脐血间充质干细胞体外扩增和向神经元样细胞的定向诱导

益气活血方体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化

益气活血方体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化张运克1,车志英2(1.河南中医学院第一附属医院,河南郑州450000;2.河南中医学院,河南郑州450008)摘　要:目的:探讨益气活血方体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。

方法:采用密度梯度离心法分离获取S D 大鼠骨髓单个核细胞层,将细胞经过传代培养使细胞得到扩增和纯化,用流式细胞仪鉴别。

用益气活血方联合二甲亚砜(DMS O )、丁羟茴醚(BH A )和β-巯基乙醇(BME )等对碱性成纤维生长因子(bFG F )预诱导的MS Cs 诱导向神经细胞定向分化。

用免疫细胞化学方法检测诱导1h 、3h 后巢蛋白(nestin )的表达,诱导5h 后神经元特异性烯醇化酶(NSE )和胶质纤维酸性蛋白(G FAP )的表达,鉴定分化细胞的类型,并计数MS Cs 分化的各种细胞的阳性率。

结果:益气活血方体外诱导MS Cs 1h 、3h 后分化为nestin 免疫细胞阳性率为45.5%±3.4%和38.3%±1.8%,诱导5h 后NSE 和G FAP 免疫细胞阳性率为82.3%±2.4%、12.1%±1.6%,与对照组相比有极显著性差异(P <0.01)。

结论:成年大鼠骨髓MSCs 可以在体外培养扩增,益气活血方有体外定向诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。

关键词:大鼠;骨髓间充质干细胞;巢蛋白;神经元特异性烯醇化酶;胶质纤维酸性蛋白;益气活血方中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1002-2392(2008)01-0022-04基金项目:本课题得到河南省自然基金(0611040400)、河南省高校杰出科研人才创新工程项目(2007KY CX 007)的资助。

收稿日期:2007-09-28 修回日期:2007-12-15作者简介:张运克(1966-),男,副主任医师,副教授,医学博士,中国中医科学院博士后,硕士研究生导师,从事中医药防治神经系统疾病的临床与实验研究。

脐血间充质干细胞的体外扩增及向类肝细胞分化的实验研究

ＣＣ。分阶段诱导６后，ＤＤ周细胞形态呈多角形，并检测到肝细胞表面标志物白蛋白、ＦＡＰ和Ｃ一９Ｋ１。结论新
生儿脐血中可分离出ＭＳｓ并可在体外进行培养扩增，Ｃ，分阶段诱导可分化为类肝细胞。
关键词：血；充质干细胞；肝细胞；化脐问类分
Ａｓａｔ０ｂｅｔｅＴｎｅｔａｈｅｓｉｔｏｕａｍｉｃｌｃｒｌｄｍｓｎｈｍｌｅｅｓ（Ｃ — ｂｔｃ：ｊｃｖｏｉｖｓｇｔｔｅｆａｉｌｙｆｈｍｎｕｂｌａｏｄｂｏｅｅｃｙａｔｃｌＵＢｒｉｉｅｂｉｉｏｓｍｌ
ｏ．ｈｈｎｅｏｃｌｓａｅｅｅｂｅｖｄｂｖｒｄｐａｅｃｎｒｓｍｃｏｃｐ．ｈｖｌｏａｕｉ（Ｌ）ａａｆｎＴｅｃａｇｓｆｅｈｐｒｏｓｒｅｙｉｅｅｈｓｏｔｔｉｓｏｅＴｅｌｅｆｌｍｎＡＢ，ｌｈ — — ｗｎｔａｒｅｓｂｐｅ
ｍｅｓｃｈｅｎｙｍａｌｔｅｍｌｎｏｆｃｉａｌｈｅｔｙｅ—ｉｅｃｌｎｖｉｏｓｃｅｌｌｔｕｎｔｓｏｎｐａｏｃｐｔｌｅｌｉｔｋｓｒ
ＨＮＣｉｉｇ，Ｉｉｏｇ，Ａｅ，Ｅｉ — ａ，Ｕｉ－ｉ，１Ａｕ－ｎＬＵＪ— ｎＧＯＬｉＰＩｎｓｈＳＮＸｎｘｎ Ⅳ ｐｙＱｇｈ
化。倒置相差显微镜观察细胞形态变化，诱导后４周和６周的细胞分别采用Ｒ－Ｃ取ＴＰＲ法检测ＡＢＡＰ和Ｃ一９Ｌ、ＦＫ１基因ｍＮＲＡ水平，析类肝细胞诱导表达情况。结果分按１ｍ接种，含１％ＦＳ的ＤＥ／１０／ｌ用５ＢＭＭＦ２培养基培养可成功获取ＵＣＭＳｓＢ — Ｃ。细胞呈长梭形，胞表面抗原测定显示强烈表达Ｃ、Ｄ而不表达造血细胞的标志物细ＤＣ，

