iTRAQ定量蛋白质组学解析

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itraq蛋白质组技术的原理和一般流程

I. 概述1. 介绍itraq蛋白质组技术的概念和意义itraq（isobaric tags for relative and absolute quantification）蛋白质组技术是一种高通量的质谱技术，广泛应用于蛋白质组学研究中，能够同时对多个蛋白质进行定量分析。

由于其高度灵敏度和高效性，itraq蛋白质组技术在生物医学研究领域中扮演着重要的角色。

II. itraq蛋白质组技术的原理1. itraq标记原理itraq蛋白质组技术的关键在于标记技术，其原理是通过化学方法在蛋白质样本中引入具有不同质量的同位素标记物，从而实现对蛋白质的定量分析。

itraq试剂包含一个受阴离子的部分、一个杂环胺基和一个羧酰亚胺可以与肽发生反应。

2. itraq标记技术itraq标记技术的过程包括样本制备、标记、复杂样品分离、质谱分析等步骤，标记过程中要注意将样品分成不同组别，分别添加不同的itraq试剂进行标记，之后混合样品进行后续分析。

III. itraq蛋白质组技术的一般流程1. 样品制备itraq蛋白质组技术的样品制备对后续的标记和分析至关重要，一般的样品制备包括蛋白提取、蛋白定量、蛋白消化等步骤，确保样品制备的完整性和准确性。

2. 蛋白质标记在样品制备完毕后，需要进行itraq标记。

将不同组别的样品分别添加相应的itraq试剂进行标记，标记的严谨性和准确性对后续实验数据的可信度具有重要影响。

3. 复杂样品分离经过标记的样品需要进行分离，一般采用高效液相色谱或离子交换色谱对样品进行分离，以确保后续质谱分析的准确性。

4. 质谱分析经过样品制备、标记和分离后的样品需要进行质谱分析，itraq蛋白质组技术中常用的是质谱-质谱技术，利用质谱仪对样品进行定量分析。

IV. 结语1. 引述itraq蛋白质组技术在蛋白质组学研究中的重要性itraq蛋白质组技术作为一种高通量的质谱技术，为蛋白质组学研究提供了强大的工具和方法，通过对多个蛋白质进行定量分析，加深了我们对细胞蛋白质组学的理解，对疾病的研究和诊断起到了重要的作用。

iTRAQ定量蛋白质组学技术

iTRAQ定量蛋白质组学技术现在有一种很火的蛋白定量技术叫做iTRAQ，相信很多接触过蛋白组学方面研究的童鞋们都有耳闻，不过可能大多数人对它没有比较深入的了解，现在我们一起来好好了解下这种超厉害的定量蛋白质组学技术。

概念啥是iTRAQ呢？相对和绝对定量同位素标记（isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ）技术是美国应用生物系统（AB SCIEX）公司与2004年推出的一种全新的体外同重同位素标记的相对与绝对蛋白组定量技术。

该同位素标记法利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端和赖氨酸侧链基团，经高精度质谱仪串联分析，可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量，能够高通量地寻找不同蛋白质组的差异蛋白并且准确进行相对或绝对定量，是近年来定量蛋白质组学中应用广泛的高通量筛选技术。

产生背景随着人类基因组计划的进展和多种生物基因组测序工作的完成，人类跨入了后基因组和蛋白质组时代，以基因组研究成果为基础，各种先进技术为支撑，进一步研究生物有机体的全部蛋白质结构，功能以及相互作用的蛋白质组学是目前的研究热点。

