重组肠激酶和目的蛋白的分离纯化方案

重组肠激酶和目的蛋白分离纯化推荐方案

重组肠激酶专为切割重组表达融合蛋白设计，分为两个类型：rEK-B 和rEK-H ，分别为不含有His-6和含有His-6 重组标签。

雅心生物目前生产的为rEK-B。不含His标签，相对比活高，约为20000 Unit/mg pro，按照活性定义，1 Unit 可以切割0.5mg目的蛋白，则酶切液中的重组肠激酶相对于目的蛋白的含量为万分之一（0.01%）。所以，在进一步的实验中，可以不考虑其对下游实验的影响，建议可以不纯化。

如果确实需要去除rEK，建议的去除方法如下：

✧如果使用亲和层析，可以利用胰蛋白酶抑制剂亲和胶，由于肠激酶是一种丝氨酸蛋

白酶，胰蛋白酶抑制剂可以与肠激酶结合，从而达到纯化目的。建议利用离子交换层析分离去除微量的肠激酶。

✧PH8.0条件下，肠激酶与DEAE胶结合，并且在0.15M NaCl中可以被洗脱。可以

利用目的蛋白与肠激酶电荷以及与DEAE胶的结合以及洗脱的不同条件将二者进行分离。