丹参注射液诱导间质干细胞分化为神经元样细胞

丹参注射液诱导间质干细胞分化为神经元样细胞项鹏;夏文杰;王连荣;陈振光;张丽蓉;张秀明;李艳;李树浓【期刊名称】《中山大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2001(022)005【摘要】[目的]丹参注射液体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞.[方法]采用Ficoll-Paque液离心分离成人MSC,体外扩增,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达,分别采用含丹参注射液或硫代甘油等试剂的无血清达乐伯克改良必需基本培养基(DMEM)诱导MSC分化为神经元,免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(nestin)的表达.[结果]成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得0.5×106,15代可获得(2～3)×1012个细胞,细胞流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD11a、CD14、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性.加入丹参或硫代甘油诱导后,MSC胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF-M、nestin表达阳性,GFAP阴性.[结论]丹参可以在体外诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞.【总页数】4页(P321-324)【作者】项鹏;夏文杰;王连荣;陈振光;张丽蓉;张秀明;李艳;李树浓【作者单位】中山医科大学病理生理教研室,;中山医科大学病理生理教研室,;中山医科大学病理生理教研室,;中山医科大学附属第一医院心胸外科,;广东药学院病理生理教研室,;中山医科大学病理生理教研室,;中山医科大学病理生理教研室,;中山医科大学病理生理教研室,【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.隐丹参酮诱导猴骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞 [J], 原清涛;邓宇斌;刘晓刚;胡军;李树浓;刘祖国2.丹参注射液体外诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究 [J], 冯亚波;姚红;庞在英;迟兆富3.小儿骨髓间质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞 [J], 李英;高杰;商亚敏;汪奇伟;王海磊4.小儿骨髓间质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞 [J], 李英;高杰;商亚敏;汪奇伟;王海磊;5.大鼠骨髓间质干细胞经三七总皂甙体外诱导分化为神经元样细胞:表型特征、凋亡蛋白的表达及存活 [J], 施雪英;陈先文;袁良津;方毅;周力军;胡慧敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人脐血间充质干细胞的体外培养

１１材料．
无菌条件下取本院正常足月剖腹产胎
的ＭｓｃｋＴｅｅｕＭ进行培养，ｎ观察细胞贴壁延伸及原代培养时间。⑤观察首次换液时间对细胞生长的影响：行以上研究时，进分别于接种后第２—７ｄ首次换液，将换下的液体转人新瓶继续培养至少６ｄ观，察是否仍有贴壁细胞，以确定首次换液时间。⑥观察不同培养基对细胞生长的影响：８份脐血，取以
１ｎ分离，获得的单个核细胞均分，１×１５ｍｉ将以０／
ｍｌ１×１。ｌ１×１ｍｌ１×１ｍｌ种于ＦＳ包、０ｍ、０／、０／接Ｂ
性，为其在组织工程方面的应用进行初步探索。
１材பைடு நூலகம் 与方法
被的培养瓶中。首次换液时间３ｄ用含１％ＦＳ，０Ｂ
液面清晰，稀释脐血与淋巴细胞分离液的柱高比为
３— ：。用Ｆｃｌ以适当的速度及时问离心，５】ｉ法ｄ取中间界面白膜层，ＰＳ后吹打，１５０ｒｍｉ加Ｂ以０／ｎ离
心５ｍｎ弃上清，ｉ，共洗涤２次，后加入培养基；以一定密度接种于培养瓶中，３置７℃ 、积分数为５％体的ＣＯ饱和湿度的孵箱中培养，细胞到８％融合时０用０２％胰酶和００％乙二胺四乙酸（：）．５．４１１消化，１：传代培养。２１２方法 ①不同离心速度及时间分离脐血单个．
以往研究 ¨ 表明，血中存在间充质干细胞脐

维甲酸联合神经生长因子体外诱导人脐血间充质干细胞向神经样细胞定向分化的实验研究

摘要目的：讨脐血间充质干细胞（Ｃ）探ＭＳｓ向神经样细胞定向诱导分化的条件及方法，
以明确其神经分化潜能。方法：将人脐血间充质干细胞体外培养扩增、保存后，第５代的ＭＳｓ取Ｃ
分别用维甲酸（Ａ）维甲酸联合神经生长因子（Ｆ）Ｒ、ＮＧ诱导方法向神经样细胞诱导，导分化期诱
间观察细胞形态变化，比较表达神经元特异性烯醇化酶（ｓ并ＮＥ）ｍＲＮＡ、质纤维酸性蛋白胶
（ＡＰ）ＧＦｍＲＮＡ的差异。结果：两种不同诱导方法均能诱导细胞发生典型变化，对照组未发现神
经样细胞生长。免疫组化法显示三种诱导方法诱导后均表达Ｎｓｉ、Ｅ、ＡＰ，ＧＦｅｔＮＳＧＦｎＮ＋Ｒ组Ａ多于Ｒ组。ｅｌｔ — Ｃ显示诱导组及对照组均有ＮＳＮＡ、ＡＰｍＲＡＲａ— ｍｅＲＴＰＲｉＥｍＲＧＦＮＡ表达，但
【中图分类号】Ｒ７１０【４．５文献标识码】Ａ
【文章编号１１０ — ３７２１）４００ —４００７７（０００ — ４４０
Ｔｈｅｅｐｒｍｅｎｒｔｎｉｃｄａｖｒｇｏｈｆｃｏｎｄｃｘｅｉｎｔｏｅｉｏｃａｉｎｄｎｅｅｒｗｔａｔｒｉｕｅ
ＤｅｒｍｅｔｏｆＮｅｒｌｇｙ，ＴｈｅＡｆｉｉｔｄＨｏｓｔｌｏｆＮｏｒｈｐａｔｎｕｏｏｆｌａｅｐｉａｔＣｈｉａｅｉａｎａＣｏｌＭｄｃｌＣｏｌｅｌｇｅ（ｎｈａ６００）Ｔａｇｓｎ０３０

