天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂速率法)
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂速率法)
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂速率法)简介：转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)旧称谷草转氨酶(GOT)主要存在于心肌、骨骼肌、肝脏，以心肌含量最高，肝脏次之。
AST能够催化天门冬氨酸和a-酮戊二酸的氨基转移作用，形成谷氨酸和草酰乙酸。
Leagene 天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂速率法)其检测原理是天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化天门冬氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，草酰乙酸与NADH经LDH催化生成NAD+，上述方法实际为AST速率法，其反应公式如下：L-天门冬氨酸+α-酮戊二酸→草酰乙酸+L-谷氨酸。
草酰乙酸+NADH+H+→L-苹果酸+NAD+。
在上述偶联反应中，NADPH的氧化速率与样本中酶活性呈正比。
对于单试剂比色法，血清与试剂完整成分的底物溶液混匀，ALT催化反应立即启动，通过分光光度计或自动分析仪检测在处吸光度下降速率(-ΔA/min)，下降速率(-ΔA/min)与AST活性呈正比，比色杯光径1.0cm，进而计算酶的活性单位。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、蒸馏水2、比色杯3、分光光度计或自动分析仪操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：编号名称TE0135100TTE0135200TStorageALT检测液(R)成分终浓度2×50ml 2×100ml 4℃避光Tris缓冲液100mML-天门冬氨酸240mM酮戊二酸12mMNADH 0.22mMLDH 2500U/L防腐剂15mM使用说明书1份①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃保存1个月有效，用于AST/GOT的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个月有效，用于AST/GOT的检测。
③(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的AST/GOT含量。
天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒(天门冬氨酸底物法)产品技术要求华宇亿康
天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒（天门冬氨酸底物法）适用范围：本试剂用于体外定量测定人血清中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的活性。
1.1 产品型号/规格1×10mL；1×20mL；1×40mL；2×50mL；4×40mL；4×50mL；5×50mL；2×100mL；4×100mL；2×40mL；1×20L；1×10L；1×5L；1×1L。
1.2 主要组成成分试剂：Tris缓冲液 5.0mmol/L乳酸脱氢酶≥6000U/L苹果酸脱氢酶≥3000U/Lα-酮戊二酸 14.0mmol/LL-天门冬氨酸 210.0mmol/L烟酰胺嘌呤二核苷酸 0.18mmol/L2.1 外观和性状2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；中文包装标签应清晰、准确、牢固。
2.1.2 试剂应为无色至浅黄色澄清液体。
2.2 净含量不少于标示值。
2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度在光径1cm、主波长340nm下，以纯化水为检测样本时，吸光度应不小于1.000。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率在光径1cm、主波长340nm下，以纯化水为检测样本时，吸光度变化率(△A/min)应不大于0.004。
2.4 分析灵敏度AST含量为100U/L时，测定吸光度变化率（△A/min）应在0.030～0.090范围内。
2.5 线性范围2.5.1 在[5，500]U/L范围内，相关系数r应不小于0.990；2.5.2 在[5，100]U/L范围内，线性绝对偏差应不超过±10U/L；在（100，500]U/L 范围内，线性相对偏差应不超过±10%。
2.6 测量精密度2.6.1 重复性分别重复测定高、低值两个浓度样本，测定结果的变异系数（CV）均应不大于5%。
2.6.2 批间差用三个批号的试剂盒测定同一浓度样本，测定结果的相对极差（R）应不大于10%。
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)测定试剂盒(IFCC法)产品技术要求derui
医疗器械产品技术要求编号:
天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定试剂盒
（IFCC法）
2、性能指标
