脂肪酸提取试剂

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脂肪酸的测定

脂肪酸的测定

2.2.1.脂肪酸的变化分析试剂:0.3%甲醛、6 mol/l HCl-CH3OH溶液、三氯甲烷方法:GC—MS联用分析测定,步骤如下:(1)菌体的培养与收集Ⅰ组实验菌株用YPD液体培养基培养,在培养基中添加一定量的抗冻保护剂,接种后放入30℃、150 r/min的摇床中培养24 h。

细胞振荡培养至生长对数中期,移取适量细胞悬浮液至-30℃冰箱冷冻7d,取出30℃下解冻5-10min,用0.3%甲醛灭活后,4000 r/min下离心5 min,弃去上清液,用蒸馏水洗涤,离心收集细胞,-18℃冷冻,冷冻真空干燥制得干细胞后备用。

空白样用0.3%甲醛灭活后,4000 r/min下离心5 min,弃去上清液,用蒸馏水洗涤,离心收集细胞,-18℃冷冻24h,冷冻真空干燥制得干细胞后备用。

Ⅱ组实验菌株用于面包冷冻面团的制备,添加抗冻保护剂,于-20℃冷冻30d 后取出解冻,取20g解冻后的面团,分散于180ml无菌水中,震荡30min,静置15min,离心并取上清液。

用0.3%甲醛灭活后,4000 r/min下离心15 min,弃去上清液,用蒸馏水洗涤,离心收集细胞,-18℃冷冻,冷冻真空干燥制得干细胞后备用。

空白样则不添加抗冻保护剂,其余处理方法一样。

(2)脂肪酸的甲基化与提取取50 mg冻干细胞加入6 mol/l HCl-CH3OH溶液2 ml,置100℃的条件下盐酸水解甲基化3 h,溶液呈现棕褐色(或黑褐色),取出,置室温下冷却。

加入正己烷1.5ml振荡。

经4000 r/min离心10min,收集上清液再加入正己烷1.5ml 抽提一次,合并两次上清液,加入蒸馏水3ml,经4000 r/min离心10 min,收吹干,加入10μl三氯甲烷制备脂肪酸酯化液。

集上清液于离心管中。

用流动N2(3)薄层层析用玻璃毛细管取脂肪酸酯化液点在硅胶G-TLC薄层板上,以正己烷+无水乙醚(1+1)为展层系统,待层析液至硅胶板上缘后立即取出薄层板,风干。

sigma 游离脂肪酸使用说明书

sigma 游离脂肪酸使用说明书

sigma 游离脂肪酸使用说明书一、产品介绍sigma游离脂肪酸是一种常用的化学试剂,可广泛应用于生化实验室中的各种研究和分析领域。

该产品为透明液体,无色或微黄色,是高纯度游离脂肪酸的混合物。

二、产品规格sigma游离脂肪酸可提供多种规格选择,包括不同链长和饱和度的脂肪酸。

请在购买前查阅相关产品目录,确认所需规格并咨询供应商获取详细信息。

三、存储条件sigma游离脂肪酸应保存在阴凉干燥的地方,远离直接阳光照射和高温。

为保持其稳定性和活性,建议在-20℃下存储,并避免多次冻融。

在正确的储存条件下,该产品的保质期为24个月。

四、实验室安全操作1.使用前请穿戴合适的防护实验服、手套和面部防护,并确保操作台面洁净。

2.避免吸入产品蒸汽或粉尘,如果发生吸入,请迅速到空气清新处休息。

3.避免接触皮肤和眼睛,如不慎接触,请立即用大量清水冲洗,并寻求医疗救助。

4.请勿摄入该产品,如不慎摄入,请立即就医并出示产品说明书。

五、实验操作指南1.使用前请确保实验室操作台面整洁,并准备好所需实验器材。

2.根据实验需要,准备适量的sigma游离脂肪酸。

3.请根据实验需求选择适当的溶剂进行溶解。

sigma游离脂肪酸在一些有机溶剂中更容易溶解,如乙醇、氯仿等。

4.溶解后的溶液可以直接用于实验,或根据实验步骤需要进一步处理。

5.实验结束后,请妥善处理废液和废弃物,并遵守本地环境保护法规。

六、注意事项1.本产品仅供科研用途,不得用于药物生产或人体内使用。

2.使用前请阅读并理解本说明书,并根据实际情况合理操作。

3.建议在进行实验前进行充分的资料搜集和前期试验。

4.如有产品使用问题或其他疑问,请咨询相关领域的专业技术人员或即时联系供应商。

游离脂肪酸测定方法

游离脂肪酸测定方法

游离脂肪酸检测(Fatty Acids Content)
游离脂肪酸检测试剂盒(FFA Assay Kit.Kit content Cu Reagent,Color reagent and standard)
实验准备
1.抽提剂配制:自备氯仿、正庚烷、甲醇,按照体积(氯仿:正庚烷:甲醇=28:21:1)配制抽提剂200ml,
4℃储存。

2.标准品配制:精确称取82.06mg标准品(Palmitic acid,分子量=256.44),溶于抽提剂中,终体积50ml,
终浓度64mM,密封4℃保存。

测定方案
1.用抽提剂将64mM标准品新鲜稀释为6.4、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1mM。

