脂肪酸提取试剂

脂肪酸提取试剂：

试剂1-皂化试剂：NaOH 45.0 g，甲醇（色谱纯）150 mL，去离子水150 mL；

试剂2-甲基化试剂：6.0 N 盐酸325 mL，甲醇（色谱纯）275 mL；

试剂3-萃取溶剂：己烷（色谱纯）200 mL，甲基叔丁醚（色谱纯）200 mL；

试剂4-碱洗涤剂：NaOH 10.8 g，去离子蒸馏水900 mL；

试剂5-饱和NaCl：NaCl 40.0 g，去离子蒸馏水100 mL。

（1）获取菌体

将培养出的微生物（细菌用TSBA培养基），取四区划线法之第三区，约40mg 左右的量，涂抹在teflon螺盖试管底部，同时做好标记。

（2）皂化

1）吸取1.0mL(±0.1) 的试剂1，注入试管内，将含Teflon内垫的螺旋盖旋紧，涡旋振荡5-10 s，

2）将试管放入95-100 ℃的水浴槽中5min，

3）取出试管，稍冷却，不要旋松盖子，涡旋振荡5-10 s，

4）放回95-100℃的水浴槽中25 min，注意盖子是否旋紧，

5）取出试管，以自来水冷却。

（3）甲基化

1）打开螺旋盖，加入2.0mL的试剂2，

2）旋紧螺盖，涡旋振荡5-10 s，

3）放入80 ℃的水浴槽中10 min，

4）取出试管，以自来水冷却。

（4）萃取

1）打开螺旋盖，加入1.25mL的试剂3，

2）旋紧螺盖，缓慢将试管上下混匀10 min，

3）打开螺盖，用玻璃滴管取出下层液体，保留上层液体。

（5）洗涤

1）加入3.0mL的试剂4，

2）旋紧螺盖，缓慢将试管上下混合5 min，

3）静置分层，若分层不够清晰，加入4-5滴的饱和NaCl溶液，

4）用玻璃滴管取出2/3的上层液体，移到GC小管中，注意不要取到下层。