葡聚糖凝胶离子交换剂
sephadex知识剖析
【操作步骤】
（1）A-50经酸碱处理，平衡至中性后，浸泡于0.1mol/L， pH7.4 PB中，置4℃冰箱储存备用。 （2）装柱：同DE52。 （3）平衡：松开出水口螺旋夹，以PB平衡，控制流速为 15滴/min，• 待洗脱液与流出液之pH值达到一致时，停止 平衡。 （4）加样、洗脱、收集与浓缩：基本上同DE52，以 0.1mol/L PB洗脱。 用过的DEAE-Sephadex A-50可用0.5mol/L Na2HPO4洗 脱回收。洗至流出液中无蛋白（OD280nm<0.04）后再用 蒸馏水洗至中性，加入0.02％叠氮钠于4℃保存备用。
Sephadex系统知识
葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶系列是当今生物大 分子分离、提取、纯化的重要分离材料， 按性能分包括 凝胶过滤、 离子交换、 疏水层析、 亲和层析，
主要用于蛋白质、核酸、多肽、多糖、酶的脱盐 与分离纯化中。 葡聚糖凝胶为葡聚糖和环氧氯丙烷交联而成的 珠状产品，化学性能稳定，在潮湿、中型ph、高 压120度，灭菌30min情况下，不影响色谱性能， 适用于柱色谱操作。用于蛋白质脱盐及不同分子 量蛋白在凝胶分离范围内的分离纯化，可在酶、 多糖、核酸和其它生物大分子的纯化中广泛应用。
葡聚糖凝胶LH
用途：分离水不溶物质。 葡聚糖凝胶LH-20/Sephadex LH-20 分离中 等大小生物分子，球蛋白分离范围100～ 4000 葡聚糖凝胶LH-60/Sephadex LH-60 分离 100～20000
葡聚糖凝胶C阳离子交换剂，吸附碱 性蛋白：
羧甲基葡聚糖凝胶C-25/CM葡聚糖凝胶C-25/CM Sephades C-25 应用：MW＞20000；载量4-5mmol/g 羧甲基葡聚凝胶C-50/CM葡聚糖凝胶C-50/CM Sephades C-50 应用：中等大小生物分子（30－200KD）；载量45mmol/g SP葡聚糖凝胶C-25/SP Sephades C-25 应用：MW>200 KD；载量：2.0-2.6mmol/g SP葡聚糖凝胶C-50/SP Sephades C-50 应用：中等大小 生物分子（30－200KD）；载量：2.0-2.6mmol/g
凝胶过滤及离子交换层析介质详解
温度对分离效果也有一 定影响，可以通过控制 实验温度来优化分离效 果。
案例分享：成功应用案例剖析
案例一
使用琼脂糖凝胶成功分离大分子蛋白质混合物，通过优化流动相和洗脱条件，实现了高 纯度蛋白质的获取。
案例二
应用离子交换层析技术成功分离了复杂样品中的痕量金属离子，通过选择合适的离子交 换树脂和优化实验条件，提高了分离效果和检测灵敏度。
现状
目前，凝胶过滤层析介质已经广泛应用于生物大分子的分离纯化，如蛋白质、酶、多糖等。同时，随着技术的不 断进步，新型凝胶过滤层析介质不断涌现，为生物分离领域提供了更多的选择。
应用领域与前景
要点一
应用领域
凝胶过滤层析介质在生物医药、生物工程、食品科学等领 域具有广泛的应用。例如，在生物医药领域，可用于药物 的分离纯化、蛋白质组学研究、抗体药物研发等；在生物 工程领域，可用于基因工程产物的分离纯化、酶工程产物 的分离纯化等；在食品科学领域，可用于食品添加剂的分 离纯化、功能性食品的研发等。
对未来发展趋势进行预测
层析技术的创新与应用拓展
随着科学技术的不断发展，层析技术将继续创新并拓展应用领域。例如，开发新型高效层析介质、优化层析条件、提 高分离效率等。
与其他技术的联合应用
层析技术可以与多种其他技术联合应用，如质谱、光谱等，实现复杂样品的高效分离和检测。这种联合应用将在未来 得到更广泛的关注和应用。
在生物医药等领域的应用前景
生物医药等领域对高纯度、高活性物质的需求不断增加，层析技术作为一种重要的分离纯化方法，将在 这些领域发挥越来越重要的作用。
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03
离子交换层析介质
根据目标离子的电荷性质和大小，选择合适的离子交换树脂，如阳离子
离子交换层析柱子的选择
离子交换层析技术离子交换层析技术是以离子交换纤维素或以离子交换葡聚糖凝胶为固定相，以蛋白质等样品为移动相，分离和提纯蛋白质、核酸、酶、激素和多糖等的一项技术。
（一）原理在纤维素与葡聚糖分子上结合有一定的离子基团，当结合阳离子基团时，可换出阴离子，则称为阴离子交换剂。
如二乙氨乙基（Dicthylaminoethyl，DEAE）纤维素。
在纤维素上结合了DEAE，含有带正电荷的阳离子纤维素—O—C6 H14N+H，它的反离子为阴离子（如Cl-等），可与带负电荷的蛋白质阴离子进行交换。
当结合阴离子基团时，可置换阳离子，称为阳离子交换剂，如羧甲基（Carboxymethy，CM）纤维素。
纤维素分子上带有负电荷的阴离子（纤维素－O－CH2－COO一），其反离子为阳离子（如Na+等）,可与带正电荷蛋白质阳离子进行交换。
溶液的pH值与蛋白质等电点相同时，静电荷为0，当溶液pH值大于蛋白质等电点时，则羧基游离，蛋白质带负电荷。
反之，溶液的pH值小于蛋白质等电点时，则氨基电离，蛋白质带正电荷。
溶液的pH值距蛋白质等电点越远，蛋白质的电荷越多。
反之则越少。
血清蛋白质均带负电荷，但各种蛋白质带负电荷的程度有所差异，以白蛋白为最多，依次为球蛋白，球蛋白和球蛋白。
在适当的盐浓度下，溶液的pH值高于等电点时，蛋白质被阴离子交换剂所吸附；当溶液的pH值低于等电点时，蛋白质被阳离子交换剂所吸附。
由于各种蛋白质所带的电荷不同。
