理工大课件-常用临床病原学检测 -2017PPT幻灯片
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临床病原学检查知识PPT课件
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那些有正常菌群寄居的腔道分泌物，涂片镜检虽不 能确定诊断，但对进一步检出的步骤、采用的方法 和分离鉴定病原体所需培养基有重要提示作用，如 在米泔水样便的悬滴片动力检查，发现有运动活泼 的鱼群样弧菌，常提示弧菌科细菌感(thiosulfatecitrate-bile saltssucrose，TCBS)选择培养基。组织标本和疱疹分泌 物涂片经瑞特染色后，查见多核巨细胞和核内嗜酸 性包涵体可早期诊断疱疹病毒感染。临床上不常规 应用电镜检查，但对某些病毒感染有确诊价值，如 婴幼儿急性胃肠炎腹泻粪便电镜下查见车轮状的双 层衣壳病毒颗粒即可诊断为轮状病毒感染。常用的 电镜技术有超薄切片标本电镜观察、负染标本电镜 观察和免疫电镜技术。
临床病原学检查
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1
不同病原体(细菌、螺旋体、支原体、放线菌、
衣原体、立克次体、病毒、真菌、原虫、蠕虫)
所致感染性疾病的实验诊断方法各有其特点，
但几乎都遵循以下基本原则：①正确、规范采
集和运送标本；②通过直接显微镜查见病原体
或检出病原体抗原成分；③借助分子生物学的
方法检测病原体核酸；④利用免疫学方法检测
机体对病原体抗原成分产生的免疫产物；⑤对
病原体进行分离与鉴定。在完成病原体的检出
和鉴定任务后，结合病人的病史、症状或体征，
快速作出诊断。并积极参与临床选择抗微生物
药物，指导和监控微生物的治疗方案，避免耐
药菌株的产生。
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2
标本采集和运送 ：
根据各种病原体所致感染性疾病的病程确定 标本采集的时间、部位和种类。所有采集的 标本均置于无菌或清洁容器中，不能接触消 毒剂和抗菌药物。 标本必须注明姓名、年 龄、性别、采集日期、临床诊断、检验项目 等。标本采集后应按要求处理，立即送往病 原学实验室，对于烈性传染病材料的运送需 专人护送。
临床常见病原体检查ppt课件
第九章 临床病原体 检测
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1
提纲
第一节：标本的采集运送、实验室评价和检查
方法
药敏检测
第二节：病原体耐药性检测
第三节：临床感染常见病原体检测 病原体检测
第四节：病毒性肝炎检测
第五节：性传播疾病病原体检测
第六节：医院感染常见病原体检测
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教学目的与要求：
了解掌握临床病原体检查的主要内容（标本采集、 标本验收、药敏检查、耐药性检测、临床常见病 原体、病毒性肝炎、性传播疾病、医院感染） 、检测原理以及临床实际应用的重要意义。
三、检查方法
（一）直接显微镜检查 （二）病原体特异性抗原检查 （三）病原体核酸检查 （四）病原体的分离培养和鉴定 （五）血清学试验
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（一）直接显微镜检查——不染色 标本
• 不染色标本：适用于检
查生活状态下病原体的 动力及运动状况。
• 方法：压滴法、悬滴法。
• 意义：在不染色状态下
借助暗视野显微镜或相 差显微镜观察病原菌的 动力、活动方式。部分 病原体可借此初步诊断， 如梅毒螺旋体。
4.荧光显微镜用于标本经荧光染色后直接检 出某些病原微生物
5.电镜检查不常规用于临床，对某些病毒感 染却有确诊的价值。
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(二)病原体特异性抗原检查
