厌氧微生物的分离及培养

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细菌的分离培养及培养性状的观察

实验四细菌的分离培养及培养性状的观察在细菌学检验中，细菌的分离培养是重要的基本技术之一。

从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的方法称为分离；纯培养是指一株菌种或一个培养物中所有的细菌都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。

分离培养的目的在于从被检材料中，或者从污染的众多杂菌中分离出纯的病原菌。

细菌分离培养应先从被检材料或病料中分离培养单个菌落，然后钓取可疑菌落进行纯培养，再将纯培养物移植培养。

目的要求1．学习、掌握需氧菌和厌氧菌分离培养的基本要领和技术。

2．了解细菌的菌落形态及其在各种培养基上的培养性状。

3．了解培养性状对细菌鉴别的重要意义。

4．掌握钓菌、纯培养及移植技术。

操作步骤一．需氧性细菌分离培养法1. 平板划线分离法菌种被其他杂菌污染时或混合菌悬液常用平板划线法进行纯种分离，此法是借助将蘸有混合菌悬液的接种环在平板表面多方向连续划线，使混杂的微生物细胞在平板表面分散，经培养得到分散的由单个微生物细胞繁殖而成的菌落，从而达到纯化目的。

但划线分离的培养基必须事先倾倒好，需充分冷凝待平板稍干后才可使用；为便于划线，一般培养基不宜太薄，每皿约倾倒20 ml 培养基，培养基应厚薄均匀，平板表面光滑。

划线分离主要有连续划线法（图4-1）和分区划线法（图4-2）两种。

划线法示意图见图4-3。

（1）连续划线法以无菌操作用接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。

将菌种点种在平板边缘一处，取出接种环，烧去多余菌体。

将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却，然后从接种细菌的部位在平板上自左向右轻轻划线，划线时平板面与接种环面成30～40度角，以手腕力量在平板表面轻巧滑动划线，接种环不要嵌入培养基内划破培养基，线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠。

划线完毕，关上皿盖。

灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。

培养皿倒置于适宜的恒温箱内培养。

培养后在划线平板上观察沿划线处长出的菌落形态，涂片镜检为纯种后再接种斜面。

亨盖特滚管技术

厌氧菌的分离和培养关键词：厌氧菌分离培养 2008-06-12 00:00 来源：丁香园点击次数：23001 目的1.1 了解厌氧微生物的生长特性1.2 观察厌氧微生物（双歧杆菌）的形态特征1.3 掌握厌氧微生物的滚管分离、培养与计数技术2 原理目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。

这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。

亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。

以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趣完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术。

而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。

亨盖特厌样滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数，还可以用于有害腐败菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭状芽孢杆菌）的分离与鉴定。

3 材料3.1 样品双歧酸奶（液体）、双歧杆菌制剂（固体）。

3.2 培养基改良MRS培养基，PTYG培养基。

3.3 仪器和器具亨盖特厌氧滚管装置一套，厌氧管，厌氧瓶，滚管机，定量加样器4 流程铜柱除氧→预还原培养基→稀释用液制备→稀释样品→滚管→培养→计数5 方法5.1铜柱系统除氧铜柱是一个内部装有铜丝或铜屑的硬质玻璃管。

此管的大小为40—400mm，两段被加工成漏斗装，外壁绕有加热带，并与变压器相连来控制电压和稳定铜柱的温度。

铜柱两端连接胶管，一端连接气钢瓶，一端连接出气管口。

由于从气钢瓶出来的气体如N2、CO2和H2等通常都含有O2，故当这些气体通过温度约360℃的铜柱时，铜和气体中的微量O2化合生成CuO，铜柱则由明亮的黄色变为黑色。