蛋白质组学的真正含义在于，在整体，动态，网络的水平上对蛋白质进行定量定性分析，对生命活动进行全面深入的认识。

仅仅知道蛋白质的身份并不足以对蛋白质给出最终定论，因为蛋白质的浓度对于实现其在细胞中的功能来说极其重要，一种特殊蛋白质在浓度上的变化，就能预示细胞的突变过程。

因此，科学家能够对蛋白质的相对和绝对浓度进行测量，是很重要的事情。

过去，科学家通常先进行凝较电泳，切断条带，再用质谱方法测量条带中的蛋白质。

可是，这种方法既不是非常敏感，也不是非常精确，对我们研究蛋白组有局限性。

科学家们一直在探索蛋白组学研究方法。

现在，基于高度敏感性和精确性的串联质谱方法，不需要凝胶，就可以获得相对和绝对定量的蛋白质结果。

定量蛋白组学是蛋白质组学的一个重要组成部分，即对一套基因组表达的全体蛋白或某一复杂的混合物体系中所有蛋白质进行定量和鉴定。

itraq定量蛋白质组学原理

itraq定量蛋白质组学原理iTRAQ（isobaric Tags for Relative and Absolute Quantification）定量蛋白质组学是一种广泛应用于蛋白质定量的方法。

它通过标记蛋白质样品中的氨基酸残基，利用质谱技术进行定量分析。

iTRAQ 定量蛋白质组学原理基于同位素标记和质谱分析的原理，具有高灵敏度、高通量和高精确度的特点，被广泛应用于生物医学研究、药物发现和临床诊断等领域。

iTRAQ定量蛋白质组学的核心原理是通过同位素标记来比较不同样品中蛋白质的相对和绝对丰度。

在实验开始前，将不同样品中的蛋白质样本分别进行消化，得到氨基酸片段。

然后，使用iTRAQ试剂对氨基酸片段进行标记。

iTRAQ试剂由一个报告离子和一个结构相似但质量不同的标记离子组成。

这些标记离子具有相同的化学性质，但在质谱分析中会产生不同的质荷比。

通过不同样品中蛋白质样本的标记，可以将它们在质谱分析中区分开来。

在质谱分析中，标记的蛋白质样本会经过离子化和碎裂，产生一系列的碎片离子。

这些碎片离子会根据它们的质荷比被质谱仪进行检测和记录。

通过比较不同样品中的标记离子的相对丰度，可以确定蛋白质在不同样品中的相对丰度。

而通过比较标记离子的绝对丰度，可以确定蛋白质在不同样品中的绝对丰度。

iTRAQ定量蛋白质组学的优势在于它能够同时分析多个样品，提供更全面的信息。

通过一次实验，可以同时比较多个样品中的蛋白质丰度差异。

同时，iTRAQ定量蛋白质组学具有较高的灵敏度和准确性，能够检测到低丰度的蛋白质，并且可以提供相对和绝对丰度的定量信息。

然而，iTRAQ定量蛋白质组学也存在一些限制和挑战。

首先，iTRAQ试剂的成本较高，限制了其在大规模研究中的应用。

其次，iTRAQ定量蛋白质组学在样品预处理、质谱分析和数据解析等方面需要较为复杂的技术和专业知识。

同时，由于iTRAQ试剂的标记机制，会导致定量结果的一定偏差。

因此，在应用iTRAQ定量蛋白质组学时，需要进行严格的实验设计和数据分析，以确保结果的准确性和可靠性。

iTRAQ蛋白组学

百泰派克生物科技
iTRAQ蛋白组学
iTRAQ蛋白组学定义
iTRAQ是一种基于标签的蛋白质定量技术，中文名称为同位素标记相对和绝对定量。

iTRAQ蛋白组学通过iTRAQ技术对蛋白组进行鉴定和定量研究。

iTRAQ蛋白组学研究方法
iTRAQ技术通过同位素标记来实现蛋白质定量研究，经水解的蛋白质其多肽N末端
或赖氨酸侧链基团可以被同位素标记，通过高精度质谱仪串联分析，可同时对最多
8个样品进行鉴别和定量。

利用iTRAQ技术研究蛋白组学具有如下优势：一次实验
可实现多达8个样品蛋白质的高通量鉴定和定量；该技术是在肽段水平上进行的体外标记，没有物种特异性限制，理论上可用于所有物种的蛋白质定量研究。

百泰派克生物科技使用Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪结合Nano-LC，提供iTRAQ定量蛋白组分析一站式服务。

