实验八：叶绿体中色素的提取和分离(整理)
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(原因是上一次滤液细线未干燥，即划下一
次线，使滤液线过粗或线上色素量较低 .
③把划好细线的滤纸条插入层析液中，并不 断摇晃，以求加快色素在滤纸条上的扩散。 （原因是由于摇晃，层析液接触液线，溶解 了色素）
实验材料用具：
1、材料：新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片)。 2、仪器：干燥的定性滤纸，烧杯(100mL)， 研钵 玻璃漏斗，尼龙布（或棉花），毛 细吸管，剪刀，小试管，培养皿盖，药勺， 量筒(10mL)，天平，镊子，铅笔，尺子。 3、药品：丙酮，层析液，二氧化硅，碳 酸钙。
实验过程：
1、提取叶绿素的步骤 ： （1）称：用天平称量5g除去叶柄的叶 片 （2）剪：越细越好，尽量去除叶脉等 部分 （3）加药品：加少量二氧化硅，碳酸 钙和丙酮（约5mL）快速充分研磨。
（4）磨：研磨要领是要用力压快速研 磨。 （5）过滤：用纱布（或棉花）、漏斗 和试管，最后提取液置于试管中待用， 及时用棉塞（或塞子）将试管塞严 .
2、分离色素的步骤
①制备滤纸条：将预备在试验桌上的滤 纸条一端剪去两个角作标记，在距离 这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。 ②画滤液细线：沿铅笔线轻轻均匀地画 一道线，用提取液反复划好几次，每 次划完尽量吹干，不要弄破纸条。
（二）叶绿素的光学性质
叶绿素的吸收光谱
类胡萝卜素的吸收光谱
实验原理：
①叶绿体中的色素是有机物，不溶于水， 易溶于丙酮等有机溶剂中，所以用丙 酮、无水乙醇等能提取色素。 ②层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。 叶绿体色素在层析液中的溶解度不同， 分子量小的溶解度高，随层析液在滤 纸上扩散得快，溶解度低的随层析液 在滤纸上扩散得慢。所以用层析液来 分离四种色素。
二、实验原理
（一）叶绿体色素：
叶绿素a
3:1 (阳生) ２:1 (阴生)
1.叶绿素
2.类胡萝卜素
叶绿素b 胡萝卜素
2：1
3：1
叶黄素
胡萝卜素（橙黄色）
绿 叶 中 的 色 素
类胡萝卜素
（含量约1/4）
叶黄素（黄色） 叶绿素a（蓝绿色）
叶绿素
（含量约3/4）
叶绿素b（黄绿色）
实验关键:
1.选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁 的叶片.(如菠菜叶) 2.画滤液细线时应以细、齐、直为标准，重复 画线时必须等上次画线干燥后再进行，重复 2-3次。
4. 为什么不能让滤液细线触及层 析液？
层析液会溶解色素 使色素无法分离 。
5.观察实验结果有什么现象？滤纸条 上出现了几条色素带？每条色素带的 颜色和排序如何？ 滤纸条上将分离出四条色素带， 颜色从上往下分别是橙黄色、黄 色、蓝绿色和黄绿色，四种色素 分别是胡萝卜素（最快）、叶黄 素、叶绿素a（最多）和叶绿素b （最慢）。
实验结果：
问题讨论：
1、加入SiO2、CaCO3的作用是 什么？
二氧化硅的作用是使研 磨更加充分、迅速；碳酸钙 的作用是保护叶绿素不分解
2、 将滤液放在试管中，为什么 要及时用棉塞将试管塞严？
滤液含有丙酮，丙酮 有毒，防止挥发Βιβλιοθήκη Baidu
3、 画滤液细线时重复画几次的 目的是什么？
增加色素的含量， 使分离后的色素带更 加清晰
2.下列关于“叶绿体色素提取和分离”的实验 描述中，不属于实验要求的是 （ ）
A.提取高等植物叶绿体中的色素 B.用纸层析法分离色素 C.了解各种色素的吸收光谱 D.验证叶绿体中所含色素的种类
3.用纸层析法将色素进行分离,在滤纸条上出 现的最窄的一条色素带的颜色是 （ ）
A.黄色 B.橙黄色 C.黄绿色 D.蓝绿色
3.层析时不要让滤液细线触及层析液。
随堂演练 ：