脐血单个核细胞体外分离和定向分化为神经干细胞的实验研究

１０）ａｌｓｂｅｔｉｕａｉｎｏｅｙｈｐｅ（ｅｓｔ．７／１ｄｎｉｙｇａｉｎｎｈｎａｈｒｎｕｔａｅＯｏｔｉＳ０ｍ１ｓｍｐｅｙｃｎｒｆｇｔｖｒｌｍｐｏｒｐｄｎｉｙ１０７ｍ）ｅｓｔｒｄｅｔａｄｔｅｄｅｅｔｃｌｖｔｄｔｂａｎＭＣｓｏｉ
（ｐｔｎｆｕｏｏｙ，ｐｉｇＨｏｐｉｌＴ＾ＤｅａｒｍｅｔＮｅｒｌｇＤａｎｓｔ，ｏａ
ＭｉｉａｙＭｅｃｌＵｎｖｒｉｙ，ｈｎｑｎ００２Ｃｈｎ）ｌｔｒｄｉａｉｅｓｔＣｏｇｉｇ４０４。ｉａ
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１４６２
重庆医学２００７年７月第３６卷第１期３
・
论
著・
脐血单个核细胞体外分离和定向分化为神经干细胞的实验研究
向静，昌铭，景周△ 王王
（第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经内科，庆４０４）重００２
ｃｏｅ．ｏｏｅｖｈｅｓｐｅｂｉｒｓｏｐｎＯｅｍｉｈｅｐｈｎｏｙｅｆｔｅｌｌｌｎｉｓＴｂｓｒｅｔｈａｙｍｃｏｃｅａｄｔｘａｎｅｔｅｔｐｓｏｈｅｃｌｂｙｆｏｗｙｔｍｅｒｔｅｎｉｓｃｏｔｙ，ｈｎｄｕｅｉｈＮＧＦｃｄｗｔａｎｄＲＡｎｖｔｏ．ｉｉｒＴｈｅｅｒｅｔａｃｉｔｓｌｍｅａｅｃａｎｒａｔｏｎ（ｎｒｖｅｓｒｎｓｒｐａｅｐｏｙｒｓｈｉｅｃｉＲＴ— ＰＣＲ）ｏｒｎｓｉｎｕａｈｉ１ａｉｎｒｒｏｒｅＯｆｅｔｎａｄｍｓｓ一ｎｔｇｅｗｅｅｐｅｆｍｄｔｃｆｒｓｌｎｄｍｕａｈｉａｔｇｅｘｐｅｓｏｎｉＳＣｓＲｅｕｌｓＡｆｅｄｈｅｅｕｌｉｔｏｎ，ｏｔｃｌｓｂｃｍｅｒｍｂｃ，ｎｆｏｎｉｍｎｅｔｎａｓｓ一１ｎｉｎｅｒｓｉｎＭ．ｓｔｔｒａｒｎｔｃｔｖａｉｍｓｅｌｅａｈｏｉａｄｄｉ— ｆｒｎｔａｅｎｔｅｏｎｌｋｅｃｌｆｅｎｄｕｔｏｎ，ｘｐｅｓｎｇＣＤ２ｅｅｉｔｄｉｏｎｕｒ —ｉｅｌｓａｔｒｉｃｉｅｒｓｉ９ｂｕｔｎｏＣＤ３４．ＣＤｎｄＣＤｂ．ＲＴ＿ｌ１ａａ１１ＰＣＲｍｏｎｔａｅｍａ１ｄｅｓｒｔｄｓｌ

树鼩骨髓间充质干细胞体外分离培养及成脂成骨诱导

【摘要】目的探讨树朐骨髓间充质干细胞（ＢＭ．ＭＳＣｓ）的体外分离、传代及定向诱导为脂肪细和成骨细胞
的可行性。方法通过密度梯度离心联合贴壁培养法对树鼢骨髓间充质干细胞进行体外分离、扩增、纯化，倒置相
ＬＵＣａｉ — ｘｉａ，ＬＩＸｉａｏ — ｆｅｉ，ＷＡＮＧＷｅｎ — ｇｕａｎｇ，ＳＵＮＸｉａｏ — ｍｅｉ，ＴＯＮＧＰｉｎ — ｆｅｎ，ＫＵＡＮＧＤｅ — ｘｕａｎ，ＤＡＩＪｉｅ－ｊｉｅ（１．ＴｈｅＣｅｎｔｅｒｏｆＴｒｅｅｓｈｒｅｗＧｅｒｍｐｌａｓｍＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｅｄｉｃａｌＢｉｏｌｏｇｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆ
２Ｏｌ４年３月
中国比较医学杂志
ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥＭＥＤＩＣＩＮＥ
Ｍａｒｃｈ，２０１４Ｖｏ１．２４Ｎｏ．３
第２４卷
第３期
树嗣骨髓间充质干细胞体外分离培养及成脂成骨诱导
差显微镜进行形态学观察。用成脂诱导液（ＤＭＥＭ／Ｆ１２＋１０％ＦＢＳ＋１００Ｕ／ｍＬ青霉素＋１００ｇ／ｍＬ链霉素＋１．０
ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ地塞米松＋０．２ｍｍｏｌ／Ｌ吲哚美辛＋０．Ｏ１ｍｇ／ｍＬ胰岛素＋０．５ｍｍｏｌ／ＬＩＢＭＸ）和成骨诱导液（高糖ＤＭＥＭ

脐带血间充质干细胞体外分离_纯化及培养

脐带血间充质干细胞体外分离、纯化及培养陈镭1,惠国桢2,栾文忠1,苗宗宁3,王玲3,陆华3,吴智远2,芦奕2(1.天津医科大学,天津,300070; 2.江苏省无锡市第三人民医院细胞实验室,江苏无锡,214019;3.苏大学附属第一医院神经外科,江苏苏州,215006)摘要:目的研究脐带血(HUCB)中含有的间充质干细胞(M S Cs)体外分离、纯化及培养条件,探究其作为种子细胞应用于实验和临床的可行性。

方法无菌条件下取正常足月剖腹产的脐带血,经肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞,以偏酸性的M esen cult T M 作为培养基进行培养和纯化获得贴壁细胞层,用流式细胞仪检测M SCs 表面抗原。