• 利用抗原抗体之间的特异性反应，用已知抗体检
测患者血清及其他体液中的待测抗原，借助免疫 荧光技术、酶联免疫技术、化学发光技术、胶乳 凝集试验、对流免疫电泳等技术检测标本中未知 的病原体抗原，其诊断价值常以标本不同而各异。
• 酒精棉球消毒，防止污染。
静脉采血后，将血液注入培 养瓶内 。
• 采集时间：一般在抗生素使
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提纲
第一节：标本的采集运送、实验室评价和检查
方法
药敏检测
第二节：病原体耐药性检测
第三节：临床感染常见病原体检测 病原体检测
第四节：病毒性肝炎检测
第五节：性传播疾病病原体检测
第六节：医院感染常见病原体检测
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教学目的与要求：
了解掌握临床病原体检查的主要内容（标本采集、 标本验收、药敏检查、耐药性检测、临床常见病 原体、病毒性肝炎、性传播疾病、医院感染） 、检测原理以及临床实际应用的重要意义。
三、检查方法
（一）直接显微镜检查 （二）病原体特异性抗原检查 （三）病原体核酸检查 （四）病原体的分离培养和鉴定 （五）血清学试验
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（一）直接显微镜检查——不染色 标本
• 不染色标本：适用于检
查生活状态下病原体的 动力及运动状况。
• 方法：压滴法、悬滴法。
• 意义：在不染色状态下
借助暗视野显微镜或相 差显微镜观察病原菌的 动力、活动方式。部分 病原体可借此初步诊断， 如梅毒螺旋体。
4.荧光显微镜用于标本经荧光染色后直接检 出某些病原微生物
5.电镜检查不常规用于临床，对某些病毒感 染却有确诊的价值。
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(二)病原体特异性抗原检查
• 利用抗原抗体之间的特异性反应，用已知抗体检
测患者血清及其他体液中的待测抗原，借助免疫 荧光技术、酶联免疫技术、化学发光技术、胶乳 凝集试验、对流免疫电泳等技术检测标本中未知 的病原体抗原，其诊断价值常以标本不同而各异。
• 酒精棉球消毒，防止污染。
静脉采血后，将血液注入培 养瓶内 。
• 采集时间：一般在抗生素使
常用病原学检测课件
中和试验 ELISA
风湿热（抗O试验） 广泛用于病原体的诊断和流行病学调查
玻片凝集试验
试管凝集试验
酶联免疫吸附试验
④细菌的快速鉴定
API细菌数值鉴定系统
PCR技术
姬姆萨染色衣原体包涵体
HSV病毒
被支原体感染的精子
梅毒螺旋体
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检测程序
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病毒感染的微生物学检查法
Diagnosis Strategy for Viral Infection
②分离培养
大多数细菌的形态与染色并无显著特异性，因此需要分离培 养。如肠道杆菌均为G-杆菌，菌落形态亦相同。 培养特征：化脓性链球菌---小而透明、溶血环。
②分离培养
• 生化试验：如肠道杆菌进行乳 糖发酵试验。
• 血清学试验：已知抗体测抗原 或已知抗原测病人血清中相应 的抗体。如玻片凝集，鉴定菌 种和型。
体液
体液
体液
粪便
传播途径 粪-口
慢性感染 否 基因组类型 ssRNA
经皮肤/ 经粘膜
是
dsDNA
经皮肤/ 经粘膜
是
ssRNA
经皮肤/ 经粘膜
是
ssRNA
粪-口
否 ssRNA
Hepatitis B Virus
• 乙型肝炎的病原体 • 在全世界广泛流行，估计全球半数以上人
口已被HBV感染过，5%的人口为HBV慢性感 染 • 中国：乙肝高发区，人群HBsAg的检出率达 9.8%
HBV virion
The infectious virion is called the DANE particle.