当向氧化状的铜柱通入H2时，H2与CuO中的氧就结合形成H2O，而CuO又被还原成了铜，铜柱则又呈现明亮的黄色。

此铜柱可以反复使用，并不断起到除氧的目的。

厌氧培养的规范化操作

厌氧培养的规范化操作
泰兴市人民医院检验科微生物室刘鸿丽
概述: 厌氧菌感染通常是内源性的，存在于人体的各个部位，病种遍及临床各科。各种器官和组织都可以发生厌氧菌感染，大部分是与需养菌混合感染。常规细菌培养阴性，很有可能是厌氧菌感染。因此，进一步分离鉴定病原菌对感染的诊断、治疗有重要意义。
厌氧菌鉴定流程转种需氧培养 ↓ 35℃18-24h
转种厌氧培养 ↓ 35℃48~72h
↓ ↓ ↓ 阳性阴性阳性 ↓ ↓ ↓ 做需氧菌鉴定考虑厌氧菌 ↓ 菌落革兰色染色、触酶试验、API20A鉴定报告报告菌种名或厌氧菌未生长
2.具体采样要求
1）从正常无菌部位或通过严格无菌操作采取，如血液、胸腔液、腹腔液、心包积液、CSF、关节液以及通过外科无菌手术或穿刺抽得脓液，或通过特殊技术如纤维支气管镜取得下呼吸道标本及由阴道后窟窿穿刺抽得盆腔脓液等。采集和运输过程中应避免接触空气，及时送检。 2）经口吐出的痰不能避免咽喉部正常菌群感染，不适宜做厌氧菌培养。可用纤维支气管镜采集。人工气道如气管切开或气管插管患者，可用吸痰管理经人工气道口插收标准
1）使用不合格的容器：有渗漏、污染或非无菌的容器。
2）申请单不符合要求：无姓名、住院/门诊号，
无检验目的，检验目的与标本不符合。
3）标本不符合要求：未与空气隔绝，要求做厌
氧菌培养，经口吐出的痰要求做厌氧菌培养。采
样至送检超过2小时而未用运用培养基等。
4.样品的处理
厌氧菌在适当的培养基上，经35℃、厌氧环境（80%N2、10%H2、10%CO2）下孵育48~72小时,经涂片染色、菌落特征、耐氧试验、生化反应等作出鉴定。
检验流程
1.流程图