它们与交换剂的结合程度也不同，只要溶液pH值发生改变，就会直接影响到蛋白质与交换剂的吸附，从而可能把不同的蛋白质逐个分离开来。
交换剂对胶体离子（如蛋白质）和无机盐离子（如NaCl）都具有交换吸附的能力，当两者同时存在于一个层析过程中，则产生竞争性的交换吸附。
当Cl一的浓度大时，蛋白质不容易被吸附，吸附后也易于被洗脱，当Cl一浓度小时，蛋白质易被吸附，吸附后也不容易被洗脱。
因此，在离子交换层析中，一般采用两种方法达到分离蛋白质的目的。
执业药师考试综合辅导：离子交换层析法(2)
(2)亲水性离子交换剂亲水性离子交换剂中的基质为一类天然的或人工合成的化合物，与水亲和性较大，常用的有纤维素、交联葡聚糖及交联琼脂糖等。
①纤维素离子交换剂纤维素离子交换剂或称离子交换纤维素，是以微晶纤维素为基质，再引入电荷基团构成的。
根据引入电荷基团的性质，也可分强酸性、弱酸性、强碱性及弱碱性离子交换剂。
纤维素离子交换剂中，最为广泛使用的是二乙胺基乙基(deae一)纤维素和羧甲基(cm一)纤维素。
近年来pharmacia公司用微晶纤维素经交联作用，制成了类似凝胶的珠状弱碱性离子交换剂(deae —sephacel)，结构与deae一纤维素相同，对蛋白质、核酸、激素及其他生物聚合物都有同等的分辨率。
目前常用的纤维素交换剂如表6–1所示。
离子交换纤维素适用于分离大分子多价电解质。
它具有疏松的微结构，对生物高分子物质(如蛋白质和核酸分子)有较大的穿透性；表面积大，因而有较大的吸附容量。
基质是亲水性的，避免了疏水性反应对蛋白质分离的干扰；电荷密度较低，与蛋白质分子结合不牢固，在温和洗脱条件下即可达到分离的目的，不会引起蛋白质的变性。
但纤维素分子中只有一小部分羟基被取代，结合在其分子上的解离基团数量不多，故交换容量小，仅为交换树脂的1／10左右。
表6–1离子交换纤维素交换剂（简写）类型功能基团交换容量（毫克当量 /g ）时宜工作 ph 磷酸纤维素（ p-c ）中强酸型阳离子交换剂— po 3 2- 0.7~7.4 ph<4 磺酸乙级纤维素（ se-c ）强酸型阳离子交换剂— (ch 2 ) 2 so 3 - 0.2~0.3 极低羟甲基纤维素（ cm-c ）弱酸型阳离子交换剂— ch 2 coo - 0.5~1.0 ph>4 三乙基氨基乙基纤维素（ teae-c ）强碱型阴离子交换剂— (ch 2 ) 2 n + (c 2 h 5 ) 3 0.5~1.0 ph>8.6 二乙氨基乙基纤维素（ deae-c ）弱碱型阴离子交换剂— (ch 2 ) 2 n + h (c 2 h 5 ) 2 0.1~1.0 ph<8.6 氨基乙基纤维素（ ae-c ）中等碱型阴离子交换剂— (ch 2 ) 2 n + h 2 0.3~1.0 ecteda 纤维素（ ecte-c ）中等碱型阴离子交换剂— (ch 2 ) 2 n + (c 2 h 4 oh) 3 0.3~0.5 ②交联葡聚糖离子交换剂交联葡聚糖离子交换剂是以交联葡聚糖g–25和g–50为基质，通过化学方法引入电荷基团而制成的。
生物制药：凝胶层析法
像Sephadex一样，商品聚丙烯酰胺为颗粒状的干 粉，它有十分明显形成块状并粘附在一起的倾向，在 溶剂中能自动溶胀成胶。
根据聚丙烯酰胺凝胶的溶胀性质和分离范围的不 同，可分成10种类型。各种类型均以英文字母P和阿 拉伯数字表示，从Bio-Gel P-2至Bio-Ge1 P-300。P 后面的阿拉伯数字乘以1000即相当于排阻限度（按球 蛋白或肽计算）。目前，美国Bio-Rad Laboratories 生产并出售多种规格的Bio-Gel P。
葡聚糖凝胶（G类）的规格
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葡聚糖凝胶（G类）特点
1、孔径。 2、稳定性。 3、吸附作用。 4、芳香族化合物和杂环化合物。
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性质与特点
1、Sephadex在水、盐、碱、弱酸以及有机溶 液中都比较稳定，可以多次重复使用。
2、稳定工作pH为2－10，强酸溶液和氧化剂 会使交联的糖苷键水解断裂。
3、在高温下稳定，可煮沸消毒，在100 °C下 40 min对凝胶的结构和性能都没有明显的影响。
如引入磺乙基（SE-Sephadex）、羧甲基（CM-Sephadex） 及二乙胺基乙基（DEAE-Sephadex A）等。葡聚糖凝胶离子交 换剂具有离子交换和分子筛双重作用。其结构多孔、疏松、非 特异性吸附很少，层析时流速易控制，特别适用于蛋白质、酶、 激素、多核苷酸等的分离纯化，以及生化制剂的除热原。
最后流出物质C，它分子量最小，其分子可 以自由进出凝胶颗粒， “全渗入”。流经 体积是外水体积与内水体积之和V0+Vi。
物质B分子量介于渗入限与排阻限之间，其
分子能够部分地进入凝胶颗粒中。 “部分
排阻”或“部分渗入”。流径体积Ve是全部 外水体积加上内水体积的一部分，即
Ve=V0+KdVi
实验五葡聚糖凝胶柱层析分离纯化蛋白质讲课讲稿
琼脂糖凝胶特点
❖室温下其稳定性胶葡聚糖凝胶和聚丙烯酰 胺凝胶，对样品的吸附性很小。
❖洗脱速度较快
❖排阻极限大，分离范围广，适合分离大分 子物质。
小结
❖ 凝胶层析的原理：分子筛效应 ❖ 凝胶层析有效分配系数（Kav）：被分
离的化合物被凝胶排阻的程度。 ❖ 层析实验操作过程中的注意事项。 ❖ 实验结果：观察到蓝色蛋白洗脱快，黄
溶质在固定相中的浓度（Cs）
K=
溶质在流动相中的浓度（Cm）
☻K值大：被固定相吸附的牢固，随流动相的移 动速度较慢。