结果来源于脐血的单个核细胞经体外培养贴壁后出现破骨样及间充质样的细胞,间充质细胞为成纤维样的细胞形态,并表达M SCs 相关的抗原(CD 29、CD 44、CD 166),但不表达造血细胞抗原(CD 34、CD 45),这与源于骨髓的M SCs 一致。

结论脐带血来源的M SCs 能在体外培养、扩增,而用于满足实验和临床的需要。

关键词:脐带血;间充质干细胞;体外培养中图分类号:R 329 2 文献标识码:A 文章编号:1672 2353(2004)01 0012 03THE ISOLATION PURIFICATION ANDCULTURE OF HUCA MSCsCHEN Lei,HUI Guo zen,RUAN Wen zong,MIAO Zong ning,WANG Ling,LU HUA,W U Zhi yuan,LU Li(1.T ianj in M edical Univer sity ,T ianj in,300070;2.Cell Dep ar tment,T hir d H osp ital of W ux i ,W ux i ,Jiangsu ,2140001;3.Dep ar tment of Neurosur gery ,First A f f iliated H osp ital of Suz houUniversity ,Suz hou,Jiangsu ,215006)ABSTRAC T Objective:To investig ate the isolation,purification and culture of hum an umbilical cord blood(HUCB)mesenchymal stem cells(M SCs)in vitro,and to observe the feasibility of using M SCs as seed cells in experiment and clinic.Methods:HUCB w ere collected from full term deliveries scheduled for cesarean section,all specimens w as obtained sterilely w ith preservative free heparin,the cord blood mononuclear cell w as isolated by lymphocyte separation medium,and puri fied and culture with M esencult T M medium and acidic environment to produce adherent layer,the surface antig en ex pression of MSCs was detected by flow cytometry.Results:The UCB derived mononuclear cells,when set in culture,gave rise to adherent cells,w hich ex hibited either an osteo clast or mesenchym al like phenoty pe,cells w ith the M SCs displayed a fibroblast like morpholog y and ex pressed several MSCs related antigens (CD 29,CD 44,CD 166),but did not ex press haematopoi etic cells antigens(CD 34,CD 45),which w as identical to human bone marrow derived M SCs.C on clusion:M SCs in H UCB can culture and expand in vitro,which could be regarded as an alternative source of MSCs for experimental and clinical needs.KEY WORDS umbilical cord blood;mesenchymal stem cells;culture in v itro脐带血(human umbilical cord blood,HUCB)是胎儿出生时脐带内及胎盘近胎儿一侧血管内的血液,含有丰富的干细胞和祖细胞,其主要包含造血干细胞和间充质干细胞(mesenchy mal stem收稿日期:2003-12-16基金项目:国家自然科学基金资助项目(30271325)、江苏省自然科学基金资助项目(BK2001170)作者简介:陈镭(1965-),男,天津市人,在读博士研究生。

成人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为神经元样细胞的研究

８
Ａ，哺ｃ：ｂｅ￣ｅｏｓｄｅｐｔｔｌｆｅｒｌｉｅｅｔｎｏｕａｎｅｎｈｆｌｔｄｓＭｅｉｓｌ劬ｔＯＪｖＴｕｙｔｏｎａｏｎｕｆｒｅｔｈｅｉａｄＢＯｆｍｎｂｅｒｓｃⅥｌｅｃｌｉｈｏｎｅＩＳｍａ．ｎａｌ
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０Ｉ口ｅｐｅｓｏｆｎｒｅｃｌｙｉｕｏｌｃｅ１ｓｉｉｇａｄＲ－Ｒ．｝ＩＷｅｎｄｈｇｏｌｎｌｒ腿ｘｒｓｉｎｏｅｖｅｌｂｓ唧ｎ｝咖ｈＨｉｉ８ｔｎｎｎＴＩａ￣ＲＩ缸鲺ｔｅｉｈｈｎ￣ｏｌ８
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文章编号：０一４８（ＯｒＯ —００ —０１＂２７２ｃ）１０４４０／７
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ｗｒｉｌｅ。ｕｕｅｎｒｉｒｅｙｅｏｒｄｎｎｒｉｎａｄａｈ施ｌｌｔａｋｃｌｒ．ＦＦａｄｔｅｌｌｅｏｔｃｌｒｄａｄｐｌｅｔｂｒｌｇａｉｔｅｔ￣ｏｅｃｔｐｓｃｆｓｕｕＢＧ￣ｌｅｓａｄｔｏｆｄＰｅｌａｅｅｈｎｄｅｏａｉｌｔｅｎｈＣｉ－