厌氧菌的采集送检培养分离鉴定及注意事项

厌氧菌的采集送检培养分离鉴定及注意事项厌氧菌是一类在缺氧或无氧条件下生长的微生物。

由于其独特的代谢方式和生长环境的要求，厌氧菌的采集、送检、培养分离和鉴定需要特殊的注意事项。

下面将详细介绍厌氧菌的采集、送检、培养分离和鉴定的方法及注意事项。

一、厌氧菌的采集方法：1.采集样品时应尽量避免与空气接触，以防止厌氧菌暴露于氧气中而失活。

2.采集厌氧菌的样品应尽快送检，以确保其最佳生长环境。

常见的厌氧菌采集样品包括：创伤分泌物、组织切片、血液、体液、粪便等。

二、厌氧菌的送检和保存：1.送检时应明确注明样品为厌氧菌的检测，以便实验室作出相应的处理。

2.采样后，尽量将样品封存，避免与氧气接触，以确保厌氧菌生长环境的完整性。

3.若无法封存样品，应尽快送检至实验室。

三、厌氧菌的培养方法：1. 使用厌氧培养基来提供适宜的生长环境，如：血寒胁素琼脂培养基、Schaedler琼脂培养基等。

2.培养瓶或培养皿密封完好，以维持厌氧条件。

3.培养培养基时，应将其加热至48-50℃，以刺激厌氧菌的孢子萌发。

4.培养温度通常为35-37℃。

四、厌氧菌的分离方法：1.采用分离培养基，在含有抗生素的培养基上分离厌氧菌。

2.厌氧菌通常会在培养基上产生特殊的形态特征，如：斑点、颜色变化等。

3.通过剖析菌落形态特征，并进行细胞的染色观察来鉴定培养物中的厌氧菌。

五、厌氧菌的鉴定方法：1.根据厌氧菌的生物学特征进行初步鉴定，如：形态特征、生理特性等。

2.利用生化试验对厌氧菌进行进一步的鉴定，如：糖、氨基酸、营养盐的利用能力等。

3.利用分子生物学方法，如PCR、16SrRNA测序等进行鉴定。

六、厌氧菌的注意事项：1.在操作过程中应严格遵守无菌操作的要求，以避免外源性菌的污染。

2.在培养过程中要注意保持相应的厌氧环境，如密封培养瓶或培养皿，避免与氧气接触。

3.在采集和送检过程中要注意样品的完整性和新鲜度，以提高厌氧菌的培养成功率。

4.在菌落鉴定过程中要仔细观察形态特征和生物学特性，以确保鉴定结果的准确性。

厌氧细菌的培养及应用方法

厌氧细菌的培养及应用方法简介厌氧细菌，是一类在无氧环境下生长和繁殖的微生物。

它们具有重要的应用价值，被广泛用于环境修复、发酵工业以及医学领域等各个方面。

本文将介绍厌氧细菌的培养方法以及其在不同领域的应用。

，是一类在无氧环境下生长和繁殖的微生物。

它们具有重要的应用价值，被广泛用于环境修复、发酵工业以及医学领域等各个方面。

本文将介绍厌氧细菌的培养方法以及其在不同领域的应用。

厌氧细菌的培养方法厌氧细菌的培养方法相较于其他微生物的培养略有不同，需要提供无氧环境，满足其生长和繁殖的需求。

下面介绍几种常用的厌氧细菌培养方法：1. 封闭式培养法：将厌氧细菌接种于装有适宜培养基的培养瓶中，然后用橡胶塞密封瓶口，以保证培养过程中无氧环境的维持。

封闭式培养法：将厌氧细菌接种于装有适宜培养基的培养瓶中，然后用橡胶塞密封瓶口，以保证培养过程中无氧环境的维持。

2. 氮气充气法：在培养瓶中先充入氮气，将气泡排除后加入培养基和厌氧细菌。

通过氮气的充气可以去除培养瓶内的氧气，创建无氧环境。

氮气充气法：在培养瓶中先充入氮气，将气泡排除后加入培养基和厌氧细菌。

通过氮气的充气可以去除培养瓶内的氧气，创建无氧环境。

3. 厌氧室培养法：专门的厌氧室内装备有无氧环境所需的设备和仪器，可提供可控的厌氧条件，适合大规模厌氧细菌的培养。

厌氧室培养法：专门的厌氧室内装备有无氧环境所需的设备和仪器，可提供可控的厌氧条件，适合大规模厌氧细菌的培养。

厌氧细菌的应用厌氧细菌在多个领域中有着广泛的应用，以下是其中几个典型领域：1. 环境修复：厌氧细菌可以通过降解有机废弃物、重金属离子还原等方式，帮助清除污染物，修复环境。

环境修复：厌氧细菌可以通过降解有机废弃物、重金属离子还原等方式，帮助清除污染物，修复环境。

2. 发酵工业：某些厌氧细菌具有产生特定有机物质的能力，可用于发酵工业中的生物合成过程，如乙醇、乳酸等物质的生产。

发酵工业：某些厌氧细菌具有产生特定有机物质的能力，可用于发酵工业中的生物合成过程，如乙醇、乳酸等物质的生产。

实验十二厌氧性细菌(1稿)

实验十二厌氧性细菌（厌氧培养方法）厌氧性细菌（Anaerobicbacteria）是一大群必须在无氧或低氧环境中才能生长繁殖的细菌；一般情况下，这类细菌在无氧条件下比在有氧环境中生长好，不能在空气（氧气浓度大于18%）和（或）二氧化碳浓度小于10%以下的固体培养基表面生长。

这类细菌缺乏完整的代谢酶体系，其能量代谢多以无氧发酵的方式进行。

它能引起人体不同部位的感染，包括阑尾炎、胆囊炎、中耳炎、口腔感染、心内膜炎、子宫内膜炎、脑脓肿、心肌坏死、骨髓炎、腹膜炎、脓胸、输卵管炎、脓毒性关节炎、肝脓肿、鼻窦炎、肠道手术或创伤后伤口感染、盆腔炎以及菌血症等。

（一）无芽胞厌氧菌主要种类及生物学性状无芽胞厌氧菌共有23个属，与人类疾病相关的主要有10个属。

1.革兰阴性厌氧杆菌有8个属，类杆菌属中的脆弱类杆菌最为重要。

形态呈多形性，有荚膜。

除类杆菌在培养基上生长迅速外，其余均生长缓慢。

2.革兰阴性厌氧菌有3个属，其中以韦荣菌属最重要。

为咽喉部主要厌氧菌，但在临床厌氧菌分离标本中，分离率小于1%，且为混合感染菌之一。

其他革兰阴性球菌极少分离到。

3.革兰阳性厌氧菌有5个属，其中有临床意义的是消化链球菌属，主要寄居在阴道。

本菌属细菌生长缓慢，培养需5～7天。

4.革兰阳性厌氧杆菌有7个属，其中以下列3个属为主：（1）丙酸杆菌属：小杆菌，无鞭毛，能在普通培养基上生长，需要2～5天，与人类有关的有3个种，以痤疮丙酸杆菌最为常见。