现用现配。

2.取1.5mlAxygen进口离心管,加入50µl样品、标准品、空白对照。

3.向管中加1.2ml抽提剂,盖紧盖子,悬涡混合器振荡30秒。

4.加0.2ml铜试剂Cu Reagent,振荡30秒,各管混匀强度时间保持一致。

5.室温放置20min。

6.室温2000g离心5min。

7.取1ml上层相转移到新离心管。

8.向新管内加0.5ml显色试剂Color Reagent。

混匀,室温孵育5min。

9.用1-cm光径玻璃比色杯读取550nmOD值。

10.做标准曲线,计算FFA浓度。

食品中脂肪酸的测定方法(食品安全国家标准)

食品中脂肪酸的测定方法(食品安全国家标准)

食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定1范围本标准规定了食品中脂肪酸含量的测定方法。

本标准适用于食品中脂肪酸含量的测定。

本标准适用于食品中总脂肪、饱和脂肪(酸)、不饱和脂肪(酸)含量的测定。

第一法内标法2原理加入内标物的样品经水解-乙醚溶液提取其中的脂肪后,在碱性条件下皂化和甲酯化,生成脂肪酸甲酯,经毛细管气相色谱分析,内标法定量测定脂肪酸甲酯含量。

依据各种脂肪酸甲酯含量和转换系数计算出总脂肪、饱和脂肪(酸)、单不饱和脂肪(酸)、多不饱和脂肪(酸)含量。

3试剂和材料注:除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1试剂3.1.1盐酸(HCl)。

3.1.2氨水(NH3·H2O)。

3.1.3焦性没食子酸(C6H6O3)。

3.1.4乙醚(C4H10O)。

3.1.5石油醚:沸程30℃~60℃。

3.1.6乙醇(C2H6O) (95%)。

3.1.7甲醇(CH3OH):色谱纯。

3.1.8氢氧化钠(NaOH)。

3.1.9正庚烷[CH3(CH2)5CH3]:色谱纯。

3.1.10三氟化硼甲醇溶液,浓度为15%。

3.1.11无水硫酸钠(Na2SO4)。

3.1.12氯化钠(NaCl)。

3.2试剂配制3.2.1盐酸溶液(8.3 mol/L):量取250 mL盐酸,用110 mL水稀释,混匀,室温下可放置2个月。

3.2.2乙醚石油醚混合液(体积比1:1):取等体积的乙醚和石油醚,混匀备用。

3.2.3氢氧化钠甲醇溶液(2%):取2 g氢氧化钠溶解在100 mL甲醇中,混匀。

3.2.4饱和氯化钠溶液:称取360 g氯化钠溶解于1.0L水中,搅拌溶解,澄清备用。

3.3标准品3.3.1十一碳酸甘油三酯。

3.3.2混合脂肪酸甲酯标准溶液(37种)。

3.3.3单个脂肪酸甲酯标准:丁酸甲酯C4:0(C5H10O2)CAS NO. 623-42-7;己酸甲酯C6:0(C7H14O2)CAS NO.106-70-7;辛酸甲酯C8:0(C9H18O2)CAS NO.111-11-5;癸酸甲酯C10:0(C11H22O2)CAS NO.110-42-9;十一烷酸甲酯C11:0(C12H24O2)CAS NO.1731-86-8;月桂酸甲酯C12:0(C13H26O2)CAS NO.111-82-0;十三烷酸甲酯C13:0(C14H28O2)CAS NO.1731-88-0;肉豆蔻酸甲酯C14:0(C15H30O2)CAS NO.124-10-7;肉豆蔻脑酸甲酯C14:1(C15H28O2)CAS NO.56219-06-8;十五烷酸甲酯C15:0(C16H32O2)CAS NO.7132-64-1;顺-10-十五碳烯酸甲酯C15:1(C16H30O2)CAS NO.90176-52-6;棕榈酸甲酯C16:0(C17H34O2)CAS NO.112-39-0;棕榈油酸甲酯C16:1(C17H32O2)CAS NO.1120-25-8;十七烷酸甲酯C17:0(C18H36O2)CAS NO.1731-92-6;顺-10-十七碳烯酸甲酯C17:1(C18H34O2)CAS NO.75190-82-8;硬脂酸甲酯C18:0(C19H38O2)CAS NO.112-61-8;反油酸甲酯C18:1n9t(C19H36O2) CAS NO.1937-62-8;油酸甲酯C18:1(C19H36O2)CAS NO.112-62-9;反亚油酸甲酯C18:2n6t(C19H34O2)CAS NO.2566-97-4;亚油酸甲酯C18:2n6c(C19H34O2)CAS NO.112-63-0;γ亚麻酸甲酯C18:3n6(C19H32O2)CAS NO.16326-32-2;花生酸甲酯C20:0(C21H42O2)CAS NO.1120-28-1;顺-11-二十碳烯酸甲酯C20:1(C20H38O2)CAS NO.2390-09-2;亚麻酸甲酯C18:3n3(C19H32O2)CAS NO.301-00-8;山嵛酸甲酯C22:0(C23H46O2)CAS NO.929-77-1;二十一烷酸甲酯C21:0(C22H44O2) CAS NO.6064-90-0;顺-11,14-二十碳二烯酸甲酯C20:2(C21H38O2) CAS NO.2463-02-7;顺-8,11,14-二十碳三烯酸甲酯C20:3n6( C21H36O2) CAS NO.21061-10-9;顺芥子酸甲酯C22:1n9(C23H44O2) CAS NO.1120-34-9;顺-11,14,17-二十碳三烯酸甲酯C20:3n3(C21H36O2) CAS NO.55682-88-7;花生四烯酸甲酯C20:4n6(C21H34O2) CAS NO.2566-89-4;二十三碳酸甲酯C23:0(C24H48O2) CAS NO.2433-97-8;顺-13,16-二十二碳二烯酸甲酯C22:2(C23H42O2) CAS NO.61012-47-3;木蜡酸甲酯C24:0(C25H50O2) CAS NO.2442-49-1;顺-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸甲酯C20:5(C21H32O2) CAS NO.2734-47-6;神经酸甲酯C24:1(C25H48O2) CAS NO.2733-88-2;顺-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸甲酯C22:6(C23H34O2)CAS NO. 2566-90-7。

