各类质粒载体图谱、序列及酶切位点大全(非常有用)
质粒图谱大全
〔转载〕Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbApTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKitsTEcoR?pGEX-1I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3PTYB1PTYB2PTYB11PTYB12pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαApBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
常见限制性酶切位点
常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)（BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等）分子生物学实验室技术2009-11-17 17:46:32 阅读2235 评论2 字号：大中小订阅.在分子克隆实验中，限制性内切酶是必不可少的工具酶。
无论是构建克隆载体还是表达载体，要根据载体选择合适的内切酶（当然，使用T载就不必考虑了）。
先将引物设计好，然后添加酶切识别序列到引物5’端（英语怎么说？）。
常用的内切酶比如BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等可能你都已经记住了它们的识别序列，不过为了保险起见，还是得查证一下。
下面，我就总结了一些常用的内切酶的识别序列，仅供各位参考。
下面这些内切酶都属于II型内切酶。
先介绍一下什么是II型内切酶吧。
The Type II restriction systems typically contain individual restriction enzymes and modification enzymes encoded by separate genes. The Type II restriction enzymes typically recognize specific DNA sequences and cleave at constant positions at or close to that sequence to produce 5-phosphates and 3-hydroxyls. Usually they require Mg 2+ ions as a cofactor, although some have more exotic requirements. The methyltransferases usually recognize the same sequence although some are more promiscuous. Three types of DNA methyltransferases have been found as part of Type II R-M systems forming either C5-methylcytosine, N4-methylcytosine or N6-methyladenine.ApaI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5'GGGCC^C 3'BamHI（类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^GATCC 3'BglII （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' A^GATCT 3'EcoRI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^AA TTC 3'HindIII （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' A^AGCTT 3'KpnI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GGTAC^C 3'NcoI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' C^CA TGG 3'NdeI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' CA^TATG 3'NheI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^CTAGC 3'NotI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GC^GGCCGC 3'SacI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GAGCT^C 3'SalI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^TCGAC 3'SphI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GCA TG^C 3'XbaI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' T^CTAGA 3'XhoI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' C^TCGAG 3'当然，上面总结的这些肯定不全，要查找更多内切酶的识别序列，你还可以选择下面几种方法：1. 查你所使用的内切酶的公司的目录或者网站；NEB网站上提供的识别序列图表下载2. 用软件如：Primer Premier5.0或Bioedit等，这些软件均提供了内切酶识别序列的信息；3. 推荐到NEB的REBASE数据库去查（网址：/rebase/rebase.html）当你设计好引物，添加上了内切酶识别序列，下一步或许是添加保护碱基了，可以参考：NEB公司网站提供的保护碱基参考表下载NEB公司网站上关于设计PCR引物保护碱基的参考双酶切buffer的选择（MBI、罗氏、NEB、Promega、Takara）这里再给大家推荐一种新的不需要连接反应的分子克隆方法，优点包括：①设计引物不必考虑选择什么酶切位点；②不必考虑保护碱基的问题；③不必每次都选择合适的酶来酶切质粒制备载体；④而且不需要DNA连接酶；⑤假阳性几率低（因为没有连接反应这一步，载体自连的问题没有了）。
常用pGEX载体图谱
常用pGEX载体图谱Rosetta系列的表达菌株可以提供T7 RNA聚合酶，它能表达PET系列载体上的外源基因。
pGEX系列载体上的外源基因不需要T7 RNA 聚合酶，普通的大肠杆菌经IPTG诱导即可表达Tac启动子是一组由Lac和trp启动子人工构建的杂合启动子，受Lac阻遏蛋白的负调节，它的启动能力比Lac和trp都强。