定向诱导骨髓间充质干细胞参与创面修复的研究

￣１：卷第２ｈＩｉｙｅａｄｕｄｅｌｚＥｅｔｎｃｄｉＪＡｒ２１．ｌ．ｏ２午第５期ＣｉＪｎｒＲｐｉｎｎａｎ（ｌｒｉＥｉ１１ｉ００ｏ５．ｎｕｒＷｏＨｉａｃｏｔ１Ｄｌｏ，ＶＮ２
ＣｏｒｓｎｉｇａｔｏｒＬＩａ —ｉｎ，点ｍａｌｓｅｅ００２＠１．ｏｒｅｐｏｄｎｕｈ：Ｘｉｏｌａｇ＇ｉ：ｔｖｎ２４１１２６ｃｍ
【ｓｒｃ］ＯｂｅｔｅＴｎｅｔａｅｔｅｆａｉｉｔｆｄｆｅｅｔｔｎｏｏｅｍａｉｗＡｂｔａｔｊｃｉｏｉｖｓｉｔｈｅｓｌｙｏｉｒｎｉｉｆｎｒｏｖｇｂｉａｏｂｍｅｅｃｙｌｓｅｃｌ（ＳｓｎｏｖｓｕａｎｏｈｌｌｅｌａｄｔｅｍｅｈｎｓｏｔｓｎｈｍａｔｍｅｌＭＣ）ｉｔａｃｌｒｅｄｔｅｉ【ｃｌｎｃａｉｍｆｉｓａｓｈｓ
ｊｏｖｍｅｔｉｕｄｈａｉｇＭｅｈｄｓＨｕａｏｅｍａｒｗＳｒａｖｅｔｄｆｏｎｖｌｅｎｎｗｏｎｅｌｎ．ｔｏｍｎｂｎｒｏＭＣＳｗｅｅｈｒｓｅｒｍｈｍａａ／ｗ．ａｄｔｅｒｓｌｔｄａｄｐｒｆｅｙｄｎｓｔｒｄｅｔｃｎｒｆａｉｎａｄｕｎｍ￣ｏｎｈｙｗｅｅｉｏａｅｎｕｉｄｂｅｉｙｇａｉｎｅｔｉｕｇｔｏｎｉａｈｒｎｅｓｒｅｉｇＡｆｅｅｎｕｌｒｄａｄａｄｅｅｃｃｅｎｎ．ｔｒｂｉｇｃｔｅｎｍｐｌｅｎｖｔｏ．ｅＭＳｒｎｕｅｔｕｉｄｉｉｒｔｉｆｈＣＳｗｅｅｉｄｃｄｗｉｈ

骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞

胞，具有横向分化为心肌细胞的能力 …。已有大量的文献报道，心肌梗死患者和动物模型中均可检测到在血清中肝细胞生长因子（ｅａｏｙｅｇｏｔａｔｒｈｐｔｔｒｗｈｆｃ，ｃｏＨＦ升高．Ｇ）因此其被认为具有防止心肌细胞凋亡和促进血管生成的作用［３２］－。但目前并没有人对ＨＦＧ是否能促进心肌细胞的分化进行具体研究。实验采本用ＨＦ作为诱导剂，Ｇ探讨ＭＣ向心肌细胞的定向诱Ｓｓ导分化，以期为干细胞移植治疗心肌梗死、力衰竭心等疾病提供更加良好的细胞源。
１材料与方法
１大鼠髓问充质干细胞的分离，扩增培养参照．１Ｐｔｇｒ述的方法，ｉｎｅ等［ｔｅ］描分离培养大鼠ＭＣ，Ｓｓ培养基组成为含１％胎牛血清（国Ｇｂｃ司）１０Ｕ５美ｉｉｏ公，０／ｍＬ青霉素及１０ｂ／Ｌ链霉素的高糖ＤＥ（０ｇｍ￣ＭＭ美国Ｇｂｃ公司）在１～２ｄ时贴壁细胞达到８％融合，ｉｉｏ，０１０用１：１的０２％胰蛋白酶和００ｍｏ／ＤＡ的混．５．１ｍｌＬＥＴ合液消化，１３的比例继续传代扩增培养。按：１骨髓基质干细胞（Ｃ的体外诱导分化将第４．２ＭＳ）代的ＭＣ细胞接种于６Ｓ孔板中，３第天换液时将６孔板分为两组，ｉ第组为对照组，不加ＨＦ第２，Ｇ；组加终浓度为２ｇｍＬ的ＨＦ共同培养２０ｎ／Ｇ．４ｈ后换液，各组全部更换为基本培养基，以后每３天换液１次，相差显微镜下观察细胞形态学变化，后进行免疫荧光４周和Ｒ —ＣＴＰＲ检测。１３免疫细胞化学检测取诱导培养４周后的．ＭＳｓ４Ｃ，％多聚甲醛固定。然后用血清稀释液封闭１ｈ以去除非特异性染色，再分别滴加抗鼠肌钙蛋白ＴｏｏｉＴ抗体和抗鼠Ｃｎｅｉ４ｒｐｎｎｏｎｘｎ３抗体（国Ｓｇａ美ｉｍ公司）加ＰＳ空白对照，，Ｂ作湿盒内４ ℃过夜，然后加

脐带间充质干细胞体外传代培养后细胞核型稳定性

脐带间充质干细胞体外传代培养后细胞核型稳定性崔冬冰;何志旭;李永念;王凤昌【摘要】目的:研究脐带间充质干细胞(UC-MSCs)在经过培养和传代后是否会出现染色体异常改变.方法:收集剖宫产足月胎儿脐带,采用胶原酶加胰酶消化法和机械法分离出UC-MSCs间充质干细胞贴壁培养传代,观察细胞形态、免疫表型及细胞增殖实验等生物学特性,利用G显带分析原代(P0)和第3～6代(P3～P6)细胞的染色体核型.结果:染色体核型分析显示,P0和P3～ P6 UC-MSCs均为正常二倍体核型,G显带未见染色体结构异常;UC-MSCs呈成纤维样形态生长,P3～P6代高表达CD73、CD90、CD44,并且UC-MSCs在培养2～3d时达到对数增长期.结论:UC-MSCs在体外连续传代培养6代以内染色体结构稳定,未出现染色体异常改变.【期刊名称】《贵阳医学院学报》【年(卷),期】2013(038)005【总页数】6页(P449-453,457)【关键词】脐带;间充质干细胞;连续传代;核型分析;细胞,培养的【作者】崔冬冰;何志旭;李永念;王凤昌【作者单位】贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心,贵州贵阳550004;贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心,贵州贵阳550004;贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心,贵州贵阳550004;贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心,贵州贵阳550004【正文语种】中文【中图分类】R349.5;R349.891.1 标本来源2例脐带取自贵阳仁爱医院产科健康足月新生儿剖宫产手术后，经家属同意捐献所得，新生儿性别为1男1女。