游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)

游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)

货号: QS2400 规格:50管/24样游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量测试盒可见分光光度法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:FFA既是脂肪水解的产物,又是脂肪合成的底物。

FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关,也可反映食物贮藏中的品质变化。

测定原理:在弱酸性条件下,FFA与铜盐反应生成铜皂,在715nm处有特征吸收峰,在一定范围内游离脂肪酸含量与显色程度呈线性关系。

自备实验用品及仪器:研钵、台式离心机、震荡仪、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿。

试剂组成和配制:试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体25mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体25mL×1瓶,4℃保存。

样品中FFA提取:2、血液:将所取血液,室温静置1 h 后,于4 ℃ 离心机3500 rpm离心15min,取上清0.1mL,加1.2mL试剂一,震荡提取3h,8000g,4℃离心10min,取上清液待测。

3、组织:组织用蒸馏水冲洗干净后,用吸水纸吸取表面水分,捣碎后按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~12的比例(建议称取约0.1g组织,加入1.2mL试剂一)加入试剂一,震荡提取3h,8000g,4℃离心10min,取上清液待测。

4、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1.2的比例(建议500万细胞加入1.2mL试剂一)加入试剂一,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声2秒,间隔3秒,总时间3min);震荡提取3h,然后8000g,4℃,离心10min,取上清待测。

测定操作:1. 分光光度计预热30 min,调节波长到715 nm。

2. 对照管:取上清液1mL,加0.5mL试剂二,充分震荡5min,室温静置5min,取上层0.8mL 于1mL玻璃比色皿,调零。

3. 测定管:取上清液1mL,加0.5mL试剂三,充分震荡5min,室温静置5min,取上层0.8mL 于1mL玻璃比色皿,测定吸光值,记为A。

生物样品中短链脂肪酸的提取与测定

生物样品中短链脂肪酸的提取与测定

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生物样品中短链脂肪酸的提取与测定
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( $ $ 南京大学生命分析化学教育部重点实验室,江苏 南京 !$""/3 ; ! $ 南京军区南京总医院普通外科研究所,江苏 南京 !$"""! ) 摘要: 综述了生物样品 ( 主要为粪便、 尿液、 血液和培养液) 中 短 链 脂 肪 酸 的 提 取 与 测 定 方 法, 讨论了各种样品提取 方法的优缺点, 并比较了气相色谱、 高效液相色谱和毛细管电泳分离检测的优点和局限性。引用文献 #3 篇。 关键词: 短链脂肪酸; 生物样品; 提取方法; 气相色谱; 高效液相色谱; 毛细管电泳; 综述 中图分类号: 7#2,0 0 文献标识码: 8 0 0 文章编号: $""" &,.$3 ( !""# ) "$ &"",$ &".0 0 栏目类别: 专论与综述
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第 !" 卷
异性不强, 准确度差。随着色谱技术的发展, 气相色 谱 ( !" ) 、 高效液相色谱 ( #$%" ) 以及毛细管电泳 已广泛用于 ’"() 的测定。但极性大、 挥发性 ( "& ) 强和水溶性大 的 特 点 使 ’"() 难 以 定 量, 生物基质 ’"() 的复杂性也更增加了定量工作的难度。同 时, 的测定首先需要对样品进行提取纯化, 因此, 提取纯 化方式的选择也一直是研究热点。
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脂肪酸抽提方法

脂肪酸抽提方法

脂肪酸抽提方法抽提步骤:(1)刮菌:将菌在216L平板上活化划出单菌后,挑单个菌落转接到Marine Agar 培养基(BD;Difco;Ref:212185),28℃避光培养48 h 左右(有一定浓度,且较为新鲜),用灭菌的长牙签将菌落刮取到脂肪酸测定管的底部,菌的湿重不得少0.4 g;(也可将鲜菌冻干后,直接称取0.02g到测定管内)(2)皂化:加入1mL 试剂1 于测定管内,充入氮气5-10s后将管盖拧紧,涡旋振荡20 s;将测定管放入超声破碎仪内超声处理10 min,再充分振荡后放入100 ℃水浴锅内加热处理25 min;每隔5min取出振荡5-10s;处理结束后放入凉水中快速冷却;(3)甲基化:在测定管内加入2 mL 试剂2,迅速将管盖拧紧(反应将生成挥发性物质),涡旋振荡20s;80 ℃水浴10 min ;处理结束后放入凉水中快速冷却;(4)萃取:在测定管内加入1.25 ml的试剂3,将管盖拧紧,涡旋振荡10 min,使萃取更充分;静置3-5 min 待溶液分层后,用干燥洁净的玻璃吸管将下层溶液吸取掉,保留上层液相;(5)洗涤:在上述溶液中加入3mL 试剂4,将管盖拧紧,涡旋振荡3-5 min,静置10-15 min使溶液分层,(对于久置后仍不能分层的样品,则加入500μL的饱和NaCl溶液,振荡后再静止使其分层)用玻璃吸管取约2/3的上清加入GC 瓶内;盖紧瓶盖,脂肪酸样品制备完成。