其中Tac 1是由Trp启动子的－35区加上一个合成的46 bp DNA片段(包括Pribnow 盒)和Lac操纵基因构成，Tac 12是由Trp的启动子-35区和Lac 启动子的-10区，加上Lac操纵子中的操纵基因部分和SD序列融合而成蛋白标签：A myc tag is a polypeptide proteintag derived from the c-myc gene product that can be added to a proteinusing recombinant DNA technology. It can be used for affinity chromatography, then used to separate recombinant, overexpressed protein from wild type protein expressed by the host organism. Itcan also be used in the isolation of protein complexes with multiple subunits.A myc tag can be used in many different assays that require recognition byan antibody. If there is no antibody against the studied protein, adding a myc-tag allows one to follow the protein with an antibody against the Myc epitope. Examples are cellular localization studies by immunofluorescence or detectionby Western blotting.The peptide sequence of the myc-tag is (in 1- and 3-letter codes, respectively):N-EQKLISEEDL-C,N-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu -C, where N stands for Amino-terminus and C stands for Carboxy terminus. The tag is approximately 1202 Daltons in atomic mass and has 10 amino acids.It can be fused to the C-terminus andthe N-terminus of a protein. It is advisablenot to fuse the tag directly behind the signal peptide of a secretory protein, since it can interfere with translocation intothe secretory pathway.A monoclonal antibody against themyc epitope, named 9E10, is available from the non-commercial Developmental Studies Hybridoma BankpGEX4T1载体基本信息出品公司: GE别名: pGEX-4T-1, pGEX4T1, pGEX 4T 1质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达载体表达水平: 高拷贝启动子: Tac克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 4969 bp5' 测序引物及序列: pGEX5': GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG3' 测序引物及序列: pGEX3': CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG载体标签: N-GST载体抗性: Ampicillin 氨苄备注: 复制子是pMB1产品目录号: 27-4580-01稳定性: 瞬时表达 Transient组成型: 诱导表达病毒/非病毒: 非病毒pGEX4T1载体质粒图谱和多克隆位点信息原核生物DNA复制起始点，是DNA链上独特的具有起始DNA复制功能的碱基序列。
质粒载体图谱大全Vector
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pBADM-60(+) map araBAD Amp
N-NusA N-His
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Top10 LMG194
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BL21 (DE3) pUC
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map T7/lac Amp
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sequence)
map seq
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T7-lac
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（转载）一. 九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二. 克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET 系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits四.PGEX 系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六. 真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZα APYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类, 其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
【原创】找质粒.载体图谱及序列的方法
【原创】找质粒.载体图谱及序列的方法
在相关版面看到n个这样的帖子：“请问....质粒的图谱?" "请问质粒...的酶切位点?"....
诸如此类的问题，多之甚多。
因此，友情提醒按以下方法查找质粒相关信息:
1.Vectorpedia：输入质粒骨架，直接查询，非常方便;
2. google
检索式子：质粒名＋ map
质粒名＋sequence ＋filetype:txt or filetype:pdf
或者：进入google，点击"图片搜索"，直接查找图谱.
3.google scholar: /
有些质粒是经过改造的，所以通过上述方法不能查询到相应信息。
这时，可以在google scholar中输入质粒名称，可以直观地看哪些学者在何文章中使用了该质粒，从而可了解到质粒的来源;或者籍此向作者咨询或索取。
4.尝试从各大生物公司，例如invitrogen网站查询.
