天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)37℃参考测定程序的建立及其临床应用
酸氨基转移酶(ALT)测定(速率丙氨法)标准化操作程序文件
酸氨基转移酶(ALT)测定（速率丙氨法）标准化操作程序文件1概述肝脏内含有丰富的酶系统，以维持机体的正常生理代谢过程。
不少酶是由肝脏合成并由肝胆系统排泄，当肝脏有病时，可由于酶生成亢进或释出异常，引起血清内酶的活性改变。
这些改变在一定程度内反映了肝脏的功能状况。
人体转氨酶的种类甚多，而以血清丙氨酸氨基转移酶，血清天门冬氨酸转换酶活性最强。
此两种酶广泛在于机体组织细胞内，以肝脏，心脏，肾脏及骨骼肌中较多。
在肝脏中丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量最多，AST以心肌含量最多，此两种转氨酶较多地释放在血液中，使血清中两种酶活性增高。
2 样本收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。
血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。
样本在4摄氏度可稳定7天。
采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。
3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。
不建议采用血浆标本。
3 方法原理L-丙氨酸+α-酮戊二酸—————→丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH—————→L-乳酸+NAD﹢4剂来源，配置及储存试剂来源：迪瑞试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使用。
启用后在2-8度可稳定30天。
若试剂混浊，或以蒸馏水为空白在340nm处的光吸收值低于1.0A,应予丢弃。
试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。
5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪分析参数：样品量15 u/l 试剂量：第一试剂240 u/l（R1）；第二试剂60 u/l测光点23—38 测定模式：速率法负反应分析波长：340nm/405nm(主波长/副波长)6计算方法样本浓度（U/L）=样本管吸光度的变化×校准液浓度（U/L）校正管吸光度的变化7 线性范围：本实验的线性范围：4----1000U/L8 参考范围：男性；：5—40U/L 女性：5---35 U/L9 失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。
门冬氨酸氨基移换酶(AST)测定的标准操作程序
门冬氨酸氨基移换酶（AST）测定的标准操作程序【应用范围】体外检测血清、血浆AST浓度测定。
【适用仪器】Olympus AU-2700全自动生化分析仪。
【程序改变】严格遵循仪器、试剂说明书及校准品使用说明。
【方法学原理】 ASTL-天门冬氨酸+ α-酮戊二酸草酰乙酸+ L-谷氨酸MDH(苹果酸脱氢酶)草酰乙酸+ NADH +H+ L-苹果酸+ NAD+ + H2O【试剂】试剂1（R1）：L-天门冬氨酸试剂2（R2）：α-酮戊二酸试剂稳定性与贮存:试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
2.校准品：DiaSys TruCal U。
3. 质控品：Randox Assayed Multiseral Level 1 and Level 2【标本收集与准备】1.血清或血浆标本根据实验室标准采集程序采集标本，适用标本为血清或肝素抗凝血浆（肝素钠抗凝结果高0.5mmol/l），不可从正在静脉滴注手臂上采血，上机标本不能有凝块，样品采集后2天内离心标本，分离血清，血清或血浆标本室温保存4天，冷藏7天，冷冻保存6个月。
【操作步骤】1.仪器测定参数设置Test Name:Sample: Volume L DilutiR1 L DilutiR2Sec. ODMethod FirstLMeasuring Firs Last LMeasuring LastANo-Lag-Time: Onboard2.试剂准备：将准备好的试剂置仪器试剂盘中（8℃）。
3.校准校准物的准备：将校准物从冰箱取出，冻干校准物按说明书加入蒸馏水复溶，轻轻颠倒混匀3次，不可用力震摇，室温放置30分钟至完全溶解；液体校准物从冰箱取出，室温放置15分钟以平衡至室温。
校准物的选择尽可能选择配套仪器厂家校准品。
亦可将校准液复溶后分装保存于－20℃冰箱中，每周校准一次或更换试剂批次后进行校准。
上机校准程序：[1]入界面。
[2] 用光标键选欲校准项目，。
肝功能中各检测项目的测定方法