欢迎免费咨询152-****7680。

iTRAQ技术

同位素相对标记与绝对定量技术（iTRAQ 技术）简介：iTRAQ 技术（同位素相对标记与绝对定量技术）是近年来最新开发的一种新的蛋白质组学定量研究技术能够得到：一般500至600种蛋白，以及不同样品间蛋白质表达的差异。

。

i TRAQ 试剂盒包括八种同量的胺活性试剂，能对蛋白质水解的肽段进行标记，因此采用串联质谱方法，可以对肽段进行精确的鉴别和定量。

应用：• 同时标记8个样品，一次实验实现多达8个样品的蛋白质鉴定和定量 • 非常高的通量• 可以进行多个时间点蛋白质组动态变化的监测，• 可以分析详细分期／型的临床疾病样本，并可设计样本重复• 甚至可以进行个体样本的研究• 细胞周期、细胞信号传导整个过程的蛋白质组动态学技术特点和优势• 定量敏感、反应速度快• 标记完全，标记效率高达97%以上• 较高的重复性，能简化谱的复杂程度、提高离子强度• 可对多达八种不同样本同时进行定量分析• 定性与定量同时进行实验大致流程：操作时首先是对不同蛋白质样品分别进行酶解，并采用不同的标记对酶解片段进行标记后混合，结合多维色谱分离和后续的串联质谱鉴定，从而实现对不同来源样品蛋白进行分离和鉴定的目的，我们可以提供8重标记iTRAQ 标记，可以对多达8种不同样本同时进行定量分析。

原理：i TRAQ 试剂包含八种不同的胺活性试剂。

每种胺活性试剂与水解后肽段结合。

胺活性试剂包含报告基团和平衡基团。

下图为整个的实验流程：1.不同的蛋白质样品S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7和S8,首先分别进行蛋白酶水解（通常为胰蛋白酶Trypsin）.2.采用不同的标记对酶解片段进行标记后混合。

3.使用液体色谱和质谱的联用进行一级质谱。

4.8个不同来源的，同一蛋白的同一个标记肽段在一级质谱上表现为一个峰。

5.对加入标记的肽段进行二级质谱，这时，平衡基团从报告基团上脱落。

6.二级质谱后，报告基团在二级质谱低质量区域产生8个报告离子信号：113、114、115、116、117、118、119和121，其强度分别代表8个标记的样品的同一个肽段。

ITRAQ串联质谱对于蛋白质组学的分析

Application example
利用iTRAQ 技术处理了猪肝细胞中的1476 种蛋白对其中880 种蛋白进行分析，在错误识别率小于 5% 条件下,他们发现一些与能量代谢、分解代谢、生物合成、电子传递、氧化还原酶类反应等有关的蛋白含量都大大增加了，这些蛋白在肝脏作为化学和能量工厂这一角色中都起着重要的作用． iTRAQ 技术鉴定了芸苔属植物保卫细胞中的相对蛋白成份．他们用相对定量的方法在经脱落酸处理过的样品中和对照组中鉴定出 431 种蛋白质．在含量丰度相对上调的 66 种蛋白质中，与应激和防御有关的蛋白占大多数． 38 种蛋白的含量丰度下调了，其中许多都与新陈代谢和蛋白合成有关．也未曾有人报道过这些蛋白与脱落酸敏感或与气孔的开合有关．他们的研究不仅建立了一个完整的脱落酸敏感蛋白库，而且鉴定出几种新的蛋白，为后续研究其在植物保卫细胞中的功能奠定了基础
Introduction
相对和绝对定量同位素标记( isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ ) 技术是美国应用生物系统公司在 2004 年推出的一项新的体外同位素标记技术.使用该技术可以寻找差异表达蛋白，并分析其蛋白功能，同时可以对1个基因组表达的全部蛋白质或1个复杂的混合体系中的所有蛋白质进行精确定量和鉴定.如今，iTRAQ 技术已经在蛋白质组学的定量研究中得到了极其广泛的应用
Methods
2. 胰酶消化蛋白
（1）在每个新的胰酶瓶中加入25 μL超纯水溶解胰酶 ↓ （2）漩涡震荡使胰酶充分溶解，短暂离心 ↓ （3）每个样品管中加入2~10 μL胰酶溶液。 ↓ （4）漩涡震荡混匀，短暂离心 ↓ （5）37 ℃保温过夜（12~16 hrs）