附录:试剂1:NaOH 45g (certified ACS)甲醇150mL (色谱纯)ddW 150mL试剂2:HCl 325mL ( 6 mol/L )甲醇275mL (色谱纯)试剂3:正己烷200mL (色谱纯)甲基叔丁基醚200mL (色谱纯)试剂4:NaOH 10.8 g (certified ACS)ddW 900mL饱和NaCl溶液:NaCl40g (certified ACS)ddW 100mL。

脂肪酸标准品

脂肪酸标准品

脂肪酸标准品脂肪酸是构成脂肪的主要成分,对于人体健康具有重要意义。

脂肪酸标准品作为一种重要的化学试剂,在脂肪酸分析领域具有广泛的应用。

本文将就脂肪酸标准品的定义、分类、应用以及选购注意事项进行探讨。

一、脂肪酸标准品的定义。

脂肪酸标准品是指已知结构和纯度的脂肪酸化合物,通常用于分析测试中作为定量分析的参照物质。

脂肪酸标准品的纯度、结构和稳定性对于脂肪酸分析的准确性至关重要。

二、脂肪酸标准品的分类。

根据其来源和性质,脂肪酸标准品可以分为天然脂肪酸标准品和合成脂肪酸标准品。

天然脂肪酸标准品主要来源于动植物的脂肪中提取,具有较高的生物活性和代谢特性;而合成脂肪酸标准品则是通过化学合成手段得到,其结构和纯度可以进行精确控制。

三、脂肪酸标准品的应用。

脂肪酸标准品在食品、医药、化工等领域具有广泛的应用价值。

在食品行业,脂肪酸标准品常用于食用油脂的质量控制和检测;在医药领域,脂肪酸标准品则可用于药物的研发和质量监控;在化工行业,脂肪酸标准品也被广泛应用于合成洗涤剂、润滑油等产品的生产过程中。

四、脂肪酸标准品的选购注意事项。

在选购脂肪酸标准品时,需要注意以下几点,首先,确保选择具有良好信誉和资质的供应商,以保证产品的质量和稳定性;其次,了解产品的纯度、结构和稳定性等关键参数,选择符合实验要求的标准品;最后,妥善保存和使用脂肪酸标准品,避免受潮、受热和受光等因素影响其质量。

综上所述,脂肪酸标准品作为一种重要的化学试剂,在脂肪酸分析领域具有重要的应用价值。

选择合适的脂肪酸标准品,并合理使用和储存,将有助于提高脂肪酸分析的准确性和可靠性,推动相关领域的科研和产业发展。

GC脂肪酸分析MIDI试剂的准备和抽提步骤分解

GC脂肪酸分析MIDI试剂的准备和抽提步骤分解

TSBA培养基是针对嗜氧菌(TSBA Media for Aerobes: TSBA6数据库)Trypticase Soy Broth Agar(TSBA)培养基是嗜氧菌标准的培养基。

利用以下的配方作为TSBA培养基。

供货商被建议在附加数据(Appendix A)中。

●混合在2升的锥形瓶●加热并搅拌至完全混合和琼脂(Agar)完全溶解●在温度121度及15psi下高压灭菌15分钟注意事项:不可过度加热培养基,使用高压灭菌器须有温度及时间的设定装置。

●在水浴中冷却至60度●加20-25 ml在溶解的琼脂(Agar)分装至无菌100 x 15mm直径的培养皿中,琼脂须有2.5-3.2mm深。

●允许琼脂在室温下凝固,但如果培养基想储存一段时间,必须在24小时内包装在无菌装置中。

它们可以保存在冷藏中直到使用。

注意事项——关于商业化已备好的TSBA培养基:TSBA可以从BBL购买,但需要指定货号,见附加数据(Appendix A)。

使用其它供应商提供的TSBA培养基可能会导致结果不一致,用户需要用ATCC菌株验证培养基是否效果相当。

试剂的准备 (Reagent Preparation)四种试剂要求是皂化细胞,脂化,萃取和基本洗涤脂肪酸的萃取物。

试剂应准备在干净,棕色及可标示一公升的瓶子。

放置一个Teflon-coated搅动台在每个瓶子上去添加在混合时。

只有Teflon和玻璃可以接触到试剂。

瓶子可以重新使用不须要重新浸润。

自动分注的增加备置速度但是必须准备和确定适当的操作在每批样品使用前。

确认分注试剂使用分注试剂在有刻度的量筒以达到校正效果。

以下的配方准备试剂约够300个样品或许可以在先前调整以够配合实验室的样品量,试剂准备用VPI Anaerobe Method 和数据库在Appendix B 中。

注意事项: 试剂1和4是腐蚀性和试剂2是酸性的全程配戴安全眼镜及手套,hexane 及methyl-tert-butyl ether (MTBE)在试剂3是可燃性的。

磷脂脂肪酸提取

磷脂脂肪酸提取

磷脂脂肪酸分析实验原理:磷脂脂肪酸是几乎所有活体细胞膜的主要成分,周转速率快且随细胞死亡而迅速降解,脂肪酸结构与种类多样,对环境因素敏感,分析结果重复性较好。

目前已发现的磷脂物质有1000多种。

依据极性有强到弱,磷脂可分为磷脂脂肪酸、糖脂脂肪酸和中性脂肪酸。

脂肪酸通常被分为6类,直链顺单烯(cis-)、直链反单烯(tran-)、支链饱和、环状及多烯脂肪酸。

脂肪酸经甲酯化后形成脂肪酸甲酯(FAMEs),它们又可分为:羟基取代的FAMEs;酯连接羟基取代的FAMEs;非酯连接羟基取代FAMEs;饱和FAMEs;单不饱和FAMEs;酯连接多聚不饱和FAMEs;非酯连接不饱和FAMEs。