☻若混合物中各组分K值相差较大, 则能较易地分 离，反之，K值相差较小，分离效果差。
离子交换层析(ion exchange chromatography)
用离子交换剂（在惰性载体上引入带有电荷的活性 基团）作固定相，与流动相中离子发生可逆性离子 交换反应而进行分离的方法。
重点1
凝胶层析的原理
分子筛效应
❖ 比孔径大的分子不能扩散到孔穴内部， 完全被排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外 的空间随流动相向下流动，它们经历的 流程短，流动速度快，首先流出。
❖ 较小的分子则可以渗透进入凝胶颗粒内 部，然后再扩散出来，经历的流程长， 流动速度慢，后流出。
凝胶层析的数理关系
外水体积Vo 凝胶体积Vg
❖分离原理 在固定相载体表面偶联具有特殊亲和作用的
配基，这些配基可以与流动相中溶质分子发 生可逆的特异性结合而进行分离纯化。
1. Incubate crude
2. Wash away non bound
sample with the
sample components from
葡聚糖凝胶 LH-20使用说明书
葡聚糖凝胶LH-20使用说明书货号：S8111规格：25g/50g/100g保存：室温存储产品简介：适合用于有机溶剂分离嗜脂性分子，天然产物在有机溶剂中的纯化。
可以非常经济的大规模制备各种天然产物，尤其在中药有效成分提取中作为大孔吸附树脂解析物的纯化。
结合凝胶过滤﹑分配色谱及吸附层析于一身，能分离结构相近的分子，因此使用中要考略几种色谱的作用机制。
最高载量可达250mg样品/ml凝胶﹑极少需要再生﹑使用得当，重复使用分离效果可保持不变。
上样量视被分离物的结构性能的差异而定：差异大，则大；差异小，则小。
凝胶过滤的上样量一般为5-7％的床体积，我们建议初次上样量控制在1-2％的床体积，视分离情况可以逐步增加；柱高的选择也与分离要求相关——难分物质要有一定柱高和流速控制；流动相可参考TLC的条件，正确的流动相可以提高分离度并缩短分离时间。
流动相的常用溶剂为：水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷。
这些溶剂的极性依次降低，对极性的被分离物而言，保留值和分离度依次递增；同理选用的凝胶柱高可依次降低，流速可以增大（或上样量可以增加，树脂体积在低极性溶剂中明显收缩）。
溶剂的溶解性，极性，沸点，毒性都是要考虑到的，二氯甲烷通常在被分离物质间的极性和碱性差异比较小时采用。
甲醇通常对带环状(包括苯环)物质分离适用，葡聚糖凝胶对环状物质有强烈吸附。
LH-20同时具备亲水和亲脂双重性质，且被分离物质的极性在分离过程中起着重要作用。
使用说明：1葡聚糖凝胶LH-20的原理葡聚糖凝胶LH-20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱，葡聚糖凝胶LH-20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，主要靠凝胶过滤作用来分离。
葡聚糖凝胶Sephadex G–25柱层析法脱盐分离蛋白质实验技术总结
装柱是凝胶层析中一个关键的操作步 骤。灌注凝胶时要求将均匀的凝胶一直加 到所需柱床高度，不能时断时续，否则将 出现分层或“纹路”等毛病。 若在灌好胶 后才发现“纹路”、分层等现象时，要重 新装柱，以免影响层析效果。 在做大型的凝胶柱时，灌注的凝胶是 否均匀往往从表面上看不出来。所以使用 前应该用一些带色的大分子物质如细胞
在凝胶层析中，不仅要保持静水压的 恒定，还要保持适当的静水压。这是因为 G–75以上的软胶胶体柔软易变形， 最初 流速会很快，其后随着静水压力过大将使 软胶变形压紧，流速逐渐降低，最后甚至 流不出。 保持恒定正确的静水压是凝胶层 析时获得满意结果的必要条件。 脱盐一般使用的是G–25属于硬胶，硬 胶不易变形，受静水压的影响较小。
凡盐析所获得的粗制蛋白质（如盐析 得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，将 影响以后的纯化，所以纯化前均应除去， 此过程称为“脱盐”（desalthing）。脱 盐常用透析法和凝胶过滤法。
大分子保持天然构象状态 （功能有关），有高度的生物活 性。
常用的柱层析方法有葡聚糖凝胶 柱层析（分子筛层析）、离子交换 层析、吸附层析、亲和层析等。
5. 洗脱
用规定的溶液流过样品，使分子 量不同的样品逐步分开并先后由柱床 流出的过程称为洗脱。 洗脱液放在贮 液瓶（洗脱瓶）中并与层析柱相通 。 打开层析柱下口开关，洗脱液即可流 出。
洗脱过程要保持适当的恒定流速 ，流速过 快有些分子来不及在分子筛中分配而流出；过慢 时已分离的分子会因扩散而混合。 洗脱液的流速取决于它的静水压。静水压是 指洗脱瓶中洗脱液的液面高出于层析柱出口产生 的液体压力（或接触空气的两个液面间的高差）， 这个高度差越大，静水压越大，洗脱液的流速就 越快。这个压力差可以调动，如提高洗脱瓶的位 置或瓶中液面的增减 ，因此静水压又称操作压。
SDS-PAGE实验报告
生化实验总结报告实验名称：SDS - PAGE法测定蛋白质的相对分子量作者：田景辉（201306230114）专业：生物工程指导教师：许培雅日期：2015.12.30组员：杨瑞徐巧妹尹彪程健刘嘉南目录一、实验介绍 (3)二、实验原理 (3)三、实验材料、试剂、器皿 (4)四、操作步骤 (5)五、注意事项 (7)六、实验数据记录与处理 (7)七、总结与建议 (8)八、术语表 (9)九、参考文献 (9)十、附录 (9)一、实验介绍1.实验目的掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法和测定蛋白质分子量的技术。