5. 这个网站收录了大量图谱：
PET系列载体信息：
本人一点想法，供参考。
希望版面内不要出现类似的帖子，浪费
斑竹和其他战友的时间，也影响自己的工作。
:P。
(完整版)所有质粒载体汇总,推荐文档
酿酒酵母表达载体pYES2,pYES2/NT,pYES2/CT,pYES3,pYES6, pYCplac22-GFP,酵母载体pAUR123,pRS303TEF,pRS304, pRS305,pRS306,pY13TEF,pY14TEF，pY15TEF，pY16TEF,酵母基因重组表达载体pUG6, pSH47,酵母单杂载体pHISi,pLacZi,pHIS2, pGAD424, 酵母双杂交系统:酿酒酵母Y187, 酿酒酵母AH109；质粒pGADT7,pGBKT7；对照质粒pGBKT7-53，pGBKT7-lam，pGADT7-T，PCL1，酿酒酵母菌株INVSc1,YM4271, AH109,Y187,Y190,毕赤酵母表达载体pPIC9K,pPIC9K-His,pPIC3.5K,pPICZalphaA,B,C,pPICZA,B,C,pGAPZαA,pAO815,pPIC9k-His,pHIL-S1,pPink hc，配套毕赤酵母Pichiapink,毕赤酵母宿主X33，KM71，KM71H，GS115，原核表达载体pQE30,31,32,40,60,61,62,等原核表达载体,包括pET系列，pET-GST，pGEX系列（含GST标签），pMAL系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis系列，pQE系列,pTrc99a,pTrcHis系列，pBV220,221,222,pTXB系列，pLLP-ompA,pIN-III-ompA （分泌型表达系列）,pQBI63（原核表达带荧光）pET3a, pET 3d, pET 11a, pET 12a, pET 14b, pET 15b, pET 16b, pET 17b, pET 19b, pET 20b, pET 21a,b,d, pET 22b, pET 23a, pET 23b, pET 24a,b, pET 25b, pET 26b, pET 27b, pET 28a,b, pET 29a, pET 30a, pET 31b, pET 32a, pET 35b, pET 38b, pET 39b, pET 40b, pET 41a,b pET 42a, pET 43.1a,b pET 44a, pET 49b pET302,303 pET His,pET Dsb,pET GST,pET Trx pQE2, pQE9 pQE30,31,32, pQE 40 pQE70 pQE80L pQETirs system pRSET-A pRSET-B pRSET-C pGEX4T-1,-2,-3,5x-1,6p-1,6p-2,2tk,3c pBV220,221,222 pTrcHisA,B,C pBAD24,34,43 pBAD HisA,B,C pPinPoint-Xa1,Xa2,Xa3 pMALc2x, p2x pBV220 pGEM Ex1, pGEM7ZF（+）, pTrc99A, pTwin1, pEZZ18 pkk232-8,pkk233-3,pACYC184,pBR322,pUC119 pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK （+）,pBlueScript SK（-）pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C, 大肠杆菌冷激质粒： pColdI pColdII pColdIII pColdTF 原核共表达质粒：pACYCduet-1,pETduet-1,pCDFduet-1，pRSFduet-1 Takara公司大肠杆菌分子伴侣： pG-KJE8 pGro7 pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞： DH5a JM101 JM103JM105 JM107 JM109 JM110 Top10 Top10F BL21（DE3）HB101 ER2529 E2566 C2566 MG1655 XL-10gold XL blue M15 JF1125 K802 SG1117 BL21（AI）BL21（DE3）plysS TG1 TB1 DH5a（pir）Tuner（DE3）Bl21 codonplusRIPL Novablue （DE3）Rosetta Rosetta（DE3）Rosetta（DE3）plys Rosetta-gami（DE3）Rosetta-gamiB（DE3）, Rosetta-gamiB（DE3）plysS Orgami（DE3）OrgamiB（DE3）HMS174（DE3）植物表达/RNAi载体农杆菌pBI121,pBI121-GFP,pBI101,pBI221,pSN1301,pUN1301,pRTL2 , pRTL2-GFP , pRTL2-CFP, pRTL2-RFP , pRTL2-YFP,pCAMBIA 1300, 1301, 1302,1303,1304,1305, 1381Z,1391Z,2300, 2301,3300,3301,pCAMBIA super1300,pCAMBIAsuper1300-GFP,pPZP212,pPZP2121,pPZP212-GFP,pGDG,RNAi载体pART27,pHANNIBAL,pKANNIBAL, pFGC5941,pTCK303, pTRV1,pTRV2,T-DNA插入载体（随机突变体库）pSKI015,pSKI074,真菌ATMT载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP,pBHt1枯草芽孢杆菌表达载体pWB980,pHT43,pHP13,pHP43,pBE2,pMUTIN4,pUB110,pE194,pMA5, pMK3,pMK4,pHT304,pHY300PLK,pBest502,pDG1363,pSG1154,pAX01, pSAS144,pDL,pDG148-stu,pDG641,pAL12,pUCX05-bgaB,pHT01，配套菌株BS 168,WB600,WB800,WB700,WB800N,1012,FZB42,1A747,广宿主质粒pVLT33RNAi基因沉默干扰敲除载体pSilencer1.0，pSilencer 2.1-U6 hygro， pSilencer 3.1-H1 hygro，pSilencer 3.1-H1 neo， pSilencer 