质粒图谱大全
质粒大全 分子大小等
名称长度抗性特殊性能PAO815 7709 bp Amp 酵母表达pAxCAwt 44741 BP Amp 腺病毒表达pAxcw 42410 bp Amp 腺病毒表达pAAV-MCS 4.7 kbp Amp 哺乳动物细胞表达pBacPAK8 5.5 k Amp 杆状病毒表达PBI121 13.0 kbp Kan 植物细胞表达pBV220 3665 bp Amp 原核表达pCAMBIA 1300 植物细胞表达pCAMBIA 1301 11837 bp Kan 植物细胞表达pCAT3-Basic 4047 bp AmppcDNA 3 5446 bp Amp 哺乳动物细胞表达pcDNA 3.1(+) 5428 bp Amp 哺乳动物细胞表达pcDNA 3.1/ mys- HisA 5494 bp Amp 哺乳动物细胞表达pCl-neo 5472 bp Amp 哺乳动物细胞表达pCMV-MCS 4.5 kbp Amp 哺乳动物细胞表达pET-3a 4640 bp Amp 大肠杆菌表达pET-11a 5677 bp Amp 大肠杆菌表达pET-15b(+) 5708 bp Amp 大肠杆菌表达pET-20b(+) 3716 bp Amp 大肠杆菌表达pET-22b(+) 5493 bp Amp 大肠杆菌表达pET-23a(+) 3666 bp Amp 大肠杆菌表达pET-23b(+) 3665 bp Amp 大肠杆菌表达pET-23c(+) 3664 bp Amp 大肠杆菌表达pET-23d(+) 3663 bp Amp 大肠杆菌表达pET-28a(+) 5369 bp Kan 大肠杆菌表达pET-28b(+) 5368 bp Kan 大肠杆菌表达pET-28c(+) 5367 bp Kan 大肠杆菌表达pET-30a(+) 5422 bp Kan 大肠杆菌表达pET-30b(+) 5421 bp Kan 大肠杆菌表达pET-30c(+) 5423 bp Kan 大肠杆菌表达pET-31b(+) 5742 bp Amp 大肠杆菌表达pET-32a(+) 5900 bp Amp 大肠杆菌表达pET-32b(+) 5899 bp Amp 大肠杆菌表达pET-32c(+) 5901 bp Amp 大肠杆菌表达pET-39b 6106 bp Kan 大肠杆菌表达pET-42a 5930 bp Kan 大肠杆菌表达pGAPZ aA 3147 bp Zeo 酵母表达pGBKT7 7.3 kbp Kan 酵母表达pGEM3Zb 原核表达pGEM3Zf(+) 原核表达pGEM7Zf(+) 原核表达pGEX-2T 4969 bp Amp 原核表达pGEX-4T-1 4969 bp Amp 原核表达pGFP-N2 4732 bp Kan 哺乳动物细胞荧光蛋白表达pEGFP-C1 4731 bp Kan 哺乳动物细胞荧光蛋白表达pEGFP-C3 4727 bp Kan 哺乳动物细胞荧光蛋白表达pEGFP-N1 4733 bp Kan 哺乳动物细胞荧光蛋白表达pLEGFP-N1 6892 bp Amp 哺乳动物细胞荧光蛋白表达pGL3-Basic 4818 bp AmppGL36 i3BaUxYEBTpLNCX 6620 bp Amp 反转录病毒表达pLNHX 5.6 kbp Amp 反转录病毒表达pLXSN 5.9 kbp Amp 反转录病毒表达pLXIN 6.1 kbp Amp 反转录病毒表达pMAL-p2x 6721 bp Amp 原核融合蛋白表达pMAL-c2x 6721 bp Amp 原核融合蛋白表达pPIC3.5K 9004 bp Amp/Kan 酵母表达pPIC9 8024 bp Amp 酵母表达pPIC9K 9276 bp Amp 酵母表达pPICZ aA 3593 bp Zeo 酵母表达pQBI PGK 5387 bp Amp 哺乳动物细胞荧光蛋白表达pQE-30 3461 bp Amp 原核表达pQE-9 3439 bp Amp 原核表达pRevTRE 6487 bp Amp 反转录病毒表达pSE420L 4617 bp AmppTac I Amp 原核表达pTac I(BamH I) Amp 原核表达pTAL-Luc 4956 bp Amp 哺乳动物细胞表达pTWIN1 7375 bp AmppTXB1 6706 bp AmppVAX1 2999 bp Kan。
质粒图谱
)质粒图谱登记号：00012)质粒名称：pIRES3)来源：BD Co4)用途：真核双表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00022)质粒名称：pECFP-C13)来源：BD Co4)用途：检测真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：7)联系方式：pm1)质粒图谱登记号：00032)质粒名称：pShuttle3)来源：4)用途：5)是否可以提供更详细资料：6)是否可以共享：7)联系方式：2)pShuttle MCS很多人用pEGFP-C1，我也来发一个)质粒图谱登记号：00042)质粒名称：pSBR322、pUC183)来源：4)用途：5)是否可以提供更详细资料：6)是否可以共享：7)联系方式：1)质粒图谱登记号：00052)质粒名称：pcDNA3.1(+)/CAT3)来源：invitrogen4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：无偿7)联系方式：PM1)质粒图谱登记号：00062)质粒名称：pQEx3)来源：Qiagen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM2)1)质粒图谱登记号：00072)质粒名称：pIVEX2.33)来源：Rocho4)用途：体外转录翻译5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM质粒图谱登记号：0008质粒名称：pIRES-EGFP来源：用途：是否可以提供更详细资料：是否可以共享：否联系方式：1)质粒图谱登记号：00092)质粒名称：pET-28a（+）3)来源：Novagen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM1)质粒图谱登记号：00112)质粒名称：pET-32a(+)3)来源：novagen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：6)是否可以共享：7)联系方式：pm1)质粒图谱登记号：00132)质粒名称：pcDNA3.1/Zeo (+)3)来源：invitrogen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00132)质粒名称：pEGFP-N33)来源：clontech4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00142)质粒名称：pcDNA33)来源：invitrogen4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00152)质粒名称：pfastbac13)来源：invitrogene4)用途：昆虫表达5)是否可以提供更详细资料：不可以6)是否可以共享：不可以7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00162)质粒名称：pEGFP-C33)来源：clontech4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PMwangjun2002274 