基于iTRAQ蛋白分析技术初步探索红参粉对果蝇的抗衰老作用及其机制研究

基于iTRAQ蛋白分析技术初步探索红参粉对果蝇的抗衰老作用及其机制研究一、内容综述随着科学技术的不断发展，人们对生物衰老机制的研究越来越深入。

在众多抗衰老方法中，红参粉作为一种具有抗氧化、抗炎、抗疲劳等作用的天然保健品，受到了广泛关注。

本研究采用基于iTRAQ蛋白分析技术，对红参粉对果蝇的抗衰老作用及其机制进行初步探索。

iTRAQ技术已成为一种高通量、高灵敏度的蛋白质组学研究方法。

通过对样品进行同位素标记，iTRAQ可以同时比较多个样本之间的蛋白质表达差异，从而揭示蛋白质在生物过程中的作用。

在本研究中，我们利用iTRAQ技术对红参粉处理后的果蝇蛋白质组进行了深度挖掘，以探讨红参粉对果蝇抗衰老作用的可能机制。

红参粉处理后的果蝇在衰老过程中，其体内多种抗氧化酶活力显著提高，且丙二醛含量、过氧化氢含量均有所降低，提示红参粉可能通过清除自由基、减轻氧化应激损伤来发挥抗衰老作用。

红参粉处理后的果蝇体内相关抗氧化基因的表达水平也发生了一定程度的改变，进一步证实了红参粉对果蝇抗氧化能力的提升作用。

除了抗氧化能力外，红参粉还可能通过调节果蝇体内的能量代谢、炎症反应等途径发挥抗衰老作用。

红参粉处理后的果蝇在衰老过程中，其体内能量代谢相关基因的表达水平发生调整，有助于维持果蝇体内能量的稳定。

红参粉还能够抑制果蝇体内炎症因子的释放，减轻炎症反应对果蝇细胞的损伤。

本研究表明红参粉可能通过多种途径发挥抗衰老作用，其机制可能与提高果蝇体内的抗氧化能力、调节能量代谢和炎症反应等相关。

红参粉在抗衰老方面的具体作用机制仍需进一步深入研究。

我们将继续利用iTRAQ技术对红参粉处理后的果蝇进行更全面的蛋白质组学分析，以期揭示更多关于红参粉抗衰老作用机制的细节。

1. 红参粉的来源与特点红参，作为人参的一种炮制加工品，因其独特的药用价值和丰富的营养价值备受关注。

红参通常选用优质的人参，在经过严格的水分、温度控制以及炮制工艺下制成。

在人参的药用功效中，红参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津养血等作用。

itraq蛋白质组学样品制备

itraq蛋白质组学样品制备iTRAQ蛋白质组学样品制备蛋白质组学是一种研究生物体内所有蛋白质的整体组成、结构和功能的科学方法。

而iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantification）技术是一种常用的蛋白质组学分析方法，它通过标记蛋白质样品中的肽段，实现对蛋白质的定量分析。