（2）双歧杆菌：呈多形性，有分枝，无动力，严格厌氧，耐酸。

29个种中有10个种与人类有关，其中只有齿双歧杆菌与龋齿和牙周炎有关。

其他种极少从临床标本中分离到。

（3）优杆菌属：单一形态或多形态，动力不定，严格厌氧，生化反应活泼，生长缓慢，常需培养7天，最常见的是迟钝优杆菌。

（二）微生物学检查要从感染灶深部采取标本。

最好是切取感染灶组织或活检标本，立即送检医.学教育网搜集整理。

1.直接涂片镜检：将采集的标本直接涂片染色镜检，观察细菌形态、染色及菌量，为进一步培养以及初步诊断提供依据。

厌氧细菌和古菌样品采集

厌氧细菌和古菌样品采集、分离、培养技术规程起草单位：中国科学院微生物研究所目次前言 (3)厌氧细菌和古菌样品采集、分离、培养技术规程 (4)1 范围....................................... (4)2 术语和定义................................. .. (4)3 样品采集................ (4)4 样品分离..................... .. (5)5 分离菌种的培养 (6)参考文献 (7)前言对于厌氧细菌和古菌，在进行取样、分离和培养的各个环节均必须注重这类微生物的特性，采用相适应的方法，使采集的样品具有代表性，尽可能保持其在原生境的种类和数量，并通过分离和培养将其反映和显示出来，同时取得所需的试验菌种。

本规程规定了厌氧细菌和古菌样品采集、分离、培养的方法和要求。

厌氧细菌和古菌样品采集、分离、培养技术规程1 范围本规程规定了厌氧细菌和古菌样品采集的要求及根据样品量的大小所应采取的采样方法；规定了厌氧细菌、古菌样品分离和培养的具体方法。

本规程适用于不同生境中厌氧细菌和古菌样品的采集；以及各类厌氧细菌和古菌的分离培养。

2 术语和定义本规范采用下列术语和定义。

2.1 厌氧细菌和古菌 Anaerobic Bacteria and Archaea厌氧细菌和古菌如梭菌属（Clostridium）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）、甲烷杆菌属（Methanobacterium）等，是指要求在没有分子氧条件下才能生活的各种细菌和古菌。

本文所指厌氧细菌和古菌为专性厌氧细菌和古菌，2.2 Hungate厌氧技术 Hungate methodHungate厌氧技术是美国微生物学家Hungate于1950年发明的一套有效的用于厌氧菌分离和培养的技术，它包括培养基预还原和在无氧环境中进行的菌株分离和培养操作技术。