仪器及设备气相色谱、MIDI软件数据库、氮吹仪、固相萃取装置、通风橱、离心机、离心管(Teflon 盖子),试管(Teflon衬垫)、移液管、SPE硅胶柱(6ml),高纯氮气,一次性吸管,水浴锅试剂柠檬酸缓冲液:柠檬酸3.75g,柠檬酸钠4.41g,用蒸馏水定容至100ml。

甲醇、氯仿、盐酸、丙酮、氢氧化钠、正己烷、甲基叔丁基醚(HPLC级)试剂1 皂化试剂氢氧化钠45.0gm甲醇(HPLC级) 150.0ml蒸馏水150.0ml试剂2甲基化作用试剂:6N 盐酸325.0ml甲醇275.0ml试剂3 抽提溶剂:正己烷(HPLC级) 200.0ml甲基特丁醚(HPLC级) 200.0ml试剂4 洗脱液氢氧化钠10.80gm蒸馏水900.00ml实验步骤:1、称取2g新鲜土壤于50ml离心管,加入12ml提取液(甲醇:氯仿:柠檬酸缓冲液=2:1:0.8=6.3:3.2:2.5ml)(在加入过程中会有机无机发生分层,建议分别加入),涡旋振荡1min,然后室温下往复式振荡2h,静止10min。

2、室温下5000rpm离心10min,上清转入分液漏斗。

3、再加10ml提取液于离心管(甲醇:氯仿:柠檬酸缓冲液=2:1:0.8=5.3:2.6:2.1ml),涡旋振荡1min,然后室温下往复式振荡30min,静止10min。

脂肪与脂肪油测定操作规程

脂肪与脂肪油测定操作规程

脂肪与脂肪油测定操作规程一、范围:本标准规定了脂肪与脂肪测定的检测方法和操作要求;适用于本公司脂肪与脂肪油的质量检测。

二、引用标准:《中华人民共和国药典》2000年版二部。

三、试剂:1、氢氧化钾(AR)2、甘油(AR)3、硫酸(AR)4、甲基橙(AR)5、氢氧化钠(AR)6、盐酸(AR)7、对甲苯碘酸(AR)8、醋酸乙酯(AR)9、吡啶(AR)10、溴化碘(AR)11、氯仿(AR)12、硫代硫酸钠(AR)四、仪器与用具1、迥流装置五、操作步骤:1、脂肪酸凝点的测定1.1 脂肪酸的提取:bc 20%(g./g)氢氧化钾的甘油溶液75g,置800ml烧杯中,加供试品50g,于1500C在不断搅拌不皂化15分钟,放冷至约1000C,加入新沸的水500ml,搅匀,缓缓加入硫酸溶液(1-4)50ml,加热至脂肪酸明显分离为一个透明层;趁热将脂肪酸移入另一烧杯。

中,用新沸的水反复洗涤,至洗液加入甲基橙指示液显黄色,趁热将澄清的脂肪酸入干燥的小烧杯中,加无水乙醇5ml,搅匀,用小火加热至无小气泡逸出,即得。

1.2 凝点的测定取按上法制成的干燥脂肪酸,照凝点测定法(见凝点测定检验操作规程)测定。

2、酸值的测定酸值系指中的脂肪、脂肪油或其他类似物质1g中含有的游离脂肪酸所需氢氧化钾的重量(mg),但在测定时可采用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)进行滴定。

除另有规定外,按表中规定的重量,精密称取供试品,置250ml锥形瓶中,加乙醇-乙醚(1:1)混合液[临用前加酚酞指示液1.0ml,用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)调至微显粉红色]50ml,振摇使完全溶解(如不易溶解,可缓慢加热回流使溶解),用Array氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定,至粉红色持续30秒钟不褪。

以消耗氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)的容积(ml)为A,供试品的重量(g)为G,照下式计算酸值:A×5.61供试品的酸值= —————G滴定酸值在10以下的油脂时,可用10ml的半微量滴定管。

脂肪酸测定方法

脂肪酸测定方法

脂肪酸组分分析(6)提取:1、准确称取2 g样品,用研钵研磨至细糊状,加入5 mL提取液充分匀浆,小心转移至50 mL离心管中,残渣用15 mL提取液充分洗涤后合并至离心管中;2、密封后40 ℃水浴条件下超声波提取30 min(期间可振荡混匀2-3次),然后室温条件下4,000×g离心5 min;3、将上层有机相转移至50 mL离心管中,原管再加入5 mL正己烷重复提取10 min,加入5 mL蒸馏水,充分振荡混匀,然后室温条件下4,000×g离心5 min;4、将上层有机相合并至50 mL离心管中,加入适量无水硫酸钠充分振荡混匀,然后室温条件下4,000×g离心5 min;5、将有机相转移至50 mL蒸发瓶中蒸干,加入500 μL二氯甲烷(含0.1% BHT),用枪头轻轻吸打至完全溶解后转移至2 mL离心管中,蒸发瓶用500 μL二氯甲烷再洗涤一次,合并有机相并混匀,然后室温条件下4,000×g离心5 min备用;甲酯化:6、取2 mL甲酯化试剂(14% BF3-CH3OH:CH2Cl2:CH3OH=25:20:55,v/v/v;含0.1%BHT)于带密封内衬垫的10 mL螺帽离心管中(防止有机溶剂蒸发),准确加入200 μL油脂轻轻吸打混匀,密封后100 ℃沸水浴甲酯化30 min;7、将离心管转移至4 ℃冰箱中冷却5 min,依次加入2 mL正己烷和2 mL蒸馏水充分振荡混匀,然后4 ℃条件下4,000×g离心5 min;8、将上层有机相转移至2 mL离心管中,加入适量无水硫酸钠充分振荡混匀,然后4 ℃条件下4,000×g离心5 min,将上层有机相转移至1.5 mL GC上样瓶中备用。