在进行iTRAQ蛋白质组学样品制备时，需要经过一系列的步骤。

首先，收集需要研究的生物样品，例如细胞、组织或血清。

然后，将样品进行样品裂解，以释放细胞或组织中的蛋白质。

样品裂解可以通过机械破碎、超声波处理或化学方法实现。

接下来，需要对裂解的样品进行蛋白质提取。

蛋白质提取方法有很多种，常用的包括酸性沉淀法、有机溶剂法和离子交换法等。

选择合适的提取方法可以保证蛋白质的高纯度和高稳定性。

蛋白质提取完成后，需要对提取的蛋白质样品进行消化。

消化是将蛋白质分解为肽段的过程，常用的酶有胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等。

消化的时间和酶的用量需要进行优化，以确保得到适量的肽段。

在消化完成后，需要对肽段进行iTRAQ标记。

iTRAQ标记是将肽段与特定的化学试剂结合，以实现对不同样品的定量分析。

iTRAQ试剂通常具有相同的质量，但具有不同的质谱特征，因此可以通过质谱分析来区分不同样品中的肽段。

标记完成后，需要将不同样品的标记肽段混合在一起，进行液相色谱-质谱联用分析。

液相色谱-质谱联用技术可以对肽段进行分离和鉴定，从而实现对蛋白质的定量分析。

需要对液相色谱-质谱联用分析得到的数据进行解析和统计分析。

通过比较不同样品中的肽段的相对丰度，可以获得蛋白质在不同样品中的定量信息。

这些定量信息可以用于研究蛋白质的表达差异和功能变化。

总结起来，iTRAQ蛋白质组学样品制备是一个复杂而关键的过程，它涉及到样品裂解、蛋白质提取、消化、iTRAQ标记、液相色谱-质谱联用分析和数据解析等多个步骤。

只有经过严格和准确的样品制备，才能得到可靠和有效的蛋白质组学数据，为后续的研究提供有力支持。

iTRAQTMT蛋白质组学分析基本知识点

iTRAQTMT蛋白质组学分析基本知识点蛋白质组（Proteome）一词源于蛋白质（protein）与基因组（genome）两个词的组合，意指“一种基因组所表达的全套蛋白质”，即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。

蛋白质组与转录组有许多相似之处，也具有时空特异性，会随着环境、组织或个体的改变而改变。

蛋白质组学本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的特征，包括蛋白质的表达水平，翻译后的修饰，蛋白与蛋白相互作用等，由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生、细胞代谢、生长发育以及各种胁迫反应等过程的整体而全面的认识。

iTRAQ和TMT的结构与区别iTRAQ和TMT是近年来应用最广泛的差异蛋白质组学技术，它们均采用体外标记的方法，利用同位素试剂标记蛋白质酶解后产生的多肽，对两个或多个样本，在全蛋白质组层面上展开相对定量分析。

说到这里,很多人可能会认为iTRAQ和TMT是两种不同的定量技术，其实二者只是不同厂家生产的（iTRAQ是AB SCIEX研发，TMT 是Thermo Fisher研发），在标记规格（iTRAQ是4标和8标的；TMT是2标、6标以及10标的）、标签分子结构上有些许差异，其他原理基本一样。

Questions and Answers1、iTRAQ/TMT与Label free相比有什么优势？Label free无需同位素标记，不受样本条件的限制，定性没有问题，但是定量的准确性不高，会受到质谱重复性等因素的影响。

iTRAQ/TMT的覆盖度高、灵敏度高、重复性好。

但是在混标上机时要充分考虑样品的情况，样品数量较多时，实验设计会较为复杂。

2、做iTRAQ/TMT蛋白质组学分析，不同老师的样本可否放在一组上机？不同老师的样品或者同一个老师不同实验的样品，都不能放在一组上机。

不同的物种的样品，在搜库的时候选择的数据库不一样，无法进行搜库比较。

同一个物种的不同处理的样品，经过不同实验室处理后，样品里的蛋白种类和丰度会有较大差别，混在一起后会影响两组不同来源的样品的蛋白鉴定。

iTRAQ定量蛋白质组学资料

<4>甲酸（TEDIA）
（2）具体操作参数反相柱信息：ZORBAX 300SB-C18 column(5 µm, 300A, 0.1 x 150mm ，microm ,USA) 色谱分离90min，梯度B%从5分钟5%到70分钟上升至35%。 A相：5%ACN,0.1%甲酸 B相：95%ACN,0.1%甲酸流速： 300nL/min
iTRAQ定量蛋白质组学
主要内容
iTRAQ技术简介 iTRAQ试剂标记原理 iTRAQ技术优势 iTRAQ实验流程 iTRAQ实验结果示例 iTRAQ实验详细步骤
iTRAQ技术简介
iTRAQ技术是由美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation，ABI)2004年开发的同重标签标记的相对和绝对定量 (isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)技术。 iTRAQ试剂是可与氨基（包括氨基酸N端及赖氨酸侧链氨基）连接的胺标记同重元素。在一级质谱图中，任何一种iTRAQ试剂标记不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。在一级质谱中，不同来源的相同肽段表现为一个峰；在二级质谱中，iTRAQ试剂中的平衡基团发生中性丢失，信号离子表现为不同质荷比(114～121)的峰，因此根据波峰的高度及面积，可以得到同一蛋白在不同样本中的表达差异；同时，肽段的MS/MS结果结合数据库检索可以鉴定出相应的蛋白种类。
A相：10mM KH2PO4，25% CAN，PH 2.6
B相：10mM KH2PO4，350mM KCl，25%ACN，PH 2.6 紫外检测波长：214nm/280nm 流速：200μL/min
梯度：60min

