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医学免疫学-抗体PPT课件

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IgG4、IgA和IgE的凝聚物 激活补体旁路 途径
三、结合Fc受体:C区功能
1、调理作用:IgG 与细菌等颗粒性抗原结合 后,可通过其Fc段与巨噬细胞和中性粒细胞 表面相应 FcγR结合,从而促进吞噬细胞的吞 噬作用。
同一种属的个体,所产生的 针对不同Ag的同一类别 的Ab,其免疫原性相同。
L链: VL,CL H链:
IgG、IgA 、IgD: VH,CH1,CH2,CH3
IgM、IgE:
VH,CH1,CH2,CH3, CH4
(三)铰链区:位于CH1与CH2间,富含脯氨酸
易伸展弯曲,有利于Fab段同时结合两个不 同距离的抗原表位; 易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解; 有利于Ab分子变构,暴露其补体结合位点; 五类Ab或亚类的铰链区不尽相同
V区的CDR在识别和结合特异性抗原中 起决定性作用
实际意义:
*中和效应: 中和毒素、病毒,阻止细菌吸附 *启动体液免疫应答:BCR(mIgM、 mIgD)特
异性识别Ag分子 *抗原与抗体的检测:
二、激活补体: C区的功能
Ab(IgM、IgG1-3) 与 Ag结合 构型改变 位于CH2/ CH3功能区的补体结合位点暴露 激活补体经典途径
抗体的水解片段

水解片段意义:
* 阐明Ab分子生物学作用;
* 用作生物制品:去掉Fc段,减少超敏反 应发生。
第二节 抗体的多样性与免疫原性
多样性:自然界存在的抗原数目繁多,每一种 抗原分子 的结构又十分复杂,含有多种不同的 抗原表位。理论上,每一种抗原表位可诱导产 生一种特异性抗体,以及针对同一抗原表位可 产生不同类型的抗体。
三、抗体分子的水解片段
目的:研究Ab的结构和功能 分离纯化特定的Ab多肽片段

医学免疫学抗体课件PPT

医学免疫学抗体课件PPT
B细胞分化
抗原刺激B细胞后,B细胞分化为浆细胞和记忆细 胞。
抗体合成
浆细胞合成和分泌抗体,与抗原结合。
抗体的作用机制
01
特异性识别
抗体能够特异性识别抗原,与其结 合。
调理吞噬
抗体与抗原结合后,可被吞噬细胞 吞噬,进一步清除抗原。
03
02
激活补体
抗体与抗原结合后,可激活补体系 统,发挥免疫效应。
免疫调节
抗体高通量测序技术
利用高通量测序技术,大规模地检测和鉴定抗体基因和蛋白质, 提高抗体研究的效率和准确性。
抗体治疗的新策略与新药物
抗体药物偶联物(ADC)
将抗体与药物偶联,形成ADC,以实现靶向治疗和精准医疗。
免疫检查点抑制剂
利用抗体阻断免疫检查点,激活T细胞免疫应答,以治疗肿瘤等疾 病。
双特异性抗体
被动免疫
将含有特异性抗体的免疫血清或免疫 球蛋白注入易感者体内,为其提供针 对性的保护,预防或控制感染性疾病 的传播。
05
抗体的研究进展与 未来展望
抗体研究的新技术与新方法
抗体基因组学技术
利用基因组学技术,研究抗体的基因结构和变异,以揭示抗体的 多样性和功能。
抗体蛋白质组学技术
通过蛋白质组学技术,研究抗体的结构和功能,以及抗体与抗原 的相互作用机制。
IgD在B细胞分化中起关键作用, 与B细胞活化、增殖和分化有关。
IgG是血清中含量最高的抗体,具 有抗菌、抗病毒和抗毒素作用, 是唯一能够通过胎盘的抗体。
IgE与Ⅰ型超敏反应有关,参与变 态反应和寄生虫感染的防御机制 。
03
抗体的生成与作用 机制
抗体的生成过程
抗原刺激
抗原进入体内后,刺激免疫系统产生抗体。