HBV Viral Genome Organization
HBcAg HBeAg
病原学检测法课件
生物传感器技术
生物传感器技术能够实时、快速地检测病原体及其代谢产 物，具有操作简便、灵敏度高等优点，在临床和食品安全 等领域有广泛应用前景。
检测方法的改进与优化
1 2 3
免疫学检测方法
通过改进免疫学检测方法，提高其灵敏度和特异 性，使其成为快速、准确的病原学检测手段。
分子生物学检测方法
分子生物学检测方法在病原学检测中具有重要地 位，通过优化引物设计和扩增技术等手段，提高 检测的灵敏度和特异性。
样本采集与处理规范
采集样本时应选择适 当的部位和方式，避 免交叉感染和污染。
样本处理时应遵循无 菌操作原则，避免污 染和交叉感染。
采集后的样本应妥善 保存和处理，防止病 原微生物的扩散。
检测操作规范与质量控制
检测操作时应遵循标准操作规程 ，确保检测结果的准确性和可靠
性。
检测过程中应进行质量控制，如 校准仪器、验证试剂等，确保检
通过病原学检测评估疫苗接种效果， 为疫苗研发和接种策略的制定提供依 据。
溯源与传 源和传播途径，为防控措施的制定提 供支持。
食品安全检测
食品中病原体的检测
病原学检测可以检测食品中是否含有病原体，确保食品的安全性 和卫生质量。
食品加工环境的监测
对食品加工环境进行病原学检测，有助于及时发现和控制食品加工 过程中的污染源。
治疗提供依据。
监测耐药性
病原学检测可以监测病原体对抗 菌药物的耐药性，帮助医生选择 敏感的抗菌药物进行治疗，提高
治疗效果。
诊断免疫缺陷
对于免疫缺陷患者，病原学检测 有助于诊断和监测感染，指导医
生制定个性化的治疗方案。
流行病学调查
疫情监测
评估疫苗接种效果
通过病原学检测对疫情进行监测，及 时发现和报告疫情，为控制疫情提供 科学依据。
生物传感器技术能够实时、快速地检测病原体及其代谢产 物，具有操作简便、灵敏度高等优点，在临床和食品安全 等领域有广泛应用前景。
检测方法的改进与优化
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免疫学检测方法
通过改进免疫学检测方法，提高其灵敏度和特异 性，使其成为快速、准确的病原学检测手段。
分子生物学检测方法
分子生物学检测方法在病原学检测中具有重要地 位，通过优化引物设计和扩增技术等手段，提高 检测的灵敏度和特异性。
样本采集与处理规范
采集样本时应选择适 当的部位和方式，避 免交叉感染和污染。
样本处理时应遵循无 菌操作原则，避免污 染和交叉感染。
采集后的样本应妥善 保存和处理，防止病 原微生物的扩散。
检测操作规范与质量控制
检测操作时应遵循标准操作规程 ，确保检测结果的准确性和可靠
性。
检测过程中应进行质量控制，如 校准仪器、验证试剂等，确保检
通过病原学检测评估疫苗接种效果， 为疫苗研发和接种策略的制定提供依 据。
溯源与传 源和传播途径，为防控措施的制定提 供支持。
食品安全检测
食品中病原体的检测
病原学检测可以检测食品中是否含有病原体，确保食品的安全性 和卫生质量。
食品加工环境的监测
对食品加工环境进行病原学检测，有助于及时发现和控制食品加工 过程中的污染源。
治疗提供依据。
监测耐药性
病原学检测可以监测病原体对抗 菌药物的耐药性，帮助医生选择 敏感的抗菌药物进行治疗，提高
治疗效果。
诊断免疫缺陷
对于免疫缺陷患者，病原学检测 有助于诊断和监测感染，指导医
生制定个性化的治疗方案。
流行病学调查
疫情监测
评估疫苗接种效果
通过病原学检测对疫情进行监测，及 时发现和报告疫情，为控制疫情提供 科学依据。
临床常见病原体检查ppt课件
疾病， 8%左右的AIDS患者伴有隐球菌
性脑膜炎，预后极差。
•中枢神经系统存活与脑脊液中缺乏抗体
和补体激活系统有关
•抗真菌治疗:两性霉素B,氟康唑
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抗酸染色
荧光显微镜用于标本经荧光染色后直接检出某些病原微生物， 用形态学和免疫学相结合的可最特新版异整理地ppt 家侧某些病原微生物的存2在4 。
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（一）直接显微镜检查——不染色标本
不染色标本：适用于检查 生活状态下病原体的动力 及运动状况。
方法：压滴法、悬滴法。 意义：在不染色状态下借
助暗视野显微镜或相差显 微镜观察病原菌的动力、 活动方式。部分病原体可 借此初步诊断，如梅毒螺 旋体。
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（一）直接显微镜检查——染色标本
2．仔细核对标本采集日期和送检日期。延误的标本，一般情况 下不接收。通常用于细菌学检验的标本的存放不要超过24h。而 病毒检测的标本可于4℃存放2～3天。
3．检查送检容器是否完整，有无破损或渗漏等情况，若有则不 予接收。
4．标本储存、运送方式不当，不予接收。
65．．标标明本本显量被是明污否显染不合的足标格的本，标不本以予，接保不收证予。接检收测。结果的准确性！
电镜检查不常规用于临床最，新版对整理p某pt 些病毒感染却有确诊的价27值