肝功能中各检测项目的测定方法、测定原理和临床意义一、血清总胆汁酸TBA：（1）测定方法：A、酶循环法，B、3a-HDS法（3-a羟类固醇脱氧酶）（2）测定原理方法A：胆汁酸被3α羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH）及口-硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸氧化型特异性的氧化，生成3酮类固醇及}硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型。
此外，生成的3酮类固醇在3α羟基类固醇脱氢酶及β硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型存在下，生成胆汁酸及β烟酰胺嘌呤二核苷酸氧化型。
以上依据循环酶而放大量的胆汁酸测定生成的β-硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型的吸光度，计算血清中胆汁酸的量。
方法B：在3-a羟类固醇脱氧酶作用下，各种胆汁酸C3上α位的羟基脱氧形成羰基，同时氧化型NAD还原成NADH随后NADH上的氢由黄递酶催化转移给硝基四氮唑蓝（NTB）产生甲替,用磷酸中止反应,甲替的产量与总胆汁酸成正比，在波长540nm比色,与同样处理的标准品比较，计算其含量。
（3）临床意义1.测定血清中胆汁酸可提供肝胆系统是否正常，肝、胆疾病时周围血循环中的胆汁酸水平明显升高。
早期和肝外阻塞性时可增至正常值的100 倍以上。
对肝胆系统疾病的诊断具有特异性。
2．可敏感地反映肝胆系统疾病的病变过程。
肝胆疾病时血清胆汁酸浓度的升高与其他肝功能试验及肝组织学变化极为吻合，在肝细胞仅有轻微坏死时，血清胆汁酸的升高，常比其他检查更为灵敏。
据报道，急性肝炎、、原发性、急性肝内胆汁郁滞、原发性以及肝外，其血清胆汁酸均100 ％出现异常。
上述疾病时均有血清胆汁酸含量的增高。
二、丙氨酸氨基转移酶ALT（1）测定方法：酶偶联法，赖氏法，连续监测法（2）测定原理：L-丙氨酸 + α-酮戊二酸---ALT----L-丙酮酸 + L-谷氨酸丙酮酸 +NADH+H+---------LD-------L--乳酸+NAD+（3）临床意义：谷丙转氨酶升高临床意义就在于对急性乙型肝炎、慢性肝炎、HBV 携带者、重型肝炎以及肝硬化、肝癌等一系列病毒性肝炎的诊断和分析，ALT 的升高只表示肝脏可能受到了损害。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)实验操作规程
1.目的和适用范围：1.1.为保证血液检测的结果正确性，规范实验操作，特制定本操作规程。
1.2.适用于本实验室，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语：无。
3.职责：3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
3.2.实验室负责人负责最终实验室报告的签发。
4.操作说明4.1.实验原理：血清中谷－丙转氨酶作用于由丙氨酸及α酮戊二酸组成的基质产生丙酮酸，丙酮酸与2,4－二硝基苯肼作用，形成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中呈红棕色。
反应过程如下：α酮戊二酸 + L丙氨酸→ L-谷氨酸 + 丙酮酸L-丙酮酸 + 2,4二硝基苯肼→ 2，4-二硝基苯腙 + 水4.2.实验所需设备和材料：ALT测定试剂盒、100μl加样器、一次性吸头、37℃水浴箱、DNM-9602酶标仪。
4.3.实验操作步骤：4.3.1.将基质液37℃保温5min。
4.3.2.微孔板上设定1个空白对照，3个标准孔，其余为样品孔。
4.3.3.各孔加缓冲液、基质液、丙酮酸与样品量如下：4.3.3.1.空白孔：10ul磷酸缓冲液后，再加50ul基质液。
4.3.3.2.标准孔：10ul磷酸缓冲液，加5ul丙酮酸标准液，再加45ul基质液。
4.3.3.3.样品孔：分别加样本10ul，加50ul基质液。
4.3.4.适当震荡混匀，置37℃温育30min。
4.3.5.每孔加2,4二硝基苯肼50ul,混匀后置37℃温育20min。
4.3.6.每孔加NaOH溶液150ul, 混匀后，置37℃温育5min。
4.4.结果判读：4.4.1.双波长（492nm,参考波长630nm）,以空白孔为零点，测定标准液与样品的OD值。
4.4.2.CUT OFF值为3个标准孔的平均值。
4.4.3.若样品OD值大于或等于CUT OFF值，为阳性。
4.4.4.若样品OD值小于CUT OFF值为阴性。
4.5.注意事项4.5.1.严重脂血，溶血或黄胆血清可使吸光度明显增加，因此检测此类标本应作血清对照管。
生化试剂SOP标准操作程序（魅力）
⽣化试剂SOP标准操作程序（魅⼒）ALT/GPT 丙氨酸氨基转移酶试剂盒临床意义：本试剂盒适⽤于体外临床检验，⽤于测定⼈⾎清中丙氨酸氨基转移酶的活⼒。
临床上，有许多疾病会导致⾎清中丙氨酸氨基转移酶活⼒增⾼。
如肝胆类疾病：包括传染性肝炎、肝癌、肝硬变活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆管炎；⼼⾎管疾病：包括⼼肌梗塞、⼼肌炎、脑出⾎等。
⼀些药物和毒物也可以引起ALT活性升⾼：如氯丙嗪、异烟肼、奎宁、酒精、铅、汞、有机磷等。
