＝2.34×109。
7.A。
解析：酚红指示剂是灵敏性高的碱性指示剂，分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，使pH升高，使酚红指示剂变红。
8.A。
解析：将菌液进行系列梯度稀释，在稀释倍数足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。
9.C。
解析：在倒平板时，左手将皿盖打开一条缝隙，不能将培养皿完全打开，以免杂菌污染。
10.B。
解析：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 ℃恒温箱的目的是检测培养基是否被杂菌污染，即制备是否合格。
11.C12.D。
解析：微生物计数法主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法、光电比浊法、最大可能数(MPN)法、膜过滤法等。
13.C。
解析：琼脂和琼脂糖都起凝固剂的作用，用于制备固体培养基。
但琼脂为混合物，含少量含氮化合物，琼脂加以纯化，去除含氮化合物就成为琼脂糖。
人教版高中生物选修一专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学案含解析
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
2．统计菌落数目(1)活菌计数法：常用稀释涂布平板法。
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②计算公式：每克样品中的菌株数＝(C ÷V )×M 。
C ：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。
V ：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)。
M ：代表稀释倍数。
③统计方法：为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取其平均值。
.1.实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)同时抑制或阻止其他微生物的生长。
2．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
3．测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。
稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌的实际数目低。
4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作为唯一氮源的选择培养基分离能分解尿素的细菌。
5．鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，依据是否变红进行判断。
(2)显微镜直接计数法：在显微镜下直接观察和计数微生物的数量。
3．设置对照(1)对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。
(2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
二、实验设计1．土壤取样从富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤取样。
实验2 分离以尿素为氮源的微生物
酚红
0.25g
尿素
10ml
思考：要验证以尿素 为唯一氮源的培养基 对土壤中的细菌确实 具有选择作用，你该
如何设计实验？
G6玻璃砂漏斗过滤灭菌
为什么用琼脂糖代替琼脂？怎么获得无菌的尿素溶液？
1、配制培养基
实验组
对照组
➢ 尿素培养基
➢ 全营养LB固体培养基
葡萄糖 0.025g 蛋白胨
0.25g
NaCl 0.12g
三、实验材料
举一反三：
为什么从油田
土样：从有哺乳动物排泄的地方取得周土边壤土1壤g 能分
离得到分解石
油的细菌？
有动物排泄物的土壤中尿素含量高， 且含产脲酶的微生物较多
四、实验步骤
配制培养基
制备灭菌的尿素培养基和 全营养LB固体培养基
制备细菌悬液 分别制备10-2、10-3、10-4、10-5 土壤稀释液
涂布分离
用玻璃刮刀将10-4、10-5稀释菌液 涂布到整个平面上
培养、 观察、计数
将培养皿倒置， 在37℃恒温箱中培养24-48h。 观察菌落数，统计细菌数。
1、配制培养基
琼 化的脂➢ 混是尿合未素物被培纯,内养基 含一葡定萄量糖的含 0.025g
氮化N合aC物l
0.12g
K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g
一、实验原理
（1）利用选择培养基分离得到以尿素作为唯一氮源的 的细菌。
（2）细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，导致pH升 高 ，使 酚红 指示剂变红，菌落出现 红色环带 。
一、实验原理
蛋白质 降解
˃
pH升高（˃7）
酚红指示剂变红 （pH=7橙色， pH<7橙色）
二、实验内容
高中生物选修1教材课后习题
实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 1. 如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶？