抗体芯片的原理,在医学生物学领域的应用及其发展趋势--第七组PPT

抗体芯片的原理,在医学生物学领域的应用及其发展趋势--第七组PPT

以下是抗体芯片研究过的疾病及发现
应用前景及其发展趋势
抗体芯片作为一种新兴的蛋白质组学研究手段, 正得以不断的发 展和完善,在蛋白质组学上拥有很大的潜力。 而且随着抗体芯片技术的日益完善,必将以其高通量、高集成、 并行化、微型化、自动化和连续化等优点在蛋白质组学研究、毒性实 验、疾病的诊断和机制探讨、药物开发以及基础生物学方面有广泛的 应用前景。 与此同时,基于抗体的微阵列技术不仅会对认识基因组与人类健 康错综复杂的关系,对疾病的早期诊断和疗效监测等会产生巨大的推 动作用,而且在其它相关领域如医学、生物工程、工业制药等方面也 将具有广阔的发展前景,这一趋势预计将继续在今后几年中陆续实现。
基本原理
• 抗体芯片的基本原理是把能和不同抗原特异性结合的多种抗体高密度 地固定到玻片或其他载体上,使待测样品通过芯片表面,经过洗脱把 非特异性结合的蛋白洗掉,从而对特异性结合在上面的抗原进行检测。
芯片应用的基本技术环节
• 抗体芯片的制备 • 样品的制备 • 生物分子反应 • 信号的检测与分析
抗体芯片的检测内容
抗体芯片的原理,在医学生物学领 域的应用及其发展趋势
主讲人:何佳沿 小组成员:刘杰、朱珂、Biblioteka 桂涛、孙北辰、陈凉、徐先、黄云川湘
什么是抗体芯片?
• 抗体芯片又称免疫芯片,是蛋白芯片的一种,具有微型化、集成化、高通 量化的特点,可以用于检测某一特定的生理或病理过程相关蛋白的表达丰 度,目前主要用于信号转导、蛋白质组学、肿瘤及其他疾病的相关研究。
抗体芯片的应用
医学领域的应用
抗体芯片在医学方面的应用主要疾病的诊断以及单克隆抗体的筛选 • 单克隆抗体的筛选 把制备的单克隆抗体制成抗体微阵列,加上荧光标记的相应蛋白, 通过荧光检测分析来快速地、高通量地筛选出来。 • 疾病诊断(肿瘤及其他疾病研究中的应用)

医学免疫学课件——抗体

医学免疫学课件——抗体

分泌型抗体
由浆细胞分泌,存在于血清、组织液和外分泌液中,发挥免疫学功能。
膜结合型抗体
由B细胞膜上的膜结合型抗体分子表达,参与B细胞分化发育及抗原识别和信号转导过程。
抗体的分类和分布
02
抗体的结构和组成
四种肽链结构:可变区、高变区、连接肽和恒定区
抗原结合部位:可变区结合抗原
抗体的基本结构
识别和结合特异性抗原:抗体可变区与抗原结合
免疫球蛋白基因
重链和轻链基因通过DNA重排机制产生多样性。
重链和轻链基因
重排机制包括V(D)J重组和体细胞高频变异。
重排机制
抗体的基因组和重排机制
抗体的多样性
抗体多样性由重链和轻链可变区(V区)的氨基酸组成和空间构象决定。
抗体的亲和力
抗体亲和力指抗体与抗原的结合强度,与抗体的特异性和亲和力有关。
抗体的多样性和亲和力
VS
单克隆抗体药物是一种针对特定疾病或症状的单克隆抗体,具有高度特异性和高效性。单克隆抗体药物的开发和应用已经成为生物医药领域的重要方向之一。
单克隆抗体药物已经广泛应用于肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病等的治疗中。这些药物的作用机制包括抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、抑制炎症反应等。同时,单克隆抗体药物也面临着一些挑战,例如生产成本高、适应症有限等。
2023
医学免疫学课件——抗体
CATALOGUE
目录
抗体的概述抗体的结构和组成抗体的基因和重排抗体的产生及作用机制抗体在医学上的应用抗体的研究方法
01
抗体的概述
抗体是介导体液免疫的重要效应分子,是B细胞接受抗原刺激后增值分化为浆细胞所产生的糖蛋白。
定义
抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白,具有凝集、沉淀、溶解等生物学效应。