提取液:正己烷:丙酮:无水乙醇=50:25:25,v/v/v;含0.1% BHT。

脂肪酸值测定方法

脂肪酸值测定方法

脂肪酸值测定方法
脂肪酸值的测定方法主要包括以下步骤:
1. 样品提取:称取适量样品,加入适量的甲醇/CH2Cl2(1:3)混合溶液,
摇匀后进行超声抽提。

取出离心管进行离心,收集上清液,重复几次,直至萃取完成。

2. 皂化:在萃取液中加入适量的碱溶液(如6%KOH的甲醇溶液),进行
碱水解。

然后加入正己烷进行萃取,弃去上层正己烷萃取液,重复几次,直至皂化完成。

3. 衍生化:将上述萃取液转移到带盖玻璃管中,用氮气吹干后,加入适量的衍生化试剂(如BF3-MeOH),密闭后在一定温度下加热一段时间。

待样
品冷却后,加入适量的盐溶液,用正己烷萃取,转移至进样瓶中,氮气吹干,待分析。

4. 色谱分析:在气相色谱仪上进行色谱分析,使用合适的色谱柱、升温程序、进样口温度等条件,测定样品中脂肪酸的值。

5. 结果计算与评价:根据色谱图中的峰面积或峰高,计算脂肪酸值。

可以使用外标法或内标法进行计算。

最后对结果进行评价,与标准值或参考值进行比较,评估样品的品质和安全性。

请注意,在进行脂肪酸值测定时,需要注意样品的保存和实验操作的准确性,以保证结果的可靠性和准确性。

同时,具体的操作步骤和试剂使用量等参数需要根据实验要求和实际情况进行调整。

脂肪酸值的测定

脂肪酸值的测定

脂肪酸值的测定一﹑实验原理脂肪酸溶于有机溶剂,通常利用无水乙醇来萃取样品中的脂肪酸,然后用标准氢氧化钾溶液滴定。

从而求得脂肪酸值。

二、仪器和试剂1.试剂0.01mol/L KOH或(NaOH)乙醇 -(95%)溶液;先配置约0.5 mol/L KOH,标定,然后用移液管移取10ml,用95%乙醇稀释至500ml.无水乙醇95%乙醇1g/100ml酚酞乙醇溶液:1.0g酚酞溶于100ml95%乙醇溶液中。

2.仪器具口磨口塞锥形瓶 150ml 、25ml比色管、10ml移液管、50ml移液管、微量袖滴定管、表面皿、感量0.01g天平、漏斗、电动振荡器三、操作步骤1.试样制备从平均样品中分取样品约80g,粉碎,95%粉碎试样通过0.45mm孔径筛。

2.浸出,取试样10g±0.01g于150ml具塞锥形瓶中,加入50ml无水乙醇,加塞,振荡几秒后,打开塞子放气,再盖紧瓶塞置电动振荡器振荡10min,将锥形瓶倾斜静置数分钟,让试样粉粒沉降在一角。

3.过滤:小心地倾析尽可能多的上清液于铺在玻璃漏斗上的多折滤纸中,用表面皿盖在漏斗上,以减少蒸发,弃去最初几滴滤液后,用25ml比色管准确收集滤液25ml。

4.滴定:将25ml滤液移入锥形瓶中,用50ml无二氧化碳蒸镏水分三次洗涤比色管,将洗涤液一并倒入锥形瓶中,加几滴酚酞批示剂,立即用0.01mol/LKOH-乙醇溶液滴定至呈现微红色,0.5min内不消失为止,记下所耗氢氧化钾乙醇溶液毫升数(V O)。

四、结果计算脂肪酸值按公式计算50 100X(脂肪酸值)=(V1- V0)c×56.1××25 m(100-M)式中:X----每100g干样所耗氢氧化钾的毫克数,mgV1----滴定试样用去的氢氧化钾乙醇溶液体积,mlV0----滴定25ml酚酞乙醇溶液用去氢氧化钾乙醇溶液的体积,ml50----浸泡试样用无水乙醇的体积,ml25----用于滴定的滤液体积,mlc-----氢氧化钾(或氢氧化钠)-乙醇溶液的浓度,mol/Lm-----试样质量,g56.1---1ml浓度为1mol/L的碱液相当KOH的质量,mgM-----试样水分百分率,%(测定小麦粉、玉米粉脂肪酸值时按湿基计算,不必减去水分)100----换算为100g试样质量双试验结果允许差为每100g干样所耗氢氧化钾不超过2mg,求其平均数,即为测定结果,测定结果取小数点后一位。