1.2 材料DMEM-低糖培养基(Gibco公司)、FBS(Hyclone公司)、Ⅱ型胶原酶(Gibco公司)、胰蛋白酶(Gibco公司)、流式抗体试剂盒(BD公司)、CO2细胞培养箱(Thermo公司)、流式细胞仪(BD公司)、Leica核型分析系统、染色体培养基、秋水仙碱、甲醇、冰乙酸、、姬姆萨染液、细胞培养瓶等。

人骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞诱导的研究

4人骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞诱导的研究袁心剐范顺阳石磊董松波刘会琼【摘要】目的研究人骨髓间充质干细胞(H B M Cs)的体外培养和向血管内皮细胞的诱导分化。

方法利用密度梯度离心法将H B M C s从人骨髓中分离出来，体外扩增。

将第三代的细胞以含V E G F，bFG F的培养基定向诱导，使其向内皮细胞方向分化。

利用免疫细胞化学和流式细胞学检浸4诱导后的细胞表型。

结果原代未经诱导的骨髓干细胞，培养3周后细胞形态呈梭彤，诱导后第7天的细胞呈椭圆形或不规则形，第14天细胞大致呈铺路石样改变。

免疫细胞化学显示C D3l、C D34、vW F因子呈阳性。

流式细胞仪测定cD3l、vW F因子阳性率分别为87．5％、82．6％，双阳性率为71．2％。

结论骨髓间充质干细胞在内皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞因子的诱导下向血管内皮细胞方向分化。

【关键词】骨髓间充质干细胞；血管内皮生长因子；碱性成纤维细胞生长因子；血管内皮细胞；诱导分化D i虢r enti at i on i nt o vas cul ar e ndot hel i al cel l s f r o m bone m ar r ow m es enc hym a l s t em cel i si nvi t ro Y U A N X i n-萨馏，似ⅣShun弘愕，SH I L ei，D O N G Song—bo，Ⅱ￡，H ui qi ong．舭豫砌A j够li at ed H ospi t al of Z heng zhou U n i vem i t y．Zhen gzh ou450052，C hi na【A bst r act】O bj e ct i ve T o st udy t he cul t ur e m et hods of hum a n bone瑚m w m es enchym al s t em ce l l s(M SCs)and di f f er en t i at i on i nt o vasc ul a r endot hel i a l cel l s i n vi t r o．M et hods B o ne I n f X T O W m e se n．chym al s t em ceU s w er e i s ol at e d and cul t i vat e d by de ns i t y gradi ent ce nt r i f uga t i on m et hod．I nduce t he t hi r d gener at i on t o va s cul a r endot hel i a l cens w i t h vas cul ar endot hel i a l grow t h f act or(V EG F)and ba si c f ibro—bl a st grow t h f a ct or(bFG F)．I m m unophenot ype s of cel l s w er e det ec t ed by f l o w c yt om e t ry t echni ques and i m m un ocyt e c he m i s t ry af t er t he t ra ns fe c t i on．R es ul t s A f t e r t hr e e w eeks of pri m ary cul t ur e of M SCs。

脐血单个核细胞体外定向分化为神经干细胞及其致瘤性的实验研究

ｄｎｉｙｇａｉｎｎｈｎａｈｒｎｌｕｔｖｔｄｔｂａｎＭＳｌｎｅ．ｓｒｅｈｈｐｙｍｉｒｓｏｅａｄｅａｎｄｔｅｅｓｔｒｄｅｔａｄｔｅｄｅｅｔｙｃｌａｅｏｏｔｉＣｓｃｏｉｓＯｂｅｖｄｔｅｓａｅｂｃｏｃｐｎｘｍｉｅｈｉｐｅｏｙｅｆｔｅｃｌｙｆｃｔｍｅｒ．ｈｎｉｄｃｄｗｔｈｎｔｐｓｏｈｅｌｂｌｗｙｏｔｔｅｎｕｅｉｈＮＧＦａｄＲＡｎｖｔｏＲｅｅｅｔａｓｒｐａｅｐｌｍｅａｅｃａｎｓｏｙｎｉｉ．ｖｒｒｎｃｔｓｏｙｒｓｈｉｒｓｉ
接种后１２周，在裸鼠皮下不能形成肿瘤，与对照组相比，胞形态学未出现恶性变化。细结论：脐血中存在ＭＳｓ分离后Ｃ，
可以体外扩增，诱导后分化为神经元样细胞，表达ＮＣｓ面标志。裸鼠体内不具有成瘤性。并Ｓ表在脐血能够成为ＮＣＳｓ的新来源。
维普资讯
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论著・
２００７年９月第４卷第２６期
脐血单个核细胞体外定化为神经干细胞向分及其致瘤性的研究实验
向静，昌铭，景周王王
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（三军医大学大坪医院野战外科研究所神经内科，第重庆
血ＭＳｓＣ形态的变化，过流式细胞仪检测干细胞表面抗原的表达。使用ＮＦ和Ｒ通ＧＡ联合诱导后，Ｒ — Ｃ用ＴＰＲ方法鉴定诱导前后神经干细胞（Ｓｓ志物巢蛋白（ｓｎ及Ｍｕａｈ一ＮＣ）标Ｎｅｔ）ｉｓｓｉ１蛋白ｍＲＡ的表达；Ｎ收集培养后７ｄ的ＭＳｓ接Ｃ，