2.实验背景在实验一中，用100g新鲜酵母用甲苯自溶法、研磨法、SDS（十二烷基苯磺酸钠）法进行了蔗糖酶的提取以及粗提取，得到初提取液A、热提取液B、乙醇提取液C。
最终得到9.0ml蔗糖酶初提取液。
实验二采用QAE-葡聚糖凝胶离子交换柱层析法进行蔗糖酶的纯化，得到经线性阶梯洗脱的分离液D1和经阶梯梯度洗脱的分离液D2。
实验三采用苯基琼脂糖凝胶柱层析法进行进一步纯化，得到经2mol/L(NH4)2SO4的0.05mol/L Tris-HCl ph7.3 缓冲液洗脱的分离液E1和经2mol/L NaCl的0.05mol/L Tris-HCl ph7.3 缓冲液洗脱的分离液E2。
二、实验原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠）， SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
葡聚糖凝胶
葡聚糖凝胶葡聚糖是一种天然高分子聚合物，广泛存在于海洋生物中，如海藻、虾壳、蟹壳等。
葡聚糖具有许多优异的特性，如生物相容性好、低毒性等，因此被广泛应用于生物医学领域中。
葡聚糖的特性与结构使其能够被用于制备特殊的材料，如凝胶。
葡聚糖凝胶是一种由葡聚糖组成的交联网络，其结构与物理性质可以通过改变制备条件来调控。
葡聚糖凝胶可以在常温常压下形成，在适当条件下可保持稳定，同时能够吸附大量水分子，形成高度保水的结构。
这些特性使得葡聚糖凝胶在生物医学领域中具有广泛的应用前景。
葡聚糖凝胶具有多种制备方法，其中最常见的是化学交联法和物理交联法。
化学交联法通常涉及到使用交联剂将葡聚糖分子交联在一起形成凝胶网络。
物理交联法通常是将葡聚糖分子通过温度、pH、盐浓度等因素相互作用，在适当条件下形成稳定的凝胶结构。
葡聚糖凝胶具有多种应用前景，其中最具有潜力的是在生物医学领域中。
例如，葡聚糖凝胶可以作为组织修复和再生的载体材料，因为其具有良好的生物相容性和生物可降解性。
葡聚糖凝胶可以作为治疗创伤和烧伤的敷料，因为其可以保持伤口湿润，促进愈合。
葡聚糖凝胶还可以用于制备智能材料，在适当的刺激下，如温度、pH等，可以实现形态转化和释放药物。
此外，葡聚糖凝胶还可以应用于其他领域。
例如，它可以被用作食品和工业加工中的增稠剂和胶凝剂，可以用于制备潜水服和防晒霜等高科技材料。
总的来说，葡聚糖凝胶是一种具有广泛应用前景的材料。
它具有优良的生物相容性和生物可降解性，可以应用于生物医学、食品加工和工业等领域。
不仅如此，葡聚糖凝胶的制备方法也越来越成熟，它的应用前途仍然值得我们进一步探索和研究。
葡聚糖凝胶柱的使用方法
葡聚糖凝胶柱的使用方法一、准备工作：1.准备好葡聚糖凝胶柱和所需的缓冲液，如PBS（磷酸盐缓冲液）、TBS（三甲基氨基甲烷缓冲液）等。
2.将葡聚糖凝胶柱放入柱层析设备中，并根据设备的要求进行调整和固定。
3.预冲柱层析设备和葡聚糖凝胶柱，以去除可能的污染和杂质。
二、样品处理：1.将待纯化的生物大分子样品先进行预处理，如去除悬浮物、离心沉淀等。
2.将样品溶液以适当的缓冲液进行稀释，以达到最佳的样品浓度和适合葡聚糖凝胶柱操作的样品体积。
三、样品加载：1.将处理好的样品溶液缓慢地倒入柱顶，让样品从柱顶进入柱内。
避免产生气泡。
2.分子在葡聚糖凝胶柱中会根据分子大小和亲疏水性质的不同而发生分离和吸附。
较大分子会在柱上层析，而较小分子会透过凝胶层均匀流出。
因此，样品会在柱内逐渐被分离和纯化。
四、缓冲液流动：1.样品完成加载后，使用适当的缓冲液进行柱洗涤，以洗掉非特异结合的杂质。
2.缓冲液的选择应根据样品的性质而定，具体的选择和流动条件可以参考相关的文献或经验。
五、洗脱纯化：1.在用于洗脱纯化的缓冲液中，调整适当的条件以实现目标分子的洗脱。
如调整pH值、离子浓度、添加洗脱剂等。
2.根据分子的亲疏水性质，选择适当的缓冲液浓度梯度进行洗脱。
一般来说，较强亲疏水性的分子需要更高浓度的洗脱缓冲液。
六、收集洗脱液：1.将洗脱液通过柱底收集，收集不同时间点或不同分析目的的洗脱液。
2.根据实验需要，将洗脱液分为不同部分进行后续的分析或纯化处理。
七、重复使用：1.柱层析后，葡聚糖凝胶柱可以进行再生，以重复使用。
具体的再生方法可以参考柱层析设备和葡聚糖凝胶柱的说明书。
总结：葡聚糖凝胶柱是一种常用的生物大分子纯化方法，通过分子在柱内的分离和纯化来实现样品纯化的目的。
使用葡聚糖凝胶柱时，需要根据样品的特性和需求进行适当的样品处理、缓冲液选择、洗脱纯化条件的优化等。
如操作规范且配合适当的实验条件，葡聚糖凝胶柱可以快速、高效地纯化和富集生物大分子。
葡聚糖凝胶使用说明
葡聚糖凝胶使用说明化学和物理性质葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。
G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。
葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。
葡聚糖凝胶有不同的粒度。
超细级的葡聚糖凝胶是用于需要极高分辨率的柱色谱和薄层色谱。
粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速。
另外，粗级也可用于批量工艺。
化学稳定性葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂(除非它被化学降解)。