因此，⾎清丙氨酸氨基转移酶活⼒的测定可⽤于这些致病的诊断和监测，特别是⽤于肝胆类疾病的诊断和肝功能检测⽅法原理：上海科华⽣物⼯程股份有限公司的丙氨酸氨基转移酶试剂盒以IFCC1（国际临床化学委员会）推荐法为基础设计，采⽤两步法测定：丙氨酸氨基转移酶L-丙氨酸+ α-酮戊⼆酸-----------------------→丙酮酸+ L-⾕氨酸乳酸脱氢酶丙酮酸+ β-NADH + H+---------------→L-乳酸+ H2O + NAD+底物L-丙氨酸和α-酮戊⼆酸在丙氨酸氨基转移酶催化下,⽣成丙酮酸和L-⾕氨酸.其中丙酮酸在乳酸脱氢酶的催化下,⽣成了L-乳酸,并同时引起了β-NADH的氧化,使波长340nm处的吸光度下降.在⼀定底物浓度范围内,β-NADH的氧化所引起的340nm处吸光度的下降速率与⾎清中丙氨酸氨基转移酶活⼒成正⽐。
样本：病⼈准备：应空腹取⾎。
样本类型：新鲜⽆溶⾎现象的⾎清或EDTA抗凝⾎浆。
最少样品量：0.2ml。
样本稳定性：⾎清中的ALT在2～8℃可稳定7天，不推荐使⽤冰冻保存的样本2。
仪器与试剂:仪器：魅⼒1800⽣化分析仪试剂：上海科华⽣物⼯程股份有限公司的丙氨酸氨基转移酶试剂盒试剂准备：丙氨酸氨基转移酶试剂盒为即开即⽤的液体双剂型，⽆需特殊准备。
试验⽤试管的直径在12～16mm。
试剂组份：参见试剂盒内说明书。
注意事项：1.此试剂为体外诊断⽤。
2.试剂有毒，不要⼊⼝，吞下有害，如误服（包括内部接触）应⽴即寻求医疗保护。
天门冬氨酸氨基转移酶测定的标准操作规程
天门冬氨酸氨基转移酶测定的标准操作规程【目的】体外检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶（AST ）的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP ，室负责人监督落实。
2.本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h ，不饮酒24h 后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】日立600全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理底物L-天门冬氨酸与α-酮戊二酸在天门冬氨酸氨基转移酶（AST ）作用下生成草酰乙酸，生成的草酰乙酸在苹果酸脱氢酶（MDH ）作用下转化成L-苹果酸，同时伴随着NADH 的氧化，引起在波长340 nm 处吸光度下降，下降速率与血清中AST 活力成正比。
谷氨酸草酰乙酸酮戊二酸天门冬氨酸---L L AST +−−→−+α酮戊二酸苹果酸草酰乙酸-++-−−→−++++αNAD L H NADH MD H二、试剂1.试剂本科使用上海科华生物工程股份有限公司AST 试剂盒，为液体双试剂，各组分如分：R1：Tris 缓冲液、β-NADH 、乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶（MEDH ）R2：L-天门冬氨酸、α-酮戊二酸2.校准要求输入理论因数或使用科华生物配套校准品。
校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。
三、操作1.分析参数：详见参数表。
2.操作步骤：签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)的实验室检测
5． 标准品法可避免检测受环境因素等 引起的系统误差，标准品的准确配置和加 样直接决定实验结果的准确。 出现大量负值（会导致漏检），阳性过多 基本上都是由于标准品配置和加样不准确。
（二） 复检——丙氨酸转移酶系数法 1. 设备 1.1 340 RT酶标仪。 2. 试剂 2.1 中生丙氨酸转移酶检测试剂（干粉） 2.2 ALT标准品：110U、88U、22U。 3. 程序设置 3.1读板程序：震荡20秒，60秒、120秒、180秒、 240秒、300秒340nm读板五次。 3.2 以标本△OD值乘以系数计算标本ALT值。
5.2.2 说明：K设为设定的接近K真的系数。 U设为已知的ALT标准品酶含量在K=K设时 测定的酶含量；∆OD为340nm波长测定反 应系统每单位时间OD值变化率； U设=K设×∆OD ∆OD= U设/K设 公式2 5.2.3同一酶含量的标本在同一反应系统中 ∆OD不变，将公式2代入公式1，得： K真= U真×K设/ U设
ALT是献血法规定的血液检验项目之一。 参考值范围为5~40U/L。 ALT催化下列反应： α-酮戊二酸 + L-丙氨酸 L-谷氨酸+丙 酮酸
ALT的生理变异较小，性别、年龄、进食、 适度运动对酶活性无明显影响。病毒性肝 炎时随不同病期和严重程度而异，常明显 升高，可达10~100倍正常上限。肝硬化、 急性心肌梗死、心肌炎、肌肉损伤、肌肉 萎缩等均可升高。
也只有在此基础上建立起来的测定方法才是可靠的准确酶反应是随着温度升高而升高的但测定酶是都需要酶和底物在一定温度下作用一段时间过高的温度可能使酶失活
丙氨酸氨基转移酶（Hale Waihona Puke LT）的 实验室检测基础知识
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂微板法)
