锰过氧化物酶试剂盒使用说明
氧化酶试剂试纸使用方法
北京华越洋生物提供QQ:1733351176氧化酶试剂,氧化酶试纸氧化酶试剂,氧化酶试纸使用参见随带包装随带纸质说明书氧化酶试剂,氧化酶试纸介绍:英文名称: Oxidase reagent产品用途:用于O157:H7菌氧化酶试验,以及其他病理类菌属检测鉴别。
氧化酶试剂,氧化酶试纸使用方法:取一条滤纸,沾取试验菌的菌落少许。
然后加一滴1%的四甲基对苯二胺试剂,仅使滤纸湿润,不可过湿,在10s内出现红色者为阳性,10—60s 呈现红色者为延迟反应,60s以上出现红色者,按阴性处理,铁可催化试剂,不能使用,可用白金丝或玻璃棒取菌。
保存:2-8℃避光保存氧化酶试剂,氧化酶试纸试剂:盐酸四甲基对苯二胺1g,水100ml(贮存于褐色瓶中,冰箱中保存2周) 氧化酶试剂,氧化酶试纸方法:(1) 取一条滤纸,沾取试验菌的菌落少许。
然后加一滴四甲基对苯二胺试剂,仅使滤纸湿润,不可过湿,在10s内出现红色者为阳性,10—60s呈现红色者为延迟反应,60s以上出现红色者,按阴性处理,铁可催化试剂,不能使用,可用白金丝或玻璃棒取菌。
(2) 可用1%四甲基对苯二胺液湿润滤纸后,再滴加等量的1%甲萘酚液(甲萘酚1g,酒精100ml),然后,涂抹菌苔,出现蓝色者为阳性反应,出现颜色的时间判定同方法1。
(3) 将新华1号滤纸用1%四甲基对苯二胺液浸湿,在室内风干,放在有橡皮塞的暗色瓶内,在冰箱中可存放数月,如存放过久,颜色过深,显色不明显者,不宜使用。
用法同前。
氧化酶试剂,氧化酶试纸用于奈瑟菌属的菌种鉴定,该属细菌均阳性。
此外,也用于假单胞菌属与肠杆菌科细菌的区别,前者阳性,而后者阴性。
莫拉菌属、产碱杆菌属等均为阳性。
异常结果:奈瑟菌属有脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等9种致病菌,引起流行性脑脊髓膜炎氧化酶试剂,氧化酶试纸上呼吸道症状:鼻咽炎等全身感染症状:高热、出血点或瘀血点,脑膜炎症状:头痛、呕吐、颈项强直;引起淋病,引起新生儿淋病性眼结膜炎。
髓过氧化物酶(MPO)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)产品技术要求百奥泰康
髓过氧化物酶(MPO)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)适用范围:该产品用于体外定量测定人血清或血浆中髓过氧化物酶浓度。
1.1 产品规格1.2 组成成分1.2.1试剂组成:液体双试剂。
1.2.2校准品的组成五个水平的冻干校准品,在磷酸盐缓冲液(50mM)中添加髓过氧化物酶纯品。
定值范围:(50-100)ng/mL;(100-180) ng/mL;(200-500)ng/mL;(550-800)ng/mL;(800-1400)ng/mL。
1.2.3质控品的组成两个水平的冻干质控品,在牛血清(20g/L)中添加髓过氧化物酶纯品。
定值范围:(30-150)ng/mL;(500-1000)ng/mL。
2.1 外观液体双试剂:试剂1:无色至淡黄色澄清液体,试剂2:乳白色液体。
校准品:冻干品,复溶后为无色至淡黄色澄清液体。
质控品:冻干品,复溶后为无色至淡黄色澄清液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 试剂空白吸光度试剂空白吸光度应在0.3-2.0之间。
2.4 分析灵敏度浓度为120ng/mL时,吸光度变化范围应大于0.01。
2.5 线性测试血清或血浆样本,试剂线性在(0,1000]ng/mL范围内,线性相关系数(r)应不小于0.990;在(0,200]ng/mL范围内绝对偏差不超过20ng/mL,在(200,1000]ng/mL范围内的相对偏差不超过±10%。
2.6 批内重复性试剂盒测试项目重复性CV≤10%。
2.7 批间差不同批号之间测定结果的相对极差应≤15%。
2.8 准确度:回收试验:回收率应在90%-110%之间。
2.9 质控品赋值有效性测定值在质控靶值范围内。
2.10 批内瓶间差校准品批内瓶间差瓶间重复性CV≤5%质控品批内瓶间差CV≤5%。
2.11校准品溯源性根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供髓过氧化物酶校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容。
过氧化物酶(POD)试剂盒说明书
过氧化物酶(POD)试剂盒说明书一、测定原理:利用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢反应的原理,通过测定420nm 处吸光度的变化得出其酶活性。
二、实际的组成和配置试剂一:液体60ml×4瓶,4℃保存6个月试剂二:粉剂×3瓶,4℃保存6个月试剂二应用液的配置:临用每瓶粉剂加入10ml 的双蒸水溶解,4℃避光保存试剂三:液体5ml×1瓶,4℃保存6个月试剂三应用液的配制:临用前用双蒸水15倍稀释,使得1cm 光径,双蒸水调零时A240保持在0.4左右,现用现配。
若A 值太高,则加双蒸水稀释,若A 值太低,则加入适量试剂三。
(一般在25倍左右稀释)试剂四:液体50ml×2瓶,4℃保存6个月。
三、操作步骤:1、前处理:植物组织匀浆的制备:准确称取组织重量,按照重量(g):体积(ml)=1:9的比列加入9倍体积的匀浆介质(推荐使用生理盐水或磷酸盐缓冲液:0.1 mol/L pH 7-7.4),冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液,3500r/min 离心10min ,取上清液进行测定。