厌氧菌的采集、送检、培养、分离鉴定及注意事项

厌氧菌在有氧的情况下不能生长。

要培养厌氧菌，必须创造一个环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。

如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。

常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。

1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。

2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。

塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。

放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。

先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。

如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育（较为推荐）。

3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。

它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。

箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。

欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。

箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。

该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。

金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。

4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。

5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。

我没见过。

6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。

焦性末食子酸与碱反应后耗氧。

厌氧微生物培养技术的目的和原理

厌氧微生物培养技术的目的和原理厌氧微生物培养技术是一种特殊的微生物培养技术，用于培养需要在无氧（或低氧）条件下生长的微生物。

传统的培养技术通常在常氧（或高氧）条件下进行，但很多微生物对氧气敏感，只有在无氧或低氧条件下才能生长和繁殖。

因此，厌氧微生物培养技术通过提供适宜的无氧（或低氧）环境，使得这些微生物能够在实验室中进行培养和研究。

下面将对厌氧微生物培养技术的目的和原理进行详细的阐述。

1.研究厌氧微生物的生长特性：通过培养厌氧微生物，可以研究其生长速度、代谢途径、产生的代谢产物等生物学特性。

这有助于了解厌氧微生物的生态功能和对环境的影响。

2.分离和纯化厌氧微生物：通过厌氧培养技术，可以将混合微生物群体中的厌氧微生物单独分离出来。

这有助于研究单个厌氧微生物的特性，并为进一步的研究提供纯化的微生物株。

3.研究厌氧微生物的代谢途径和产物：许多厌氧微生物具有特殊的代谢途径，如厌氧呼吸、厌氧发酵等。

通过培养这些厌氧微生物，可以研究其代谢途径和产物，有助于理解它们在生物地球化学循环中的角色。

1.提供无氧（或低氧）环境：为了使厌氧微生物能够生长和繁殖，必须在培养过程中提供无氧（或低氧）的条件。

通常采用的方法是使用密封的容器或瓶子，将培养物与外界的氧气隔离开来。

为了进一步确保无氧环境，可以添加还原剂如硫化钠或葡萄糖，以降低培养液中的氧气含量。

2.确定厌氧微生物的生长需求：不同的厌氧微生物对培养条件有不同的要求，如温度、pH值、营养物质等。

在培养之前需要进行调查和研究，以确定最适合其生长和繁殖的条件。

3.选择适当的培养基：为了培养厌氧微生物，需要选择适合其生长的培养基。

一般来讲，培养基中需要添加适量的有机物、无机盐和维生素等营养物质。

此外，还可以添加一些特殊的成分，如胶体杰尔线、酶还原剂等，以促进厌氧微生物的生长。

4.控制培养条件：在培养过程中，需要注意控制培养条件，如温度、pH值等。

这可以通过使用恒温箱、恒温培养箱和PH计等仪器设备来实现。

厌氧菌土壤实验报告

一、实验目的1. 了解厌氧菌的生物学特性及其在土壤中的分布情况。

2. 掌握厌氧菌的分离、培养和鉴定方法。

3. 探讨厌氧菌在土壤生态系统中的作用及其与土壤环境的关系。

二、实验原理厌氧菌是一类在无氧或低氧条件下生长的微生物，广泛分布于土壤、水体、动物肠道等环境中。

土壤中的厌氧菌在有机质分解、氮素循环、硫素循环等方面发挥着重要作用。

本实验通过分离、培养和鉴定土壤中的厌氧菌，分析其生物学特性，探讨其在土壤生态系统中的作用。

三、实验材料与方法1. 实验材料（1）土壤样品：采集于某农田土壤，充分混合均匀后，分成若干份备用。

（2）厌氧菌培养基：疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基、牛心脑浸液培养基等。

（3）厌氧菌鉴定试剂：氧化酶试剂、过氧化氢酶试剂、硝酸盐还原试剂等。

2. 实验方法（1）土壤样品的预处理将采集的土壤样品充分混合均匀，称取一定量的土壤样品，加入适量的无菌水，充分搅拌，制成土壤悬液。

（2）厌氧菌的分离将土壤悬液接种于厌氧菌培养基中，在厌氧条件下培养。

选取生长良好的菌落，进行纯化培养。

（3）厌氧菌的鉴定对纯化后的厌氧菌进行形态观察、生理生化实验和分子生物学鉴定。

1）形态观察：观察菌落的形状、颜色、大小、边缘等特征。

2）生理生化实验：进行氧化酶、过氧化氢酶、硝酸盐还原等实验，鉴定厌氧菌的生理生化特性。

3）分子生物学鉴定：采用PCR技术扩增厌氧菌的16S rRNA基因，进行基因序列分析，鉴定厌氧菌的种属。

四、实验结果与分析1. 厌氧菌的分离与纯化经过厌氧培养，成功分离出多种厌氧菌。

纯化后的菌落形态各异，具有一定的生物学特征。

2. 厌氧菌的鉴定通过对纯化后的厌氧菌进行形态观察、生理生化实验和分子生物学鉴定，确定其种属。

（1）氧化酶实验：部分厌氧菌表现出氧化酶活性，可氧化还原性物质。

（2）过氧化氢酶实验：部分厌氧菌表现出过氧化氢酶活性，可分解过氧化氢。

（3）硝酸盐还原实验：部分厌氧菌具有硝酸盐还原酶活性，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐。

厌氧菌的实验报告

一、实验目的1. 掌握厌氧菌的分离方法。

2. 学习厌氧菌的鉴定技术。

3. 了解厌氧菌的生长特性及其在自然界中的分布。

二、实验原理厌氧菌是一类在无氧条件下生长繁殖的微生物，其代谢过程中不需要氧气。

本实验通过分离和鉴定厌氧菌，旨在了解其在自然界中的分布和作用。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 酵母膏- 葡萄糖- 琼脂- 麦芽糖- 磷酸氢二钠- 氯化钠- 硫化氢生成剂- 氨水- 氨化钠- 氨水- 硫化氢指示剂- 酚红指示剂- 酚红- 氨水- 碘液- 水浴锅- 火焰光度计- 紫外分光光度计- 显微镜- 培养箱- 无菌操作台2. 实验仪器：- 离心机- 高压蒸汽灭菌器- 玻璃器皿- 移液器- 恒温培养箱- 紫外可见分光光度计- 电子天平四、实验方法1. 厌氧菌的分离（1）样品采集：从土壤、水体、动物粪便等环境中采集样品。