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏微板法)简介：转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)旧称谷草转氨酶(GOT)主要存在于心肌、骨骼肌、肝脏，以心肌含量最高，肝脏次之。
AST能够催化天门冬氨酸和a-酮戊二酸的氨基转移作用，形成谷氨酸和草酰乙酸。
Leagene 天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏微板法)其检测原理是天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化天门冬氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，在ALT催化下，其反应公式如下：L-天门冬氨酸+α-酮戊二酸→草酰乙酸+L-谷氨酸。
二硝基苯肼与α-酮酸反应，生成相应的二硝基苯腙，在碱性条件下，二硝基苯腙的吸收光谱有差异，通过分光光度计检测在处差异最大，以等摩尔浓度计算出丙酮酸的生成量，进而计算酶的活性。
100T该检测试剂盒可检测50个样本(不含标准品)，该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、蒸馏水2、离心管3、水浴锅4、96孔板5、酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：编号名称TE0131100TStorage试剂(A): 丙酮酸标准(100mmol/L)1ml 4℃避光试剂(B): 丙酮酸标准稀释液2ml RT试剂(C): 标准对照液2ml 4℃试剂(D): AST assay buffer3ml -20℃避光使用说明书1份①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃保存1个月有效，用于AST/GOT的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个月有效，用于AST/GOT的检测。
③(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的AST/GOT含量。
2、制作AST标准曲线：取适量的丙酮酸标准(100mmol/L)，按丙酮酸标准(100mmol/L)：丙酮酸标准稀释液混合，即为丙酮酸标准工作液-丙酮酸标准(2mmol/L)，按下表制备标准曲线。
19、天冬氨酸氨基转移酶标准操作规程(AST-SOP)
前言为使临床检验操作规范化，指导检验人员严格按规程进行正确的常规操作，保证检验质量，特制定本操作规程。
本规程的编写遵循了ISO 15189《医学实验室——关于质量和能力的特殊要求》及WS/T 227-2002《临床检验操作规程编写要求》的有关规定并结合产品实际情况制订，作为本产品的标准操作程序。
本规程从2007年5月2日起实施，每2年复审1次。
本规程由浙江伊利康生物技术有限公司编制。
本规程起草单位：伊利康生物技术有限公司技术部。
本规程主要起草人：蒙凯、蔡其浩。
本规程首次起草。
目录1 检验申请 (3)2 标本采集与处理 (3)3 试剂及成份 (4)4方法原理 (4)5 仪器 (4)6 校准液及校准模式 (4)7质控品与室内质控规则 (4)8标本检测步骤 (5)9 结果计算 (5)10 操作性能 (5)11试剂使用的注意事项 (5)12参考范围及医学决定水平 (5)13检验结果的报告及范围 (5)14临床意义 (6)15结果审核分析以及相关项目的联系 (6)16威胁生命的“紧急值”及报告规定. (6)17有关引用程序与文件 (6)18参考文献附录A XXX型全自动生化分析仪参数天门冬氨酸氨基转移酶测定标准操作规程1.检验申请单独检验项目申请：血清天门冬氨酸氨基转移酶（Apartate Aminotransferase,缩写(AST/GOT）测定；组合项目申请：肝功能测定项目组合。
临床医生根据需要提出检验申请。
2.标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后。
体检对象抽血前应有两周的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2标本采集2.2.1除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
丙氨酸氨基转移酶37℃参考方法评价临床常用方法探讨
摘要 ： 目的
通过建立 ３ ℃丙氨酸氨基转移酶 （ Ｌ ） 考方法 ， ７ Ａ Ｔ参 评价干化学和湿化学五种检测组合 的临床常用方
法， 探讨 Ａ 测定结果的准确性与可 比性。方法Байду номын сангаасⅡ
依据国际临床化学 与检 验医学联 合会 （ Ｃ ）推荐 的参考测 量程序 ＩＣ Ｆ