它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。
长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。
物理稳定性葡聚糖凝胶并不熔融，可以在湿态、中性PH进行灭菌或在高压灭菌器120℃、30分钟而不影响它的色谱性质。
干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。
葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。
产品说明：产品名称分离范围应用葡聚糖凝胶 G-10<700缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子葡聚糖凝胶 G-15<1500缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子葡聚糖凝胶 G-251000-5000工业上脱盐及交换缓冲液葡聚糖凝胶 G-501000-30000多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定葡聚糖凝胶 G-752000-70000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定葡聚糖凝胶 G-1002000-120000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定葡聚糖凝胶 G-1505000-300000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定葡聚糖凝胶 G-2005000-600000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定使用方法：1. 乙醇浸泡：在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干;2. 无盐水浸泡：室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀，然后；3. 盐酸浸泡：在常温下再用0.2N HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗只中性；4. 将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；5. 上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)；6. 凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm 以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。
阴离子交换填料使用说明
阴离子交换填料使用说明凝胶型号QAE葡聚糖凝胶A-25DEAE葡聚糖凝胶A-25DEAE葡聚糖凝胶A-50基团－N＋(CH2CH3)3Cl-－N(CH2CH3)2－N(CH2CH3)2载量 2.6-3.2mmol/g3-4mmol/g3-4mmol/g相应产品QAE Sephadex-A25DEAE Sephadex A-25DEAE Sephadex A-50颗粒大小（μm）干粉40-120干粉40-120干粉40-120应用离子交换层析介质，纯化蛋白及巨大分子等离子交换层析介质，纯化蛋白及巨大分子等离子交换层析介质，纯化蛋白及巨大分子等pH稳定性2-132-132-121使用方法将干粉浸泡于60-70％乙醇中过夜（充分搅拌），去离子水洗净乙醇。
取适量凝胶湿态装柱，绝对不能出现凝胶断层，依次分别用五倍柱体积的0.15M氢氧化钠、水、0.15M盐酸、水、0.15M氢氧化钠、水上柱至中性。
然后用上样的平衡液平衡柱后即可上样。
2上样量上样的多少取决于分离的要求及漏出的控制，当作饱和吸附时可以多上样，富集时为70-80％的柱体积，需要分离不同组分时应减少上样量，上样量控制在柱体积的25%以内。
柱高严格控制在25cm以内（A-50），因为这是软胶。
3洗脱方法：上样后用平衡液淋洗三个柱体积，然后在平衡液中加入一定浓度的氯化钠（或其它无机盐）进行洗脱（改变平衡液PH值也是洗脱的方法）。
4在位清洗（CIP）凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。
方法是以0.15M氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
请避免使用磷酸，醋酸缓冲液.而可以采用Tris-HCl作为使用Buffer。
5保存第1页，共2页用过的产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。
不能冷冻。
用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。
上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。
生物制药工艺学习题集离子交换法
第八章离子交换法一、填空题1、离子交换剂由、与组成。
平衡离子带为阳离子交换树脂，平衡离子带称阴离子交换树脂。
2、常见的离子交换剂有，，等。
3、离子交换树脂的根本要求有、、、与。
4、影响离子交换选择性的因素主要有、、、、等。