脂肪酸的实验制备与应用

脂肪酸的实验制备与应用

生物柴油制备
生物柴油制备原理:利用脂肪酸与 醇反应生成酯类物质,再通过酯交 换反应生成生物柴油。
生物柴油的优势:可再生、环保、 节能等。
添加标题
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添加标题
添加标题
生物柴油制备方法:酯交换法、直 接酯化法、酶催化法等。
生物柴油的应用领域:交通运输、 航空航天、工业等领域。
其他领域
表面活性剂:脂肪酸可以用 于制备表面活性剂,具有广 泛的工业应用。
食品工业
脂肪酸在食品工业中用作食品添加剂,提高食品的口感和稳定性。
脂肪酸可以用于生产人造黄油、起酥油等,提供更丰富的油脂来源。
脂肪酸在食品包装材料中也有广泛应用,如塑料、涂层等,可以提高食 品的保存性能。 脂肪酸还可以用于生产食品包装容器,如塑料袋、保鲜膜等,方便食品 的储存和运输。
化妆品行业
作为保湿剂,提高皮肤水分含量 作为柔润剂,改善皮肤粗糙度 作为抗氧化剂,延缓皮肤衰老 作为乳化剂,稳定化妆品体系
酸化水解法:将油脂与酸共热,使油脂水解成脂肪酸和甘油,再通过分离得到脂肪酸
皂化法:将油脂与碱共热,使油脂水解成肥皂和甘油,再通过分离得到脂肪酸
酯交换法:将油脂与醇在酸催化下进行酯交换反应,生成新酯和游离脂肪酸,再通过 分离得到脂肪酸
微生物发酵法:利用微生物发酵油脂原料,得到脂肪酸和甘油,再通过分离得到脂肪酸
实验过程中可能存在安全隐患,需要采取相应的防护措施
Part Four
脂肪酸的应用前景
市场需求
化妆品行业:作为保湿剂和 抗氧化剂,改善皮肤状况
食品工业:作为食品添加剂, 提高食品质量和口感
医药行业:用于药物生产和 制备,治疗多种疾病
农业领域:作为肥料和农药 的添加剂,提高作物产量和

如何进行常见的有机实验室脂肪酸的合成和鉴定

如何进行常见的有机实验室脂肪酸的合成和鉴定

如何进行常见的有机实验室脂肪酸的合成和鉴定有机实验室脂肪酸的合成和鉴定是有机化学实验室中常见的操作之一。

本文将介绍脂肪酸的合成和鉴定方法,以帮助读者更好地进行实验。

一、脂肪酸的合成脂肪酸的合成可以通过多种方法实现,以下是几种常见的实验室合成方法:1. 卡宾加成反应卡宾加成反应是一种合成脂肪酸的重要方法。

首先需要制备卡宾试剂,通常是通过Diazomethane与碱反应制备。

然后将卡宾试剂与合适的亲核试剂反应,生成脂肪酸。

2. 劳斯噻尔酯基化反应劳斯噻尔酯基化反应是另一种常用的脂肪酸合成方法。

该反应利用劳斯噻尔催化剂催化酸与醇反应生成酯。

通过选择合适的酸和醇结合,可以实现脂肪酸的合成。

3. 酰氯酯化反应酰氯酯化反应是一种直接的脂肪酸合成方法。

通过将脂肪酸与氯化亚砜反应生成脂肪酰氯,然后再与合适的醇反应得到酯。

以上是几种常见的脂肪酸合成方法,实验室中可以根据具体需求选择适合的合成方法。

二、脂肪酸的鉴定脂肪酸的合成完成后,需要进行鉴定以确定化合物的结构和纯度。

以下是常用的脂肪酸鉴定方法:1. 薄层色谱法薄层色谱法是一种简单而常用的脂肪酸鉴定方法。

将合成得到的脂肪酸样品与已知纯度的脂肪酸样品一起进行色谱分离,通过比较色谱带的迁移距离和颜色来确定待测脂肪酸的纯度和结构。

2. 质谱法质谱法是一种精确的脂肪酸鉴定方法。

通过将待测脂肪酸样品进行质谱分析,可以获取样品的质谱图谱。

通过比对质谱图谱与数据库中已知脂肪酸的质谱图谱,可以确定待测脂肪酸的分子式和结构。

3. 核磁共振法核磁共振(NMR)谱是一种常用的脂肪酸鉴定方法。

通过将待测脂肪酸样品进行核磁共振分析,可以获取样品的NMR谱图。

根据NMR 谱图中的峰值位置和积分,可以推断出样品的结构和纯度。

以上是几种常见的脂肪酸鉴定方法,实验室可以根据设备和条件选择适合的鉴定方法。

总结:本文介绍了常见的有机实验室脂肪酸的合成和鉴定方法。

脂肪酸的合成可以通过卡宾加成反应、劳斯噻尔酯基化反应和酰氯酯化反应等方法实现。

索莱宝游离脂肪酸(FFA)含量检测试剂盒说明书

索莱宝游离脂肪酸(FFA)含量检测试剂盒说明书

游离脂肪酸(FFA)含量检测试剂盒说明书微量法货号:BC0595规格:100T/96S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体100 mL×1瓶4℃保存试剂一液体50 mL×1瓶(自备)常温保存试剂二液体20mL×1瓶4℃保存试剂三粉剂×2瓶4℃保存标准品粉剂×1支常温保存溶液的配制:1、试剂一:实验前一天,取一个玻璃瓶,按照正庚烷:无水甲醇:氯仿=24:1:25的比例配置(自备),盖紧后混匀;2、试剂三:临用前每瓶加入13 mL无水乙醇充分溶解,4℃可保存一周;3、标准品:临用前把试剂转移到10 mL玻璃瓶中,加入7.8 mL氯仿充分溶解,即为5μmol/mL的棕榈酸标准溶液,4℃保存。