2.1外观和性状
外观和性状应符合表2要求。
表2 试剂盒内各组分的外观性状
2.2试剂空白
2.2.1试剂空白吸光度
试剂以蒸馏水为空白时，波长340nm，光径1.0 cm，温度37℃，吸光度≥ 1.0。
2.2.2试剂空白吸光度变化率
试剂以蒸馏水为空白时，波长340nm，光径1.0 cm，温度37℃，吸光度变化率≤0.004。
2.3分析灵敏度
试剂盒测试130 U/L被测物时，吸光度变化率≥ 0.02。
2.4线性范围
2.4.1试剂盒在10 ~800U/L区间（范围）内，其回归系数r≥0.990。
2.4.2相对偏差或绝对偏差应符合表3 要求。
表3 相对偏差或绝对偏差
2.5精密度
2.5.1试剂盒批内精密度CV 值应≤5.0%。
2.5.2试剂盒批间相对极差（R）应≤10.0%。
2.6准确度
1
相对偏差（Bias%）应在参考物质靶值±10%以内。
2.7液体装量
试剂盒不同规格的净含量应不少于其标示量。
2。
天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒(天门冬氨酸底物法)产品技术要求aiweide
天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒（天门冬氨酸底物法）适用范围：本试剂用于体外定量测定人体血清中天门冬氨酸氨基转移酶的活性。
1.1 包装规格a) 试剂1：2×45 mL，试剂2：1×18mL；b) 试剂1：4×50 mL，试剂2：2×20mL；c) 试剂1：2×100mL，试剂2：2×20mL。
1.2 主要组成成分1.2.1试剂1主要组分Tris缓冲液100 mmol/LL-天冬氨酸240 mmol/L苹果酸脱氢酶>600 U/L乳酸脱氢酶﹥1200U/Lα-氧代戊二酸12mmol/LProClin300 适量1.2.2试剂2主要组份Tris缓冲液100 mmol/L还原型辅酶Ⅰ0.18mmol/LProClin300 适量2.1外观试剂1：无色澄清液体；试剂2：无色或淡黄色澄清液体。
2.2试剂装量应不低于试剂瓶标示装量。
2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度：在340nm处测定试剂空白吸光度，应≥1.5。
2.3.2试剂空白吸光度变化率：在340nm处测定空白吸光度变化率|△A/min|应≤0.05。
2.4分析灵敏度测定AST含量为40U/L样本时，其|△A/min|应≥0.01。
2.5线性范围2.5.1测试浓度在[0，600] U/L范围内，线性回归的相关系数（r）应不低于0.990；2.5.2测试浓度在[0，60] U/L范围内，线性绝对偏差应不超过±6 U/L；测试浓度在(60，600] U/L范围内，线性相对偏差应不超过±10%。
2.6 测量精密度2.6.1重复性：重复测试三个水平的样本，所得结果的变异系数（CV）应不大于5％。
2.6.2批间差：抽取3个不同批号的试剂，对同一份样本进行重复测定，相对极差≤10％。
2.7准确度以国家标准物质为检测样本时，测定结果相对偏差不超过±10％。
2.8 稳定性取在2℃～8℃条件下贮存达到18个月的试剂进行检测，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)测定试剂盒(天门冬氨酸底物法)产品技术要求lideman
天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定试剂盒（天门冬氨酸底物法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中天门冬氨酸氨基转移酶的含量1.1规格试剂1（R1）:4×80mL, 试剂2（R2）：4×16mL；试剂1（R1）:5×60mL, 试剂2（R2）：5×12mL；试剂1（R1）:3×40mL, 试剂2（R2）：3×8mL；试剂1（R1）:2×80mL, 试剂2（R2）：2×16mL；试剂1（R1）:2×400mL, 试剂2（R2）：2×80mL；试剂1（R1）:5×45mL, 试剂2（R2）：5×15mL；试剂1（R1）:2×70mL, 试剂2（R2）：1×70mL；试剂1（R1）:1×20mL, 试剂2（R2）：1×6mL。
1.2试剂组成见表1：试剂1（R1）（以下简称R1）,试剂2(R2)（以下简称R2）。
表1 试剂组成2.1 外观液体双试剂：R1（缓冲液）：无色液体，R2（启动液）：无色液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 试剂空白2.3.1 空白吸光度在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度＞1.0 ABS。
2.3.2空白吸光度变化率在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下，用去离子水作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应<0.004 ABS/min。
2.4 分析灵敏度浓度为50U/L时，吸光度变化率绝对值≥0.014。
2.5 线性范围在[1-600]U/L线性范围内，线性相关系数r2≥0.996。
在（100-600]U/L,范围内的相对偏差不超过10%；测定结果为[1-100]U/L时绝对偏差不超过10U/L。
2.6 精密度试剂盒测试项目精密度CV< 5 %。
生化试剂SOP标准操作程序（魅力）