5、请写出以下离子交换剂的名称与类型：CM-C的名称是，属于交换纤维素; DEAE-C的名称是，属于交换纤维素;。
6、色谱聚焦〔chromatofocusing〕是一种高分辨的新型的蛋白质纯化技术。
它是根据，结合，能别离几百毫克蛋白质样品，洗脱峰被聚焦效应浓缩，分辨率很高，操作简单。
7、写出以下离子交换剂类型：732 ，724 ，717 ，CM-C ,DEAE-C ，PBE94 。
8、在采用多缓冲阴离子交换剂作固定相的离子交换聚焦色谱过程中，当柱中某位点之pH值下降到蛋白质组分值以下时，它因带电荷而，如果柱中有两种蛋白组分，pI值较者会超过另一组分，移动至柱下部pH较的位点进展。
9、影响离子交换选择性的因素有、、、二、选择题1、用钠型阳离子交换树脂处理氨基酸时，吸附量很低，这是因为〔〕A. 偶极排斥B.离子竞争C. 解离低D. 其它2、在酸性条件下用以下哪种树脂吸附氨基酸有较大的交换容量〔〕3、在尼柯尔斯基方程式中，K值为离子交换常数， K＞1说明树A. 小于平衡离子B.大于平衡离子C. 等于平衡离子D. 其它三、名词解释1、蛇笼树脂：2、尼柯尔斯基方程式：3、偶极离子排斥作用：四、问答题1、简述离子交换纤维素的特点有哪些？2、请以CM-C为例说明离子交换纤维素别离纯化蛋白质时的洗脱方法有哪些？并说出各种方法的洗脱原理。
3、请以DEAE-C为例说明离子交换纤维素别离纯化蛋白质时的洗脱方法有哪些？并说出各种方法的洗脱原理。
4、由以下图，利用给出的两种离子交换剂〔E1，E2〕别离3种蛋白质〔P1、P2、P3〕，用箭头流程图表示(并指出E1，E2的类型)。
5、以下图为离子交换法应用实例，请填写生产工艺流程中的空格〔可选因素：阴离子交换树脂，阳离子交换树脂， 0.05mol/L 氨水，0.1mol/L氨水，2mol/L氨水〕。
葡聚糖凝胶
(1)预处理称取葡聚糖凝胶（有不同型号）若干克，加入洗脱剂（通常为甲醇或者水，这里以甲醇为例）约20倍凝胶量，置室温下3h进行溶胀，溶胀必须彻底，否则会使上柱后流速变慢，凝胶断裂等。
(2) 装柱凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15。
柱的底部用装有细玻璃管的橡皮塞塞紧，用洗净的玻璃丝（约200目尼龙布）垫底或购买类似规格的商品柱。
然后将柱垂直安装好，接着将溶胀好的凝胶边搅匀边缓缓连续装入，色谱柱的出口流速m维持在5~10ml/min。
凝胶颗粒沉积到柱底后关紧色谱柱，等沉降到1-2cm时再2打开色谱柱。
直至降到满意高度为止，等凝胶柱内的液体留的与凝胶高度差不多时，用较小的滤纸盖住凝胶床表面，再用洗脱剂洗脱过夜。
装柱后的凝胶必须均匀，不能有气泡或明显条纹。
否则，必须到出重装。
(3) 加样装好的色谱柱至少要用相当于3倍保留体积的洗脱剂平衡，待洗脱剂流至与凝胶柱液面相平时（不能流干，否则会带入气泡），用滴管吸取样品溶液，在高于凝胶表面约1cm 处，沿管壁四周缓缓滴加样品液，加完后打开下面的出口，使样品渗入凝胶内。
再关闭出口，用少量洗脱液将管壁残留的样品洗下，再打开出口，至溶液渗入柱内，再关闭出口。
可以考虑再加一层薄薄的脱脂棉以保护柱表面（我一般不加），然后即可进行洗脱。
(4) 洗脱与收集洗脱时，用甲醇作洗脱剂，并且要连续不断地进行，使凝胶柱上端保持一定的液层，防止凝胶柱表面的液体流干。
一般酸性洗脱剂中碱性物质容易洗脱，碱性洗脱剂中酸性物质容易洗脱。
多糖类物质等极性大的物质考虑用水洗脱，常用的洗脱剂是水-甲醇，水-乙醇，水-丙酮等，一般根据自己样品的性质选择洗脱液，洗脱液可一直用单一梯度。
凝胶色谱的共性是流速慢，每份一般体积较小。
（内径1.3cm左右，长80cm左右的柱子我一般每份收集液为8ml）(5) 凝胶的再生和回收凝胶柱多次使用后，若污染严重，则考虑用50度左右的2%的NaOH和0.5mol/LNaCl 混合液浸泡后，再用水洗净即可。
葡聚糖凝胶使用说明书
上课下子棋保证书详细(第一篇)此文档协议是通用版本，可以直接使用，符号*表示空白。
敬重的班主任老师：在此，非常愧疚地向你递交我这份保证，由于一次保证意味着我犯了一次重大过错。
此次，我由于上课玩五子棋、不好好听课，给班级上课秩序造成了比较严峻的影响。
您观看到我的不良行为，准时加以制止，并且没收我的手机作为惩罚。
如今，经过面壁思过与深刻反剩我深深地觉悟到自己所犯错误的严峻性：第一，我身为一名在校同学，学习无疑是自己的本职工作，也是必需履行的义务。
其次，在高校期间的教育对于每个人来说都是非常宝贵的，而我却不思进取，甚至严峻到在上课期间玩手机、不用心听课。
这更是犯了非常严峻的错误，这是对于教育资源的铺张。
第三，身为一名同学，我犯这样的错误，无疑是大大辜负了我父母对我的殷切期望。
这对于我年迈的父母来说，是一个很大的打击。
我的父母辛苦赚钱，送我们进入高校深造，为的就是我们能够努力学习，找到一份好的工作，将来能够生活得更好。
而为的使我们能够在各方面活动好的条件，父母为我们购得手机。
而我却恰恰不用功读书，不能全身心的投入学习，反倒是上课玩五子棋。
如今我做了错事，辜负了我的父母，我觉得很惭愧，想起父母的辛苦，不由地流泪。
再看我的。
错误，我也是很抱歉辛勤教育我的老师的。
老师为我们辛勤工作，为我们努力备课，而我却辜负老师的辛苦，上课不好好听讲是对老师的不敬重。
此次保证过后，我也会跟老师做当面正式赔礼的。
最终我写一下对今后保证：我保证今后上课期间不做任何**行为了，上课期间不再玩五子棋。
今后仔细听每一节课，在校当一名好同学，在家做一个孝顺的儿子，将来为社会做出自己的一份贡献。