4.1-CMV neo， pSilencer 4.1-CMV puro pMIR-REPORT Luciferase RNAi载体（oligoengine）pSuper-puro RNAi逆转录病毒载体（clontech）: RNAi-Ready pSIREN-Retro Q， RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-ZsGreen（Luciferase shRNA Annealed Oligonucleotide）RNAi慢病毒载体（addgene）: pLKO.1哺乳动物表达载体pcDNA3.1+/-,pcDNA4/HisMax B，pSecTag2 A，pVAX1，pBudCE4.1,pTracer CMV2，pcDNA3.1（-）/myc-His A ，pcDNA6-Myc/His B，pCEP4， pIRES，pIRESneo，pIRES hyg3，pCMV-myc，pCMV-HA，pIRES-puro3，pIRES-neo3,pCAGGS哺乳动物双杂交系统pACT，pBIND，pACT-MyoD，pBIND-Id，pG5luc,pCMV-BD, pCMV-AD, pBD-p53, pFR-luc,Cytotrap Two-Hybrid System:pSos, pSos MAFB, pMyr蜕皮激素诱导系统pIND, pVgRxR,LacSwith II哺乳动物诱导表达系统:pOPRSVI ，pOPI3CAT，pCMVLacI,GeneSwitch System:pSwitch哺乳动物表面展示系统:pDisplay, 四环素调控系统（Invitrogen）：pcDNA4/TO/Myc-His A，pcDNA4/TO/Myc-His B，pcDNA4/TO/Myc-His C，pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ，pcDNA6/TR四环素调控系统（Clontech）：pTet-On，pTet-Off，pTRE2,pRevTRE，pRevTet-On，pRevTet-off信号通路报告载体:pGAS-TA-Luc，pSTAT3-TA-Luc, pISRE-TA-Luc, pTA-Luc，pIκB-EGFP，pNFAT-TA-Luc，pCaspase3-sensor，pAP1（PMA）-Luc;pGL4.26[luc2P/minP/Hygro],pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro],pGL4.30[luc2P/NFA T-RE/Hygro]，pGL4.75;p53-Luc，pAP-1-Luc， pNF-κB-Luc，pSRE-Luc，pFA2-Elk1，pFC-MEKK，pFR-luc,Gateway系统（invitrogen）pcDNA6.2-GWEmGFP-miR negative, pLenti 6/TR,pcDNA 6.2-GW EmGFP-miR，乳酸菌表达载体及各种乳酸菌乳酸杆菌菌株，pNZ8148,pLEISS,pMG36e,pBBR1MCS-5,pBBR1MCS-6,pRV610,pLEM415,pHY3 00PLK,分泌型乳酸菌表达载体pVE5523，pPG611.1,pPG612.1等和乳酸杆菌菌株宿主菌NZ9000,MG1363,Lactobacillus casei 1.539,Lactobacillus casei,acidophilus NCFM,1.2,Lactobacillus sakei 23K,L.plantarum,L.rhamnosusGG,B.coagulans,Bifidobacterium bifidum,Bifidobacterium infantis,Lactococcus lactis M17,1663,Lactobacillus reuterii广宿主表达载体链球菌表达敲除载体假单胞菌表达载体pVLT33,pBBR1MCS-2,3,4,5,6, pJRD215,pJN105,pME6032,Cos载体pLAFR3,pMP2444（GFP）, pHY300PLK,pRT102,pRL1063a, 转座子载体pUT-miniTn5,pMGS100, pWHM10,pKC1139,pSET152,pOJ260,pPG611.1,pPG612.1，腺病毒载体/慢病毒，逆转录病毒表达载体及包装包膜质粒，腺病毒系统（Stratagene）: pAdEasy-1,pShuttle-CMV,pShuttle,pAdTrack, pAdTrack-CMV, pShuttle-IRES-hrGFP-1、pShuttle-IRES-hrGFP-2、pShuttle-CMV-lacZ,pShuttle-CMV-EGFP-C,pXC1, pBHGE3, 配套大肠杆菌BJ5183,293,293T cellline 腺相关病毒系统（Stratagene）： pAAV-MCS，pAAV-RC，pHelper，pAAV-LacZ，pAAV-IRES-hrGFP，pCMV-MCS，慢病毒载体:pLVX-DsRed-Monomer-N1,pLVX-IRES-ZsGreen1,pLVX-AcGFP1-N1,Lenti6/v 5-EDST-EGFP,pWPXL, FUGW,pLentilox 3.7,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q-ZsGreen,pSUPER.Retro-GFP/Neo,pSUPER-Retro-Neo, pSUPER.Retro-puro,PLNCX PLNCX2 pMSCV-HYG pMSCV-neo pMSCV-puro pLEGFP-C1 pLOX-CW-CRE pLOX-GFP-IRES-TK pRetroX-IRES-DsRedExpress, pLVX-IRES-mCherry质粒载体。
质粒图谱大全之欧阳与创编