（2）样品处理：将样品进行梯度稀释，取适量稀释液涂布于厌氧菌培养基上。

（3）培养：将涂布好的培养基置于厌氧培养箱中，37℃恒温培养24小时。

（4）观察：观察菌落形态，挑取典型菌落进行进一步鉴定。

2. 厌氧菌的鉴定（1）形态学鉴定：观察菌落形态、颜色、大小等特征。

（2）生化鉴定：a. 硫化氢生成试验：将分离得到的菌落接种于硫化氢生成培养基上，观察硫化氢生成情况。

b. 氨水试验：将分离得到的菌落接种于氨水培养基上，观察氨水颜色变化。

c. 碘液试验：将分离得到的菌落接种于碘液培养基上，观察碘液颜色变化。

d. 紫外分光光度计测定：测定菌落生长过程中产生的代谢产物，如有机酸、醇类等。

（3）分子生物学鉴定：a. 16S rRNA基因扩增：提取分离得到的菌落DNA，进行16S rRNA基因扩增。

b. 序列分析：将扩增得到的16S rRNA基因序列进行BLAST分析，与数据库中的已知序列进行比对，确定菌种。

五、实验结果与分析1. 厌氧菌的分离结果从土壤、水体、动物粪便等环境中分离得到多种厌氧菌，菌落形态各异，如球形、杆状、螺旋状等。

分离厌氧微生物的方法

分离厌氧微生物的方法
分离厌氧微生物的方法主要包括以下几种：
1. 厌氧培养：采用无氧条件下的培养基培养微生物。

通过控制培养基的成分、温度和氧气供应
等条件，创造适合厌氧微生物生长的环境。

2. 稀释培养：将样品逐渐稀释至极低浓度，以保证每个培养基只能分离出单个微生物单体。

通
过在厌氧条件下培养，可以分离出不同种类的厌氧微生物。

3. 筛选培养基：根据不同厌氧微生物对营养物质的需求，设计配制出适合分离其生长的培养基。

如硝酸盐还原菌对硝酸盐的需求量较高，可以通过硝酸盐培养基对其进行分离。

4. 采用选择性培养基：根据厌氧微生物对抗生素的耐受性，通过添加抗生素来抑制其他微生物
的生长，从而选择性地分离出厌氧微生物。

5. 微生物学鉴定：通过形态学观察、生理生化特性检测、分子生物学方法等手段对分离得到的
微生物进行鉴定和分类，从而了解微生物的物种及其特性。

此外，还可以通过无增殖培养、微生物共培养、微生物共鸣等新技术来分离厌氧微生物。

总之，分离厌氧微生物需要严格控制培养条件，选择适当的培养基和鉴定方法，通过不断的实
验和优化，可以有效地分离出不同种类的厌氧微生物，并进一步研究其生理、生态和应用价值。

厌氧微生物的分离与培养 (1)

产甲烷厌氧微生物的分离与培养一、实验目的掌握Hungate厌氧操作技能，掌握厌氧微生物的培养基配制和厌氧菌的富集、分离和纯化方法。

二、知识背景产甲烷菌（Mathanogens）是一类以产生大量甲烷气体作为能量代谢的终产物的特殊原核微生物，广泛存在于各种极端厌氧环境中。

作为自然界碳素循环中厌氧生物处理的最后一个成员，该菌与其它菌群协同作用，将大量的有机物转化成可再生能源，对自然界中的物质循环及当今社会能源危机中的能源替代问题具有极大的推动作用。

产甲烷菌是一类严格的厌氧细菌，至今还未发现产甲烷菌具有超氧化物歧化酶和过氧化氢酶，产甲烷菌不能除去在生命代谢过程中产生的超氧化物、过氧化氢等氧化产物，这些氧化物可损害组成细胞的大分子，如F420因子，当F420处于氧化态时，即与酶蛋白分离而失活。