Ａ ｐ ｏｃ ｎｕｉｇｔｅｒｆ ｅｃ ｔｏ ｆ ａ ｙ ｃ ｏｃｎｒｔ ｎｏ ａｉｅ ｍｉｏ ａｓ ｒｓ（７ ２ ｔ ａ ａｅ ｅｒｕｉ ｐ ｒａｈｏ ｓ ｅ ｎｅ ｈ ｄｏ ￣ ｔ ｎｅｔａｏ ｆ ｌｎ ｎ ｔ ｎｆ ａｅ３０ ） ｏｅ ｌ ｔ ｔ ｏｔ ｅ ｎ ｈ ｅｒ ｍｅ ｃ ｉｃ ｉ ａ ｎａ ｒ ｅ （ ｖｕ ｈ ｎ ｍｅ ｏｓ Ｑ ｈ ｈｎ ， Ｈ ＮＧＦ ｎ Ｚ￣０ Ｆ ｎ ｅ ． 脚 ｎ ｌ ｌ￣ａ ｌｂｒｔｉ ， ｅｉ ｎ ｎＭ ｄ ａ Ｃ ｌｇ ｏ— ｈ ｔ ｄ ｔ ｉ ｏ Ｚ Ａ ａｇ， Ｉ ａｇ，ｔ （ Ｚ －ｇ ４ 咖 ｅ ｏ ｉ ｌａｏ ｏ ｅ Ｐｋ Ｕ ｉ ｅｉｌ ｏｅｅ ｓ ｍ ｆＣ ｒ ａ ｒｓ ｇ ｎ ｏ ｃ ｌ Ｈ ｐｔ ， ｈ ｅ Ａａｅ ｙｏ ｄ ａ ｃｎｅ， ｅ ｇ １０３ ， ｈｎ ） ｉｌ Ｃ ｉ ｓ ｃｄｍ ａ ｎｅ ｆＭｅｉ ｌ ｉ ｃ Ｂ ｎ ０ ７０ Ｃ ｉ ｃ Ｓｅ ｓ ａ
建立 Ａ 参考方法 ， 测定 Ｅ Ｍ⑩．Ｄ４４Ａ Ｊ参考 品 ， Ｒ Ａ ５ 『 Ｔ 验证参考方法 的准确性 。并对其精 密度进行评估 。同时用 参考 方法 为冰冻新鲜血清定值 ， 校准非配套湿化学 常用方法 。干化学采 用 Ｖｔ ｓ ｉｏ 配套 系统 。按 照 Ｎ Ｃ ＳＥ ９Ａ方 案分别 ｒ Ｃ Ｌ Ｐ一 比较 ４ 份人血清干湿化学五种检测组合 的常 用方法 和参 考方法 Ａ 结果 。结果 用参考 方法 测定 Ｅ Ｍ＠ Ａ ５ ｏ Ｒ Ｄ４４ Ａ ．参考 品结果 １６ ４Ｕ Ｌ 在其给定 的 １６４ ／ Ｉ Ｔ ８ ． ／ ， ８ ４Ｕ Ｌ范围内。建立 的 ３￣ Ｌ 参考方法 总 Ｃ ．９ 一１ １ － ７Ｃ Ａ Ｔ Ｖ０ ８ ％ ．２％。Ｖｔ ｉ —
天冬氨酸氨基转移酶检验操作步骤
天冬氨酸氨基转移酶检验操作步骤下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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丙氨酸氨基转移酶,天冬氨酸氨基转移酶,谷氨酰转肽酶
丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和谷氨酰转肽酶是三种重要的酶类物质，它们在人体内发挥着非常重要的生理功能。
本文将从以下几个方面对这三种酶类物质进行介绍，包括其基本作用、相关疾病与健康、检测方法以及相关研究进展。
一、丙氨酸氨基转移酶（AST）丙氨酸氨基转移酶，即AST，是一种存在于细胞质内的酶，它主要参与氨基酸代谢过程中的转移反应。
AST的主要功能是在氨基酸的转移过程中，将丙氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸上，形成谷氨酸。
AST在蛋白质的合成和分解过程中发挥着重要作用。
临床上，AST是一种常见的生化指标，在检测肝脏、心脏等重要器官功能方面有着重要价值。
AST的升高往往与肝脏疾病（如肝炎、肝硬化）或心肌损伤密切相关。
常规生化检查中AST的检测对于早期发现和诊断上述疾病具有重要意义。
二、天冬氨酸氨基转移酶（ALT）天冬氨酸氨基转移酶，即ALT，也是一种重要的酶类物质，它主要参与氨基酸代谢过程中天冬氨酸的转移反应。
ALT在肝脏细胞中含量较高，因此检测ALT可以间接反映肝脏细胞的状态。
与AST类似，ALT的升高也常常与肝脏疾病（如肝炎、脂肪肝）相关。
正常情况下，ALT存在于肝细胞内，当肝细胞受损时，ALT会释放入血液中，因此ALT在血清中的升高可以提示肝脏损伤的发生。
三、谷氨酰转肽酶（GGT）谷氨酰转肽酶，即GGT，是一种存在于细胞膜上的酶，它主要参与胆汁酸代谢、氨基酸代谢以及谷胱甘肽代谢等重要生物化学反应。
GGT在肝脏和胆道系统中的含量较高，因此其检测对于评估肝脏和胆道系统功能具有重要意义。
与AST、ALT相比，GGT在肝炎、肝硬化等疾病诊断中的特异性更高。
GGT的升高还与酗酒、胆管梗阻、药物中毒等因素相关。
对GGT的检测有助于早期发现上述疾病及危险因素。
丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和谷氨酰转肽酶在人体内都起着非常重要的生理作用，它们对于维持人体的正常代谢和功能具有重要意义。
科学合理地进行相关检测，能够及时发现并诊断肝脏、心脏等重要器官的疾病，有助于及时进行治疗和干预，对于维护人体健康具有重要意义。
天门冬氨酸氨基转移酶测定标准操作规程
天门冬氨酸氨基转移酶测定标准操作规程1.检验原理：（IFCC 法）L-天冬氨酸和α-酮戊二酸在AST 的作用下生成草酰乙酸和L-谷氨酸。
草酰乙酸在苹果酸脱氢酶作用下生成L-苹果酸，同时还原型辅酶Ⅰ（NADH ）被氧化为氧化型辅酶Ⅰ（+NAD ），在340nm 处测得吸光度呈下降趋势与AST 活性成正比。
根据NADH 吸光度下降程度计算AST 的活力单位。
试剂内不含磷酸弼哆醛。
L-天冬氨酸+α-酮戊二酸−−→−AST L-谷氨酸+草酰乙酸草酰乙酸+NADH++H −−→−AST L-苹果酸++NAD2.试剂主要组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清。
在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释：6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V ）的氯化钠溶液稀释样本。