（转载）一.九种表达载体Pllp-OmpA,pllp-STII,pMBP-P,pMBP-C,pET-GST,pET-Trx,pET-His,pET-CKS,pET-DsbA 二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusion Systems39band40bProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressio nSystem33bProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressio nSystemsProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressio nSystemsplusCompetentCellsProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusio nSystems41and42ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusi onSystems43.1and44ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDN AProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinRes insandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAP pGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
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（转载）一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
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转载一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA 二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKSL4440pCAMBIA-1301pGD926三.PET系列表达载体ProteinExpressionProkaryoticExpressionpETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpressionProkaryoticExpressionpETExpressionSystem33b ProteinExpressionProkaryoticExpressionpETExpressionSystems ProteinExpressionProkaryoticExpressionpETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpressionProkaryoticExpressionpETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpressionProkaryoticExpression ProteinExpressionProkaryoticExpressionpETVectorDNA ProteinPurificationPurificationSystemsStrepTactinResinsandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR pGEX-1I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-3 pGEX-6P-1 pGEX-6P-2 pGEX-6P-3五.PTYBsystem PTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体-pPICZalphaA pGAPZαApBI121pEGFP-N1 pEGFP-C1pPIC9K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体;一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点;原核生物DNA分子中只有一个复制起始点;而真核生物DNA分子有多个复制起始位点;抗生素抗性基因可以便于加以检测,如Amp ,Kan多克隆位点MCS克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms终止信号加polyA信号可以起到稳定mRNA作用二、如何阅读质粒图谱第一步：首先看Ori的位置,了解质粒的类型原核/真核/穿梭质粒第二步：再看筛选标记,如抗性,决定使用什么筛选标记;1Ampr水解β－内酰胺环,解除氨苄的毒性;2tetr可以阻止四环素进入细胞;3camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物,使之失去毒性;4neorkanr氨基糖苷磷酸转移酶使G418长那霉素衍生物失活5hygr使潮霉素β失活;第三步：看多克隆位点MCS;它具有多个限制酶的单一切点;便于外源基因的插入;如果在这些位点外有外源基因的插入,会导致某种标志基因的失活,而便于筛选;决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因;第四步：再看外源DNA插入片段大小;质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段;一般来说,外源DNA片段越长,越难插入,越不稳定,转化效率越低;第五步：是否含有表达系统元件,即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号;这是用来区别克隆载体与表达载体;克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体;选用那种载体,还是要以实验目的为准绳;启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号启动子－促进DNA转录的DNA顺序,这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游,是DNA 分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位,但启动子本身不被转录;增强子/沉默子－为真核基因组包括真核病毒基因组中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序;其作用与增强子所在的位置或方向无关;即在所调控基因上游或下游均可发挥作用;/沉默子－负增强子,负调控序列;核糖体结合位点/起始密码/SD序列Rbs/AGU/SDs：mRNA有核糖体的两个结合位点,对于原核而言是AUG起始密码和SD序列;转录终止顺序终止子/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列,此位点down－stream有一段GT或T富丰区,这2部分共同构成polyA加尾信号;结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列,此位点down－stream有一段GT或T 富丰区,这2部分共同构成polyA加尾信号;回答有人之前提出的一个问题：为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针,那其实是代表两条DNA链,即质粒是环状双链DNA,它的启动子等在其中一条链上,而它的抗性基因在另一条链上.