意义
1. 无菌体液的直接镜检对病原体诊断具有一定意 义。
2. 对正常菌群寄居腔道的分泌物图片镜检可提示 进一步检查的步骤、采取的方法和确定分离鉴 定病原体所需的培养基。
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意义
3.由于临床标本中常含有一定的抗菌物质， 以致分离培养可为阴性，此时的镜检往 往可能在诊断是起作用。
临床常见病原体检测培训课件
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药敏试验结果的解释标准
根据所测得的抑菌环直径，参照CLSI标准报 告药敏试验结果
– 敏感——该菌株能被测定药物常规剂量给药后在 体内达到的血药浓度所抑制或杀灭
– 耐药——常规剂量用药时，在体内感染部位所能 达到的药物浓度不能抑制测试菌的生长
– 中介——药物的MIC接近体液或组织中通常可达 到的血药水平，在药物生理浓集的部位或提高药 物剂量预期有效；此外，中介可作为一个缓冲区
1
<10
>25
分类中1～3类不做培养，要求重新留取标本； 4、5类为合格标本；6类为气管穿刺液时，如未见白 细胞，而鳞状上皮细胞>10/低倍，亦应重新留取引起呼吸系统感染的病原微生物种类繁多
–原发性肺炎的常见致病菌是肺炎链球菌、金黄 色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、衣 原体等
3 可疑细菌性心内膜炎，在1～2h内采集3份血标本， 如果24h后阴性，再采集3份以上的血标本。
临床常见病原体检测
4
采血套数
100
96％
99％
90
80％
80
70
65％
60
50
40
30
20
10
0
1套
2套
3套
4套
血培养套数与阳性检出率（％）
血培养套数
Cockerill, CID 2004
临床常见病原体检测
临床常见病原体检测
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二、细菌耐药性检测
细菌耐药机制
– 产生灭活酶，改变抗生素的结构，使之灭活 – 抗生素作用的靶位改变，使细菌对抗生素不再敏
感 – 细菌膜的通透性降低及主动外排系统的过度表达，
使抗生素在菌体内的浓度减少 – 细菌的代谢途径的改变 – 细菌水平和垂直传播耐药基因的整合子系统 – 细菌生物膜的形成
临床常见病原体检测PPT文档50页
45、法律的制定是为了保证每一个人 自由发 挥自己 的才能 ，而不 是为了 束缚他 的才能 。—— 罗伯斯 庇尔
谢谢你的阅读
❖ 知识就是财富 ❖ 丰富你的人生
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。—要的不是针对犯 罪的法 律，而 是针对 疯狂的 法律。 ——马 克·吐温 42、法律的力量应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊 44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒
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❖ 知识就是财富 ❖ 丰富你的人生
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。—要的不是针对犯 罪的法 律，而 是针对 疯狂的 法律。 ——马 克·吐温 42、法律的力量应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊 44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒
常用病原学检测ppt课件
•50%感染量（ID50）或50%组织细胞感染量（TCID50）
–不能准确地测定感染性病毒颗粒的数量
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25
乙型肝炎的病原学诊断
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26
病毒性肝炎- 背景
病毒性肝炎
Hepatitis Virus
A
E 肠道传播
NANB
BD
C 肠道外传播
F, TTV ? 其他
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27
病毒性肝炎类型
标本：双份血清标本，恢复期血清抗体效价比急性 期升高≥4倍者方有意义。单份血清效价超过一定 标准才有诊断意义。
种类：凝集试验、沉淀试验、中和试验、补体结合 试验。
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13
常用的血清学诊断方法
类型
诊断应用举例
直接凝集试验 伤寒和副伤寒（肥达试验）、立克次体（外斐试验）、 钩端螺旋体（显微凝集试验）
• 位于Dane颗粒核心部分和肝细胞核内，在 血清中不易检出游离的HBcAg
