血清总胆红素及结合胆红素测定PPT优秀课件
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血清总胆红素及结 合胆红素测定
Ⅰ 重氮反应法测 定总胆红素和结合 胆红素
• 【实验原理】 血清中结合胆红素可直接与重氮试
剂反应，产生偶氮胆红素；非结合胆红 素须有加速剂咖啡因-苯甲酸钠-醋酸钠 作用，其分子内氢键破坏后才能与重氮 试剂反应，也产生偶氮胆红素。本法重 氮反应pH6.5，最后加入碱性酒石酸钠 使紫色偶氮胆红素(吸收峰530nm)转变 成蓝色偶氮胆红素，在600nm波长比色， 使检测灵敏度提高。
总胆红素和结合胆红素测定分别按表标准管进行。取4支试 管，标明标准空白管，测定空白管，标准管和测定管。
加入BOD工作液后立即混匀，置37C水浴5min， 用分光光度计，在450nm波长，去离子水调零， 读取各管吸光度(A)。用于对照管的比色杯与非 对照管的比色杯不得混用。
谢谢
个人观点供参考，欢迎讨论
4．总胆红素标准液(342μmol/L) 按胆红素测定J-G法中方法配制，或 市售合乎要求的标准液。
5．结合胆红素标准液 将DTB配于胆红素浓度可忽略不计的人血清中， 或用冻干品按说明书要求重建。配制后分装于聚丙烯管内，－70℃保 存，可稳定6个月。冻干品未重建前置低温中，至少稳定1年。
【操作步骤】
• (3) 新生儿溶血症 血清胆红素有助于了解疾病严重程度。
• (4) 再生障碍性贫血及数种继发性贫血(主要见于癌或慢性 肾炎引起)，血清总胆红素减少。
【临床意义】
2．血清结合胆红素测定的意义 结合胆红素 与总胆红素的比值可用于鉴别黄疸类型。
• (1) 比值＜20% 溶血性黄疸，阵发性血红 蛋白尿，恶性贫血，红细胞增多症等。
在pH3.7～4.5缓冲液中，BOD催化单葡萄糖醛酸胆红 素(mBc)、双葡萄糖醛酸胆红素(dBc)及大部分δ胆红 素氧化，非结合胆红素(Bu)在此pH条件下不被氧化。 用配制于人血清中的二牛磺酸胆红素 (ditaurobilirubin，DTB)作标准品，检测此条件下 450nm吸光度的下降值可反映结合胆红素的含量。
【检验原理】
总胆红素在pH3.0附近，在钒 酸盐和表面活性剂存在下，可以被 氧化成胆绿素。与此同时，胆红素 特有的黄色也随之消失。测定胆红 素氧化前后吸光度的差，可以计算 出样品中总胆红素的浓度。
• 【试剂】 1．咖啡因-苯甲酸钠试剂 2．碱性酒石酸钠溶液 3．72.5mmol/L亚硝酸钠溶液 4．28.9mmol/L对氨基苯磺酸溶液 5．重氮试剂 6．5.0g/L叠氮钠溶液。 7．胆红素标准液
2．0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.5)。
3．BOD溶液 如系冻干品，按说明书要求复溶，但复溶后冰箱保存不宜 过长(约可保存1周)，如系液体(可能含有甘油)，置4℃冰箱可保存较 长时间，BOD贮存溶液的酶活性一般在数千至1万～2万U/L，BOD 工作液酶活性可按反应液中BOD终浓度达0.3～1.0U/ml计算。
•
【操作步骤】 1.样品的测定 取3支试管，按下表程序操作.