混匀后,3500r/min 离心10min ,取上清于波长420nm 处,1cm 光径,双蒸水调零,测定各管吸光度值。
四、计算及举例1、定义:在37℃条件下,每毫克组织蛋白每分钟催化1ug 底物的酶量定义为一个酶活力单位。
2、植物组织中过氧化物酶(POD)活力计算公式:10)/()min 30()()()1(12-)/(⨯÷÷⨯⨯=ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD 匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力 3.计算举例取新鲜桑叶,制备成10%匀浆,取100ul 匀浆上清,按照操作表进行操作,测得数据如下:对照OD 0.237;测定OD 0.665;同时测得10%桑叶匀浆蛋白浓度是1.80mgprot/ml 根据公式计算如下:mgprotU ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD / 26.42010001.80300.14.01120.237-0.6651000)/()min 30()()()1(12-)/(=⨯÷÷⨯⨯=⨯÷÷⨯⨯=匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力。
超氧化物歧化酶(SOD)测试盒【测总SOD(Cu-Zn,Mn,总)】
水补水至 75ml,配好后的试剂避光 4℃冷藏 1 年(不同规格参照下表)
96T
75ml
48T
37.5ml
4、试剂 F:用时加蒸馏水 75ml 溶解后备用。
96T
75ml
48T
37.5ml
显色剂的配制:按照试剂 E:试剂 F:冰乙酸=3:3:2 的体积比配成显色剂,即用即配。配好的显色剂
4℃避光冷藏 3 个月。
0.1
0.1
0.1
0.1
Buffer C(ml)
0.1
0.1
0.1
0.1
Buffer D 工作液(ml)
0.1
0.1
0.1
0.1
用旋涡混匀器充分混匀,置 37℃恒温水浴 40 分钟
显色剂(ml)
2
2
2
2
混匀,室温放置 10 分钟,于波长 550nm 处,1cm 光径比色杯,蒸馏水调零,测定各管吸光度值。
注:试剂 E,试剂 F 必须分开进行配制,切不可将试剂 E,试剂 F 混合后再进行配制,否则不显色。
七.实验操作步骤
1、对于测定分型所用的样本上清前处理办法:取样本 0.2ml 加 Buffer G 0.2ml,涡旋混匀 1 分钟,以 3500~4000 转/分,离心 15 分钟,取上清进行 CuZn-SOD 测定。此上清即为经过处理的样本,Mn-SOD 的 活力丧失,而 CuZn-SOD 活力不受影响。 2、对照上清制备:取生理盐水 0.2ml 加 Buffer G 0.2ml,涡旋混匀 1 分钟,以 3500-4000 转/分,离心 15 分钟,取上清作 CuZn-SOD 的对照上清。
注 1:a*代表样本取样量和蒸馏水取样量。
注意
过氧化值试纸使用方法
过氧化值试纸使用方法
过氧化值试纸是一种用于测量水中氧化性物质浓度的试纸。
以下是过氧化值试纸的使用方法:
1. 准备样品:将待测样品收集到一个干净的容器中。
确保样品足够多以涵盖试纸完全。
2. 提取试纸:使用干燥的手指或工具将一张试纸从试纸包中取出。
注意避免触摸试纸感应区。
3. 浸泡试纸:将试纸的感应区完全浸入样品中。
在浸泡期间,可以轻轻搅动试纸以确保与样品充分接触。
4. 拿出试纸:根据试纸包上的建议时间,浸泡一段时间(通常为10-60秒)。
然后小心地取出试纸,并轻轻摇晃或轻轻拍打试纸以去除多余的样品。
5. 对比颜色:将试纸与试纸包上的颜色参照进行比较。
注意,目测颜色有时可能不准确,因此使用可靠的照明条件和视觉比较。
6. 测量结果:对照试纸颜色参照图,确定试纸颜色与某一特定数值相关联的氧化性物质浓度。
注意事项:
- 避免触摸试纸感应区,以防止污染或对试纸结果产生干扰。
- 严格按照试纸包上的浸泡时间进行操作,避免过长或过短时
间的浸泡。
- 遵循试纸包上的使用说明和建议,以确保正确操作和准确的结果。
植物过氧化物酶(POD)ELISA试剂盒使用说明书
植物过氧化物酶(POD)ELISA试剂盒使用说明书药品名称:通用名:过氧化物酶(POD)酶联免疫诊断试剂盒使用目的:本试剂盒用于测定组织,细胞及其它相关样本中过氧化物酶(POD)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中过氧化物酶(POD)水平。
用纯化的过氧化物酶(POD)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入过氧化物酶(POD)抗原,再与HRP标记的过氧化物酶(POD)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的过氧化物酶(POD)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中过氧化物酶(POD)抗原浓度。
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为240 U/L,160 U/L ,80 U/L,40U/L,20 U/L)。
NADH氧化酶(NOX)活性检测试剂盒说明书 微量法
NADH氧化酶(NOX)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC0635规格:100T/48S产品内容:试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体1mL×1瓶,-20℃保存。