edited on 2004-06-22 00:041)质粒图谱登记号：00172)质粒名称：pSecTag23)来源：Invitrogen4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)1质粒图谱登记号：00192)质粒名称：pET20b3)来源：NOVAGEN4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM1)质粒图谱登记号：00222)质粒名称：pThioHisA3)来源：invitrogen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：4.365kb , HP-thioredoxin fusion proteinexpressionvector, trc promoter, Ampr, a EK cleavage site lies between HP-thioredoxin and MCS宿主菌TOP10（基因型为：F-mcrA △（mrr-hsd RMS-mcrBC）Ф80 lacZ M15 △lacX74 deoR recAl araD139 △（ara-leu）7697 galU galK rpsL endAl nupG6)是否可以共享：交换或其它7)联系方式：PM2)3)1)质粒图谱登记号：00242)质粒名称：pcDNA3.1-Myc-His-A-3)来源：invitrogen4)用途：真核核表达4))质粒图谱登记号：00252)质粒名称：pSUPER.neo3)来源：4)用途：siRNA5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00312)质粒名称：pSilencer1.0-siRNA3)来源：Ambion4)用途：RNAi5)是否可以提供更详细资料：/techlib/Documents.html?fkResSxn=7&fkSub Sxn=236)是否可以共享：实验结束后，可提供含shRNA模板的质粒7)联系方式：pm5) )质粒图谱登记号：00322)质粒名称：pSilencer2.0-U6siRNA 3)来源：Ambion4)用途：RNAi ，与1.0相比，可以建立稳转株5)更详细资料：/techlib/prot/fm_7209.pdf 6)是否可以共享：交换 7)联系方式：pm6)会员名：mlluoE-mail：*************可提供试验资源名称和简要介绍：pSilencer 3.1-H1 neo Vector，是Ambion公司目前最高版本的shRNA 载体，为扩增此载体我已插入目的片段，如有战友需要，将此片段双酶切再连上自己的片段即可。
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（转载）一. 九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二. 克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET 系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits四.PGEX 系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六. 真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZα APYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类, 其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
质粒
pCMV-C-Flag质粒图谱pCMV-C-Flag质粒图谱pCMV-C-Flag的MCS：XmaI PstISacI Small BamHI HindIII651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCTCTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGAFlagEcoRI EcoRV SacI BglII XhoI XbaI D Y K D701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA GATTACAAGGCGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT CTAATGTTCCtagD D D K ApaI751 ATGACGACGA TAAGTAAGGG CCCGGTACCT TAATTAATTA AGGTACCAGGTACTGCTGCT ATTCATTCCC GGGCCATGGA ATTAATTAAT TCCATGGTCC说明：1.该质粒的大小为4317bp2. Ori控制复制起始的位点，该质粒有两个复制位点，分别是：pUCori f1ori，是真核质粒。
3.该质粒图谱上的抗生素抗性基因有： Neor r/kanr4.该质粒的多克隆位点是MCS Flag tag，克隆携带外源基因片段。
5.该质粒有启动子pSV40,p bla,pCMV，可以使目的基因在增殖的细胞中稳定表达。
6.该质粒TkpA、SV40pA信号是加polyA信号，可以起到稳定mRNA的作用。
综上所述，该质粒有质粒所需的组成元素，是一个合格的质粒。
基因工程技术流程图。
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（转载）一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
质粒
质粒载体
把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术，送进受体细胞中去进行繁殖和表 达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA 技术中常用的载体。 质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的。与天然质 粒相比，质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因(如抗生素抗性基因) 和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列，并去掉了 大部分非必需序列，使分子量尽可能减少，以便于基因工程操作。大多质粒载体 带有一些多用途的辅助序列，这些用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克隆、 产生用于序列测定的单链DNA、体外转录外源DNA序列、鉴定片段的插入方向、 外源基因的大量表达等。 一个理想的克隆载体大致应有下列一 些特性：（1）分子量小、多拷贝、 松驰控制型；（2）具有多种常用的 限制性内切酶的单切点；（3）能插 入较大的外源DNA片段；（4）具有 容易操作的检测表型。常用的质粒载 体大小一般在1kb至10kb之间，如 PBR322、PUC系列、PGEM系列和 pBluescript（简称pBS）等