三、介绍一下关于载体的知识虽然课本上都有写1. 什么是载体即要把一个有用的基因目的基因——研究或应用基因通过基因工程手段送到生物细胞受体细胞,需要运载工具交通工具携带外源基因进入受体细胞,这种运载工具就叫做载体vector;.基因工程所用的vector实际上是DNA分子,是用来携带目的基因片段进入受体细胞的DNA2. 载体的分类―――按功能分成：1克隆载体都有一个松弛的复制子,能带动外源基因,在宿主细胞中复制扩增;它是用来克隆和扩增DNA片段基因的载体;所以有时实验时扩增效率低下,要注意是不是使用的严谨行载体2表达载体具有克隆载体的基本元件ori,Ampr,Mcs等还具有转录/翻译所必需的DNA顺序的载体;―――按进入受体细胞类型分：1原核载体2真核载体3穿梭载体sbuttlevector指在两种宿主生物体内复制的载体分子,因而可以运载目的基因穿梭往返两种生物之间..穿梭质粒含原核和真核生物2个复制子,以确保两类细胞中都能扩增;3. 基因工程载体的3个特点：一都能独立自主的复制：载体DNA分子中有一段不影响它们扩增的非必需区域,如MCS,插在其中的外源DNA片段,能被动的跟着载体一起复制/扩增,就像载体的正常成分一样;二都能便利的加以检测：如载体的药物抗性基因,多是抗生素抗性基因,将受体细胞放在含有该抗生素培养板上培养生长时,只有携带这些抗性基因的载体分子的受体细胞才能存活;三都能容易进入宿主细胞中去,也易从宿主细胞中分离纯化出来;4. 载体的选择和制备：选择载体主要依据构建的目的,同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点;如果构建的目的是要表达一个特定的基因,则要选择合适的表达载体;载体选择主要考虑下述3点：1构建DNA重组体的目的,克隆扩增/表达表达,选择合适的克隆载体/表达载体;2.载体的类型：1克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小大选大,小选小;如<10kb选质粒;2表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭,哺乳类细胞表达载体;3对原核表达载体应该注意3点：①选择合适的启动子及相应的受体菌；②用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；③表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考;3载体MCS中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异,适应目的基因与载体易于链接,不产生阅读框架错位;选用质粒最常用做载体的4点要求：①选分子量小的质粒,即小载体1－→不易损坏,在细菌里面拷贝数也多也有大载体；②一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束,一般10个以上的拷贝,而严谨型质粒<10个;③必需具备一个以上的酶切位点,有选择的余地；④必需有易检测的标记,多是抗生素的抗性基因,不特指多位Ampr试一试;无论选用哪种载体,首先都要获得载体分子,然后采用适当的限制酶将载体DNA进行切割,获得分子,以便于与目的基因片段进行连接。
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.（转载）一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAP.pGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
所有质粒载体汇总
所有质粒载体汇总质粒载体是用于携带和复制DNA分子的小圆环DNA分子，在基因工程和分子生物学研究中扮演着重要的角色。
质粒载体的选择取决于不同的实验需要以及目标基因的特性。
下面是一些常用的质粒载体的简要概述。
1.pUC19：pUC19是一种常用的高拷贝质粒载体，在能源代谢和抗性等方面具有一些基本功能。
它含有多个限制性内切酶切位点，可以方便的进行基因克隆和插入。
2.pBR322：pBR322是最早的质粒载体之一，也是最常用的选择性质粒载体。
它具有多个抗性基因和多个限制性内切酶切位点，可以方便的进行限制性内切酶切和基因插入。
3. pET28a：pET28a是一种常用的诱导表达质粒载体。
它具有T7启动子和强力的胼胝体定位肽（His-tag），可以用于原核表达大量目标蛋白。
6. pcDNA3.1：pcDNA3.1是一种常用的真核表达质粒载体，可以在哺乳动物细胞中稳定表达目标基因。
它具有CMV启动子和多个选择性标记。
7.pAVEX系列：pAVEX系列是一组常用的双杂交质粒载体。
这些载体可以用于植物或哺乳动物细胞中检测蛋白相互作用。
8.pBI121：pBI121是一种常用的植物转化质粒载体。
它具有多个选择性标记和启动子，可以将目标基因导入植物细胞中进行稳定表达。
9.pCAMBIA1300：pCAMBIA1300是另一种常用的植物转化质粒载体。
它具有多个选择性和表达标记，以及多个启动子和启动子缺陷。
10.pHSE系列：pHSE系列是一组常用的高效表达质粒载体。
这些载体具有强力的启动子和增强子，可以用于高效表达目标基因。
这些只是众多质粒载体中的几个典型例子，根据不同实验需求和目标基因特性，科研人员可以选择适合自己实验的质粒载体。
质粒载体的设计和构建在基因工程研究和生物技术应用中起着至关重要的作用，不断的优化和改进将进一步拓宽其应用范围。
各类质粒载体图谱
pGADT7
Vector Information