试剂四:液体35mL×1瓶,4℃保存。
试剂五:液体5mL×1瓶,4℃保存。
试剂六:粉剂×2瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入4.5mL双蒸水,用不完的试剂仍-20℃保存。
产品说明:NOX(EC1.6.99.3)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可在氧气存在下,直接将NADH氧化为NAD。
该酶不仅参与NAD的再生,而且与免疫反应密切相关。
NOX能够将NADH氧化为NAD,NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝(DCPIP)的还原相偶联,蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP,在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水操作步骤:一、样品测定的准备:1、组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:2、准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
3、将匀浆600g,4℃离心5min。
4、将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。
5、将上清液转移至另一EP管中,用于线粒体中泄露NOX活性测定。
6、沉淀即为线粒体,加入200uL试剂二和2uL试剂三,用于NOX活性测定。
7、NOX总酶活即为上清中NOX活性与沉淀中NOX活性之和。
二、测定步骤和加样表:1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。
2、试剂四37℃保温放置。
试剂名称(µL)测定管对照管试剂四175175试剂五2525样本1010蒸馏水40试剂六40-将上述试剂按顺序在微量玻璃比色皿/96孔板中操作,加入试剂六后立即混匀,同时开始计时,在600nm 波长下记录20秒时的初始吸光度A1,迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃水浴中,准确反应1分钟。
髓过氧化物酶测定试剂盒(酶法)产品技术要求lepu
髓过氧化物酶测定试剂盒(酶法)适用范围:用于体外定量测定人血清中髓过氧化物酶的活性。
1.1规格试剂1: 1×24mL,试剂2: 1×12mL,试剂3: 1×9mL;试剂1: 2×24mL,试剂2: 2×12mL,试剂3: 2×9mL。
1.2主要组成成分试剂1主要组分:试剂2主要组分:试剂3主要组分:2.1 净含量应不低于试剂瓶标示装量。
2.2 外观试剂1:无色或淡黄色透明溶液;试剂2:无色或淡黄色透明溶液;试剂3:无色或淡黄色透明溶液。
外包装完好、无破损,标签完好、字迹清晰。
2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度在505nm处测定试剂空白吸光度,应≤1.2;2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.3。
2.4 分析灵敏度测试150 ng/mL的被测物时,吸光度变化率(ΔA/min)应不低于0.0055。
2.5 准确度在样品中加入一定体积的纯品,计算回收率,应介于90%-110%之间。
2.6 重复性批内变异系数(CV)应不超过10%。
2.7 线性2.7.1在[50,1300] ng/mL区间内,线性相关系数r应不低于0.990;2.7.2 [50,156 )ng/mL L区间内绝对偏差不超过±18.7 ng/mL;[156,1300] ng/mL 区间内相对偏差不超过±12%。
2.8 批间差对同一份样品进行重复测定,相对极差≤12%。
2.9 稳定性取在2℃~8℃条件下贮存达到12个月后的试剂进行检测,应符合本标准2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7之规定。
过氧化物酶(Peroxidase,POD)试剂盒使用说明
3、细菌或细胞 POD 活性
(1)按样本蛋 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活 力单位。
POD(U/mg prot)=245μL(反应体系)÷1000μL×提取酶液总体积(1000μL)÷样 本体积(5μL)÷0.01×ΔA÷蛋白质浓度(mg/mL)=4900×ΔA÷蛋白质浓度(mg/mL)
2、组织 POD 活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个酶 活力单位。
POD(U/mg prot)=245μL(反应体系)÷1000μL×提取酶液总体积(1000μL)÷样 本体积(5μL)÷0.005×ΔA 测定÷蛋白质浓度(mg/mL)=9800×ΔA÷蛋白质浓度(mg/mL)
用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)POD 活性
单位的定义:每 mL 血清(浆)在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个 酶活力单位。
POD(U/mL)=245μL(反应体系)÷1000μL×血清(浆)总体积(1000μL)÷样本 体积(5μL)÷0.005×ΔA =9800×ΔA
(2)按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一 个酶活力单位。