⽣化试剂SOP标准操作程序（魅⼒）ALT/GPT 丙氨酸氨基转移酶试剂盒临床意义：本试剂盒适⽤于体外临床检验，⽤于测定⼈⾎清中丙氨酸氨基转移酶的活⼒。
临床上，有许多疾病会导致⾎清中丙氨酸氨基转移酶活⼒增⾼。
如肝胆类疾病：包括传染性肝炎、肝癌、肝硬变活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆管炎；⼼⾎管疾病：包括⼼肌梗塞、⼼肌炎、脑出⾎等。
⼀些药物和毒物也可以引起ALT活性升⾼：如氯丙嗪、异烟肼、奎宁、酒精、铅、汞、有机磷等。
因此，⾎清丙氨酸氨基转移酶活⼒的测定可⽤于这些致病的诊断和监测，特别是⽤于肝胆类疾病的诊断和肝功能检测⽅法原理：上海科华⽣物⼯程股份有限公司的丙氨酸氨基转移酶试剂盒以IFCC1（国际临床化学委员会）推荐法为基础设计，采⽤两步法测定：丙氨酸氨基转移酶L-丙氨酸+ α-酮戊⼆酸-----------------------→丙酮酸+ L-⾕氨酸乳酸脱氢酶丙酮酸+ β-NADH + H+---------------→L-乳酸+ H2O + NAD+底物L-丙氨酸和α-酮戊⼆酸在丙氨酸氨基转移酶催化下,⽣成丙酮酸和L-⾕氨酸.其中丙酮酸在乳酸脱氢酶的催化下,⽣成了L-乳酸,并同时引起了β-NADH的氧化,使波长340nm处的吸光度下降.在⼀定底物浓度范围内,β-NADH的氧化所引起的340nm处吸光度的下降速率与⾎清中丙氨酸氨基转移酶活⼒成正⽐。
样本：病⼈准备：应空腹取⾎。
样本类型：新鲜⽆溶⾎现象的⾎清或EDTA抗凝⾎浆。
最少样品量：0.2ml。
样本稳定性：⾎清中的ALT在2～8℃可稳定7天，不推荐使⽤冰冻保存的样本2。
仪器与试剂:仪器：魅⼒1800⽣化分析仪试剂：上海科华⽣物⼯程股份有限公司的丙氨酸氨基转移酶试剂盒试剂准备：丙氨酸氨基转移酶试剂盒为即开即⽤的液体双剂型，⽆需特殊准备。
试验⽤试管的直径在12～16mm。
试剂组份：参见试剂盒内说明书。
注意事项：1.此试剂为体外诊断⽤。
2.试剂有毒，不要⼊⼝，吞下有害，如误服（包括内部接触）应⽴即寻求医疗保护。
天门冬氨酸氨基转移酶测定的标准操作规程
天门冬氨酸氨基转移酶测定的标准操作规程【目的】体外检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶（AST ）的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP ，室负责人监督落实。
2.本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h ，不饮酒24h 后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】日立600全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理底物L-天门冬氨酸与α-酮戊二酸在天门冬氨酸氨基转移酶（AST ）作用下生成草酰乙酸，生成的草酰乙酸在苹果酸脱氢酶（MDH ）作用下转化成L-苹果酸，同时伴随着NADH 的氧化，引起在波长340 nm 处吸光度下降，下降速率与血清中AST 活力成正比。
谷氨酸草酰乙酸酮戊二酸天门冬氨酸---L L AST +−−→−+α酮戊二酸苹果酸草酰乙酸-++-−−→−++++αNAD L H NADH MD H二、试剂1.试剂本科使用上海科华生物工程股份有限公司AST 试剂盒，为液体双试剂，各组分如分：R1：Tris 缓冲液、β-NADH 、乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶（MEDH ）R2：L-天门冬氨酸、α-酮戊二酸2.校准要求输入理论因数或使用科华生物配套校准品。
校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。
三、操作1.分析参数：详见参数表。
2.操作步骤：签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。
AST
天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒（IFCC 推荐法） 使用说明书【产品用途】本试剂用于人血清或血浆中天门冬氨酸氨基转移酶（AST ）的体外定量测定。
【测定原理】L-天门冬氨酸+α-酮戊二酸AST草酰乙酸 + L-谷氨酸草酰乙酸+ NADH + H ＋MDHL-苹果酸 + NAD ＋+ H 2O 在波长340nm 处测定NADH 降低速率，可计算出AST 活性。
【产品规格】R 1：60ml×2 R 2：15ml×2 R 1：80ml×2 R2：20ml×2【试剂成分及浓度】R 1 每1000ml 内含 100mmol Tris 缓冲液；15mmol α-酮戊二酸； 0.24mmol NADH ；3.0KU MDH ；R 2每1000ml 内含 3.0KU L-天门冬氨酸。
【样品和仪器要求】不溶血血清或肝素抗凝血浆。
样品中AST 在2-8℃可稳定3天。
各类全自动生化分析仪和半自动生化分析仪。
【试剂贮存条件与稳定性】试剂2-8℃避光密封保存，自生产之日起可稳定12个月。
避免污染在2-8℃下，试剂瓶开启后稳定14天；单试剂工作液稳定7天。
【测定方法】主/副波长：340nm/405nm 反应方法：速率法 反应方向：负【结果计算】AST(U/L) =（ΔA 测定/min -ΔA 空白/min ）× 3376 3376为在波长340nm/405nm ，比色杯光径1cm 下的理论K 值，其中NADH340nm 处的毫摩尔消光系数取6.22，建议各实验室根据实测K 值计算。