胰岛素样生长因子-1体外诱导人脐带间充质干细胞向神经样细胞分化重点

ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基及１００Ｕ／ｍｌ青霉素，１００斗ｇ／ｍｌ链霉
公司）；异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）一ＣＤｌ９单克隆抗体、ＦＩＴＣ．ＣＤ３４单克隆抗体、藻红蛋白（ＰＥ）．ＣＤｌｌｂ单克隆抗体、ＰＥ—ＣＤ７３单克隆抗体、ＰＥ—ＣＤ９０单克隆抗体、ＰＥ．ＣＤ４５单克隆抗体、ＰＥ—ＣＤｌ０５单克隆抗体、ＰＥ．人类白细胞抗原ＤＲ基因（ＨＬＡ—ＤＲ）单克隆抗体、ＦＩＴＣ．山羊抗小鼠单克隆抗体、ＦＩＴＣ一山羊兔单克隆抗体、鼠抗ＦＩＴＣ．ＩｇＧｌ单克隆抗体、鼠抗ＰＥ．ＩｇＧｌ单克隆抗体（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ公司）；链菌素抗生物素蛋白．过氧化物酶（ｓＰ）免疫组织化学试剂盒（北京中杉金桥公司）。２．ｈＵＣＭＳＣｓ的分离与扩增：脐带取自足月健康分娩新生儿，均经产妇授权同意。无菌条件下剔除脐动静脉，将剩余的脐带间质组织切割成１ｍｍ３大小的组织块，０．２％胶原酶Ⅱ消化，在含有２０％胎牛血清
ＨｕｍａｎＢｉｎｂｉＨｅａｌｃｏｒｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｉｎｔｏｎｅｕｒｏｎ—ｌｉｋｅｃｅｌｌｓｗｉｔｈｉｎｓｕｌｉｎ—
ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ一１抽ｖｉｔｒｏＷａｎｇＧｕｏＬｉ，ＳｏｎｇＧｕｏｑｉａｎｇ，ＺｈａｏＺｏｎｇｍａｏ，ＭａＳｈｕｃｈｅｎｇ，Ｆｅ增Ｙｕｍｉｎ，ＣｕａｎｇｆｉｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓ毋，Ｓｈｉｉｉａｚｈｕａｎｇ０５００００，Ｃｈｉｎａ（ＧｕｏＬ，ｓｏｎｇＣＱ，Ｚｈａｏ删，Ｍａｓｃ，Ｆｅ增跏，ＷａｎｇＧＪ）；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｍｍ”ｙ，ｔｈｅＦｏｕｒｔｈＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＨｅｂｅｔＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ。Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００Ｈ．Ｃｈｉｎａ（ＧｕｏＬ、Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＺｈａｏＺｏｎｇｎｕｔｏ．Ｅｍａｉｌ：ｚｚｍ６９＠１６３．ｃｏｍ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄｍｅｓｅｎ－ｅｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ（ｈＵＣＭＳＣｓ）。ａｎｄｅｘｐｌｏｒｅ山ｅｃｏｎｄｉｆｉｏｎｓａｎｄｅｆｆｅｃｔｏｆｉｎｓｕｌｉｎ—ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｉｎｆａｃｔｏｒｌ

间充质干细胞体外诱导生成软骨细胞的研究进展

限制了细胞间信号传递。阻碍细胞因子对软骨细胞的调节作用，影响软骨细胞
既然骨髓、肪组织、带血、脂脐滑膜、的进一步分化及成熟。单层培养最主要
应用。间充质干细胞（ｓｎｈｍａｓｍＭｅｅｃｙｌｔ骨骼肌、骨膜等组织都可分离出间充质的弊端，随着传代次数的增多，骨细ｅ即软ｃｌ）ｅｓ由于具有良好的多向分化潜能、ｌ来干细胞。那么不同来源的ＭＳｓ是否具胞会出现去分化和老化现象，上述情况Ｃ源方便等优势，近年来日益成为人们关有相同的分化能力？Ｓｋｇｃｉ用人ａａｕｈ￣
发现它还可以向脂肪、袭性软骨缺损通常由创伤及关节了更为深入研究，
寿分炎等原因引起，一种常见的骨科疾病，肌肉等其他各种间充质组织分化。也正充质细胞不论是在数量、命、化能是都由于软骨组织无血管、经和淋巴管，因如此．人们将这些成纤维细胞集落形力等方面，表现出与供者年龄呈负相神同时软骨细胞代谢率低．加之在基质纤维成单位定义为问充质干细胞。后来的研关的趋势＿。近年来．究人员还从头４ｌ研网中的增生和迁移受限。故当软骨组织究进一步证明．间充质干细胞是一种来皮＿、水［、周膜、６羊］７牙１鼠类前列腺组织９１Ｓｓ遗并受到破坏后，自行修复能力非常有限，源于中胚层的具有高度增殖能力及多向［中成功获得ＭＣ，憾的是，没有其往往会造成不可逆转的功能障碍．从而分化潜能的成体干细胞，不仅能够分化对这些不同组织源性ＭＳｓ的软骨细胞Ｃ

干细胞存储：人类的生命银行，守护健康未来

干细胞存储：人类的生命银行，守护健康未来什么是“生命银行”？银行，是货币存取，并可通过借贷流通实现财富保值、增值的金融机构。

“生命银行”是一种形象的比喻，将充满健康活性的“生命种子”——干细胞，通过高科技手段安全地保存下来，以备未来为自身或家人治疗重大疾病提供特殊医疗资源的“生命健康储存”方式。

从生命保险的意义上讲，干细胞存储又称为生命健康“大病超级保单”。

❖存储场所“生命银行”的外在形式或场所是干细胞库❖存储物品1.新生儿类：脐带间充质干细胞、胎盘亚全能干细胞、羊膜多能干细胞、胎盘造血干细胞；2.成人类：成人脂肪干细胞、成年女性宫内膜（经血）干细胞、牙髓干细胞、免疫细胞。