POD(U/104 cell)=245μL(反应体系)÷1000μL×提取酶液总体积(1000μL)÷样 本体积(5μL)÷0.01×ΔA÷细菌或细胞密度(104 cell /mL)=4900×ΔA÷细菌或细胞密 度(104 cell /mL)
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活力单 位。
锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)试剂盒说明书
货号: QS3110 规格:50管/24样锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)试剂盒说明书可见分光光度法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:锰过氧化物酶(EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT,多环芳烃等。
测定原理:锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制:试剂一:液体75mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体5mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取:1.组织:按照质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
2.细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
3.培养液或其它液体:直接检测。
测定操作:1、分光光度计预热30min以上,调节波长至465nm,蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、二、三、四在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)放置10min以上。
465nm下30s时的吸光值A1和2min30s后的吸光值A2。
计算ΔA=A2-A1。
注意:若一次性测定样本较多,可将试剂一、二、三、四按比例配成混合液,在37℃(哺乳第1页,共2页动物)或25℃(其它物种)放置10min以上,测定时加入100µL样本和900µL混合液测定。
植物过氧化物酶(POD)检测试剂盒(愈创木酚比色法)说明书
检测试剂盒(愈创木酚比色法)说明书
4ml预冷的PODLysisBuffer研磨或匀浆,4 POD粗提液,-20℃冻存,用于过氧化物酶的
A测定0=加入PODAssaybuffer工作液后立即测定的测定孔吸光度值t=反应时间(min)=3
注意事项:
1、待测样品中不能含有酶抑制剂,同时需避免反复冻融。
2、POD酶液提取时注意低温操作,防止酶活性。
3、以煮沸的酶液为对照时,酶要充分失活。
4、POD氧化剂和POD终止液具有一定腐蚀性,请小心操作。
5、POD氧化剂易挥发,请密闭保存,否则检测效率下降。
6、如果没有分光光度计,也可以使用普通的酶标仪测定,每次检测指标不宜过多,否则操作时间不一,有可能导致样本间的差异。
7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
髓过氧化物酶测定试剂盒产品技术要求万孚
髓过氧化物酶测定试剂盒产品技术要求万孚髓过氧化物酶测定试剂盒(化学发光免疫分析法)是一种用于测定体液
中髓过氧化物酶(MPO)浓度的试剂盒。
这种测定试剂盒在医疗诊断中具有
重要的应用价值,可以帮助医生及时发现和监测一些炎症性疾病和心血管
疾病的病情。
为了保证髓过氧化物酶测定试剂盒在实际使用中的准确性和灵敏度,
产品需要满足以下一些技术要求:
1. 灵敏度:可以测定微量水平下的髓过氧化物酶浓度,灵敏度应小
于20 ng/mL。
2. 线性范围:试剂盒需要具有较广的线性范围,可以测定不同浓度
范围内的髓过氧化物酶。
通常可以测定的线性范围应从10 ng/mL至500
ng/mL。
3.反应时间:试剂盒应具有快速的反应时间,可以在较短的时间内完
成髓过氧化物酶浓度的测定。
一般反应时间应控制在30分钟以内。
4.特异性:试剂盒应具有良好的特异性,可以区分髓过氧化物酶与其
他可能存在的干扰物质。
特异性可以通过进行交叉反应实验等方法来验证。
5.稳定性:试剂盒需要具有较好的稳定性,可以在存储和运输过程中
不降低其灵敏度和准确性。
通常应具有两年以上的长期稳定性。
6.操作简便性:试剂盒需要操作简便、易于使用,并且可以适用于各
种常见的化学发光免疫分析仪器。
7.技术支持:供应商需要提供详细的产品说明书,包括操作步骤、试剂的配制方法以及结果的解读方法。
同时还需要提供技术支持和问题解答服务。
以上是髓过氧化物酶测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的一些基本技术要求,供参考使用。
实际产品的技术要求可能会根据具体厂家和产品而有所不同。
髓过氧化物酶(MPO)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)产品技术要求赛诺浦
髓过氧化物酶(MPO)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)适用范围:用于体外定量测定人体血清中髓过氧化物酶(MPO)的浓度。