混匀后，波长600nm，对照管调零，读取吸 光度，在标准曲线上查出相应的胆红素浓度。
2.标准曲线制作
取5支试管，分别编号，然后按表稀释胆红 素储存液配制胆红素标准液。
Biblioteka Baidu
混匀(不可产生气泡)，按总胆红素测定 法操作。每一浓度作3个平行管，并分 别做标准对照管，用各自的标准对照 管调零，读取标准管的吸光度。配制 标准液用的溶剂血清中尚有少量胆红 素，同样测定后得一吸光度值。每个 标准管的吸光度值均应减去此吸光度， 然后与相应胆红素浓度绘制标准曲线
• (2) 比值40%～60% 肝细胞性黄疸。 • (3) 比值＞60% 阻塞性黄疸。 • 但以上几类黄疸，尤其是(2)、(3)类之间有
重叠。
Ⅱ定胆总红胆d素红oi氧素n化和g酶结法合测胆
红素
【原理】
胆红素呈黄色，在450nm附近有最大吸收峰。胆红素 氧化酶(BOD)催化胆红素氧化，随着胆红素被氧化， A450nm下降，下降程度与胆红素被氧化的量相关。 在pH8.0条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧 化，因而检测450nm吸光度的下降值可反映总胆红素 含量；加入SDS及胆酸钠等阴离子表面活性剂可促进 其氧化。
【试剂】
1．0.1mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.2) 称取三羟甲基氨基甲烷 (Tris)1.211g，胆酸钠172.3mg,十二烷基硫酸钠(SDS)432.6mg， 溶于去离子水90ml中，在室温(25～30℃)用1mol/L盐酸调节pH至 8.2(约用6ml)，再加蒸馏水至100ml，置冰箱保存，此液含 4mmol/L胆酸钠、15mmol/L SDS。
【参考范围】 血清总胆红素：5.1～19μmol/L(0.3～1.1mg/dl)； 血清结合胆红素：1.7～6.8μmol/L(0.1～0.4mg/dl)。
【临床意义】
1．血清总胆红素测定的意义
• (1) 有无黄疸及黄疸程度的鉴别。
• (2) 肝细胞损害程度和预后的判断 胆红素浓度明显升高 反映有严重的肝细胞损害。但某些疾病如胆汁淤积型肝炎 时，尽管肝细胞受累较轻，血清胆红素却可升高。
Ⅰ 重氮反应法测 定总胆红素和结合 胆红素
• 【实验原理】 血清中结合胆红素可直接与重氮试
剂反应，产生偶氮胆红素；非结合胆红 素须有加速剂咖啡因-苯甲酸钠-醋酸钠 作用，其分子内氢键破坏后才能与重氮 试剂反应，也产生偶氮胆红素。本法重 氮反应pH6.5，最后加入碱性酒石酸钠 使紫色偶氮胆红素(吸收峰530nm)转变 成蓝色偶氮胆红素，在600nm波长比色， 使检测灵敏度提高。
总胆红素和结合胆红素测定分别按表标准管进行。取4支试 管，标明标准空白管，测定空白管，标准管和测定管。
加入BOD工作液后立即混匀，置37C水浴5min， 用分光光度计，在450nm波长，去离子水调零， 读取各管吸光度(A)。用于对照管的比色杯与非 对照管的比色杯不得混用。
谢谢
个人观点供参考，欢迎讨论
4．总胆红素标准液(342μmol/L) 按胆红素测定J-G法中方法配制，或 市售合乎要求的标准液。
5．结合胆红素标准液 将DTB配于胆红素浓度可忽略不计的人血清中， 或用冻干品按说明书要求重建。配制后分装于聚丙烯管内，－70℃保 存，可稳定6个月。冻干品未重建前置低温中，至少稳定1年。
【操作步骤】
• (3) 新生儿溶血症 血清胆红素有助于了解疾病严重程度。
• (4) 再生障碍性贫血及数种继发性贫血(主要见于癌或慢性 肾炎引起)，血清总胆红素减少。
【临床意义】
2．血清结合胆红素测定的意义 结合胆红素 与总胆红素的比值可用于鉴别黄疸类型。