【正常参考值范围】37℃ 成人：5-49U/L建议各实验室建立自已的正常参考值范围。
【注意事项】1.试剂与样品用量可根据不同仪器要求，按比率改变，计算公式不变。
2.试剂请于2-8℃贮存，避免冷冻、污染，否则将导致失效。
3.高脂或黄疸样品在340nm 处有较高的吸收值，应稀释后再测定。
4.试剂若不慎溅到人体表面如皮肤、眼睛等，必须用清水冲洗；如果误服则需要到医院治疗。
AST
天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定方法操作程序【产品名称】通用名称：天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定试剂盒（IFCC法）【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的活力。
【检验原理】在AST催化下，从天门冬氨酸转移氨基到α-酮戊二酸，生成产物L-谷氨酸和草酰乙酸。
草酰乙酸通过苹果酸脱氢酶催化下生成苹果酸，在340nm波长条件下测定到NADH吸光度的变化率，与AST的活力成比例。
L—天门冬氨酸+α-酮戊二酸草酰乙酸+ L-谷氨酸O草酰乙酸+NADH+H+L-苹果酸+NAD++H【主要组成成份】R1：Tris缓冲液100mmol/LL-天门冬氨酸300 mmol/L苹果酸脱氢酶（MDH）≥600U/L乳酸脱氢酶≥900U/LNADH 0.4mmol/LR2：α-酮戊二酸60mmol/LNADH 0.9mmol/L*不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定28天。
试剂不可冰冻。
【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。
若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。
建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。
【样本要求】新鲜血清，采集后及时测定，应避免污染和溶血。
样本3天内的活性损失：（2℃~8℃保存）<8%；（15℃~25℃保存）<10%。
【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm温度37℃分析类型动力学法反应方向下降反应操作步骤* ΔA/min=ΔA/min样本管—ΔA/min空白管* 试剂和样本量可根据不同生化分析仪要求按比例适当增减。
天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒 (天门冬氨酸底物法)产品技术要求shouyi
天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒（天门冬氨酸底物法）适用范围：本试剂用于体外定量测定人血清中天门冬氨酸氨基转移酶的活性。
1.1产品规格试剂1:3×80ml，试剂2:3×20ml；试剂1:4×60ml，试剂2:4×15ml；试剂1:6×40ml，试剂2:3×20ml；试剂1:2×80ml，试剂2:2×20ml 1.2产品组成成分试剂1：L- 天门冬氨酸200mmol/L，LDH 1200U/L，MDH 800U/L。
试剂2：NADH 0.18mmol/L，α-酮戊二酸12mmol/L。
2.1 外观试剂1为无色透明溶液；试剂2为无色或略带黄色透明溶液。
2.2 装量液体试剂的净含量应不少于标示值。
2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度A≥1.0(光经1.0cm，波长340nm)。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率△A/5min≤0.01。
2.4分析灵敏度测定92.9U/L被测物，吸光度变化率在0.0225/min～0.0325/min范围内。
2.5 准确度相对偏差在±10%范围内。
2.6 精密度2.6.1 重复性变异系数CV≤5.0%。
2.6.2 批间差批间相对极差≤6.0%。
2.7 线性区间a）线性区间为（0，600]U/L（37℃）。
在规定的线性区间内，测定值与样本浓度值的相关系数（r）应≥0.990。
b（0，80]U/L区间内，线性绝对偏差应不超过±8U/L；（80，600]U/L 区间内，线性相对偏差应不超过±10%。
2.8稳定性原包装试剂2～8℃避光保存，有效期12个月，有效期满后两个月内测定结果应符合2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。
血清谷草转氨酶测定标准操作规程
血清天门冬氨酸氨基转移酶标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清天门冬氨酸氨基转移酶(缩写AST)；组合项目申请：血生化中心肌酶谱、或肝功能测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本应记录采集时间、送检时间、接收时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2～8℃）稳定7天。
-20℃保存稳定30天。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3 标本采集的注意事项2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，和12h 以上禁食空腹状态。