• 主要成分是蛋白质 • 刺激机体产生抗-HBc(非保护性抗体) • 在乙肝急性期、恢复期和HBsAg携带者中
常可检出抗-HBc • 抗-HBc IgM常提示病毒处于复制状态
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35
抗原组成-- HBeAg
• 位于HBV的核心,是一种可溶性蛋白抗原 • HBeAg和Dane颗粒出现相平行，且与DNA多聚酶在血中的消
肝细胞受体结合，从而起到抵抗病毒的作用 • 抗Pre-S1和抗Pre-S2的出现，表示病情好转，趋向
痊愈
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37
• 患者
– 潜伏期 – 急性期 – 慢性期
传染源
• 无症状HBsAg携带者
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–不能准确地测定感染性病毒颗粒的数量
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病毒性肝炎- 背景
病毒性肝炎
Hepatitis Virus
A
E 肠道传播
NANB
BD
C 肠道外传播
F, TTV ? 其他
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病毒性肝炎类型
标本：双份血清标本，恢复期血清抗体效价比急性 期升高≥4倍者方有意义。单份血清效价超过一定 标准才有诊断意义。
种类：凝集试验、沉淀试验、中和试验、补体结合 试验。
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常用的血清学诊断方法
类型
诊断应用举例
直接凝集试验 伤寒和副伤寒（肥达试验）、立克次体（外斐试验）、 钩端螺旋体（显微凝集试验）
• 位于Dane颗粒核心部分和肝细胞核内，在 血清中不易检出游离的HBcAg
• 主要成分是蛋白质 • 刺激机体产生抗-HBc(非保护性抗体) • 在乙肝急性期、恢复期和HBsAg携带者中
常可检出抗-HBc • 抗-HBc IgM常提示病毒处于复制状态
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抗原组成-- HBeAg
• 位于HBV的核心,是一种可溶性蛋白抗原 • HBeAg和Dane颗粒出现相平行，且与DNA多聚酶在血中的消
肝细胞受体结合，从而起到抵抗病毒的作用 • 抗Pre-S1和抗Pre-S2的出现，表示病情好转，趋向
痊愈
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• 患者
– 潜伏期 – 急性期 – 慢性期
传染源
• 无症状HBsAg携带者
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《临床病原体检查》PPT课件
精品医学
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第二节 临床常见病原体检查
• 临床常见病原体为：细菌、病毒、支原 体、衣原体、立克次体 以及寄生虫等。
精品医学
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细菌感染检查项目的选择
• 普通细菌：常采用直接镜检、分离培养 与鉴定明确病原体。
• 难培养或培养要求高的细菌：综合运用 免疫学或分子生物学检测，如结核分枝 杆菌感染以及幽门螺杆菌感染等。
• 上呼吸道存在正常菌 群，在采集标本与结 果分析时应予考虑。
精品医学
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痰标本的采集
• 采集时间：晨痰，且 在取痰前用清水反复 漱口。
• 方法：（1）自然咳 痰法：（2）气管镜 下采集法；（3）气 管穿刺法。
精品医学
13
尿标本的采集
• 无菌采集中段尿 • 如考虑厌氧菌感染，
采取膀胱穿刺法采集 标本。 • 排尿困难者考虑导尿 采集标本。
Westerblot为确诊实验。
精品医学
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单纯疱疹病毒
• 分离培养；阳性可确诊。 • 目前临床常检测HSV-DNA与HSV抗原，
用于早期快速诊断。
精品医学
• The specimen has been transported at the improper temperature or in improper medium.
• The quantity of specimen is insufficient for testing .
• The specimen is leaking .
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寄生虫感染检查项目的选择与 应用评价
• 直接显微镜检查：观 察寄生虫生活史的各 阶段，是寄生虫感染 的主要诊断依据。