6.2.单位换算：ukat/L=U/L*16.67×310-7.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊，或以水空白在340nm 处吸光度小于1.000时不能使用。
7.3检验结果仅供参考，不作为临床诊断唯一依据。
8.试剂性能指标8.1试剂外观：无色透明液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3试剂空白8.3.1试剂空白吸光度：在340nm处，光径1cm时，空白吸光度A≥1.0008.3.2试剂空白吸光度变化率：在340nm处，光径1cm时，△A/min≤0.0048.4线性区间：试剂的线性区间为[10-500]U/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[10-50]U/L区间内，线性绝对偏差不超过±5U/L；（50-500）U/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。
8.5准确度：相对偏差应不大于±15%。
天门冬氨酸氨基转移酶37_参考方法的建立及其应用研究
天门冬氨酸氨基转移酶 (AST) 作为临床常用实 验诊断指标 ,对肝脏及心脏疾病的诊断和疗效监测 有十分重要的作用 。目前 ,酶测定主要是通过它们 催化的反应速度测定的 ,以酶催化 (活性) 浓度表示 。 但由于酶的催化活性不仅决定于酶的含量 ,还受底 物浓度 、反应介质的 pH、温度 、离子强度 、激活或抑 制因子等多种因素的影响 。因此对同一酶测定存在 多种参考范围 ,各实验室间的结果缺乏可比性 ,甚至 有时会引起临床上的误诊 。国内各临床实验室间测 定酶活性结果的差异较大 ,明显高于小分子化合物 的测定结果[1] 。本研究旨在依据国际临床化学与检 验医学联合会 ( IFCC) 参考测量程序 , 建立我室的 AST 37 ℃参考方法 ,同时对其检测性能进行评价 ,并 对制备的酶校准品定值 ,探讨血清 AST 测定结果的 准确性与可比性 。 1 材料与方法 1. 1 材料 11111 仪器 Olympus AU 2700全自动生化分析仪 ; SHIMADZU UV21700 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 ; SHI2 MADZU TCC 比色杯恒温电子控制装置 ;CAL 3200 点 温度计 ; Fisher Scientific Accumet model 10 pH 计 ; Sar2 torius RC210D 分 析 天 平 ; Eppendorf 加 样 器 ( Re2 search) ;华恒万仪水浴箱 ;秒表 。 11112 试剂 (1) 建立参考方法所用试剂 : 丙酮酸 钠 ,纯度 99 % ;L - 天门冬氨酸 ,纯度 > 99 % ;α2酮戊 二酸 ,纯度 97 % ,无水 ;草酰乙酸 ,纯度 98 % β; 2尼克 酰氨腺嘌呤二核苷酸 (NADH) ,还原型 ,纯度 98 % ; 磷酸吡哆醛 ( PLP) ,纯度 98 % ;氯化钠 ,纯度 99. 5 % ; Tris ,纯度 99. 9 % ;牛血清白蛋白 (BSA) 组分五 ,纯度 96 % ;盐酸 1N ,分析纯 ;氢氧化钠 5 M ,分析纯 ,以上 试剂均为 Sigma 公司提供 。叠氮钠 ,纯度 99. 0 %由 Farco 提供 。乳酸脱氢酶 (LDH) 甘油溶液 ,由猪骨骼 肌提取 ,LDH 活性超过 6 000 KU/ L ; 苹果酸脱氢酶 (MDH) 甘油溶液 ,由猪心提取 ,MDH 活性大于 4 000
(完整word版)天门冬氨酸氨基转移酶检测标准操作规程
(完整word版)天门冬氨酸氨基转移酶检测标准操作规程科室：查验科题目：天门冬氨酸氨基转移酶检测标准操作规程页码： 1编号： 1第 0 次订正奏效日期：2012 年1 月1 日编写人拟订日期2012 年郑剑1 月1 日审查审查日期杜文卫2012年 1 月12 日同意同意日期2012杜文卫年 1 月12 日1、方法依照：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限企业天门冬氨酸氨基转移酶测定方法2、合用范围合用于血清天门冬氨酸氨基转移酶的测定3、试剂仪器3.1 试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限企业原装试剂盒3.2 未开启的试剂盒避光保留于2℃— 8℃有效期一年。
试剂不能够冰冻。
4、操作程序4.1 方法原理ASTL—天门冬氨酸 +a—酮戊二酸草酸乙酸 +L —丙谷酸MOHL —苹果酸 +NAD +草酸乙酸 +NADH+4.2 样本要求新鲜血清或肝素血浆，样本采集后应赶快测定，一定避光保留，防止使用溶血样本。
4.3 上机操作4.3.1 试剂装载、校准、样品和质控血清剖析操作详见“ 《迈瑞 BS-220 全自动生化剖析仪标准操作、保护、养护规程》”4.3.2 校准“4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限企业配套冻干品，按说明书要求稀释后分装， -20℃冷冻保留，用前提早 15 分钟从冰箱拿出，复溶到室温后上机检测。