医学免疫学课件——抗体

医学免疫学课件——抗体

2023医学免疫学课件——抗体•抗体概述•抗体的分子结构与功能•抗体的基因组与表达•抗体的免疫应答与调节目•抗体在疾病诊断和治疗中的应用•研究进展与展望录01抗体概述定义抗体(Antibody)是B淋巴细胞接受抗原刺激后增值分化形成的浆细胞产生的一类能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。

特点高特异性、高亲和性、可塑性。

抗体的定义和特点分类按作用方式分,抗体分为膜结合型和分泌型;按功能分,抗体分为中和抗体、调理抗体、ADCC抗体、凝集抗体、促有丝分裂抗体等。

功能识别并结合特异性抗原,参与免疫效应,介导体液免疫应答。

抗体的分类和功能B淋巴细胞接受抗原刺激后增值分化为浆细胞,浆细胞产生抗体。

产生抗体与相应抗原发生特异性结合,通过中和毒素、阻止病原体入侵、激活补体等方式发挥免疫效应。

作用机制抗体的产生和作用机制02抗体的分子结构与功能两个重链和两个轻链组成每个抗体分子由两个重链(heavy chain)和两个轻链(light chain)组成,通过二硫键连接。

抗原结合部位抗体的抗原结合部位位于重链的V区(variable region)和轻链的V区,这些区域在识别和结合特异性抗原中起关键作用。

抗体的基本结构五类免疫球蛋白根据重链的类型,抗体分为五类免疫球蛋白,包括IgM、IgD、IgA、IgE和IgG。

不同类别抗体的特点每种免疫球蛋白都有其独特的特点和功能,例如IgM在早期感染中起重要作用,IgA在黏膜免疫中发挥关键作用。

抗体的超家族结构功能区划分每个抗体分子都有不同的功能区,包括抗原结合区、Fc(结晶片段)区和铰链区(hingeregion)。

抗体的功能区及其作用机制Fc区的功能Fc区在Fc受体结合和效应功能中起作用,例如调理吞噬、ADCC(抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用)和炎症反应等。

铰链区的功能铰链区在抗体分子的折叠和稳定性中起关键作用,并可以调节抗原结合区的构象和功能。

03抗体的基因组与表达抗体是由B淋巴细胞表面表达的免疫球蛋白,其基因组由多个基因片段组成,包括编码重链和轻链的V、D、J基因片段以及编码恒定区和可变区的C基因片段。

医学免疫学—抗体PPT课件

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每一Ig单体分子两条重链必须同类,两条轻链必须同型。
医学免疫学—抗体
7
3.分区:
根据H、L链氨基酸组成及序列变化大小,可分为: 可变区(variable region,V区):近氨基端(N端)L链的
1/2(VL)和H链的1/4或1/5(VH) 恒定区(constant region,C区)近羧基端(C端)L链的1/2
聚体(IgM),起稳定多聚体结构及参与体内运转的 作用。
分泌片(secretory piece,SP)
– 由粘膜上皮细胞合成的糖蛋白。 – 作用:保护SIgA抵抗外分泌液蛋白酶的降解。利于
SIgA分泌到粘膜表面。
医学免疫学—抗体 Ig的J链与分泌片 10
(三)Ig的功能区及功能:
定义:Ig的H链、L链每隔110个氨基酸由链内二硫 键连接构成一个能行使特定功能的球形结构,称为 Ig的功能区。
as the cells involved are derived from the thymus
内容
一、基本概念 二、免疫球蛋白的分子结构 三、免疫球蛋白的生物学活性 四、五类免疫球蛋白的特点与功能 五、抗体的人工制备
医学免疫学—抗体
3
一、基本概念
抗体(Antibody,Ab):
– 指B淋巴细胞受抗原刺激后活化、增殖、分化成为浆细胞, 产生的能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。
免疫球蛋白
Immunoglobulin,Ig
医学免疫学—抗体
1
Types of adaptive immune responses
Called a B-cell response
as the cells involved are derived from bone marrow