• 寄生虫抗体检测：辅 助诊断。
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预报用药
测试药 菌名 推测其它药物的敏感性
• 苯唑西林 葡萄球菌
所有β-内酰胺类
• 四环素 所有（除葡
多西环素，米诺环素
萄球菌和不
动杆菌〕
• 红霉素
G＋球菌 罗红霉素，克拉霉素，阿奇霉素
• 克林霉素 所有
林可霉素
预报用药
测试药 菌名
推测其它药物的敏感性
• 氨苄西林 肠球菌
青霉素
• 青霉素G 葡萄球菌
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4.分子生物学检查法
➢ 应用分子生物学方法进行细菌检测，如部分 的核酸杂交技术、聚合酶链反应技术（PCR）及 质粒指纹图谱技术，还有逐渐成熟的蛋白质芯片 技术及DNA芯片技术。 ---全自动细菌鉴定飞行质谱仪（简单介绍）
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二、细菌耐药性检查
常用检测细菌耐药性的方法为： ✓ KB法（即纸片扩散法）：根据纸片中所
•生物学检查法
7
细菌鉴定
形态学
✓革兰染色镜检 ✓真菌湿片镜检 ✓抗酸染色镜检 ✓墨汁染色
菌落特征
✓菌落大小 ✓菌落颜色 ✓溶血特点 ✓产色素情况 ✓气味
生化鉴定
G-菌：氧化酶、 OF ✓葡萄球菌属： 触酶、凝固酶 ✓b溶血链球菌： 血清凝集试验 ✓肠球菌属：高 盐、胆七试验
8
1.形态学检查
• 一、观察细菌的培养特征来判断，观察内容包括：细菌培养物的颜色 、气味、溶血性、菌落形态、细菌动力及在液体、半固体、固体培养基 中的生长状态；
5.安全采集：
采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的污染。同时也 要注意安全，防止传播和自身感染。
2
形态学检查
革兰氏染色
5
✓ （三）病原体的分离培养和鉴定
微生物
细菌培 养
培养分 类
血培 养
真菌培 养
自动培 养
6
细菌鉴定
•形态学检查 •生物化学检查法 •免疫学检查法 •分子生物学检查法
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（1）双歧法：工作量大、工作效率低、 准确性差、人为因素。
未知菌
测试1
+
—
测试2
测试3
+
—
+
—
O对于工作经验很丰富的检验人员，双歧法也不失 为一种简便而有效的细菌鉴定方法，这个方法所 选用的测试特异性很好。
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O（2）数值法：将细菌的形态和理化特征用数 字表示，按照数学理论的方法将反应谱进行数 字处理最后得出结果。
含药物的抑菌环大小来判断。抑菌环越大 越敏感。
➢ 优点：选药灵活、便宜、一个平皿可测多个药 ➢ 缺点：影响因素多
✓ MIC法：检测能够抑制被测菌生长的最低 药物浓度，MIC值越小越敏感。
➢ 优点：操作容易（一次可操作检测多种药物）；敏感株的 MIC呈正态分布；已实现自动化等
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药敏试验折点的建立
1. MIC的分布 2. 药代动力学和药效学 定 MIC的折点 3. 临床疗效和细菌清除率 4. 抑菌圈直径的分布 …定抑菌圈折点
微生物室工作流程简介
微生物培养
病原微生 物鉴定
工一、标本采集和运送
✓ （一）微生物标本采集的一般原则： 1.早期采集：
采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时，而且必须在使用 抗生素或其他抗菌药物之前采集。
2.无菌采集：
采集的标本应无外源性污染。在采集血液、脑脊液、胸腔积液、关 节液等无菌标本时，应注意对局部及周围皮肤的消毒，严格进行 无菌操作；对于与外界相通的腔道，如窦道标本应由窦道底部取 活组织检查，而不应从窦道口取标本，以免受皮肤表面正常菌群 的污染，造成混淆和误诊；对于从正常菌群寄生部位（如口腔） 采集的标本，应明确检查的目的菌，在进行分离培养时，采用特 殊选择性培养基。采集的标本均应盛于无菌容器内，盛标本的容 器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌，或用一次性无 菌容器，而不能用消毒剂或酸类处理。
• 二、显微镜检查：借助各种显微镜可对细菌形态、基本结构、排列方式 、数量、活体状态、运动特征等进行直观检查，对样本中细菌的含量和 种类做出大致判断。
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2.生物化学检查法
生物化学法又叫生化反应试验，它是利用各种 不同细菌在进化中形成的独特的酶系统，在其生 长环境中加入相应作用底物和指示剂，经培养一 定时间后，细菌的代谢产物呈现肉眼可见或仪器 可分析的变化，根据这些变化可对细菌的种类进 行鉴别。 ✓糖代谢试验； ✓蛋白质代谢试验； ✓碳源和氮源利用试验； ✓氧化酶、接触酶等单项检测试验。