4.3.2.2 校准程序：每 30 天需要定标一次。
当有以下状况时需从头定标：1）换试剂批号或出现质控漂移时；2）当仪器做完养护后；3）仪器进行部件改换时。
每次试验前用准备好的校准品进行定标，定标通事后进行检测。
天门冬氨酸氨基转移酶37℃参考方法的建立及其应用研究
天门冬氨酸氨基转移酶37℃参考方法的建立及其应用研究齐志宏;邸茜;宋耀虹;张芳;赵芳;苏玉君;嵇巍;谢少伟【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2009(013)005【摘要】目的通过建立37℃天门冬氨酸氨基转移酶(AST)参考方法,对酶校准品定值,探讨血清AST测定结果的准确性与可比性.方法依据国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)推荐的参考测量程序建立AST酶催化活性参考方法,并对其精密度、线性范围和干扰因素进行方法学评价,用参考方法测定c.f.a.s多项校准液,并建立本室的参考范围.同时用参考方法对制备的酶校准品进行准确定值,按照NCCLS EP9-A方案比较40份人血清用酶校准品校准的常规方法和参考方法AST结果.结果我室初步建立的37℃ AST参考方法相应方法学参数,如下:总CV 0.89%-1.12%、线性范围1.3-300 U/L.AST测定结果在48 U/L左右偏差超过5%的干扰物浓度分别为游离胆红素256.5 μmol/L、结合胆红素205.2 μmol/L;AST在165 U/L左右测定结果偏差超过5%的干扰物浓度分别为游离胆红素307.8 μmol/L、结合胆红素342 μmol/L.血红蛋白在1 g/L时对两种浓度的AST干扰均大于5%.而甘油三酯在10 mmol/L以下对两种浓度的AST的干扰仍然小于5%.用参考方法测定c.f.a.s多项校准液AST结果128.5 U/L,比靶值高0.5 U/L.本室参考范围AST:男性10-40 U/L;女性7-40 U/L.健康男女AST有显著差别(P＜0.05).用制备的酶校准品校准的常规方法和参考方法进行比较,相关良好(r2=0.9992).前者结果与后者相对偏倚在±10%之内.结论我室的参考方法基本建立,采用参考方法为酶校准品定值,可以提高血清AST测定结果的准确性和可比性.【总页数】6页(P612-617)【作者】齐志宏;邸茜;宋耀虹;张芳;赵芳;苏玉君;嵇巍;谢少伟【作者单位】中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院,检验科,北京,100032;中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院,检验科,北京,100032;中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院,检验科,北京,100032;中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院,检验科,北京,100032;中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院,检验科,北京,100032;中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院,检验科,北京,100032;中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院,检验科,北京,100032;中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院,检验科,北京,100032【正文语种】中文【中图分类】Q55【相关文献】1.γ-谷氨酰转肽酶37℃参考方法的建立在临床中的初步应用 [J], 张莹;周铁成;童开;岳乔红;郝晓柯2.天门冬氨酸氨基转移酶参考方法建立及性能评价 [J], 迟珊;沈默;杨桂花;张曼3.天门冬氨酸氨基转移酶“改良参考方法”的建立及其用于测定结果的可比性研究[J], 庄俊华;郑松柏;王建兵;黄宪章;马艳;徐宁;周华友;陈茶4.37℃α-淀粉酶参考方法的建立及其应用研究 [J], 高学慧;齐志宏;秦续珍;赵芳;叶阿里;徐二木;邱玲;宋耀虹5.谷丙转氨酶37℃参考方法的建立及其应用研究 [J], 齐志宏;邸茜;赵芳;宋耀虹;张芳;嵇巍;谢少伟;苏玉君因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
天门冬氨酸基转移酶50丙氨酸氨基转移酶110 -回复
天门冬氨酸基转移酶50丙氨酸氨基转移酶110 -回复天门冬氨酸基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）是两种常见的酶类，它们在细胞代谢中发挥重要作用。
本文将逐步解释AST和ALT的功能、测量方法、临床意义以及与它们相关的疾病。
AST是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，主要参与氨基酸代谢过程。
它在肝脏、心肌、肾脏和骨骼肌等组织中特别丰富。