2. 耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途？
实验8 果酒的制作 1. 葡萄或其他果实上常有天然的野生酵母存在，为什么上述两个实验都要接种 酵母？
2. 为什么发酵瓶中的液体不能装满？
3. 图12中装着水的弯曲玻璃管起什么作用？ 4. 制酒时必须保证所有用具都是清洁的，为什么？
1. 为什么要向发酵瓶中通入空气？
实验8 果醋的制作
2. 为什么空气要用棉花过滤？
3. 你所得到的丙瓶中的液体是否就是市售的白醋？为什么？怎样才能得到白醋？
实验10 泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定 1. 加入白酒起什么作用？ 2. 用水封闭坛口，起什么作用？不封闭有什么结果？
3. 厌氧发酵和有氧发酵的产物有什么不同？
实验11 植物的组织培养 1. 不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使用与本实验相同的生长素和 细胞分裂素浓度？
2. 本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？
3. 如果在自然界取植物样本进行组织培养，你认为应采取什么措施保证样本 不被污染？
实验1 大肠杆菌的培养和分离 1. 如何操作才可以尽量避免被杂菌污染？
2. 在培养后如何判断是否有杂菌污染？
3. 进行恒温培养时为什么要将培养皿倒置？ 4. 实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处理？
பைடு நூலகம்
5. 如果分离的是转基因的大肠杆菌，如何保证不被普通的大肠杆菌所污染？
实验2 分离以尿素为氮源的微生物 1. 为什么要用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基？
2. 有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？
3. 有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现？ 4. 与全营养培养基上的菌落数比较，为什么尿素培养基上只有少数菌落？
2021-2022学年浙江省Z20名校联盟高三(第3次)联考生物试卷+答案解析(附后)
2021-2022学年浙江省Z20名校联盟高三（第3次）联考生物试卷1. 下列关于细胞中各种有机化合物的叙述，正确的是（）A. 酶、抗体都是由氨基酸通过肽键连接而成B. 蛋白质和核酸在细胞内合成时都需要模板、能量和酶C. 糖原、脂质、核酸都是以碳链为骨架的生物大分子D. 细胞中运输各种离子和氨基酸的物质都是蛋白质2. 下列关于细胞生命历程的叙述，正确的是（）A. 细胞的癌变是细胞异常分化的结果，根本原因是基因的选择性表达B. 细胞分化过程中，细胞内核酸的种类和数量会发生改变C. 衰老细胞中各种酶的活性均降低，细胞的形态和结构发生许多变化D. 细胞凋亡是编程性死亡，细胞凋亡过程中基因不再表达3. 下列关于人类遗传病和优生的叙述，正确的是（）A. 婚前检查不属于优生措施B. 胎儿的性别可通过羊膜腔穿刺进行确定C. 早孕期接触致畸剂是形成畸形胎的遗传因素D. 新出生婴儿和儿童易表现单基因病和染色体病4. 甲状腺激素的生理作用十分广泛，下列关于甲状腺机能亢进患者症状的叙述，错误的是（）A. 喜热恶寒B. 喜怒无常C. 耗氧量增加D. 血中胆固醇含量常偏低5. 集群分布是最常见的分布型。
集群分布的原因主要有：①资源分布不均匀；②植物种子传播方式以母株为扩散中心；③动物的社会行为。
下列分析不合理的是（）A. 蚯蚓因趋湿性形成集群分布，属于原因①B. 沙漠植物因争夺水分形成集群分布，属于原因①C. 雪松和橡树常形成集群分布，与原因②密切相关D. 人类在地球表面呈集群分布，与原因③密切相关6. 生物多样性使地球充满生机，也是人类生存和发展的基础。
保护生物多样性有助于维护地球家园，促进人类可持续发展。
下列叙述错误的是（）A. 物种多样性是生态系统多样性形成的保证B. 捕食者的存在可以促进物种多样性的提高C. 种群的遗传多样性越高，对环境变化的适应能力就越强D. 加强对外来物种引入的评估和审批是保护生物多样性的措施之一7. 下列关于“分离以尿素为氮源的微生物”实验的叙述，正确的是（）A. 在尿素固体培养基上生长的细菌都是以尿素为氮源的细菌B. 液体培养基振荡培养的目的是使微生物均匀分布以便涂布C. 对含有尿素的培养基进行灭菌时，需降低高压蒸汽灭菌的压力与温度D. 称取土壤、稀释土壤溶液、涂布平板这些操作都需要在酒精灯火焰旁进行8. 下列关于孟德尔杂交实验的叙述，正确的是（）A. 豌豆自交实验要在花蕾期对母本进行去雄处理B. 基因的自由组合定律发生在雌雄配子随机结合时C. 测交结果不能反映F1产生的雌雄配子数量的比例D. 孟德尔定律适用于真核生物基因的遗传9. 质膜作为细胞系统的边界，保证了细胞内部环境的相对稳定，从而使细胞内的生命活动有序进行。
实验二：分离以尿素为氮源的微生物(13张PT)
90℃，500g/cm2,30min
冷却至60℃时，加入通过G6玻璃漏斗过 滤（使之无菌）的10mL尿素溶液。
步骤三：取土样1g 步骤四：倒平板
在60℃左右时，将两只三角瓶中已灭菌的LB固体 培养基和尿素固体培养基，在酒精灯旁分别导入 两个培养皿中。
步骤五：制备细菌悬液 在无菌条件下，将1g土样加到有99mL无菌水的 三角瓶中，振荡10min，即成10-2土壤稀释液。 依此法制备10-3、10-4、10-5土壤稀释液。 取样时，尽量只取悬液。