医学免疫学课件第三章抗体

医学免疫学课件第三章抗体

04
抗体的生物进化与免疫应答
抗体的生物进化与类别转换
1
抗体是免疫系统中最重要的一类效应分子,具 有与抗原结合的能力,参与免疫应答。
2
抗体的生物进化经历了漫长的历程,通过基因 重组和突变等机制形成了多样化的抗体库。
3
类别转换是指抗体可变区不变,恒定区发生交 换,从而产生新的抗体,增强机体对不同抗原 的识别和结合能力。
2023
医学免疫学课件第三章抗 体
目录
• 抗体的基本知识 • 抗体的分子结构与功能域 • 抗体的基因编码与表达调控 • 抗体的生物进化与免疫应答 • 总结与展望
01
抗体的基本知识
抗体的定义与特点
定义
抗体(Antibody)是B淋巴细胞接受抗原刺激后增值分化形成的浆细胞产生 的一类能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。
抗体基因组学、蛋白质组学和结构生物学等研究手段 的进步,为抗体研究提供了更为深入和精确的数据。
抗体药物的研发和应用逐渐成为生物医药领域的重要 方向之一,具有广阔的市场前景和发展潜力。
抗体在医学诊断、治疗与预防中的应用前景
抗体在医学诊断中具有广泛的应用, 如ELISA、免疫荧光、流式细胞术等 检测方法,可应用于感染、肿瘤、自 身免疫性疾病等疾病的诊断。
特点
高特异性、高亲和力、可塑性、种属特异性。
抗体的类型与功能
类型
IgM、IgG、IgA、IgD、IgE
功能
识别并结合特异性抗原、激活补体、调理吞噬、中和毒素和病毒、穿过胎盘和黏 膜等。
抗体的产生与作用机制
产生
B淋巴细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞,产生抗体。
作用机制
抗体与相应抗原特异性结合,通过调理吞噬、激活补体等方 式发挥免疫效应。

医学免疫学抗体课件

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抗体技术在医学研究中的应用与前景
基础研究
抗体技术可用于研究细胞因子、 生长因子等生物分子的作用机制 ,以及疾病发生发展过程中的分
子机制。
临床研究
抗体技术可用于开发新型诊断试 剂盒,以及研究针对特定疾病的
免疫治疗策略。
转化研究
通过将基础研究成果转化为临床 应用,抗体技术可以为疾病的预 防、诊断和治疗提供更多有效手
2023-11-12
医学免疫学抗体课件
目 录
• 抗体概述 • 抗体的分子结构与功能域 • 抗体的基因组与表达调控 • 抗体的产生与免疫应答 • 抗体的应用与前景
01
抗体概述
抗体的定义与特点
定义:抗体(Antibody)是B淋巴细胞接受抗原刺激后增值 分化形成的浆细胞产生的一类能与相应抗原特异性结合的糖 蛋白。
02
抗体的分子结构与功能域
抗体的分子结构
两臂结构
抗体分子由两个完全相同的抗原结合臂组成,每个臂由V区(variable region) 和C区(constant region)组成。
V区与C区
V区是抗体分子的抗原结合部位,负责识别和结合抗原;C区则是抗体分子的铰链 区,参与效应功能的发挥。
抗体分子的功能域与抗原结合部位
段。
THANK S感谢观看
特点
特异性:只能与相应的抗原结合,具有高度特异性。
多样性:能结合多种抗原,且结合位点多样。 亲和力:与抗原的结合具有相对稳定性。
可变区:V区(抗原结合部位),恒定区:C区。
抗体的分类与功能
分类
按作用对象:外毒素、内毒素、胞内菌、真核生物抗原、异嗜性抗原;按功能:膜结合抗体、分泌型抗体;按Ig 类别:IgM、IgG、IgA、IgD、IgE;按铰链区结构:两对半结构、二硫键结构、非共价结合结构;按功能:调 理吞噬、ADCC、阻断抗原与相应细胞结合、促有丝分裂、凝集红细胞。