蛋白质组学iTRAQ研究的内容、方法及意义

蛋白质组学iTRAQ研究的内容、方法及意义生物有机体的生理活动、病理活动以及**的功用主要是通过蛋白质来实现的,然而仅凭目前已知的蛋白质根本无法阐明各种复杂的生命活动过程,因此,以基因组的调研成果为基础,以各种先进工艺为支撑,进一步调研生物有机体的全部蛋白质结构、功能及其相互功用已经成为必然。

目前大量工作者致力于蛋白质组学的调研,本文现对此作一简述。

1 蛋白质组学的定义及调研内容蛋白质组学(proteomics)是调研在特定时间或环境下某个细胞或某种组织的基因组表达的全部蛋白质。

蛋白质组学的真正含义在于:它不是按照传统的方式孤立地调研某种蛋白质分子的功能,而是应用各种蛋白质组学工艺调研某种蛋白质在复杂的细胞环境中的功能。

蛋白质组学旨在列出全部蛋白质的细目,弄清每一个蛋白质的结构和功能及蛋白质群体内的相互功用,对比在**和健康状态下它们的表达水平的变化。

蛋白质组学分为表达蛋白质组学和细胞图谱蛋白质组学。

前者利用各种先进工艺调研蛋白质表达的整体变化,即调研在机体的生长发育、**和死亡的不同阶段中,细胞与组织的蛋白质组分的变化;后者主要通过分离蛋白质复合物系统地调研蛋白质间的相互功用。

2 蛋白质组与基因组的关系基因是遗传信息的携带者,蛋白质则是生命活动的执行者。

实际上每一种生命运动形式,都是特定蛋白质群体在不同时间和空间出现并发挥功能的结果。

因而蛋白质组调研是我们理解细胞功能和**发**展过程的中心环节。

如果不能共同致力于蛋白质组的调研,那么基因组的调研成果将无法兑现。

DNA序列所提供的信息仅仅是一种静止的资源,而细胞的生命活动是通过各种蛋白质来实现的一种动态过程。

一个机体内所有不同的细胞都共享同一基因组,然而同一个机体的不同细胞和不同组织却有不同的蛋白质组,而且机体在不同发育阶段,直至后消亡的全过程中蛋白质组也在不断变化。

因而蛋白质组要比基因组复杂得多。

由于对转录产物的选择性剪切、**起止点的变化或者mRNA上三联体密码发生移码突变等均可以明显促进蛋白质多样性的产生,而且mRNA的水平并不能反映蛋白质水平,即使一个开放阅读框(ORF) 呈现在面前,也根本无法证实某种蛋白质存在与否。