步骤一：配制培养基
尿素固体培养基：
0.025g葡萄糖、0.12gNaCl、0.12gK2HPO4、 0.25mg酚红、0.5g琼脂糖、水15mL
步骤二：灭菌 LB固体培养基 5支装有4.5mL蒸馏水的5支试管
装有99mL蒸馏水的三角瓶
高压蒸汽灭菌 121℃，1kg/cm2,15min
尿素固体培养基： 高压蒸汽灭菌
• 细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿 素水解，水解后产生氨，氨为碱性， 酚红在酸性环境里呈黄色，碱性里呈 红色。培养基中酸碱指示剂产生颜色 变化（变红），标志着存在脲酶水解 尿素的作用，养培养基上的菌落数比较，为什么尿素培 养基上只有少数菌落 ？ • 表明能利用尿素的细菌在土壤菌落中只占 有极少数。
倒平板
• 需要倒3个LB平板，9个尿素平板 LB(对照) 10-3 10-4 10-5 尿素
每个稀释度
1个LB对照平板 3个尿素平板(平行重复组)
步骤六：涂布分离 取10-4和10-5的土壤稀释液各0.1mL，分别加 到有LB培养基和尿素培养基的培养皿中，各 种浓度做三个培养皿。
（排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提 高实验的可信度）
选择培养基：在 微生物学中，将 允许特定种类的 微生物生长，同 时抑制和阻止其 他种类微生物生 长的培养基，称 作选择培养基。 功能上是 选择培养基
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⑷无机盐：酶的成分、调节渗透压等
⑸水：溶剂、生化反应的介质
培养基种类 液体培养基 固体培养基
特 点 不加凝固剂 加凝固剂,
用 途 工业生产、 扩大培养 微生物分离
如琼脂 鉴定、计数 选择培养基 加入或减少 鉴别培养基 培养、分离出 某种化学物质 特定 微生物 鉴别培养基
金黄色葡萄球菌 加入某种 鉴别不同种类 —— 金属光泽 微生物 指示剂 例：无氮、加青霉素、加浓盐水属选择培养 基
本实验的基本要求
选择培养基
1.使用专一的培养基（含有尿素）分离 专一的细菌（有脲酶的细菌）。 所催化的反应。
2.使用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）
一、基本知识
人和其他哺乳动物的尿中都含有尿 素（或称脲），是蛋白质降解的产物， 大量尿素的存在会对环境造成污染。 有一些以尿素为氮源的细菌含有脲 酶，脲酶能分解尿素并利用所形成的氨， 这有利于自然界的氮循环。
0.5mL
0.5mL 0.5mL
-5 10 -4
各盛有4.5mL
无菌水
10-2
1g 土 样 99mL 无菌 水
10-3 10
无菌条件下操作
3
、 用 涂 布 法 分 离 细 菌 ：
无 -5 10 -3 10 菌 10-4 条 0.1mL 件 下 操 作
用玻璃刮刀涂布
（保存在70%酒 精中）
各浓度做三个平 皿
未稀释的结果
通常以每个培养皿中有20个以内的 单菌落最为合适
4、将培养 皿倒置，在 37℃恒温箱 中培养2448h,观察菌 落数 有脲酶的细菌 菌落周围会出 现什么现象？
菌落周围出现红色， 红色环状区域的大小 代表脲酶活性的强弱 和含量的多少。红色 区域大，表明菌株利 用尿素的能力越强。
(NH2) 2C=O + H2O 脲酶 2NH3+CO2
二. 实验原理： • 实验组：尿素固体培养基（尿素为唯一 氮源），通过稀释涂布分离法分离含脲 酶的细菌。在尿素固体培养基中加入酚 红指示剂，如有含脲酶的细菌存在，这 些细菌会向外分泌脲酶，使培养基中的 尿素分解后产生氨，从而令培养基pH升 高、颜色变红。
①在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 ②尿素固体培养基选择分解尿素的微生 物的原理? 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶 的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮 源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿 素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而 受到抑制，所以用此培养基就能够选择 出分解尿素的微生物。
实验2
分离以尿素为氮源的微生物
微生物生长所需的营养物质： ⑴碳源：异养：有机碳源(最常利用葡萄糖)； 自养：无机碳源(如CO2) ⑵氮源：提供氮元素 ⑶生长因子：生长不可缺少的微量有机物
(例：维生素、氨基酸、碱基→构成酶和核酸 的成分) (注意：酵母提取物、蛋白胨可为微生物提供 碳源、氮源、生长因子)
• 对照组基：
K2HPO4 酚红 NaCI 琼脂和琼脂 葡萄糖 糖一样吗？ 尿素 琼脂糖 0.12g 0.25mg 如何向灭菌后的培养 基中加入尿素？ 0.12g 0.025g 2.0g 0.5g
• 用G6玻璃漏斗过滤尿素溶液 •琼脂是未被纯化的混合物，内含一定 量的含氮化合物
LB全营养固体培养基（25mL）：
蛋白胨 酵母提取物 NaCI 琼脂糖 水 0.25g 0.12g 0.25g 0.5g 25mL
三、实验步骤
1、倒平板：将已灭菌的LB全营养固体 培养基和尿素固体培养基冷却至60℃左 右时，在酒精灯旁分别倒入两个培养皿 中，摇匀、平放至凝固。
2、制备细菌悬浮液：