病原生物与免疫学第04章抗体PPT课件

病原生物与免疫学第04章抗体PPT课件

详细描述
IgM是分子量最大的免疫球蛋白,主要由脾脏和淋巴结中的 浆细胞分泌。在个体发育中,IgM是最早产生的抗体,具有 强大的凝集作用和调理吞噬作用,对早期抗感染具有重要意 义。
免疫球蛋白D(IgD)
总结词
在免疫系统中具有重要调节作用 ,但具体机制尚不完全清楚。
详细描述
IgD约占血清免疫球蛋白总量的 0.2%,主要分布在B淋巴细胞表面。 IgD在免疫系统中具有重要调节作 用,但具体机制尚不完全清楚。
抗体药物的优化与改进
总结词
抗体药物的优化与改进是提高其疗效和降低副作用的关键。
详细描述
通过结构生物学、蛋白质工程和免疫学等技术手段,研究人员可以对抗体药物进行改造,以提高其亲 和力、特异性和稳定性,降低潜在的免疫原性。
抗体在免疫治疗中的潜力
总结词
抗体在免疫治疗中具有巨大的潜力,特 别是在肿瘤免疫治疗领域。
靶向治疗
利用抗体与特定靶点结合的能力,开发出针对特定靶点的 抗体药物,如单克隆抗体、双特异性抗体等,用于治疗肿 瘤、自身免疫性疾病等。
疫苗佐剂
某些抗体可作为疫苗佐剂,增强疫苗的免疫原性,提高疫 苗的保护效果。
预防疾病
疫苗
抗体是疫苗的重要组成部分,通过注 射疫苗,使机体产生特异性抗体,从 而预防疾病的发生。
免疫球蛋白A(IgA)
总结词
主要存在于呼吸道、消化道和泌尿生殖道等黏膜表面,具有抗感染和免疫调节作 用。
详细描述
IgA分为血清型和分泌型两种,前者主要存在于血清中,后者则是黏膜局部免疫 的主要成分。分泌型IgA能够抑制细菌黏附宿主细胞,参与黏膜局部的抗感染免 疫。
免疫球蛋白M(IgM)
总结词
在个体发育中最早产生的抗体,具有强大的凝集作用和调理 吞噬作用。

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2023
医学免疫学抗体课件
目录
• 医学免疫学抗体概述 • 医学免疫学抗体的种类与特性 • 医学免疫学抗体的应用 • 医学免疫学抗体与其他免疫分子的关系 • 医学免疫学抗体的产生与调控机制 • 医学免疫学抗体相关的疾病与治疗策略
01
医学免疫学抗体概述
抗体的定义与特点
定义
抗体(Antibody)是B淋巴细胞接受抗原刺激后增值分化生 成的浆细胞分泌的一类能与相应抗原特异性结合的糖蛋白。
基础研究
抗体在基础研究中发挥重要作用,可用于研究细胞信号转导、免疫应答机制 等。例如,利用抗体技术阻断或激活细胞表面受体,研究细胞信号转导通路 。
转化研究
将基础研究中的发现转化为临床应用,需要借助抗体的科研应用。例如,利 用抗体技术识别肿瘤细胞,开发新型肿瘤诊断方法。
04
医学免疫学抗体与其他免疫分子的关 系
抗体与补体系统的关系
补体激活
抗体可以激活补体系统,通过经典途径或旁路途径引发补体级联反应,最终导致 靶细胞裂解。
补体调节
抗体与补体结合后,可以调节补体的活化与抑制,防止过度激活,维持体内免疫 稳态。
抗体与细胞因子的关系
促炎症效应
抗体可诱导炎症细胞分泌细胞因子,如IL-1、IL-6和TNF-α等 ,促进炎症反应。
亲和力检测
通过检测抗体与抗原的亲和力,可以了解抗体的成熟程度和 功能状态。亲和力检测方法包括ELISA、放射免疫测定法等。
03
医学免疫学抗体的应用
抗体的诊断应用
感染性疾病的诊断
抗体是人体免疫系统对感染源的应答产物,可用于感染性疾病的诊断。例如,HIV抗体检 测用于诊断人类免疫缺陷病毒感染。
自身免疫性疾病的诊断
肿瘤免疫与抗体治疗策略