1.通过纸层析分离叶绿体色素，结果在滤纸 条上出现四条色素带，从上到下依次为 （ ） A.胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b B.胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素 C.叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、胡萝卜素 D.叶黄素、叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素
(2)在做“叶绿体中色素的提取和分离” 实验时，向研钵中加入SiO2的目的 是： ， 加入CaC03的目的是 在盛有层析液的烧杯上盖上培养皿盖的是
在滤纸条上扩散速度最慢的色素带是
其颜色是
(3)某同学在做“叶绿体中色素的提 取分离”实验时，操作情况如下所述， 结果实验失败，请指出其错误所在:
①将5克新鲜完整的菠菜叶，放在研钵中，加入 丙酮、石英砂、CaCO3以后，迅速研磨。 (原因是没有去除粗叶脉和将叶剪碎，这样降低了 叶绿素的提取率 ） ②用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线处小心均 匀地划出一条滤液细线，并连续迅速地重复划 2～3次。
A.光合作用的原料 B.光合作用的产物 C.能量转换器 D.氢的接受器
7.下列作用不属于叶绿素的功能 的是 （ ）
A.吸收光能 B.利用光能使水分解 C.利用光能合成ATP D.固定和还原二氧化碳
能力提高练习：
(1)在圆形滤纸的中央，点上叶绿体色素的 提取液进行层析，随着层析液从滤纸的中 央向四周扩散，形成四个色素环带，排在 最里圈的色素是（ ） A.橙黄色 B.黄绿色 C.蓝绿色 D.黄色
4.提取叶绿体中的色素时要加丙 酮，其原因是 （ ）
A.让色素溶解 B.防止叶绿素被破坏 C.便于将叶片研磨成匀浆 D.促使叶绿体中色素分离
5.在叶绿体色素的提取和分离实验中， 在滤纸条上扩散速度最快的色素是（ ）
A.叶绿素a B.叶绿素b C.胡萝卜素 D.叶黄素
6.绿色植物的光合作用中，叶绿 素是 （ ）
③层析分离叶绿体中的色素：将3mL层析液 倒入烧杯中，注意将纸条画有滤液细线的 一端置于烧杯中的层析液中，注意千万不 要将滤液细线浸没在层析液中。 ④观察实验结果：最后滤纸条上将分离出四 条色素带，颜色从上往下分别是橙黄色、 黄色、蓝绿色和黄绿色，四种色素分别是 胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b。
实验6：叶绿体中色素 的提取和分离
马山县周鹿中学 陆保宗
二、实验原理
（一）叶绿体色素：
叶绿素a
3:1 (阳生) ２:1 (阴生)
1.叶绿素
2.类胡萝卜素
叶绿素b 胡萝卜素
2：1
3：1
叶黄素
叶绿素a、b的结构式
类胡萝卜素的结构式
（二）四种色素的化学性质
均为亲脂性>亲水性， ∴均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用 乙醇、丙酮等有机溶剂提取。 极性大小： 叶绿素b>叶绿素a>叶黄素>胡萝卜素。 ∴根据相似相溶原理，在有机溶液中的溶解 度： 叶绿素b<叶绿素a <叶黄素<胡萝卜素。
次线，使滤液线过粗或线上色素量较低 .
③把划好细线的滤纸条插入层析液中，并不 断摇晃，以求加快色素在滤纸条上的扩散。 （原因是由于摇晃，层析液接触液线，溶解 了色素）
实验材料用具：
1、材料：新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片)。 2、仪器：干燥的定性滤纸，烧杯(100mL)， 研钵 玻璃漏斗，尼龙布（或棉花），毛 细吸管，剪刀，小试管，培养皿盖，药勺， 量筒(10mL)，天平，镊子，铅笔，尺子。 3、药品：丙酮，层析液，二氧化硅，碳 酸钙。
实验过程：
1、提取叶绿素的步骤 ： （1）称：用天平称量5g除去叶柄的叶 片 （2）剪：越细越好，尽量去除叶脉等 部分 （3）加药品：加少量二氧化硅，碳酸 钙和丙酮（约5mL）快速充分研磨。
（4）磨：研磨要领是要用力压快速研 磨。 （5）过滤：用纱布（或棉花）、漏斗 和试管，最后提取液置于试管中待用， 及时用棉塞（或塞子）将试管塞严 .