as a fusion to a hemagglutinin (HA) epitope tag. HA-tagged proteins can be identified with antibodies raised to this common epitope, eliminating the need to generate specific antibodies to new proteins. The T7 promoter is used for in vitro transcription and translation of the epitope tagged fusion protein and also provides a binding site for sequencing using the T7 Sequencing Primer. Note that the AD is not expressed during the in vitro transcription and translation reactions. The Nco I and Pst I sites may be used to shuttle inserts from pGADT7 into pGBKT7, the MATCHMAKER Two-Hybrid System 3 DNA-BD Vector. The MCS in pGADT7 is compatible with those in pMyc-CMV and pHA-CMV, CLONTECH's epitope tagged mammalian expression vector set (#K6003-1). As a result, the target gene can be shuttled into these vectors in order to confirm protein interactions in vivo. Location of features: • Full-length S. cerevisiae ADH1 promoter (PADH1): 7–1479 • GAL4 AD polypeptide with SV40 Nuclear Localization Signal (NLS) NLS: 1501–1557 GAL4 amino acids 768–881: 1561–1899 • T7 RNA polymerase promoter: 1905–1927 • HA epitope tag: 1942–1968 • Multiple Cloning Sites: 1969–2041 • Transcription termination signal Fragment carrying the S. cerevisiae ADH1 terminator (TADH1): 2280–2605 • LEU2 coding sequences: 3814–2723 • pUC plasmid replication origin: 4581–5418 • Ampicillin resistance gene: 6432–5575 • Yeast 2 µ replication origin: 6998–7988 Location of primers: • T7 Sequencing Primer: 1905–1925 • 3' AD Sequencing Primer: 2102–2083 • MATCHMAKER 5' AD LD-Insert Screening Amplimer (#9103-1): 1858–1889 • MATCHMAKER 3' AD LD-Insert Screening Amplimer (#9103-1): 2078–2046 Propagation in E. coli: • Suitable host strains: DH5α, DH10 & other general purpose strains • Selectable marker: plasmid confers resistance to ampicillin (100 µg/ml) to E. coli hosts • E. coli replication origin: pUC • Copy number: ~500 • Plasmid incompatibility group: pMB1/Col E1 Propagation in S. cerevisiae: • Suitable host strains: Y187(α), Y190(a), SFY526(a), CG1945(a), HF7c(a), or AH109(a) • Selectable marker: LEU2 • S. cerevisiae origin: 2 µ Reference:
质粒图谱大全之欧阳索引创编
（转载）欧阳家百（2021.03.07）一.九种表达载体Pllp-OmpA,pllp-STII,pMBP-P,pMBP-C,pET-GST,pET-Trx,pET-His,pET-CKS,pET-DsbA 二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39 band40bProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplu sCompetentCellsProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41 and42ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems4 3.1and44ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNA ProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurifi cationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAP pGEX-2TpGEX-2TKpGEX-4T-1 pGEX-4T-2 pGEX-4T-3 pGEX-5X-1 pGEX-5X-2 pGEX-5X-3 pGEX-6P-1 pGEX-6P-2 pGEX-6P-3五.PTYBsystem PTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-) pCDNA3.1( ) pPICZalphaA pGAPZαA PYES2.0pBI121pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。