医学免疫学IC-1ppt课件

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- CTLA-4 B-7
调节强度
IL-12
Th2 辅助体液免疫
51
非专职APC(non-professional APC) : 在某些活性分子刺激下能被诱导表达
MHC-II类分子并能处理和提呈抗原的细胞 。包 括:内皮细胞;纤维母细胞;上皮及间皮细胞; 嗜酸性粒细胞等。抗原提呈能力弱。
52
53
54
DC摄取抗原途径: • 胞饮作用 • 吞噬作用 • 受体介导的内吞作用
44
2. 免疫调节 分泌细胞因子调节免疫应答
3. 参与诱导免疫耐受 诱导中枢耐受:参与T细胞阳性选择 未成熟DC诱导外周耐受
45
调节免疫应答
分泌多种细胞因子, 调节免疫应答。
MHC 表达MHC分子, 激活T细胞。
表达MHC分子, 诱导免疫耐受
第三节 自然杀伤细胞
自然杀伤细胞(natural killer cells,NK)是一类 不同于T、B淋巴细胞的第三类淋巴细胞。因无需抗原 致敏即能直接杀伤某些靶细胞而得名。
55
56
一 来源、分布与生物学特征
1.来源: 淋巴样细胞分化而来
分布: 外周血、骨髓、脾脏、肝脏等
2.生物学特征 表面标志 CD3-、CD56+、CD16+
57
二 生物学作用
1.细胞毒作用 杀伤机制: 释放穿孔素/颗粒酶 表达FasL 分泌TNF-α 抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用
58
59
NK cells
Large granular “lymphocytes” Non-T, non-B cells
No clonotypic antigen receptors Recognize and kill abnormal cells such as tumour cells Involved in antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC)
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05级生物技术3班
金波
蛋白组学研究是即基因组学研究后的生命 科学发展的一个大方向之一。蛋白质的结 构和功能最终直接影响着生命活动的变化, 基因转录水平的研究只能在一定程度上反 映基因表达产物的变化,而真正发挥功能 的蛋白要经过转录后加工、翻译调控以及 翻译后加工等许多步骤和调控才能形成, 因而对蛋白质的直接研究才能真实的解释 各种生命现象。但是目前研究蛋白质的手 段和方法还没有很大的发展,所以寻找有 效、快捷的蛋白分析技术成为了至关重要 的一个环节。
* 芯片上的抗体分别经过特异性抗原、细胞 系和组织的检测,灵敏度高.
* 开放性的芯片平台设计,可以用各种型号 DNA芯片荧光扫描仪进行检测。
还有一点值得注意,由于抗体抗原结合 的差异、标记差异等原因,根据芯片结果 信号的强弱判断同一样品中两种不同蛋白 的多少是不恰当的。
A:蛋白质相互作用的检测 当发现一种新的基因时,需要知道这个基 因和它编码的蛋白在细胞中起什么作用, 这时需要确定此基因编码的蛋白在信号通 路中的作用,抗体芯片AntibodyArraysTM 提供了一种非常经济实惠且操作快速的方 法,使用抗体芯片可快速筛选出此编码蛋 白和信号通路中其它蛋白的相互作用。抗 体芯片筛选方法具有以下优点:实验周期 短;耗费低;假阳性率非常低;操作简便 一般实验室均很容易完成。