2、分离色素的步骤
①制备滤纸条：将预备在试验桌上的滤 纸条一端剪去两个角作标记，在距离 这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。 ②画滤液细线：沿铅笔线轻轻均匀地画 一道线，用提取液反复划好几次，每 次划完尽量吹干，不要弄破纸条。
（二）叶绿素的光学性质
叶绿素的吸收光谱
类胡萝卜素的吸收光谱
实验原理：
①叶绿体中的色素是有机物，不溶于水， 易溶于丙酮等有机溶剂中，所以用丙 酮、无水乙醇等能提取色素。 ②层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。 叶绿体色素在层析液中的溶解度不同， 分子量小的溶解度高，随层析液在滤 纸上扩散得快，溶解度低的随层析液 在滤纸上扩散得慢。所以用层析液来 分离四种色素。
二、实验原理
（一）叶绿体色素：
叶绿素a
3:1 (阳生) ２:1 (阴生)
1.叶绿素
2.类胡萝卜素
叶绿素b 胡萝卜素
2：1
3：1
叶黄素
胡萝卜素（橙黄色）
绿 叶 中 的 色 素
类胡萝卜素
（含量约1/4）
叶黄素（黄色） 叶绿素a（蓝绿色）
叶绿素
（含量约3/4）
叶绿素b（黄绿色）
实验关键:
1.选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁 的叶片.(如菠菜叶) 2.画滤液细线时应以细、齐、直为标准，重复 画线时必须等上次画线干燥后再进行，重复 2-3次。
4. 为什么不能让滤液细线触及层 析液？
层析液会溶解色素 使色素无法分离 。
5.观察实验结果有什么现象？滤纸条 上出现了几条色素带？每条色素带的 颜色和排序如何？ 滤纸条上将分离出四条色素带， 颜色从上往下分别是橙黄色、黄 色、蓝绿色和黄绿色，四种色素 分别是胡萝卜素（最快）、叶黄 素、叶绿素a（最多）和叶绿素b （最慢）。
实验结果：
问题讨论：
1、加入SiO2、CaCO3的作用是 什么？
二氧化硅的作用是使研 磨更加充分、迅速；碳酸钙 的作用是保护叶绿素不分解
2、 将滤液放在试管中，为什么 要及时用棉塞将试管塞严？
滤液含有丙酮，丙酮 有毒，防止挥发Βιβλιοθήκη Baidu
3、 画滤液细线时重复画几次的 目的是什么？
增加色素的含量， 使分离后的色素带更 加清晰
2.下列关于“叶绿体色素提取和分离”的实验 描述中，不属于实验要求的是 （ ）
A.提取高等植物叶绿体中的色素 B.用纸层析法分离色素 C.了解各种色素的吸收光谱 D.验证叶绿体中所含色素的种类
3.用纸层析法将色素进行分离,在滤纸条上出 现的最窄的一条色素带的颜色是 （ ）
A.黄色 B.橙黄色 C.黄绿色 D.蓝绿色
3.层析时不要让滤液细线触及层析液。
随堂演练 ：
1.通过纸层析分离叶绿体色素，结果在滤纸 条上出现四条色素带，从上到下依次为 （ ） A.胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b B.胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素 C.叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、胡萝卜素 D.叶黄素、叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素
(2)在做“叶绿体中色素的提取和分离” 实验时，向研钵中加入SiO2的目的 是： ， 加入CaC03的目的是 在盛有层析液的烧杯上盖上培养皿盖的是
在滤纸条上扩散速度最慢的色素带是
其颜色是
(3)某同学在做“叶绿体中色素的提 取分离”实验时，操作情况如下所述， 结果实验失败，请指出其错误所在:
①将5克新鲜完整的菠菜叶，放在研钵中，加入 丙酮、石英砂、CaCO3以后，迅速研磨。 (原因是没有去除粗叶脉和将叶剪碎，这样降低了 叶绿素的提取率 ） ②用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线处小心均 匀地划出一条滤液细线，并连续迅速地重复划 2～3次。
A.光合作用的原料 B.光合作用的产物 C.能量转换器 D.氢的接受器
7.下列作用不属于叶绿素的功能 的是 （ ）
A.吸收光能 B.利用光能使水分解 C.利用光能合成ATP D.固定和还原二氧化碳
能力提高练习：
(1)在圆形滤纸的中央，点上叶绿体色素的 提取液进行层析，随着层析液从滤纸的中 央向四周扩散，形成四个色素环带，排在 最里圈的色素是（ ） A.橙黄色 B.黄绿色 C.蓝绿色 D.黄色
4.提取叶绿体中的色素时要加丙 酮，其原因是 （ ）
A.让色素溶解 B.防止叶绿素被破坏 C.便于将叶片研磨成匀浆 D.促使叶绿体中色素分离
5.在叶绿体色素的提取和分离实验中， 在滤纸条上扩散速度最快的色素是（ ）
A.叶绿素a B.叶绿素b C.胡萝卜素 D.叶黄素
6.绿色植物的光合作用中，叶绿 素是 （ ）
③层析分离叶绿体中的色素：将3mL层析液 倒入烧杯中，注意将纸条画有滤液细线的 一端置于烧杯中的层析液中，注意千万不 要将滤液细线浸没在层析液中。 ④观察实验结果：最后滤纸条上将分离出四 条色素带，颜色从上往下分别是橙黄色、 黄色、蓝绿色和黄绿色，四种色素分别是 胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b。
实验6：叶绿体中色素 的提取和分离
马山县周鹿中学 陆保宗
二、实验原理
（一）叶绿体色素：
叶绿素a
3:1 (阳生) ２:1 (阴生)
1.叶绿素
2.类胡萝卜素
叶绿素b 胡萝卜素
2：1
3：1
叶黄素
叶绿素a、b的结构式
类胡萝卜素的结构式
（二）四种色素的化学性质
均为亲脂性>亲水性， ∴均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用 乙醇、丙酮等有机溶剂提取。 极性大小： 叶绿素b>叶绿素a>叶黄素>胡萝卜素。 ∴根据相似相溶原理，在有机溶液中的溶解 度： 叶绿素b<叶绿素a <叶黄素<胡萝卜素。