此致敬礼！保证人：******日期：*****上课下子棋保证书详细(第二篇)合同范本合同编号：[合同编号]标题：上课下子棋保证书日期：[签署日期]甲方：[甲方机构/个人名称]地址：[甲方地址]电话：[甲方电话]乙方：[乙方机构/个人名称]地址：[乙方地址]电话：[乙方电话]鉴于甲方作为[甲方机构/个人名称]（以下简称“甲方”）提供上课下子棋服务，乙方作为[乙方机构/个人名称]（以下简称“乙方”）接受上述服务，双方达成以下协议，以兹共同遵守：一、合作内容1.1 甲方将为乙方提供专业的上课下子棋服务，包括但不限于教授棋谱、指导棋局策略等。
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项葡聚糖凝胶柱是一种常用的色谱柱，其主要由多糖聚合物构成，具有多孔结构以及极高的比表面积。
葡聚糖凝胶柱在生物分离、蛋白质纯化以及分析等方面有重要的应用。
下面将介绍葡聚糖凝胶柱的使用方法以及注意事项，并列举了几种常见溶剂的溶胀系数作为参考。
使用方法：1.预处理：新柱使用前需进行预处理。
首先，在使用前用适当的缓冲液再生柱子，一般推荐使用PBS缓冲液进行再生。
其次，用去离子水进行洗脱，去除缓冲液中的离子。
2.样品准备：准备好带有样品的溶液，可以是蛋白质溶液、核酸溶液或者其他需要分离的溶液。
3.进样：将样品溶液注入到柱子中，可以使用曲线尖管或者注射器进行。
4.溶剂流动：使用适当的流动缓冲液进行柱子的着色，常用的缓冲液有PBS缓冲液、甲醇和乙醇。
5.收集分离的组分：通过收集分离的组分，可以进行后续的实验操作或者分析。
注意事项：1.柱子的平衡：在使用柱子前，将柱子放入合适的缓冲液中，进行平衡处理，通常需要约30分钟。
2.柱子的保管：使用完毕后，需将柱子用适当的缓冲液保存，避免干燥。
3.柱子的温度：柱子的运行温度一般在室温下进行，避免过高温度的使用，以免影响柱子的性能。
4.溶液选择：在选择适当的缓冲液时，应根据样品的性质以及需求进行选择，不同的缓冲液对分离的效果会有影响。
5.柱子的清洗：使用完毕后的柱子需要进行彻底的清洗工作，尤其是对于经常使用的柱子，清洗工作要做得彻底。
下面是几种常见溶剂的溶胀系数参考值：1.水：溶胀系数为1，对于葡聚糖凝胶柱来说，水是适用的溶剂。
2.硫酸：溶胀系数为0.57，硫酸能够完全渗透葡聚糖凝胶柱。
3.乙醇：溶胀系数为0.44，适量的乙醇可以使用，但过高浓度的乙醇可能会影响柱子的性能。
4.甲醇：溶胀系数为0.65，甲醇也可以使用，但同样需要注意控制浓度。
总结：葡聚糖凝胶柱是一种常见的色谱柱，具有广泛的应用。
在使用葡聚糖凝胶柱时，需进行适当的处理以及注意事项，以保证柱子的性能和寿命。
生物分离工程》题库+答案
生物分离工程》题库+答案1.生物产品的分离包括去除R不溶物、分离I产物、纯化P产物和精制P产物。
2.发酵液常用的固液分离方法包括过滤和离心等。
3.离心设备的形式包括管式、套筒式和碟片式等。
4.膜分离过程中使用的膜根据其孔径特性不同可分为微滤膜、超滤膜、纳滤膜和反渗透膜。
5.多糖基离子交换剂包括离子交换纤维素和葡聚糖凝胶离子交换剂两大类。
6.工业上常用的超滤装置有板式、管式、螺旋式和中空纤维式。
7.影响吸附的主要因素包括吸附质的性质、温度、溶液pH值、盐的浓度以及吸附物的浓度与吸附剂的用量。
8.离子交换树脂由网络骨架（载体）、联结骨架上的功能基团（活性基）和可交换离子组成。
9.在电泳用凝胶制备时，过硫酸铵的作用是引发剂，甲叉双丙烯酰胺的作用是交联剂，___的作用是增速剂。
10.影响盐析的因素包括溶质种类、溶质浓度、pH和温度。
11.工业上常用的结晶起晶方法包括自然起晶法、刺激起晶法和晶种起晶法。
12.离子交换过程实际上只包括外部扩散、内部扩散和化学交换反应三步。
13.在生物制品进行吸附或离子交换分离时，通常遵循Langmuir吸附方程，其形式为q=qc/(K+c)。
14.反相高效液相色谱的固定相是疏水性强的，而流动相是极性强的。
常用的固定相有C8辛烷基和十八烷基C18，常用的流动相有乙腈和异丙醇。
15.超临界流体的特点是与气体有相似的粘度和扩散系数，与液体有相似的密度。
16.离子交换树脂的合成方法包括加聚法和逐步共聚法两大类。
17.常用的化学细胞破碎方法包括渗透冲击法、酶消化法、增溶法、脂溶法和碱处理法。
18.等电聚焦电泳法分离不同蛋白质的原理是依据其等电点的不同。
19.离子交换分离操作中，常用的洗脱方法包括静态洗脱和动态洗脱。
20.晶体质量主要指晶体大小、形状和纯度三个方面。
21.亲和吸附原理包括配基固定化、吸附样品和样品解析三步。
22.根据分离机理的不同，色谱法可分为吸附、离交、亲和、凝胶过滤色谱。
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凝胶层析的定义：
凝胶是一种具有多孔、网状结构的分子筛。 利用这种凝胶分子筛对大小、形状不同的分 子进行层析分离，称凝胶层析 。
凝胶层析的应用范围：
凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、酶、 多肽、激素、多糖、核酸类等物质。分子大小 彼此相差25%的样品，只要通过单一凝胶床就可 以完全将它们分开。利用凝胶的分子筛特性， 可对这些物质的溶液进行脱盐、浓缩、去热源 和脱色。 凝胶层析的优点 凝胶层析具有设备简单、操作方便、分离 迅速及不影响分子生物学活性等优点。目前已 被广泛应用于各种生化产品的分离和纯化。
凝胶层析法
思考题（课前设疑）
1.层析分离技术包括哪些技术？分别叙 述凝胶层析、离子交换层析、亲和层析、 高压液相层析、疏水层析、聚焦层析的 分离纯化原理。 2.一般在粗品制备阶段和精品纯化阶段 分别应采用哪些层析分离技术？