iTRAQ简介8剖析

iTRAQ试剂标记原理
iTRAQ技术优势
• 1：灵敏度高，检测限低，可检测出低丰度蛋白； • 2：分离能力强,分析范围广,iTRAQ可以对任何类型的蛋白质进行鉴定，包括高分子量蛋白质、酸性蛋白和碱性蛋白，膜蛋白和不溶性蛋白。 • 3: 高通量：同时对8个样本进行分析，提高了实验通量，可同时对多个时间点或不同处理的蛋白质进行分析； • 4：结果可靠：定性与定量分析结果更加可
（Matrix-assisted-laser-desorption-time-of-flight, MALDI-TOF/MS）
• 质谱技术的基本原理是样品分子离子化后，根据不同离子间的质荷比(ｍ/ ｚ)在真空系中飞行速度的差异来分离并确定其分子量。生物质谱仪通常包含三个部分：离子源，质量分
标记
• 1. 不同的蛋白质样品S1、S2、S3、S4、S5、S6、 S7和S8,首先分别进行蛋白酶水解（通常为胰蛋白酶Trypsin）. • 2. 采用不同的标记对酶解片段进行标记后混合。 • 3. 使用液体色谱和质谱的联用进行一级质谱。 • 4. 8个不同来源的，同一蛋白的同一个标记肽段在一级质谱上表现为一个峰。 • 5. 对加入标记的肽段进行二级质谱，这时，平衡基团从报告基团上脱落。 • 6. 二级质谱后，报告基团在二级质谱低质量区域产生8个报告离子信号：113、114、115、116、
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪
iTRAQ简介
• iTRAQ试剂是可与氨基酸末端氨基及赖氨酸侧链氨基连接的胺标记同重元素。在质谱图中，任何一种iTRAQ试剂标记不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。在串联质谱中，信号离子表现为不同质荷比(114～121)的峰，因此根据波峰的高度及面积，可以鉴定出蛋白质和分析出同一蛋白质不同处理的定量信息。

中科项目文章蛋白质组学（iTRAQPRM）探讨药物联合治疗胃癌细胞效果和作用机制

中科项目文章蛋白质组学（iTRAQPRM）探讨药物联合治疗胃癌细胞效果和作用机制质谱多组学iTRAQ‑based proteomics analysis of the therapeutic effects of combined anticancerbioactive peptides and oxaliplatin on gastric cancer cellsOncology Reports IF=3.04研究背景胃癌（Gastric Cancer, GC）是最常见的癌症类型之一，也是全球癌症死亡的第二大原因。

胃癌的病因复杂，确切发病机制尚不清楚，由于缺乏有效的临床早期诊断和治疗的肿瘤分子标志物，大多数胃癌患者确诊时已是中晚期，故而导致疗效不佳，死亡率高居不下，患者的5年生存率仅有25％左右。

此外，这些患者有很高的局部复发和远处转移的风险，预后差，存活率低。

因此，胃癌与疾病负担显著相关。

奥沙利铂（Oxaliplatin，OXA)是第三代铂类抗肿瘤药物，以DNA为靶作用部位，铂原子与DNA形成交叉联结，拮抗其复制和转录。

广泛的应用于胃肠道恶性肿瘤的临床治疗。

然而，OXA作为一种化疗药物，使用起来存在一些缺点，长期使用可降低OXA最初的治疗效果，通过提高副作用的风险以及多药物抗性，因此，寻找针对胃癌的新的组合治疗方法成为了研究热点。

抗肿瘤生物活性多肽（ACBP）是用人胃癌细胞免疫山羊，从羊肝脏中分离获得，含有多种肽段，分子量8kDa，包括泛素蛋白酶和脂肪酸结合蛋白。

ACBP不干扰体内正常的生理功能和酶反应。

此前的研究也表明，ACBP具有有效的抑制包括胃癌细胞、鼻咽癌细胞和胆囊癌细胞等多种肿瘤细胞的增殖，具有诱导肿瘤细胞凋亡以及调节患者机体无氧糖代谢等作用。

联合ACBP和低剂量的顺铂可获得与高剂量顺铂治疗同样的治疗效果，有效的降低了顺铂剂量和可能的药物抗性。

然而，ACBP联合OXA抑制增殖，包括凋亡、引起不可逆的MKN-45细胞停滞在细胞周期的G2/M时期。

iTRAQ定量蛋白质组学分析

百泰派克生物科技
iTRAQ定量蛋白质组学分析
iTRAQ定量蛋白质组学是一种基于体外等质量同位素标签研究蛋白质组相对和绝对
定量的技术，可分析不同样本中的蛋白质组成差异。

iTRAQ技术利用4-8种不同的
同位素试剂标记酶解后的肽段氨基（即氨基酸N-末端和赖氨酸侧链基团），经过液
相色谱串联质谱技术检测得到一级质谱图和二级质谱图，解析质谱数据可实现4-8
种不同样品间蛋白质的定量检测，是蛋白质组学常用的高通量定量技术。