基因克隆载体之质粒
质粒(Plasmid)是一种染色体 外的稳定遗传因子，大小从1200kb不等，为双链、闭环的 DNA分子，并以超螺旋状态存在 于宿主细胞中。 质粒主要发现于细菌、放线 菌和真菌细胞中，它具有自主复 制和转录能力，能在子代细胞中 保持恒定的拷贝数，并表达所携 带的遗传信息。 质粒的复制和转录要依赖于 宿主细胞编码的某些酶和蛋白质， 如离开宿主细胞则不能存活，而 宿主即使没有它们也可以正常存 活。质粒的存在使宿主具有一些 额外的特性，如对抗生素的抗性 等。 pBR322 质粒物理图谱
从细菌中分离质粒 DNA
从细菌中分离质粒DNA的 方法都包括3个基本步骤： 培养细菌使质粒扩增；收 集和裂解细胞；分离和纯 化质粒DNA。
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.（转载）一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAP.pGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
质粒图谱——精选推荐
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各类质粒载体图谱
pGADT7
Vector Information
as a fusion to a hemagglutinin (HA) epitope tag. HA-tagged proteins can be identified with antibodies raised to this common epitope, eliminating the need to generate specific antibodies to new proteins. The T7 promoter is used for in vitro transcription and translation of the epitope tagged fusion protein and also provides a binding site for sequencing using the T7 Sequencing Primer. Note that the AD is not expressed during the in vitro transcription and translation reactions. The Nco I and Pst I sites may be used to shuttle inserts from pGADT7 into pGBKT7, the MATCHMAKER Two-Hybrid System 3 DNA-BD Vector. The MCS in pGADT7 is compatible with those in pMyc-CMV and pHA-CMV, CLONTECH's epitope tagged mammalian expression vector set (#K6003-1). As a result, the target gene can be shuttled into these vectors in order to confirm protein interactions in vivo. Location of features: • Full-length S. cerevisiae ADH1 promoter (PADH1): 7–1479 • GAL4 AD polypeptide with SV40 Nuclear Localization Signal (NLS) NLS: 1501–1557 GAL4 amino acids 768–881: 1561–1899 • T7 RNA polymerase promoter: 1905–1927 • HA epitope tag: 1942–1968 • Multiple Cloning Sites: 1969–2041 • Transcription termination signal Fragment carrying the S. cerevisiae ADH1 terminator (TADH1): 2280–2605 • LEU2 coding sequences: 3814–2723 • pUC plasmid replication origin: 4581–5418 • Ampicillin resistance gene: 6432–5575 • Yeast 2 µ replication origin: 6998–7988 Location of primers: • T7 Sequencing Primer: 1905–1925 • 3' AD Sequencing Primer: 2102–2083 • MATCHMAKER 5' AD LD-Insert Screening Amplimer (#9103-1): 1858–1889 • MATCHMAKER 3' AD LD-Insert Screening Amplimer (#9103-1): 2078–2046 Propagation in E. coli: • Suitable host strains: DH5α, DH10 & other general purpose strains • Selectable marker: plasmid confers resistance to ampicillin (100 µg/ml) to E. coli hosts • E. coli replication origin: pUC • Copy number: ~500 • Plasmid incompatibility group: pMB1/Col E1 Propagation in S. cerevisiae: • Suitable host strains: Y187(α), Y190(a), SFY526(a), CG1945(a), HF7c(a), or AH109(a) • Selectable marker: LEU2 • S. cerevisiae origin: 2 µ Reference:
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质粒图谱大全质粒图谱大全质粒图谱大全（转载）一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C, pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?p ETDsbFusionSystems39band40bProteinExpression?ProkaryoticExpression?p ETExpressionSystem33bProteinExpression?ProkaryoticExpression?p ETExpressionSystemsProteinExpression?ProkaryoticExpression?p ETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?p ETGSTFusionSystems41and42ProteinExpression?ProkaryoticExpression?p ETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?p ETVectorDNA ProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAP pGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystem PTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-) pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA 是一种新的非病毒转基因载体。