• (1) 比值＜20% 溶血性黄疸，阵发性血红 蛋白尿，恶性贫血，红细胞增多症等。
在pH3.7～4.5缓冲液中，BOD催化单葡萄糖醛酸胆红 素(mBc)、双葡萄糖醛酸胆红素(dBc)及大部分δ胆红 素氧化，非结合胆红素(Bu)在此pH条件下不被氧化。 用配制于人血清中的二牛磺酸胆红素 (ditaurobilirubin，DTB)作标准品，检测此条件下 450nm吸光度的下降值可反映结合胆红素的含量。
【检验原理】
总胆红素在pH3.0附近，在钒 酸盐和表面活性剂存在下，可以被 氧化成胆绿素。与此同时，胆红素 特有的黄色也随之消失。测定胆红 素氧化前后吸光度的差，可以计算 出样品中总胆红素的浓度。
• 【试剂】 1．咖啡因-苯甲酸钠试剂 2．碱性酒石酸钠溶液 3．72.5mmol/L亚硝酸钠溶液 4．28.9mmol/L对氨基苯磺酸溶液 5．重氮试剂 6．5.0g/L叠氮钠溶液。 7．胆红素标准液
2．0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.5)。
3．BOD溶液 如系冻干品，按说明书要求复溶，但复溶后冰箱保存不宜 过长(约可保存1周)，如系液体(可能含有甘油)，置4℃冰箱可保存较 长时间，BOD贮存溶液的酶活性一般在数千至1万～2万U/L，BOD 工作液酶活性可按反应液中BOD终浓度达0.3～1.0U/ml计算。
•
【操作步骤】 1.样品的测定 取3支试管，按下表程序操作.
混匀后，波长600nm，对照管调零，读取吸 光度，在标准曲线上查出相应的胆红素浓度。
2.标准曲线制作
取5支试管，分别编号，然后按表稀释胆红 素储存液配制胆红素标准液。
Biblioteka Baidu
混匀(不可产生气泡)，按总胆红素测定 法操作。每一浓度作3个平行管，并分 别做标准对照管，用各自的标准对照 管调零，读取标准管的吸光度。配制 标准液用的溶剂血清中尚有少量胆红 素，同样测定后得一吸光度值。每个 标准管的吸光度值均应减去此吸光度， 然后与相应胆红素浓度绘制标准曲线
• (2) 比值40%～60% 肝细胞性黄疸。 • (3) 比值＞60% 阻塞性黄疸。 • 但以上几类黄疸，尤其是(2)、(3)类之间有
重叠。
Ⅱ定胆总红胆d素红oi氧素n化和g酶结法合测胆
红素
【原理】
胆红素呈黄色，在450nm附近有最大吸收峰。胆红素 氧化酶(BOD)催化胆红素氧化，随着胆红素被氧化， A450nm下降，下降程度与胆红素被氧化的量相关。 在pH8.0条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧 化，因而检测450nm吸光度的下降值可反映总胆红素 含量；加入SDS及胆酸钠等阴离子表面活性剂可促进 其氧化。
【试剂】
1．0.1mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.2) 称取三羟甲基氨基甲烷 (Tris)1.211g，胆酸钠172.3mg,十二烷基硫酸钠(SDS)432.6mg， 溶于去离子水90ml中，在室温(25～30℃)用1mol/L盐酸调节pH至 8.2(约用6ml)，再加蒸馏水至100ml，置冰箱保存，此液含 4mmol/L胆酸钠、15mmol/L SDS。
【参考范围】 血清总胆红素：5.1～19μmol/L(0.3～1.1mg/dl)； 血清结合胆红素：1.7～6.8μmol/L(0.1～0.4mg/dl)。
【临床意义】
1．血清总胆红素测定的意义
• (1) 有无黄疸及黄疸程度的鉴别。
• (2) 肝细胞损害程度和预后的判断 胆红素浓度明显升高 反映有严重的肝细胞损害。但某些疾病如胆汁淤积型肝炎 时，尽管肝细胞受累较轻，血清胆红素却可升高。