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台，Orbitrap Fusion质谱平台，Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供
TMT/iTRAQ/MultiNotch定量蛋白组学分析服务，您只需要将实验目的告诉我们并
将样品寄出，我们会负责项目后续所有事宜，包括细胞培养、细胞标记、蛋白提取、蛋白酶切、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。

定量蛋白质组学iTRAQ实验

定量蛋白质组学iTRAQ实验
定量蛋白质组学iTRAQ
Lable-free与iTRAQ
复杂的蛋白样品经过酶解形成肽段，再经过广泛分级，由自动化的串联质谱鉴定。

差异蛋白质的定量研究是基于肽段水平而非完整的蛋白质，成为该工艺大的工艺特色，该工艺实现了样品分离与鉴定直接联合，自动化操作，可以用于各种蛋白质混合物的蛋白质组学分析，如血清、组织、各种体液以及尿液等。

非标记定量工艺在定量蛋白质组学研究中受到了众多科学工作者的推崇。

【优点：信息量大，样本量低，检测低丰度蛋白更多，较于定量】同位素标记较于和定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)工艺是一种新的、功能强大的可同时对四种样品进行和较于定量研究的方法。

iTRAQ试剂为可与氨基酸N端及赖氨酸侧链连接的胺标记同重元素(isobaric)。

在质谱图中，一种iTRAQ试剂标记的不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。

而在串联质谱中，信号离子表现为不同质荷比(114～117)的峰，因此，根据波峰的高度及面积，可以得到蛋白质的定量信息。

【优点：定量更准，信息量较于少】
lable-free 实验流程：
1、样本提取蛋白；
2、胰蛋白酶消化蛋白；
3、 LC-MS/MS质谱检测及分析
iTRAQ 实验流程：
1、样本还原、变性、半胱氨酸封闭；
2、胰蛋白酶消化蛋白；
3、消化蛋白的iTRAQ试剂标记；
4、混合标记蛋白到同一个试管内；
5、 LC-MS/MS质谱检测及分析；。

iTRAQTMT技术

iTRAQTMT技术iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技术是一种多肽体外标记技术。

该技术采用4-plex或8-plex同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，进行LC-MS/MS分析，可同时比较多种不同样本中蛋白质的相对表达含量。

TMT(Tandem Mass Tag)技术也是一种多肽体外标记的方法，采用2-plex、6-plex或10-plex同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，然后进行串联质谱分析，可同时比较2组、6组或10组不同样品中蛋白质的相对含量。

iTRAQ是由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝对定量技术; TMT技术是由美国Thermo Scientific公司研发的一种多肽体外标记技术。

TMT与iTRAQ试剂在结构和检测原理上基本类似，都是由报告基团、平衡基团和肽反应基团三部分组成。

一、科沿有道服务内容1、服务项目：iTRAQ/ TMT；2、要求：干冰运输（详细要求见样品要求）；3、交付：蛋白鉴定及定量结果表、肽段鉴定及定量结果表、差异蛋白结果表、生物信息学分析结果、质谱原始数据、实验报告；4、周期：5-7周。

二、服务流程：iTRAQ/TMT定量蛋白质组学实验的基本流程。

第一步，从样品中提取蛋白。

第二步，对提取后的蛋白样品进行还原烷基化处理，打开二硫键以便后续步骤充分酶解蛋白。

第三步，用Brandford法进行蛋白的浓度测定。

第四步，SDS（十二烷基磺酸钠）-PAGE。

第五步，取等量蛋白Trypsin酶解。

第六步，用iTRAQ/TMT试剂标记肽段。

第七步，将标记后的肽段进行等量混合。

第八步，对混合后的肽段使用强阳离子交换色谱（Strong Cation ExchangeChoematography，SCX）进行预分离。

第九步，通过Orbitrap Fusion Lumos分析鉴定。