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A. Geerlof
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ce
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Proteas e
cleavag e site
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Origin of replicati
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pCDFDuet-1 map T7/lac
Spec/Stre p
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EMBL-AG
pBADM-60(+) map araBAD Amp
N-NusA N-His
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Top10 LMG194
pUC
EMBL-AG
pBAT4
map T7
Amp
BL21 (DE3) pUC
EMBL-MH
pBAT5
map T7
Amp
BL21 (DE3) pUC
EMBL-MH
pCal-n
map T7/lac Amp
TEV
N-His
C-His
(signal
sequence)
map seq
gb
T7-lac
pUC18+和+pUC19质粒图谱
pUC18 和pUC19质粒图谱pUC18 和pUC19 大小只有2686bp ，是最常用的质粒载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的DNA 片段，GenBank注册号为L08752（pUC18）和X02514（pUC19）。
由pBR322 改造而来，其中lacZ（MSC）来自M13mp18/19 图3-4 是其质粒图谱。
这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的排列方向相反。
这些质粒缺乏控制拷贝数的rop基因，因此其拷贝数达500-700 。
pUC 系列载体含有一段lacZ蛋白氨基末端的部分编码序列，在特定的受体细胞中可表现α-互补作用。
因此在多克隆位点中插入了外源片段后，可通过α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组质粒。
特征序列区位：pBR322_origin1471 - 852Ampicillin2486 - 1626lac_promoter543 - 514AmpR_promoter2556 - 2528M13_pUC_rev_primer500 - 478M13_reverse_primer479 - 461M13_forward20_primer379 - 395M13_pUC_fwd_primer364 - 386lacZ_a398 - 250pGEX_3_primer51 - 29Orf22486 - 1626NOS terminator sequence:ggatccatcgttcaaac atttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataattt ctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtccc gcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcat ctatgt tactagtaatcgat设计引物：Forward primer: 5’ ggaGGATCC ggatccatcgttcaaac 3’(含Bam H I 位点GGATCC及三个保护碱基)Reverse primer: 5’ atcGAATTC ATCGATTACTAGTAACATAG 3’(含Eco R I 位点GAATTC及三个保护碱基)请查一下NOS终止子序列内有没有这两个酶切点。
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〔转载〕
Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,
pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA
pTZ19RDNA
pUC57DNA
PMD18T
PQE30
pUC18
pUC19
pTrcHisA
pTrxFus
pRSET-A
pRSET-B
pVAX1
PBR322
pbv220
pBluescriptIIKS( )
L4440
pCAMBIA-1301
pMAL-p2X
pGD926
ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNA
ProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits
TEcoR?pGEX-1I/BAP
pGEX-2T
pGEX-2TK
pGEX-3X
pGEX-4T-1
pGEX-4T-2
pGEX-4T-3
pGEX-5X-1
pGEX-5X-2
pGEX-5X-3
pGEX-6P-1
pGEX-6P-2
pGEX-6P-3
PTYB1
PTYB2
PTYB11
PTYB12
pCDNA3.1(-)
pCDNA3.1( )
pPICZalphaA
pGAPZαA
pBI121
pEGFP-N1
pEGFP-C1
pPIC9K
如何阅读分析质粒图谱
载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
一、一个合格质粒的组成要素
复制起始位点Ori?即控制复制起始的位点。
原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。
而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。
抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp ?,Kan
多?克隆位点MCS克隆携带外源基因片段
P/E?启动子/增强子
Terms终止信号?