Ab Microarray 380上抗体是经过精心挑选 的,这些抗体不仅可以识别人源的蛋白, 对小鼠和大鼠样品同样有效。另外,每个 抗体的结合亲和力都经过了实验测定,从 多种抗体来源的克隆中筛选出反应特异性 好,交叉反应程度小,信号明显的抗体, 并且还要保证信号与抗原浓度有着良好的 线性关系。优化的抗体探针才可以保证反 应的特异和灵敏(可检测20pg/ml的抗原浓 度)。芯片的检测是用荧光报告分子,常 用的荧光扫描仪都能够完成。
C:蛋白质表达谱检测: 抗体芯片可用来检测两个不同样品间蛋白 质的表达水平的相对差异,一次简单实验 可以比较出数百种蛋白质(多达400种)的 表达水平变化
* 整个分析过程可以在一天内完成
* 适用于包括组织、细胞系、体液在内的多 种生物样品
* 试剂盒提供完整的样品抽提制备、标记, 特别设计的样品制备的过程能保持样品的 完整性和溶解性,保证制备样品具有代表 性和一致性。
*芯片上的抗体包含针对经生 物学等广泛的生物功能的相关蛋白,跨度 大、适用范围广。
Ab Microarray 380抗体芯片并不要求 特殊的实验操作,只要一般常规的操作就 可以完成以往极为复杂耗时的工作。整个 操作流程包括:从50—200mg组织或细胞、 体液中进行蛋白质抽提——用Cy5和Cy3两 种不同颜色的荧光分子分别标记两个样 品——洗去多余的标记分子——与芯片杂 交孵育——扫描分析结果。整个过程从样 品制备到结果分析只要一天即可完成,你 只要准备好样品、荧光染料、脱盐纯化柱 (处理体液样品时用)和荧光扫描仪,其 他的试剂全部由试剂盒提供。
抗体芯片是最近发展起来的一种技术,可 以同时检测几百种蛋白质表达水平;也可 以用来研究蛋白质翻译后加工(磷酸化水平 改变)或者研究蛋白质间相互作用。其原理 是:大量不同的抗体按照预定的顺序排列 并固定在固体支持物上且保留其抗原结合 能力,制成抗体芯片膜,芯片膜与蛋白质 样品一起孵育,在温育过程中芯片膜识别 并捕捉抗原,通过化学发光方法对抗原以 及与抗原相连的蛋白质进行研究
芯片上抗体的选择不但根据其特异性,也 根据抗体的结合亲和力,在验证实验中特 异性低、交叉反应高、或者信号强度低的 抗体都被排除,另外所有抗体都经过检验 保证得到的信号与抗原浓度有良好的线性 相关,那些没有良好的线性剂量关系的抗 体都被排除。因此抗体芯片能够检测到样 品中很低的pg/ml浓度的抗原。
B:蛋白质磷酸化的检测 某制药公司研究人员,她领导的小组已经 发现了某一化学物质作用的靶点,但是她 需要了解这些化学物质是否对其它蛋白有 影响,这样她才可以知道药物的选择性和 毒性如何。她选择使用AntibodyArraysTM 来进行评估,比较了药物处理和没有处理 的细胞蛋白质磷酸化水平的改变,由此对 该化学药物的专一性有了进一步了解。 使用AntibodyArraysTM研究者可以快速得 到关于哪些蛋白质已磷酸化(活性变化) 的信息,这样便可以确定下一步研究目标。
蛋白芯片技术的出现给蛋白组学研究带来 新思路。蛋白组学研究中一个主要的内容 就是要研究在不同生理状态或病理状态下 蛋白水平的量变,微型化,集成化,高通 量化的抗体芯片就是一个非常好的研究工 具,它也是蛋白芯片中发展最快的芯片, 而且在技术上已经日益成熟。这些抗体芯 片有的已经在向临床应用上发展,比如肿 瘤标志物抗体芯片等,还有很多已经用在 研究的各个领域里。
第一张商品化的抗体芯片是由美国BD Clontech公司推出的。这是一张用于研究的 抗体芯片,芯片上排列了378种已知蛋白的 单抗(Ab Microarray 380, 目录号 K18471),这些单抗对应的蛋白都是细胞结构和 功能上十分重要的蛋白,涉及信号传导、 肿瘤、细胞周期调控、细胞结构、细胞凋 亡和神经生物学等广泛的领域。通过这张 芯片,我们在一次实验中就能够比较几百 种蛋白的表达变化。
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