因此，在对甲烷菌进行分离、培养以及操作过程中必须给予无氧的环境。

产甲烷菌广泛分布于自然界，在淤泥、瘤胃、人和动物的肠道、昆虫的肠道、湿树木、地热泉水、深海火山口、水田和海洋的沉积物、沼泽等厌氧环境中都有产甲烷菌存在。

三、原理产甲烷菌是一类必须生活在厌氧生境下并伴有甲烷产生的古生菌，其形态和生理、生化特性呈现明显的多样性。

它生长的氧化还原电位约为-0.33V，一般最适生长温度为30～40℃，最适pH为6.0～7.2。

例如细胞形态有球状、短杆状、长杆状、螺旋状和丝状等；Gram染色反应有阳性、阴性和不定性；产甲烷菌生长需要的营养与其它微生物一样，需要碳源、氮源、无机盐、生长因子等。

生长所需碳源约有10多种，除CO2外，还有其它一碳化合物（甲酸、甲醇、甲胺等）和二碳化合物（乙酸等）；只有当产甲烷菌在利用H2作CO2还原剂以产生生物合成所需细胞物质，才能利用CO2作电子受体以产生ATP和CH4。

四、实验药品、器材1、药品NH4Cl、MgCl2·6H2O、K2HPO4、KH2PO4、甲酸钠、乙酸钠、胰化酪蛋白、酵母膏、盐酸半胱氨酸、刃天青、Na2S·9H2O、NaHCO3、氨三乙酸、MgSO4·7H2O、MnSO4·2H2O、NaCl、FeSO4·7H2O、CoSO4·7H2O、CaCl2·2H2O、ZnSO4·7H2O、KAl（SO4）2·12H2O、CuSO4·5H2O、H 3BO3、Na2MoO4·2H2O、NiCl2·6H2O、Na2SeO3·5H2O、生物素、叶酸、盐酸吡哆醇、二水盐酸硫胺、核黄素、烟酸、D-泛酸钙、维生素B12、对氨基苯甲酸、硫辛酸。

厌氧菌的培养实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 熟悉厌氧菌的微生物学特性。

2. 掌握厌氧菌的分离和纯化方法。

3. 学习使用厌氧培养箱进行微生物培养。

4. 了解厌氧菌在生物工程和医学研究中的应用。

二、实验原理厌氧菌是一类在无氧或低氧环境中生长繁殖的微生物。

它们不能进行有氧呼吸，其能量代谢主要通过无氧发酵的方式进行。

厌氧菌在自然界中广泛存在，与人类的健康和疾病密切相关。

本实验旨在通过厌氧菌的分离和培养，了解其生长特性，为后续研究提供基础。

三、实验材料1. 厌氧菌样品：土壤、水体、粪便等。

2. 培养基：厌氧肉汤培养基、血琼脂平板、液体石蜡。

3. 器械：厌氧培养箱、接种环、接种针、无菌试管、锥形瓶、移液器、酒精灯、高压蒸汽灭菌器等。

四、实验方法1. 样品处理- 取一定量的厌氧菌样品，用无菌生理盐水进行稀释。

- 取适量稀释液，分别接种于厌氧肉汤培养基和血琼脂平板。

2. 厌氧环境制备- 将厌氧肉汤培养基和血琼脂平板放入厌氧培养箱中。

- 在厌氧培养箱中注入液体石蜡，覆盖培养基表面，隔绝空气。

3. 培养- 将厌氧肉汤培养基置于37℃恒温培养箱中培养24小时。

- 观察菌落生长情况，记录菌落形态、颜色等特征。

4. 分离和纯化- 将生长良好的菌落挑取，接种于血琼脂平板。

- 再次放入厌氧培养箱中培养，观察菌落生长情况。

- 重复上述步骤，直至获得纯化的厌氧菌。

五、实验结果1. 菌落形态- 厌氧肉汤培养基中的菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐、颜色为白色。

- 血琼脂平板上的菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐、颜色为白色，周围有溶血现象。

2. 分离和纯化- 通过多次接种和纯化，成功获得纯化的厌氧菌。

六、实验讨论1. 厌氧菌在自然界中广泛存在，对生态环境和人类健康具有重要意义。

2. 本实验成功分离和纯化了厌氧菌，为后续研究提供了基础。

3. 在厌氧菌的培养过程中，厌氧环境至关重要。

本实验通过使用厌氧培养箱和液体石蜡，成功制备了厌氧环境，保证了厌氧菌的生长。

七、实验结论1. 厌氧菌是一类在无氧或低氧环境中生长繁殖的微生物，其能量代谢主要通过无氧发酵的方式进行。