3.膜分离技术的原理是什么？它同一般
的透析方法相比有何特点？
4.凝胶层析的应用范围有那几方面？
式中Ve为脱体积，它包括自加入样品时算 起，到组分最大浓度出现时所流出的体积。 Kd为每个溶质分子在流动相和固定相之间的 一个特定的分配系数，它只与被分离物质分 子大小和凝胶颗粒内孔隙大小分布有关。Kd 可通过实验由Ve、Vo和Vi求得。
Ve＝Vo＋Kd.Vi
可改写为：
（Ve-Vo） Kd=－－－－ Vi
Vi 简称内水体积，可由 g· Wr 求得（g 为干 凝胶质量，单位为g，Wr为凝胶吸水量，以mL ／g表示）。Vi也可以从洗脱一种完全不受凝 胶微孔排阻的小分子溶质（如重铬酸钾）的 洗脱体积Ve计算，即
Ve＝Vo＋Vi
对某物质在凝胶柱内洗脱体积Ve、Vo和 Vi之间的关系可用下式表示： Ve＝Vo＋Kd.Vi
不同型号葡聚糖凝胶柱床参数 型号 G-10
G-15 G-25 G-50 G-75 G-100 G-200
Vt 2
3 5 10 13 17 30
V0 0.8
1.1 2 4 5 6 9
Vi 1
1.5 2.5 5 7 10 20
二、凝胶层析的特点
1．凝胶层析操作简便，所需设备简单。 有时只要有一根层析柱便可进行工作。 分离介质—凝胶完全不需要像离子交换 剂那样复杂的再生过程便可重复使用。 2．分离效果较好，重复性高。最突出 的是样品回收率高，接近100％。
5．分辨率不高，分离操作较慢。由于凝 胶层析是以物质分子量的不同作为分离 依据的，分子量的差异仅表现在流速的 差异上，所以分离时流速必须严格把握。 因而分离操作一般较慢。而且对于分子 量相差不多的物质难以达到很好的分离。 此外，凝胶层析要求样品粘度不宜太高。 凝胶颗粒有时还有非特异吸附现象 。
三、常用凝胶的结构和性质 凝胶层析法常用的凝胶有天然凝胶 （如琼脂粉凝胶）和人工合成凝胶（如 葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶）。
1．葡聚糖凝胶
葡聚糖凝胶（Sephadex）具有良好的 化学稳定性，是目前生化产品制备中最 常用的凝胶。
G类葡聚糖凝胶（Sephadex-G）的最基本骨架是 葡聚糖，它是一种以右旋葡萄糖为残基的多糖， 分子间主要是α-1,6- 糖苷键（约占 95% ），分 枝为l，3-糖苷键（约占5%），以1-氯-2，3-环 氧丙烷（见右式）Cl－CH2－CH－CH2为交联剂将
－、凝胶层析的基本原理
凝胶层析的原理
l 分子大小不同混合物上柱； 2 洗脱开始，小分子扩散进人凝胶 颗粒内，大分子被排阻于颗粒之外；3 大小分子分开： 4大分子行程 较短，已洗脱出层析柱，小分子尚在进行中
凝胶是一类多孔性高分子聚合物，每 个颗粒犹如一个筛子。当样品溶液通过 凝胶柱时，相对分子质量较大的物质由 于直径大于凝胶网孔而只能沿着凝胶颗 粒间的孔隙，随着溶剂流动，因此流程 较短，向前移动速度快而首先流出层析 柱；反之，相对分子质量较小的物质由 于直径小于凝胶网孔，可自由地进出凝 胶颗粒的网孔，在向下移动过程中，它 们从凝胶内扩散到胶粒孔隙后再进入另
当Kd＝0时，Ve=Vo，说明这种溶质相对分子 质量大，完全不能进入凝胶颗粒微孔内，被 排阻于凝胶颗粒之外而最先洗脱下来；
当Kd＝1时，即Ve小分子 ＝Vo＋KdVi，说明这 种溶质的相对分子质量小，完全向凝胶颗粒 内扩散，在洗脱过程中将最后流出柱外。
但实际上，约有1/5的内水因溶剂化作用 而呈水合状态，妨碍小分子的自由扩散。故 实际上Ve小分子 ＝Vo＋0.8Vi；当0＜Kd＜l时， 意味着溶质分子只有部分向凝胶颗粒内扩散， Kd愈大，进入凝胶颗粒内的程度愈大；Kd＝ 0.5时，其洗脱体积Ve＝Vo十0.5Vi。
3 ．分离条件缓和。凝胶骨架亲水，分 离过程又不涉及化学键的变化，所以对 分离物的活性没有不良影响。 4 ．应用广泛。适用于各种生化物质，如 肽类、激素、蛋白质、多糖、核酸的分离 纯化、脱盐、浓缩以及分析测定等。分离 的分子量范围也很宽，如Sephadex G类为 102～105d；Sepharose类为105～108d。
5.凝胶层析有何优缺点？
6.常用凝胶分那几类？分别叙述它们各 自的应用范围及特点。 7.在实验中应如何选择凝胶与预处理？
8.细粒凝胶柱流速慢，洗脱峰越窄，分辨 率高，适用于什么产品多分离或分析？粗 粒凝胶柱流速高，但洗脱峰平坦，分辨率 低，适用于产品制备那个阶段的分离？
9.什么是“类分离”和“分级分离 ”？
一凝胶颗粒，如此不断地进入与逸出，使 流量增长，移动速率慢而最后流出层析柱。 而中等大小的分子，它们也能在凝胶颗粒 内外分布，部分进入颗粒，从而在大分子 物质与小分子物质之间被洗脱。这样，经 过层析柱，使混合物中的各物质按其分子 大小不同而被分离。
Vt=Vo+Vi+Vg
Vt=π R2h
V。简称为外水体积，Vo等于被完全排阻 的大分子的洗脱体积。可以用一个已知相对 分子质量远超过凝胶排阻极限的有色分子， 如常用的蓝色葡聚糖 -2000 溶液通过柱床， 即可测出柱床的外水体积Vo。
10.在凝胶层析中要想得到好的层析结果 应注意那些问题和采取那些措施？ 11.凝胶用过后，有那几种保存方法？ 12.葡聚糖凝胶离子交换剂，葡聚糖凝胶 和离子交换剂有何异同及特点？
凝胶层析（gel chromatography）常出 现多种名称 ：
如凝胶过滤、分子筛层析、排阻层析、凝ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ胶渗透层析等。