药代动力学和药效学
O 药代动力学：药物吸收，分布，代谢，排泄 O 药效学：药物对机体的作用 ➢ 时间依赖型（％T>MIC〕：β－内酰胺类，大环内酯类 ➢ 浓度依赖型（AUC/MIC比率〕：AGS, FQ
• 这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案
选药原则
➢ 主要根据细菌种类和抗生素作用机制选药。 选择试验的药物应具有确切的临床疗效，试验药 物的体外试验结果可以接受，并且试验药物具有 代表性。
分离平板
O数值鉴定的流程
调配菌液
测试组合
孵育 鉴定结果
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13
结果判读
查询编码 册或软件
14
15
3.免疫学检查法
免疫学检查又叫血清学检查，它是利用抗体-抗原反应 在细菌感染的种类、性质、部位及病人的感染程度进行特 异性诊断，包括： ✓沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体相混合，在一定条件 下，形成肉眼可见的沉淀物 。应用于如链球菌、肺炎链 球菌、鼠疫耶尔森菌的鉴定 ✓凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体可发生特异性结合， 在一定条件下出现肉眼可见的凝集小块。用于沙门菌、志 贺菌、致病性大肠埃希菌、霍乱弧菌、布氏杆菌、流感嗜 血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌及链球菌等的鉴定。 荚膜肿胀试验：常用于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和炭疽 芽胞梭菌等检测。 ✓制动试验：主要用于霍乱弧菌的快速鉴定。
氨苄，美洛，替卡
• 头孢噻吩 肠杆菌科
拉定，氨苄，克罗
• 万古霉素s 所有
替考拉宁s
• 奈啶酸 肠杆菌科
所有FQs
1
3.方法得当：
即根据检测的目的菌采用适宜的方法。如，厌氧菌、需氧或兼性厌 氧菌，以及L型菌采用的方法不同。如尿液标本，疑为厌氧菌感染时， 应以无菌注射器从耻骨上缘行膀胱穿刺术抽取；若怀疑是需氧或兼性 厌氧菌的感染。则可通过自然导尿获取标本。
4.标本适量：
采集量不应过少或过多，而且要有代表性，同时有些标本还要注意 在不同时间采集不同部位标本。如肠热症患者，发病的第1周应采集血 液，第2周应采集粪便和尿液。否则影响细菌检出率。
预报用药
测试药 菌名 推测其它药物的敏感性
• 苯唑西林 葡萄球菌
所有β-内酰胺类
• 四环素 所有（除葡
多西环素，米诺环素
萄球菌和不
动杆菌〕
• 红霉素
G＋球菌 罗红霉素，克拉霉素，阿奇霉素
• 克林霉素 所有
林可霉素
预报用药
测试药 菌名
推测其它药物的敏感性
• 氨苄西林 肠球菌
青霉素
• 青霉素G 葡萄球菌
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4.分子生物学检查法
➢ 应用分子生物学方法进行细菌检测，如部分 的核酸杂交技术、聚合酶链反应技术（PCR）及 质粒指纹图谱技术，还有逐渐成熟的蛋白质芯片 技术及DNA芯片技术。 ---全自动细菌鉴定飞行质谱仪（简单介绍）
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二、细菌耐药性检查
常用检测细菌耐药性的方法为： ✓ KB法（即纸片扩散法）：根据纸片中所
•生物学检查法
7
细菌鉴定
形态学
✓革兰染色镜检 ✓真菌湿片镜检 ✓抗酸染色镜检 ✓墨汁染色
菌落特征
✓菌落大小 ✓菌落颜色 ✓溶血特点 ✓产色素情况 ✓气味
生化鉴定
G-菌：氧化酶、 OF ✓葡萄球菌属： 触酶、凝固酶 ✓b溶血链球菌： 血清凝集试验 ✓肠球菌属：高 盐、胆七试验
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1.形态学检查
• 一、观察细菌的培养特征来判断，观察内容包括：细菌培养物的颜色 、气味、溶血性、菌落形态、细菌动力及在液体、半固体、固体培养基 中的生长状态；
5.安全采集：
采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的污染。同时也 要注意安全，防止传播和自身感染。
2
形态学检查
革兰氏染色
5
✓ （三）病原体的分离培养和鉴定
微生物
细菌培 养
培养分 类
血培 养
真菌培 养
自动培 养
6
细菌鉴定
•形态学检查 •生物化学检查法 •免疫学检查法 •分子生物学检查法
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（1）双歧法：工作量大、工作效率低、 准确性差、人为因素。
未知菌
测试1
+
—
测试2
测试3
+
—
+
—
O对于工作经验很丰富的检验人员，双歧法也不失 为一种简便而有效的细菌鉴定方法，这个方法所 选用的测试特异性很好。