1.1试剂盒包装规格试剂1:1×15ml,试剂2:1×5ml;试剂1:2×54ml,试剂2:2×18ml;试剂1:3×39ml,试剂2:3×13ml;试剂1:4×54ml,试剂2:4×18ml;试剂1:2×300ml,试剂2:1×200ml;试剂1:2×30ml,试剂2:2×10ml。
校准品(选配,冻干品):5×1ml(五水平)。
质控品(选配,冻干品):1×1ml;1×2ml。
1.2 试剂盒主要组成成分2.1 外观试剂1:无色澄清液体;试剂2:乳白色悬浊液体。
校准品:冻干品,复溶后为无色至浅黄色液体。
质控品:冻干品,复溶后为无色至浅黄色液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 试剂空白吸光度在37℃、600nm波长、1cm光径条件下,试剂空白吸光度应不大于2.0。
2.4 分析灵敏度测定浓度为200ng/ml样本时,吸光度变化值(ΔA)应在(0.02,0.25)范围内。
2.5 线性范围在(25,1300)ng/ml线性范围内,线性相关系数r应不小于0.990。
在(25,150]ng/ml范围内测定结果的线性绝对偏差应不大于±15ng/ml;在(150,1300)ng/ml范围内测定结果的线性相对偏差应不大于±10%。
2.6 重复性重复测试两份高低浓度的样本,所得结果的变异系数(CV%)应不大于10%。
2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本,测定结果的批间相对极差应不大于10%。
2.8 准确度回收试验:回收率应在85%~115%。
2.9 质控品赋值有效性测定结果在靶值范围内。
2.10 瓶间差(均一性)校准品和质控品的瓶间变异系数(CV%)应不大于5%。
过氧化物酶(POD)试剂盒说明书
过氧化物酶(POD)试剂盒说明书一、测定原理:利用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢反应的原理,通过测定420nm 处吸光度的变化得出其酶活性。
二、实际的组成和配置试剂一:液体60ml×4瓶,4℃保存6个月试剂二:粉剂×3瓶,4℃保存6个月试剂二应用液的配置:临用每瓶粉剂加入10ml 的双蒸水溶解,4℃避光保存试剂三:液体5ml×1瓶,4℃保存6个月试剂三应用液的配制:临用前用双蒸水15倍稀释,使得1cm 光径,双蒸水调零时A240保持在0.4左右,现用现配。
若A 值太高,则加双蒸水稀释,若A 值太低,则加入适量试剂三。
(一般在25倍左右稀释)试剂四:液体50ml×2瓶,4℃保存6个月。
三、操作步骤:1、前处理:植物组织匀浆的制备:准确称取组织重量,按照重量(g):体积(ml)=1:9的比列加入9倍体积的匀浆介质(推荐使用生理盐水或磷酸盐缓冲液:0.1 mol/L pH 7-7.4),冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液,3500r/min 离心10min ,取上清液进行测定。
混匀后,3500r/min 离心10min ,取上清于波长420nm 处,1cm 光径,双蒸水调零,测定各管吸光度值。
四、计算及举例1、定义:在37℃条件下,每毫克组织蛋白每分钟催化1ug 底物的酶量定义为一个酶活力单位。
2、植物组织中过氧化物酶(POD)活力计算公式:10)/()min 30()()()1(12-)/(⨯÷÷⨯⨯=ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD 匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力 3.计算举例取新鲜桑叶,制备成10%匀浆,取100ul 匀浆上清,按照操作表进行操作,测得数据如下:对照OD 0.237;测定OD 0.665;同时测得10%桑叶匀浆蛋白浓度是1.80mgprot/ml 根据公式计算如下:mgprotU ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD / 26.42010001.80300.14.01120.237-0.6651000)/()min 30()()()1(12-)/(=⨯÷÷⨯⨯=⨯÷÷⨯⨯=匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力。
过氧化氢酶检测试剂盒(钼酸铵比色法)
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)简介:过氧化氢酶(Catalase ,CAT)又称触酶,是一类以铁卟啉为辅基的结合酶,由四个相同亚单位组成的四聚体酶,共含4分子的亚铁血红素作为辅基,分子量约为24KD 。
CAT 能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除,可与GSH-Px 共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。
Leagene 过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)其检测原理是血清或血浆等样本中在最佳酶反应条件下,反应后剩余的H 2O 2与钼酸铵形成稳定的黄色复合物,其黄色深浅与酶活性成反比,通过分光光度计或酶标仪检测吸光度。
该酶的检测对于研究自由基代谢平衡,抗衰老和肿瘤发病机制具有一定的价值。
50该试剂盒可检测23-25个样本。
该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:1、 蒸馏水、生理盐水2、 比色杯3、 分光光度计操作步骤(仅供参考):1、 配制H 2O 2基液:本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2浓度约为。