2.3.2 一般采用血清，也可以使用EDTA 、枸橼酸盐、草酸盐抗凝的血液标本，但肝素抗凝剂可引起反应液混浊。
3 方法原理测定反应以如下的原理进行：＋DH＋TA 酸＋NAD ＋NADH＋苹果草酰乙酸草酰乙酸谷氨酸酮戊二酸门冬氨酸−−→−+−−→−-+M S H α AST 催化L-天门冬氨酸的氨基转移至α-酮戊二酸，生成草酰乙酸和L-谷氨酸。
MDH 催化草酰乙酸还原的同时将NADH 氧化成NAD +。
血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定
血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定1.实验原理Vitros AST试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
将一滴患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。
在磷酸吡哆醛的催化作用下，谷草转氨酶使天门冬氨酸的氨基向α-酮戊二酸转移生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸在草酰乙酸脱羟酶的作用下生成丙酮酸和二氧化碳。
随后丙酮酸被丙酮酸氧化酶氧化生成乙酰磷酸酶和过氧化氢。
最后是过氧化氢与白色染剂在过氧化物酶的催化下生成一种有色染剂。
在37℃用反射仪可以测定白色染剂的氧化率，然后再将某一线性范围内反射强度变化率转化为以U/L为单位的酶活性度。
干片支撑层上的短波滤光剂可以减少入射光在有色染剂形成过程中的影响。
测定方式：速率法波长：670nm测试时间和温度：37℃约５分钟反应过程：AST，磷酸吡哆醛天门冬氨酸 + α-酮戊二酸————————→草酰乙酸 +谷氨酸草酰乙酸脱羟酶草酰乙酸————————→丙酮酸+二氧化碳丙酮酸氧化酶丙酮酸+磷酸盐+O2————————→过氧化氢+乙酰磷酸酶过氧化物酶过氧化氢+白色染剂————————→有色染剂2. 标本：2.1 病人准备：无特殊。
2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。
2.3 标本采集与处理：样品采集后3天内以1000g最少离心10分钟，然后吸出血清。
特别要注意：样品不能含细胞物质，因为血小板中AST活性也很高，既使离心不足10分钟的新鲜血浆与新鲜血清的测试结果相比都有很大差异。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多3天；4～8℃冷藏最多1周；样品冷冻保存可达3个月。
4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5. 标本拒收的标准：由于用草酸钾/氟化钠，枸掾酸和EDTA抗凝的标本结果负偏差>50%，因此不能使用。
此外，因为红细胞中AST活性很高，溶血标本也不能使用。
6. 试验材料：6.1 测试AST所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit3；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA 稀释液。
天门冬氨酸氨基转移酶测定
AST活性（U/L）=（D A测定/min－D A空白/min）×4118（340nm/380nm，1cm光径）
7.正常参考值：
男11～49U/L女11～40U/L（37℃）
建议各实验室建立自己的正常参考值范围
注意事项：
1.如果试剂变混浊或试剂空白吸光度值（340nm）小于1.0，试剂已失效。
2.如果标本中AST活力＞700U/L（30℃）或＞1000U/L（37℃），需用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。
单试剂操作：工作液配制：临用时将R1与R2按2:1混合
加入物
空白管（B）
测定管（T）
工作液
300μl
300μl
蒸馏水
15μl
-
标本
-
15μl
混合，置37℃孵育90秒，在主波长340 nm/辅助波长410nm下连续监测1～3分钟各管吸光度变化，计算ΔA/min。
6.结果计算：
AST活性（U/L）=（D A测定/min－D A空白/min）×3376（340nm/410nm，1cm光径）
3.稳定性与保存：试剂在2～8℃避光保存可稳定一年。单试剂工作液2～8℃避光保存可稳定一周。
4.基本参数：
主波长
340nm
标本
5μl
反应方法
速率法
延滞时间
90秒
辅助波长
410nm
R1
200μl
反应方法
向下
读数时间
150秒
反应温度
37℃
R2
100μl
计算因子
3376（340nm/410nm，1cm光径）
3. NADH在340nm的理论摩尔吸光吸数6.22×103，计算因子最好根据实测摩尔吸光系数计算。
天门冬氨酸氨基转移酶测定标准操作规程
天门冬氨酸氨基转移酶测定标准操作规程1.检验原理：（IFCC 法）L-天冬氨酸和α-酮戊二酸在AST 的作用下生成草酰乙酸和L-谷氨酸。
草酰乙酸在苹果酸脱氢酶作用下生成L-苹果酸，同时还原型辅酶Ⅰ（NADH ）被氧化为氧化型辅酶Ⅰ（+NAD ），在340nm 处测得吸光度呈下降趋势与AST 活性成正比。
根据NADH 吸光度下降程度计算AST 的活力单位。
试剂内不含磷酸弼哆醛。
L-天冬氨酸+α-酮戊二酸−−→−AST L-谷氨酸+草酰乙酸草酰乙酸+NADH++H −−→−AST L-苹果酸++NAD2.试剂主要组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清。