❖存储环境-196℃深低温液氮❖存储期限一般可存储10-25年。

长期保存，随用随取。

❖存储程序采集、分离、制备、提纯、检测、低温存储及严苛的监督管理。

❖作用/功能可代替骨髓和外周干细胞移植，治疗诸多传统医学上的“不治之症”，如血液系统疾病、先天性免疫缺损、遗传疾病、帕金森症、糖尿病、老年性痴呆、心脏病、脊髓损伤等多种疾病，防止肿瘤放化疗对骨髓造血机能的抑制。

可用于供体自身或家族成员。

❖治疗特点无排斥反应、成本低、疗效好、无副作用。

01脐带间充质干细胞间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cell，MSC），具有亚全能分化潜能，在特定环境下，能够诱导分化成为多种组织细胞——如神经、心脏、肝脏、骨、软骨、肌腱、脂肪、上皮等多种细胞，为多种疾病的治疗提供宝贵的原材料。

一根脐带能够提取间充质干细胞的数量相当于成人5000ml骨髓中的含量，并且纯度高、活性高，品质优良，体外增殖能力强，是理想的间充质干细胞来源。

❖医疗价值我国已开始用间充质干细胞治疗临床上一些难治性疾病，如脊髓损伤、脑瘫、肌萎缩侧索硬化症、系统性红斑狼疮、系统性硬化症、克隆氏病、中风、糖尿病、糖尿病足、肝硬化等。

临床实践表明，间充质干细胞众多疾病的治疗均疗效明显。

不同来源间充质干细胞定向诱导为神经样细胞的研究

天津医药２１年Ｉ第３０１２月９卷第１期２
ｉ９ｌｏ
ｄｉＯ３６￣ｉｓ．２３９９．０１．２ｏ：．９９．ｎ０５－８６２１．２０ｌｓ１０
不同来源间充质干细胞定向诱导为神经样细胞的研究
白丽萍杨瑞芳李芳许雯赵智刚
摘要目的：比较不同来源间充质干细胞（Ｃ）ＭＳｓ在体外定向分化为神经样细胞的能力。方法：无菌获取不同来源的ＭＳｓＣ并进行分组。Ａ组胎儿真皮；组：Ｂ胎儿骨髓；组：Ｃ成人骨髓。倒置显微镜下观察各组细胞形态并检测其
倍增时间。流式细胞术检测各组ＭＣ的细胞表型和细胞周期。全反式维甲酸（ＴＡ诱导各组ＭＣ在体外分化为ＳｓＡＲ）Ｓｓ
ＢｉｉｇＹＡＮＧｉａｇＬａｇＸＵｅ，ＡＩｐｎ，ＬＲｕｆｎ，ＩＦｎ，ＷｎＺＨＡＯＺｉａｇｈｇｎ
ＣｉｉｌａｏａｏｙＫｙａｏａｏｙｏａｃｒｒｖｎｉｎｈｒｙＴａｊｄｃｌｎｖｒｔｌｃｂｒｔ，ｅｂｒｔｎｅｅｅｔｎａｄＴｅｐ，ｉｎｉＭｅｉｉｓｙｎａｌｒＬｒｆＣＰｏａｎａＵｅｉ
ｅ－ｅｒｆａｅｔＮ）ｎｓｏｙｅｐｃｃｒｅ－ｌｌｉｒｌｙａｉｉｐｏｉＧＡ）Ｒｓｌ：ｕｓｌｈｗｄｔａｒｎｕｏｉｍｎ（Ｆａｄａｔｃｔｓｅｉｋｒｇｉｂｉａｃｃｒｔｎ（ＦＰ．ｅｕｔＯｒｅｕｔｓｏｅｔｌｒｉｆｍａａｆｌｒｄｅｓｒｓｈ
ＣｎｅｓｔｔａｄＨｓｉｌＴａｆ０００Ｃｉａａｃｒｎｔｕｎｏｔ，ｉｎｎ３０６，ｈｎＩｉｅｐａｉ

人骨髓间充质干细胞的分离、培养和体外定向诱导成类软骨细胞的实验研究

２１１原代培养：．．骨髓单个核细胞刚接种时，细胞分散，ＣＭＳｓ与周围的血细胞相混杂，易区分。骨不髓单个核细胞接种３ｄ，壁ＭＳｓ的形态逐渐延，贴Ｃ伸成梭形，即成纤维样细胞。８ｄ后，ＣＭＳｓ进一步伸展、增殖，见ＭＳｓ成集落，可Ｃ形随着集落不断扩大，细胞呈放射状向周围扩展，逐渐与邻近集落相汇
—
ｐ／转铁蛋白、霉素１０ｐｍｌ链霉素１０／．ｍｌｇ青０．、／０
ｍ１诱导第二代、四代、）第第六代ＭＳｓ在倒置显微Ｃ，镜下观察均比较相似，导１，Ｃ变成圆形或诱４ｄＭＳｓ
多边形，清晰，核核周可见密集的黑色颗粒。对照组ＭＳｓ明显改变。Ｃ无
结论不同代的ＭＳｓ导率无明显差异；ＧＦ浓度为５ｎ／组 Ⅱ型胶原弱阳性，适合作为组Ｃ诱Ｔ一８ｇｍｌ不
织工程种子细胞；导软骨Ｔ一目最适浓度为１ｇｍｌ２ｇｍｌ诱ＧＦ０ｎ／、０／ｎ【键词】人骨髓间充质干细胞生物学特性分化关软骨ＴＧ一口Ｆ
化成软骨细胞，为组织工程提供软骨种子细胞。
１材料与方法１１材料．
２１２传代培养：．．刚传代的细胞呈圆形，很快贴壁
逐渐变成长梭形，壁细胞均匀分布，态趋于同贴形