由于过氧化氢不是非常稳定,使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。
把浓度约为的基液用本试剂盒提供的CAT Assay buffer 稀释,使H 2O 2基液中的H 2O 2浓度约为。
分光光度计测定A 240(一般情况下,新配制的H 2O 2基液A 240在0.45左右,经过3个月以后A 240在0.42左右),H 2O 2浓度(mM)=22.94×A 240。
进而计算出本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2的实际浓度。
然后再根据实际的过氧化氢浓度,配制MH 2O 2基液。
2、 准备样品:① 细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行裂解,可以采用Leagene Western 及IP编号 名称TO1071 50T T01071 100T Storage试剂(A): H 2O 2基液 5ml 10ml 4℃ 试剂(B): CAT Assay buffer 52ml 104ml 4℃ 避光 试剂(C): MO 显色液 50ml100ml4℃ 避光使用说明书1份细胞裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,冻存,用于CAT的检测。
过氧化物酶染色液(DAB法)使用说明书
过氧化物酶染色液(DAB法)使用说明书过氧化物酶染色液(DAB法)使用说明书货号:G2370有效期:6个月有效。
产品内容:名称4×10ml4×20ml Storage 试剂(A):BFA固定液10ml20ml4℃避光试剂(B): POX孵育液B1:DAB染色液10ml20ml-20℃避光B2:DAB氧化剂2×100μl4×100μl RT临用前,按B1:B2=1000:1比例混合,即为POX孵育液,即配即用。
试剂(C):WG染色液10ml20ml RT避光试剂(D):WG buffer10ml20ml RT产品说明:过氧化物酶(Peroxidase,简称POX或MPO)是由微生物或植物所产生的一类能催化很多反应的以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶氧化还原酶,主要存在于细胞的过氧化物酶体中,以铁卟啉为辅基,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
过氧化物酶染色液(DAB法)是ICSH推荐采用的POX染色液,其原理是细胞内的过氧化物酶能将无色的DAB的氢原子传递给过氧化氢,使前者催化成有色染料沉积在细胞质中的POX所在部位。
该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片过氧化物酶染色,POX活性部位呈棕黄色。
自备材料:1、载玻片2、显微镜操作步骤(仅供参考):1、血液、骨髓或细胞涂片滴加预冷的BFA固定液,4℃固定30~60s,稍水洗。
2、滴加配制好的POX孵育液,室温(20~25℃)避光孵育10~15min,水洗2min。
3、滴加WG染色液,孵育30~60s。
4、直接滴加等量WG buffer,染色10~15min。
5、水洗、晾干、镜检。
染色结果:POX活性部位棕黄色细胞核蓝色粒细胞系除早期原粒细胞阴性外,分化好的原粒细胞以下阶段细胞随细胞成熟而阳性反应增强,衰老中性粒细胞反应程度减弱单核细胞系弱阳性,淋巴细胞系为阴性。
浆细胞及巨核细胞均为阴性。
过氧化物酶检测标准操作规程
过氧化物酶(pox)检测标准操作规程1.【目的】为了供骨髓涂片及血液细胞涂片染色检查。
2.【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP,室负责人监督落实。
2.本SOP的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:室负责人、科主任。
3.【标本类型及实验前准备】1.标本类型1.要求新鲜的骨髓细胞涂片或血液细胞涂片。
2.若样本采集后不能及时测定,可采用95%乙醇固定2分钟后,可保存数天。
亦可使用某些抗凝血(肝素、EDTA)。
3.样本在未染色前切勿沾有甲醇和氧化剂类试剂,以免细胞内的过氧化物被抑制和破坏。
4.溶血样本不宜使用,因涂片中大量游离血红蛋白易使背景产生难以去除的杂质颗粒。
2.患者准备成人一般取骼后、骼前上棘,其次为胸骨、棘突部位。
2岁以下小儿可穿刺胫骨。
3.容器、添加剂类型骨髓液量不宜过多,不需抗凝,迅速置于载玻片上,必要时可用EDTA2K抗凝。
4仪器设备捷达骨髓成像系统,OLYMPUS显微镜5.实验试剂1.快速染液A ( A液):曙红2.快速染液B ( B液):天青3.碘化钾溶液(C液):碘化钾4.WG溶液(D液):瑞姬氏染料4.【测定原理】细胞中的过氧化物酶分解过氧化物产生新生态氧,后者与KI (碘化钾)作用产生碘,碘与WG等显色剂中的有效成分结合,形成有色颗粒定位于细胞浆中。
5.【程序性操作步骤】本法采用滴染法,滴染工作液配制(1份滴染工作液为2.4ml)使用器材:一次性塑料试管、微量移量液器、一次性吸嘴、滴管。
操作:取C液2.0ml,D液4ul,混匀,2小时内使用。
染色步骤:1.快速染色(核染色):干燥的骨髓涂片滴加A液(覆盖标本)后,再滴加B液(A液:B液=1:1至1:2)混匀,染色20-30秒,流水冲洗,甩干或滤纸吸干;2.滴加工作液于涂片上,染色40-60秒后倾去(不用水冲洗),滤纸吸干,镜检。
6.【结果计算与判断】呈阳性反应时,可见胞浆中有红棕色至蓝黑色颗粒。