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O（2）数值法：将细菌的形态和理化特征用数 字表示，按照数学理论的方法将反应谱进行数 字处理最后得出结果。
含药物的抑菌环大小来判断。抑菌环越大 越敏感。
➢ 优点：选药灵活、便宜、一个平皿可测多个药 ➢ 缺点：影响因素多
✓ MIC法：检测能够抑制被测菌生长的最低 药物浓度，MIC值越小越敏感。
➢ 优点：操作容易（一次可操作检测多种药物）；敏感株的 MIC呈正态分布；已实现自动化等
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药敏试验折点的建立
1. MIC的分布 2. 药代动力学和药效学 定 MIC的折点 3. 临床疗效和细菌清除率 4. 抑菌圈直径的分布 …定抑菌圈折点
微生物室工作流程简介
微生物培养
病原微生 物鉴定
工一、标本采集和运送
✓ （一）微生物标本采集的一般原则： 1.早期采集：
采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时，而且必须在使用 抗生素或其他抗菌药物之前采集。
2.无菌采集：
采集的标本应无外源性污染。在采集血液、脑脊液、胸腔积液、关 节液等无菌标本时，应注意对局部及周围皮肤的消毒，严格进行 无菌操作；对于与外界相通的腔道，如窦道标本应由窦道底部取 活组织检查，而不应从窦道口取标本，以免受皮肤表面正常菌群 的污染，造成混淆和误诊；对于从正常菌群寄生部位（如口腔） 采集的标本，应明确检查的目的菌，在进行分离培养时，采用特 殊选择性培养基。采集的标本均应盛于无菌容器内，盛标本的容 器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌，或用一次性无 菌容器，而不能用消毒剂或酸类处理。
• 二、显微镜检查：借助各种显微镜可对细菌形态、基本结构、排列方式 、数量、活体状态、运动特征等进行直观检查，对样本中细菌的含量和 种类做出大致判断。
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2.生物化学检查法
生物化学法又叫生化反应试验，它是利用各种 不同细菌在进化中形成的独特的酶系统，在其生 长环境中加入相应作用底物和指示剂，经培养一 定时间后，细菌的代谢产物呈现肉眼可见或仪器 可分析的变化，根据这些变化可对细菌的种类进 行鉴别。 ✓糖代谢试验； ✓蛋白质代谢试验； ✓碳源和氮源利用试验； ✓氧化酶、接触酶等单项检测试验。
药代动力学和药效学
O 药代动力学：药物吸收，分布，代谢，排泄 O 药效学：药物对机体的作用 ➢ 时间依赖型（％T>MIC〕：β－内酰胺类，大环内酯类 ➢ 浓度依赖型（AUC/MIC比率〕：AGS, FQ
• 这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案
选药原则
➢ 主要根据细菌种类和抗生素作用机制选药。 选择试验的药物应具有确切的临床疗效，试验药 物的体外试验结果可以接受，并且试验药物具有 代表性。
分离平板
O数值鉴定的流程
调配菌液
测试组合
孵育 鉴定结果
12
13
结果判读
查询编码 册或软件
14
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3.免疫学检查法
免疫学检查又叫血清学检查，它是利用抗体-抗原反应 在细菌感染的种类、性质、部位及病人的感染程度进行特 异性诊断，包括： ✓沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体相混合，在一定条件 下，形成肉眼可见的沉淀物 。应用于如链球菌、肺炎链 球菌、鼠疫耶尔森菌的鉴定 ✓凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体可发生特异性结合， 在一定条件下出现肉眼可见的凝集小块。用于沙门菌、志 贺菌、致病性大肠埃希菌、霍乱弧菌、布氏杆菌、流感嗜 血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌及链球菌等的鉴定。 荚膜肿胀试验：常用于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和炭疽 芽胞梭菌等检测。 ✓制动试验：主要用于霍乱弧菌的快速鉴定。
氨苄，美洛，替卡
• 头孢噻吩 肠杆菌科
拉定，氨苄，克罗
• 万古霉素s 所有
替考拉宁s
• 奈啶酸 肠杆菌科
所有FQs
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3.方法得当：
即根据检测的目的菌采用适宜的方法。如，厌氧菌、需氧或兼性厌 氧菌，以及L型菌采用的方法不同。如尿液标本，疑为厌氧菌感染时， 应以无菌注射器从耻骨上缘行膀胱穿刺术抽取；若怀疑是需氧或兼性 厌氧菌的感染。则可通过自然导尿获取标本。
4.标本适量：
采集量不应过少或过多，而且要有代表性，同时有些标本还要注意 在不同时间采集不同部位标本。如肠热症患者，发病的第1周应采集血 液，第2周应采集粪便和尿液。否则影响细菌检出率。