加poly〔A〕信号?可以起到稳定mRNA作用
二、如何阅读质粒图谱
第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型〔原核/真核/穿梭质粒〕
第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。
〔1〕Ampr水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。
〔2〕tetr可以阻止四环素进入细胞。
〔3〕camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
〔4〕neor〔kanr〕氨基糖苷磷酸转移酶使G418〔长那霉素衍生物〕失活
〔5〕hygr使潮霉素β失活。
第三步：看多克隆位点〔MCS〕。
它具有多个限制酶的单一切点。
便于外源基因的插入。
如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。
决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源DNA插入片段大小。
质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。
一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。
第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。
这是用来区别克隆载体与表达载体。
克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。
选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。
启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号
启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。
?
增强子/沉默子－为真核?基因组〔包括真核病毒基因组〕中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。
其作用与增强子所在的位置或方向无关。
即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。
/沉默子－负增强子，负调控序列。
核糖体结合位点/起始密码/SD序列〔Rbs/AGU/SDs〕：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG〔起始密码〕和SD序列。
?
转录终止顺序〔终止子〕/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA 的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly〔A〕加尾信号。
结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream 有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly〔A〕加尾信号。
?
答复有人之前提出的一个问题：为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针，那其实是代表两条DNA链，即质粒是环状双链DNA，它的启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上.
三、介绍一下关于载体的知识〔虽然课本上都有写〕
1. 什么是载体
即要把一个有用的基因〔目的基因——研究或应用基因〕通过基因工程手段送到生物细胞〔受体细胞〕，需要运载工具〔交通工具〕携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体〔vector〕。
P.S.基因工程所用的vector实际上是DNA分子，是用来携带目的基因片段进入受体细胞的DNA
2. 载体的分类
―――按功能分成：〔1〕克隆载体都有一个松弛的复制子，能带动外源基因，在宿主细胞中复制扩增。
它是用来克隆和扩增DNA片段〔基因〕的载体。
〔所以有时实验时扩增效率低下，要注意是不是使用的严谨行载体〕
〔2〕表达载体具有克隆载体的基本元件〔ori,Ampr,Mcs等〕还具有转录/翻译所必需的DNA 顺序的载体。
―――按进入受体细胞类型分：〔1〕原核载体〔2〕真核载体〔3〕穿梭载体〔sbuttlevector〕指在两种宿主生物体内复制的载体分子，因而可以运载目的基因〔穿梭往返两种生物之间〕. P.S.穿梭质粒含原核和真核生物2个复制子，以确保两类细胞中都能扩增。
3. 基因工程载体的3个特点：
〔一〕都能独立自主的复制：载体DNA分子中有一段不影响它们扩增的非必需区域，如MCS，插在其中的外源DNA片段，能被动的跟着载体一起复制/扩增，就像载体的正常成分一样。
〔二〕都能便利的加以检测：如载体的药物抗性基因，多是抗生素抗性基因，将受体细胞放在含有该抗生素培养板上培养生长时，只有携带这些抗性基因的载体分子的受体细胞才能存活。
〔三〕都能容易进入宿主细胞中去，也易从宿主细胞中别离纯化出来。
4. 载体的选择和制备：
选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。
如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。
载体选择主要考虑下述3点：
【1】构建DNA重组体的目的，克隆扩增/表达表达，选择合适的克隆载体/表达载体。
【2】.载体的类型：
〔1〕克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小〔大选大，小选小〕。
如<10kb选质粒。
〔2〕表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。
〔3〕对原核表达载体应该注意3点：
①选择合适的启动子及相应的受体菌；
②用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；
③表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。
【3】载体MCS中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不产生阅读框架错位。
选用质粒〔最常用〕做载体的4点要求：
①选分子量小的质粒，即小载体〔〕→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多〔也有大载体〕；
②一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。
③必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；
④必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr〔试一试〕。
无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA进行切割，获得分子，以便于与目的基因片段进行连接。