在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释：6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V ）的氯化钠溶液稀释样本。
6.2.单位换算：ukat/L=U/L*16.67×310-7.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊，或以水空白在340nm 处吸光度小于1.000时不能使用。
7.3检验结果仅供参考，不作为临床诊断唯一依据。
8.试剂性能指标8.1试剂外观：无色透明液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3试剂空白8.3.1试剂空白吸光度：在340nm处，光径1cm时，空白吸光度A≥1.0008.3.2试剂空白吸光度变化率：在340nm处，光径1cm时，△A/min≤0.0048.4线性区间：试剂的线性区间为[10-500]U/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[10-50]U/L区间内，线性绝对偏差不超过±5U/L；（50-500）U/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。
8.5准确度：相对偏差应不大于±15%。
小鼠天门冬氨酸氨基转移酶AST试剂盒使用方法
小鼠天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒使用方法检测范围：96T2U/L - 55U/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平。
用纯化的小鼠天门冬氨酸氨基转移酶（AST）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入天门冬氨酸氨基转移酶（AST），再与HRP标记的天门冬氨酸氨基转移酶（AST）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的天门冬氨酸氨基转移酶（AST）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠天门冬氨酸氨基转移酶（AST）浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（96 U/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
48U/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液32U/L 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液16U/L 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液8U/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液4U/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
小鼠天门冬氨酸氨基转移酶AST试剂盒使用方法
小鼠天门冬氨酸氨基转移酶AST试剂盒使用方法小鼠天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒是一种用于测量小鼠体内AST活性的实验试剂盒。
AST是一种重要的酶，存在于多种组织和器官中，尤其是心肌、肝脏、肌肉和肾脏。
AST活性的测量可以用于评估这些组织和器官的功能及其受损程度。
下面是小鼠AST试剂盒的使用方法：材料：1.小鼠AST试剂盒2.取自小鼠尾静脉的血液样本3.显微孔板4.吸光度计5.定量移液器和相应的移液管尖头6.离心机7.试剂盒中的稀释缓冲液（DB）8.试剂盒中的显色缓冲液（BC）9.试剂盒中的辅助酶液（AK）试剂准备：1.将试剂盒中的稀释缓冲液（DB）和显色缓冲液（BC）平衡至室温。
2.检查试剂盒中的辅助酶液（AK）的透明度和颜色是否符合要求。
样本制备：1.采集小鼠的血液样本，将其加入离心管中。
2.在3000g的离心机中离心血液样本10分钟，以分离血浆。
3.用定量移液器将血浆移至新的离心管中。
酶活性测定：1.取出所需数量的试剂盒，并在显微孔板上设置标准曲线和样本孔。
2.标准曲线的制备：用试剂盒中的辅助酶液（AK）配制不同浓度的AST标准品，通常为0、10、20、40、80和160U/L。
分别用稀释缓冲液（DB）稀释AST标准品至不同浓度，并加入到标准孔中。
每个浓度的标准曲线孔各加入100μL。
3.样本孔的制备：将150μL的稀释缓冲液（DB）加入到样本孔中。
4.各样本离心管中的血浆样本离心6000g10分钟，以去除任何可能存在的沉淀。
5.将从离心管中分离的血浆样本（100μL）加入到样本孔中。
6.向标准孔和样本孔中分别加入100μL的显色缓冲液（BC）。
7. 以灵敏度为450 nm的吸光度计读取孔的吸光度值，并记录下来。
结果计算：1.建立标准曲线后，使用曲线上的吸光度值和相应的AST标准品浓度进行直线插值计算出样品中AST的活性。
2.根据样品的吸光度值计算出AST活性（U/L）。
注意事项：1.所有试剂和样本应在室温下使用，并在适当的温度下保存。
三种心肌酶不同试剂盒比较及速率法测定时间...
