临床检验基础 血液检验重点整理(理论考试版)

血液标本

全血：用于细胞计数、分类、形态观察;

血浆：全血去除血细胞，用于血栓止血检测;

血清：全血自然凝固后析出的液体，用于生物化学、免疫学检测等。

血液标本采集方法：

一、毛细血管采血法：用于微量检测

部位：耳垂或手指末梢，主要是中指或无名指尖内侧，半岁以下拇指或足部，特殊人员视情况而定

所用器材：采血针、吸管，

简要步骤：1、准备材料；2、选择采血部位；3、按摩皮肤；4、消毒皮肤；5、针刺皮肤；6、拭去第一滴血；7、吸血；8、止血；9、稀释血液。

二、静脉采血法：用于血沉、免疫、生化等检测项目

部位：主要是肘静脉。还可以在：手背部手腕部等部位采血，幼儿可采用颈外静脉采血。采血器材：一次性注射器，检验用真空定量采血装置。

简要步骤：1、准备试管；2、标记试管；3、消毒双手；4、选择静脉；5、检查注射器；6、扎压脉带；7、选择进针部位；8、消毒皮肤；9、穿刺皮肤；10、抽血；11、止血；12、放血

【质量控制】

标本采集时应规范操作，以减少误差；毛细血管采血时应避开伤损部位，避免挤压皮肤，血液应自然流出；静脉采血时压脉带压迫时间不宜太长；动脉采血后应立即与空气隔绝，阻止血气交换；容器要洁净干燥，避免强力振荡引起溶血；血液标本采集后应立即送检；抗凝的标本其比例要准确，必要时需修正；尽量避免输液时采血，因可干扰测试结果

抗凝:

用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固，称为抗凝。

一、草酸盐，

抗凝原理：与血液中钙离子形成沉淀；

使用方法：草酸钠0.1mol/L和血液1:9。

优点：溶解性好，价廉。

缺点：①对凝血因子保护功能差，影响凝血因子；②形成草酸钙沉淀物，影响自动凝血仪器的使用。

使用范围：逐步被淘汰。

二、柠檬酸钠（枸橼酸钠），

抗凝原理：与钙离子生成可溶性的鳌合物。

使用方法：配成109mmol/L的浓度和血液1:9（用于凝血试验）；106mmol/L的浓度和血液1:4（用于血沉）。

优点：对凝血因子有很好的保护作用。

缺点：血液中溶解度低，抗凝作用较弱。

使用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）。

三、乙二胺四乙酸（EDTA）盐，

抗凝原理：与钙离子生成可溶性的鳌合物。

使用方法：15g/L EDTA和血液1:10。

优点：对红细胞和白细胞形态影响小。

缺点：影响血小板的聚集。

使用范围：全血细胞分析和血细胞比容测定，但不适用于出凝血实验和血小板功能。

四、肝素，

抗凝原理：加强抗凝血酶作用，阻止凝血酶形成。

使用方法：肝素钠1g/L与血液1:10。

优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温。

缺点：引起白细胞聚集，使白细胞计数降低，不利于制备血涂片，价格昂贵。

使用范围：血浆生化/免疫项目，红细胞脆性实验，科学研究等。

【保存】血液学检验标本，室温2d；分离以后的血浆20~30℃室温中储存<4h；4℃冰箱可储存1d，-80℃冰箱可储存30d；生化检验和免疫学检验的标本4℃冰箱可储存1周。

【处理原则】血液标本在不抗凝情况30~60min凝固后析出血清；血凝测定，应充分抗凝后尽早离心分离血浆，在2h内完成测定或4℃冰箱中保存；血液形态学检验的抗凝标本应放置在室温中，不宜冷冻，1~4h内无影响，但应及时制作血涂片。

亚铁血红素:

血红蛋白色素部分，由铁原子及原卟啉区组成。

血涂片的制备

1、用途：血细胞形态学检验、网织红、异常细胞检验、寄生虫检验。

2、制备步骤：（手工推片法）

将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推玻片的宽度后，以一定均匀的速度向2的方向滑动。

3、质量评价：均匀、厚薄、头体尾、边缘、两侧

注意：血滴大，速度快、角度大----血膜厚

瑞氏染色法

【原理】：分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性染料天青B与细胞中的酸性物质如核染色质、特异中性颗粒、血小板结合。第二相是天青B和伊红结合在适宜条件下形成紫色的天青B-伊红复合物，结果使白细胞核染色质成紫色（疟原虫的染色质成红色），中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。

【试剂】

1. Wright染液：瑞氏染粉0.1g，甲醇60.0ml

甲醇：有强大的脱水力，可将细胞固定为一定形态，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，

增加细胞与染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。

2.磷酸盐缓冲液（PBS）：磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸氢二钠（无水）0.2g, 蒸馏水加到1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正pH(6.4-6.8)，塞紧瓶口备用。

【方法】：

a. 用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。

b. 加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。

c. 滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10分钟。

d. 用清水冲洗，待干后镜检。

红细胞计数（RBC）：测定单位体积血液中红细胞的数量

【计数方法】显微镜计数法：

用等渗稀释液将血液稀释一定倍数（一般200倍）后，滴入血细胞计数盘，然后于显微镜下，计数一定范围内的红细胞数，经过换算即可求得每升血液中的红细胞数。

【红细胞稀释液】：Hayem液、枸橼酸钠液、1%甲醛-生理盐水。要求：等渗、防粘连、防腐。

Hayem稀释液：氯化钠（调节渗透浓度），硫酸钠（调节渗透浓度，防止红细胞聚集），氯化高汞（防腐剂，有毒）。缺点：如遇高球蛋白血症或自身凝集素增高患者，红细胞易凝集或形成串钱状，影响计数。

【操作】：1、取小试管一支，准确加入红细胞稀释液2.0ml。2、毛细血管采血，取血10ul，稀释200倍。3、混匀，充池，静置2min后以低倍镜计数中间大方格的四角和中央5个中方格内的红细胞。