当这些组织受损或发生疾病时，AST就会释放入血液中，导致其浓度上升。
另一方面，ALT 主要存在于肝细胞中，其浓度也可通过血液检测进行评估。
测量AST和ALT浓度的方法通常是通过血液检查。
这种检查被广泛应用于临床实践中，可以帮助医生评估肝脏和心脏等重要器官的功能。
正常情况下，AST和ALT的浓度应该很低，一旦它们的浓度升高，就表明可能存在细胞损伤。
由于这两种酶都主要存在于肝脏中，因此AST和ALT的测量可以成为评估肝功能的指标。
肝炎、肝硬化、肝癌和药物性肝损伤等疾病都会导致AST和ALT浓度升高。
此外，心肌梗死、心肌病和心肌炎等心脏疾病也可能引起AST和ALT浓度的升高。
通过测量血液中AST和ALT的浓度，医生可以对这些疾病的严重程度进行评估和监测治疗效果。
值得注意的是，AST和ALT浓度的上升并不总是有问题的迹象。
在剧烈运动、贫血和某些药物使用等情况下，这两种酶的浓度可能会暂时性地升高。
因此，在评估疾病时，医生需要综合考虑其他因素，如患者的临床症状和其他相关检测结果。
在临床实践中，AST和ALT的测量通常作为常规血液检查的一部分进行。
这种检查不仅可以帮助诊断和监测疾病，还可以评估患者的整体健康状况。
虽然AST和ALT浓度升高可能意味着器官损伤和疾病，但它们不能单独作为诊断的依据。
在评估AST和ALT浓度时，医生需要结合临床症状、其他血液检测结果和影像学检查等信息进行综合分析。
总之，AST和ALT是两种重要的酶类，参与细胞代谢过程。
它们的浓度测定可以帮助评估肝脏和心脏等器官的健康状况，对于诊断和监测疾病具有重要意义。
改良ALT和AST参考方法的建立、评价及应用的开题报告
改良ALT和AST参考方法的建立、评价及应用的开题报告一、研究背景ALT（丙氨酸氨基转移酶）和AST（天门冬氨酸氨基转移酶）是常见的肝功能指标之一，其参考值在临床应用中具有重要意义。
然而，现有的ALT和AST参考值的建立并不完善，该参考值在不同年龄、性别、种族等方面存在较大的差异，因此不同地区、不同医院甚至不同临床科室使用的参考值不尽相同，给临床应用带来了很大的不便和不确定性，同时也对诊断结果产生一定的影响。
为了更准确、科学地确定ALT和AST的参考值，从而提高临床诊断的准确性和可靠性，需要进行更全面、深入的研究和评价。
二、研究目的本研究旨在建立ALT和AST参考值的改良方法，对建立的参考值进行评价，并探讨其在临床应用中的价值和应用前景。
三、研究内容和方法3.1 研究内容（1）收集并整理现有的ALT和AST参考值的相关文献资料，对其进行分析和比较，探讨其存在的问题和不足之处，以及改良的可能性和可行性。
（2）利用大样本量、多因素分析等方法，建立新型的ALT和AST参考值，考虑年龄、性别、种族、生理和病理因素等多种因素对参考值的影响。
（3）对新型参考值进行评价，包括与现有参考值的比较、合理性分析、临床试用等方面的评价。
（4）探讨新型参考值在临床应用中的价值和应用前景，以及可能的改进和完善方向。
3.2 研究方法（1）文献资料收集：采用数据库检索的方法，检索相关领域的文献资料，包括专业文献、学位论文、研究报告等。
（2）样本选择和数据采集：采用随机抽样的方法，选择不同年龄、性别、种族、地域的人群作为样本，采集其ALT和AST检测数据，并对其生理和病理状态进行调查和记录。
（3）数据统计与分析：采用SPSS软件对收集的数据进行统计和分析，包括平均数、标准差、方差等描述性统计方法，以及单因素方差分析、多元方差分析等多种分析方法，建立新型参考值。
（4）评价方法：对新型参考值进行与现有参考值的比较、合理性分析、临床试用等方面的评价。
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图３ＡｓＴ线性范围预实验
图４ＡＬＴ线性范围预实验
从图３和图４可见，稀释点和测定值间的关系为抛物曲线，在第一个稀释点到第四稀释点之间，曲线近似上升的直线，第五点达到曲线的最高点，从第五点开始，曲线呈下降趋势。
可以推断ＡｓＴ、ＡＬＴ（３７℃）ｓ０Ｐ线性范围大致在Ｏ一３００ｕ几之问。
ＡｓＴ、ＡＬＴ（３７℃）ＳＯＰ线性确证实验分别使用第二组稀释样本，相应的测定原始结果分别见表１８、表１９。
按照ＮｃｃＬｓＥＰ一６中的数据处理方法”１，将每个标本（Ｘ１到ｘ４）四次测定的结果排列在Ｙ卜Ｙ４，进行离群点检查。
ＡｓＴ、ＡＬＴ（３７℃）ｓ０Ｐ离群点检查结果分别见表２０、表２１。
ＡＳＴ、ＡＬＴ（３７℃）ＳＯＰ线性确证理论稀释值一测定值图分别见图５、图６。
图５ＡＳＴ线性确证实验
表２０ＡＳＴ离群点检查结果
４１
表１９
ＡＬＴ线性确证实验原始数据
样品号
理论稀释值———————————————壅型堕』坐旦Ｌ——＝—＿—————．＝ｉ＿
（ｕ／Ｌ）
第一次
第二次
第三次
第四次
爿
０７５１５０２２５３００
０．３８Ｏ．１９
０．１９
０．００Ｏ．１９７６．２３
７５．９８
７５．５６
７５．２０７５．７４１５１．００
１５０．９６１５０．５９１５０．２３
１５０．７６２２５．３６
２２５．２３２２４．２８
２２４．９８
２２４．９６３００．０６
２９９．８５
２９８．９８
２９８．６８
２９９．３９
图６ＡＬＴ线性确证实验
表２１ＡＬＴ离群点检查结果
界限值Ｐ。
；＝０．７６５，Ｐ。
＝Ｏ．８８９
４３。