过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书
过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书一、测定原理:过氧化氢酶(CAT)分解H2O2的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止,剩余的H2O2与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物,在405nm处测定其变化量,可计算出CAT的活力。
试剂一(ml)二、试剂组成与配制:试剂一:液体100 ml×1瓶,4℃保存6个月。
试剂二:底物液体10 ml×1瓶,4℃保存6个月。
试剂三:显色粉剂×1瓶,4℃保存6个月。
加双蒸水至100 ml溶解,4℃保存1个月。
(如果底部有不溶粉末沉淀,直接取上清使用,不影响测定结果)试剂四:液体10 ml×1瓶,4℃保存6个月。
天冷时会凝固,临用前37℃水浴至透明方可使用。
三、组织样本的检测1、组织匀浆液的制备:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下,制备成10%的组织匀浆,2500转/分离心10分钟,取上清,再用生理盐水稀释成最佳取样浓度,待测(最佳取样浓度摸索减附录)。
2、操作表:混匀,波长405nm ,光径0.5cm ,双蒸水调零,测定各管吸光度值。
注:一般样本没有高脂等导致显著差异情况,对照管的样本更换成双蒸水,做1-2管对照即可。
如需做样本自身对照,则试剂盒所测定样本数量减至48样。
3.组织中CAT 活力的计算:(1)定义:每毫克组织蛋白每秒种分解1umol 的H2O2的量为一个活力单位。
(2)计算公式: )ml /mgprot (601271)OD -OD ()mgprot /U (CAT *待测样本蛋白浓度取样量值测定值对照活力组织匀浆中÷⨯⨯⨯=注:*271为斜率的倒数 (3)计算举例:取10%水稻叶片匀浆0.05ml 做CAT 检测,测得对照管吸光度为0.605,测定管吸光度为0.332,同时测得10%水稻叶片匀浆蛋白浓度为3.1303 mgprot/ml 。
则计算结果为:()/mgprotU 7351.101303.305.0601271332.0704.0)mgprot /U (CAT =÷⨯⨯⨯-=活力组织匀浆中注:1.测定血清和血浆时,如果样本不溶血,每批样本只需要随机挑2个样本做对照或者用双蒸水代替额样本做对照;如果样本溶血的话,必须每个样本都要做对照。
锰过氧化物酶(Mnp)活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4253
锰过氧化物酶(Mnp)活性检测试剂盒说明书注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:UPLC-MS-4253可见分光光度法规格:50T/48S产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体80mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体6mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体11mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体200μL×1支2-8℃保存溶液配制:试剂四:临用前根据实验所需量按照试剂四(μL):蒸馏水(μL)=1:49的比例配制,现用现配。
产品说明:锰过氧化物酶(Mnp)(EC1.11.1.13)是一种普遍存在于细菌和真菌中的微生物木质素分解酶,在微生物木质素分解系统中起着关键作用,它可以有效的降解木质素以及废水和土壤中比较难降解的化合物,在生物制浆、生物漂白和污染物的生物降解等工业领域具有广泛应用。
锰过氧化物酶在Mn2+环境下,可将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,四邻甲氧基连酚在465nm处有吸收峰,通过检测465nm处吸光值的变化,可测定锰过氧化物酶的活性。
Mn2+Guaiacol Tetra-o-methoxylianol(465nm)Mnp注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、超声波细胞破碎仪、研钵/匀浆器、1mL 玻璃比色皿、震荡仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、组织:按照样本质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆;10000g4℃离心10min,取上清置冰上待测。
2、细菌或细胞样本:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500-1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一)加入试剂一,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率30%或300W,超声3s,间隔7s,总时间3min),10000g4℃离心10min,取上清置冰上待测。
MAO试剂盒说明书
