色素提取试验方法

一、暗紫贝母内生真菌红色素的提取及稳定性研究张辉东，曾雪丽，陈鹊，吴卫

（四川农业大学农学院，四川雅安625014）

1．2方法

1．2．1红色素的生产和提取工艺菌种→扩培→

发酵→收集菌体→超声波提取→减压浓缩→红色

素粗品。

1．2．2菌体培养从保存试管培养基斜面上挑取

单菌落接种于PDA培养基中，28℃，恒温培养3 d，

将菌丝转接于装有液体培养基的三角瓶中（150

mL／250 mL），总计20瓶，放于26℃、110 r／min恒温

摇床培养7 d，抽滤，弃上清液，得红色菌体。

1．2．3不同溶剂下红色素的提取方法称湿菌体6

份，每份2．0 g，分别加入去离子水、甲醇、乙醇、甲醇

和丙酮的混合液（1∶1，V∶V，下同）、丙酮、乙酸乙酯

40 mL，在超声功率400 W、超声10 S间歇20 S条件

下超声破碎30 min，过滤除去菌体，即为红色素在

不同溶剂中的提取液。

红色素的吸收光谱

称取湿菌体2．0 g，20 mL丙酮作溶剂，超声波法

提取红色素，抽滤得红色素溶液，在25℃下用日本

岛津UV2450型紫外分光光度计于190 nm到500

nm范围内扫描测定，测定结果见图1。由图可知，红

色素在210 nm处有一个最大吸收峰，该峰为红色素

的特征吸收峰。

2．2不同溶剂对红色素提取量的影响

根据1.2.3所述方法获得的不同溶剂的红色素

提取液，分别在210 nm处用紫外分光光度计测定吸

光度（OD）值。红色素在210 nm处的OD值与红色

素含量呈正比，OD值越大，单位体积中红色素的含

量越高，即溶解度越大，提取量越高。结果见表1。从

表1可见，红色素在不同溶剂中测得的OD值不同

即溶解度不同。在室温条件下，红色素在丙酮中的

OD值最大，溶解度最大，提取量最大。

2．3红色素的稳定性分析

2．3．1酸碱度对红色素稳定性的影响取红色素

提取液12等分，以NaOH和HCl溶液调pH，在室

温下用pH酸度计调节各溶液的pH分别为1、2、3、

4、5、6、7、8、9、10、11、12，室温（25℃）下避光放置0．5 h后，在210 nm下测定OD值，结果见表2。由表

2可知，当pH＜7时，随着pH降低，红色素溶液OD

值减少，颜色呈浅黄色，pH≥7时，红色素溶液OD

值变化不大，颜色呈红色，说明红色素在碱性环境

中较稳定。

2．3．2温度对红色素稳定性的影响取pH为9的

红色素溶液，分别在25、40、60、80、100℃恒温水浴

中放置0．0、0．5、1．0、1．5 h，冷却至室温后定容至相同体积，在210 nm处测定OD值，结果见表3。由表

3可知，pH为9时，红色素溶液在25℃到100℃范

围内，随温度的升高，其OD值有先增大后减小的趋

势，但颜色变化不明显，可能是红色素中某化合物

的吸光基团因温度的升高构象有所改变导致的。说

明该化合物的热稳定性较好。

2．3．3光照对红色素稳定性的影响将pH为9的

红色素溶液分别置于光照和黑暗环境下，间隔一定

时间测定各溶液OD值，结果见表4。由表4和试验

观察可知，光照条件下，红色素溶液的OD值随着时

间的延长逐渐变小，从第3天开始，颜色逐渐变淡，

直至第6天，近于无色，而放于黑暗条件下的溶液，

OD值基本保持不变，而且颜色也无明显变化，说明

红色素对光照不稳定。可能是光照和温度的同时作

用，使得红色素的结构发生变化，减少了其溶液的

OD值。

2．3．4紫外光对红色素稳定性的影响在波长210

nm的紫外灯下照射pH为9的红色素溶液，分别在

照射了0、20、40、60、80、100 min时测定OD值，结

果见表5。由表5可知，在紫外光的照射下，红色素

溶液在210nm处的OD值只在一个较小的范围内

波动，说明紫外光对红色素的吸光基团影响不大，

对红色素的稳定性影响不大。

2．3．5碳水化合物添加剂对红色素稳定性的影响

取红色素溶液，分别配制含蔗糖、葡萄糖浓度为30

g／L的红色素溶液，在室温（25℃）下避光放置0．5 h 后，在210 nm下测定OD值，结果见表6。由表6可

知，不加任何碳水化合物添加剂的红色素溶液（对

照）的最大OD值为1．486，而加了碳水化合物添加

剂的红色素溶液在放置4 d后，OD值及溶液颜色变

化不大，没有沉淀产生，说明葡萄糖和蔗糖对红色

素的稳定性没有影响。

2．3．6氧化剂H2O2对红色素稳定性的影响取红

色素溶液，配制H2O2浓度为0．00％、0．03％、0．30％、

1．50％、3．00％（V／V，下同）的红色素溶液，在室温

（25℃）下避光放置0．5 h后，在210 nm处测定OD

值，结果见表7。由表7可知，未添加H2O2的红色素溶液的OD值比含有H2O2的红色素溶液的OD值大很多，且随着H2O2浓度的增大，最大OD值逐渐

减小，颜色明显变浅。说明该红色素耐氧化性较差，

易因氧化而退色，应用时应避免强氧化剂的加入。

2．3．7还原剂Na2SO3对红色素稳定性的影响取

红色素溶液，配制Na2SO3浓度为0、2×10－4、5×10－4、

1×10－3、3×10－3、5×10－3mol／L的红色素溶液，在室温

（25℃）下避光放置0、1、2、3、4 d后，在210 nm处测

定OD值，结果见表8。由表8可知，该红色素随还原剂Na2SO3浓度的增大，放置时间的增长，颜色变浅，在前3 d OD值减小，第4天又稍有增大，说明

该色素的耐还原性较差，第4天由于Na2SO3被空气

氧化，还原性减弱，红色素溶液的OD值又有所增大。

2．3．8金属离子对红色素稳定性的影响取红色

素溶液，配制含不同金属离子Na＋、K＋、Mg2＋、Co2＋、

Al3＋、Pb2＋、Sn2＋，浓度均为1×10－4 mol／L的红色素溶

液，在室温（25℃）下避光放置不同的时间0、24 h

后，在210 nm处测定OD值，结果见表9。从表9可

知，24 h后含Co2＋的红色素溶液的OD值减小，Pb2＋、

Sn2＋与红色素发生络合，产生絮状沉淀。Na＋、K＋、

Mg2＋、Al3＋对红色素的稳定性影响不大。

二、茶树内生真菌H8菌株的鉴定及其产红色色素培养条件

卢东升陈玉栋王金平李文锦

(信阳师范学院,信阳, 464000)