三种心肌酶不同试剂盒比较及速率法测定时间...
王大平;蒋仲谋
【期刊名称】《陕西医学检验》
【年(卷),期】1993(008)001
【摘要】进口与国产肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)速率法试剂盒线性时间均大于3分钟,不同实验室、不同仪器其测定时间不一样,在线性时间内,速率时间(动力学时间)不同,其测定结果有无差异;进口与国产心肌酶谱速率法试剂盒有无差异。
特做如下实验探讨。
【总页数】2页(P4-5)
【作者】王大平;蒋仲谋
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R446.1
【相关文献】
1.三种直接法测定HDL-c试剂盒的性能比较分析 [J], 唐吉斌;汪亚勤
2.对速率法负向、正向反应测定中延迟时间不同设置方法的比较 [J], 贾文魁;胡玉丽
3.不同遮荫度对三种牧草净光合速率和生物量影响的比较分析 [J], 张学权;胡庭兴;张健
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5.三种丙氨酸氨基转移酶速率法试剂盒测定结果的比较 [J], 姜岩;江国峰;于发吉;华裕忠
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天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂速率法)
简介：
Leagene 天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂速率法)其检测原理是天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化天门冬氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，草酰乙酸与NADH 经LDH 催化生成NAD +，上述方法实际为AST 速率法，其反应公式如下：在上述偶联反应中，NADPH 的氧化速率与样本中酶活性呈正比。
对于单试剂比色法，血清与试剂完整成分的底物溶液混匀，ALT 催化反应立即启动，进而计算酶的活性单位。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品：
① 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，
-20℃保存1个月有效，用于AST/GOT 的检测。
② 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个
月有效，用于AST/GOT 的检测。
③ (选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续
计算单位蛋白重量组织或细胞内的AST/GOT 含量。
2、 分光光度计检测：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避
免产生气泡。
如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
编号 名称
TE0135 100T
TE0135 200T
Storage
ALT 检测液(R)
成分 终浓度 2×50ml 2×100ml 4℃ 避光
Tris 缓冲液 100mM L-天门冬氨酸 240mM 酮戊二酸 12mM NADH 0.22mM LDH 2500U/L 防腐剂 15mM
使用说明书
1份
加入物
空白管 测定管 AST 检测液(R)(μl)
900
900
混匀孵育。
蒸馏水(μl) 45 －
待测样品(μl) －45
混匀，孵育，在340nm处各管吸光度变化，计算各管Δ
A/min。
3、生化分析仪检测：按照下表设置主要参数。
如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用
量或适当稀释后再进行测定。
波长340nm
反应温度37℃
孵育时间90s
比色杯光径 1.0cm
系数3376
待测样品15μl
ALT检测液(R) 300μl
计算：
分光光度计计算公式：AST(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(945/45)=ΔA/min×3376 生化分析仪计算公式：AST(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(315/15)=ΔA/min×3376
参考范围：成年健康人血清AST：8-40U/L
注意事项：
1、抗坏血酸≤30mg/dl，游离胆红素≤40mg/dl，结合胆红素≤40mg/dl，甘油三酯
≤2000mg/dl对测定结果无影响。
2、如果生化分析仪内无所要求波长的滤光片，应选择接近的滤光片。
3、二硝基苯肼显色液溶解以后，如果仍然有结晶析出，应弃用。
4、严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
打开包装以后，4℃保存一个月。