产品说明:FFA既是脂肪水解的产物,又是脂肪合成的底物。

血清中FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关。

FFA与铜离子结合形成脂肪酸铜盐,并溶于氯仿;利用铜试剂法测定铜离子含量,即可推算出游离脂肪酸含量。

技术指标:检出限:0.0390 μmol/mL线性范围:0.05-2 μmol/mL注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:研钵/匀浆器、冰、台式离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、一个50mL 玻璃瓶、一个10mL玻璃瓶、正庚烷、无水甲醇、氯仿(三氯甲烷)、无水乙醇和蒸馏水。

操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、血清中FFA测定:将所取血液,室温静置1 h 后,于4 ℃离心机3500 rpm离心15min,取上层血清置于4℃冰箱保存,待测。

第 1 页,共 3 页2、组织中FFA含量测定:组织用生理盐水冲洗干净后,用吸水纸吸取表面水分,称取约0.1g,加入1 mL提取液,匀浆后,8000rpm,4℃离心10min,取上清液,置冰上待测。

脂肪酸值的测定方法

脂肪酸值的测定方法

脂肪酸值的测定方法一、原理在室温下用无水乙醇提取玉米中的脂肪酸,用标准氢氧化钾溶液滴定,计算脂肪酸值。

二、试剂和材料除非另有规定,仅使用分析纯试剂。

1、无水乙醇。

2、酚酞-乙醇溶液(10g/L):1.0g酚酞溶于100ml 95%(V/V)乙醇。

3、c(KOH)=0.01mol/L氢氧化钾-95%乙醇标准滴定溶液的制备:准确移取10.0ml已经标定好的(同测酸价用的)0.1mol/L氢氧化钾标准溶液,用95%(V/V)乙醇稀释定容至100ml,临用前稀释。

三、仪器与设备1、具塞磨口锥形瓶:250ml。

2、移液管:50.0ml、25.0ml。

3、微量滴定管:5ml,最小刻度为0.02ml;10ml,最小刻度为0.05ml。

4、天平:感量为0.01g。

5、振荡器:往返式,振荡频率为100次/min。

四、分析步骤1、试样处理:称取约10g试样,精确到0.01g,于250ml具塞磨口锥形瓶中,并用大肚吸管准确加入50.0ml 无水乙醇,置往返式振荡器上振摇10min,频率为100次/min。

静置1~2min,在玻璃漏斗中放入折叠滤纸过滤,并加盖滤纸。

弃去最初几滴滤液,收集滤液25ml以上。

2、测定:精确移取25.0ml滤液于150ml锥形瓶中,加50ml不含CO2的蒸馏水,滴加3~4滴酚酞-乙醇指示剂后,用0.01mol/L的氢氧化钾-95%乙醇标准溶液滴定至呈微红色,30s不消褪为止。

记下耗用的氢氧化钾-95%乙醇溶液体积(V1)注:样品提取后一定要及时滴定,滴定应在散射日光或日光灯下对着光源方向进行,滴定终点不易判定时,可用已加去CO2蒸馏水后尚未滴定的提取液作参照,当被滴定液颜色与参照相比有色差时,即可视为已到滴定终点。

3、空白试验:取25.0ml无水乙醇于150ml锥形瓶中,加50ml不含CO2的蒸馏水,滴加0.1ml酚酞-乙醇指示剂,用0.01mol/L的氢氧化钾-95%乙醇溶液滴定至呈微红色,30s不消褪为止。

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脂肪酸提取试剂:
试剂1-皂化试剂:NaOH 45.0 g,甲醇(色谱纯)150 mL,去离子水150 mL;
试剂2-甲基化试剂:6.0 N 盐酸325 mL,甲醇(色谱纯)275 mL;
试剂3-萃取溶剂:己烷(色谱纯)200 mL,甲基叔丁醚(色谱纯)200 mL;
试剂4-碱洗涤剂:NaOH 10.8 g,去离子蒸馏水900 mL;
试剂5-饱和NaCl:NaCl 40.0 g,去离子蒸馏水100 mL。

(1)获取菌体
将培养出的微生物(细菌用TSBA培养基),取四区划线法之第三区,约40mg 左右的量,涂抹在teflon螺盖试管底部,同时做好标记。

(2)皂化
1)吸取1.0mL(±0.1) 的试剂1,注入试管内,将含Teflon内垫的螺旋盖旋紧,涡旋振荡5-10 s,
2)将试管放入95-100 ℃的水浴槽中5min,
3)取出试管,稍冷却,不要旋松盖子,涡旋振荡5-10 s,
4)放回95-100℃的水浴槽中25 min,注意盖子是否旋紧,
5)取出试管,以自来水冷却。

(3)甲基化
1)打开螺旋盖,加入2.0mL的试剂2,
2)旋紧螺盖,涡旋振荡5-10 s,
3)放入80 ℃的水浴槽中10 min,
4)取出试管,以自来水冷却。

(4)萃取
1)打开螺旋盖,加入1.25mL的试剂3,
2)旋紧螺盖,缓慢将试管上下混匀10 min,
3)打开螺盖,用玻璃滴管取出下层液体,保留上层液体。

(5)洗涤
1)加入3.0mL的试剂4,
2)旋紧螺盖,缓慢将试管上下混合5 min,
3)静置分层,若分层不够清晰,加入4-5滴的饱和NaCl溶液,
4)用玻璃滴管取出2/3的上层液体,移到GC小管中,注意不要取到下层。

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