单胺氧化酶(Monoamine Oxidase,MAO)试剂盒说明书微量法100T/96S注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎动物的各种器官,特别是分泌腺、脑、肝脏,在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢,含量较低,具有重要的生理功能,其活性能反映肝纤维化的程度。
此外,MAO活性异常导致细胞内单胺类神经递质运转出现紊乱,从而引发多种病症。
测定原理:MAO催化单胺类底物脱氨生成相应的醛,进一步氧化成酸;底物在360nm处有特征吸收峰,测定360nm 光吸收下降的速率,计算MAO活性。
自备实验用品及仪器:天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制:提取液一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体120mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体2mL×1管,4℃避光保存。
粗酶液提取:1. 称取约0.1g样品,加1 mL预冷的提取液一充分冰浴匀浆,1000g,4℃,离心10min,弃沉淀;把上清转移到另一预冷的离心管,10000g,4℃,离心30min,弃上清;加入1mL预冷的提取液二,震荡混匀,16000g,4℃,离心40min,弃上清;沉淀加入预冷的1mL 试剂一,震荡混匀,即粗酶液(可用于可溶性蛋白浓度测定)。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,弃沉淀;把上清转移到另一预冷的离心管,10000g,4℃,离心30min,弃上清;加入1.0 mL预冷的提取液二,震荡混匀,16000g,4℃,离心40min,弃上清;沉淀加入预冷的1.0 mL 试剂一,震荡混匀,即粗酶液(可用于可溶性蛋白浓度测定),取上清置于冰上待测。
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锰过氧化物酶试剂盒使用说明
分光光度法货号:BC1620
规格:50管/24样
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
产品内容:
试剂一:液体75mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体5mL×1瓶,4℃保存。
产品说明:
锰过氧化物酶(EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT,多环芳烃等。
锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。
操作步骤:
一、酶液提取
1.组织:按照质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL
试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
2.细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万
细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时
间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
3.培养液或其它液体:直接检测。
二、测定操作
对照管测定管
试剂一(μL)600500
试剂二(μL)100
试剂三(μL)200200
样品(μL)100100
试剂四(μL)100100
充分混匀,于37℃反应10min,于1mL玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定465nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,△A=A测定管-A对照管。
三、酶活计算公式
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性(nmol/min/mg prot)=△A÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T=83×△A÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性(nmol/min/g)=△A÷(ε×d)×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T=83×△A÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义:每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性(nmol/min/104cell)=△A÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T
=83×△A÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义:每升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性(nmol/min/L)=△A÷(ε×d)×V反总÷V样÷T=8.3×104×△A
ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,1mL;V样:反应中样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,10min。