纸层析法PPT课件
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纸层析法分离氨基酸16页PPT
主要试剂：
（1）展开剂 正丁醇:甲酸:水＝60:12:8。 （2）氨基酸标准溶液 2 g·L-1水溶液。 （3）茚三酮 1 g·L-1乙醇溶液。 （4）氨基酸混合试液 将（2）配制的三种氨基酸等量混合。
实验操作：
1.在层析缸中装入展开剂，其高度约1.5~2.0cm；
2.准备滤纸：戴上手套，取层析滤纸一张，在纸的另一端距 边缘3.0cm处用铅笔画一直线，在此直线上每隔2cm作一记 号，为点样位置（即原点）；
3.点样：用毛细血管依次将异亮氨酸，谷氨酸，赖氨酸和混 合样品分别滴在四个位置，点样干后再点一次； 注意事项：每个点在纸上扩散的直径，最大不超过3mm；
实验步骤 ——点 样
3.0cm
1234
异 亮赖 谷混 氨氨 氨合 酸酸 酸液 3.0cm
各点 φ≈2mm
实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题
赖氨酸
原点到层析斑点中 心的距离 原点到溶剂前沿的 距离
标准aaRf 混合aaRf
Байду номын сангаас
纸层析结果
异亮氨酸
谷氨酸
思考题： 1.纸层析法属于吸附层析还是分配层析，为什么？ 2.此三种氨基酸还能用什么层析方法进行分离，为什么？
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
纸层析法分离氨基酸
Rf：0~1， Rf值相差越大，分离效果越好。 本实验分离和鉴定的氨基酸混合液：异亮氨酸、 赖氨酸和谷氨酸。
无色物质的纸色谱可用光谱法（紫外光照射）或 显色法鉴定，氨基酸纸色谱图谱常用茚三酮或吲哚 醌作为显色剂，本实验采用茚三酮作为显色剂。
高中化学精品课件：纸层析法分析铜离子和铁离子
ห้องสมุดไป่ตู้
• （5）显色反应: 取出滤纸条，放在浓
氨水的瓶口上用氨气熏，即见滤纸条 上端出现红棕色，这是Fe3+离子跟氨 水反应生成的Fe（OH）3 的颜色。在 滤纸条上红棕色的下方出现深蓝色， 这是Cu2+离子跟氨反应生成的铜氨络 离子[Cu（NH3）4]2+的颜色。由于 Fe3+的展开速度比Cu2+快，它们的富
以分离铁离子和铜离子 为例,学会纸层析法
做一做:纸层析法操作要点
• （1）装配仪器 : 取大试管一支，配一 个合适的橡皮塞。在橡皮塞的底部用 小刀切开一条缝，插入小半段回形针， 用来夹持层析的滤纸条。在离开滤纸 条末端约2 厘米处用铅笔画×作记号。
• （2）点样：点层析试样 是决定实验 能否取得理想效果的重要操作。将饱 和FeCl3和CuSO4混合液按1∶1的体 积比在表面皿中配成溶液。用毛细管 吸取样品溶液，在离滤纸条一端2 cm 处点一斑点。注意斑点尽可能小。如 果色斑颜色很浅，待溶液挥发后，在 原处重复点样。晾干备用。
课题2 纸层析法分离铁离子和铜离子
想一想:
1.混合物分离或提纯的方法主要有哪些?
过滤.重结晶.升华.蒸馏.萃取.分液.盐析.洗气. 色谱分离法(如层析). 膜分离法(如渗析).离子 交换分离法……
2.天然蛋白质水解得到不同的氨基酸,这 些氨基酸结构相近,性质相似,如何分离它 们呢?
看一看:看谁爬得快
• 当滤纸接触到溶剂时，毛细 现象使溶液上升。
• 滤纸上的小圆点是4种不同的 氨基酸的混合物。
• 看看接下来会发生什么事 情…
1
• 可以看出1号氨基酸上升的最高，
2
在滤纸上跑得最快。
3
4
• 而4号氨基酸与滤纸的结合最紧， 因此跑的速度比其他的氨基酸 慢。
• （5）显色反应: 取出滤纸条，放在浓
氨水的瓶口上用氨气熏，即见滤纸条 上端出现红棕色，这是Fe3+离子跟氨 水反应生成的Fe（OH）3 的颜色。在 滤纸条上红棕色的下方出现深蓝色， 这是Cu2+离子跟氨反应生成的铜氨络 离子[Cu（NH3）4]2+的颜色。由于 Fe3+的展开速度比Cu2+快，它们的富
以分离铁离子和铜离子 为例,学会纸层析法
做一做:纸层析法操作要点
• （1）装配仪器 : 取大试管一支，配一 个合适的橡皮塞。在橡皮塞的底部用 小刀切开一条缝，插入小半段回形针， 用来夹持层析的滤纸条。在离开滤纸 条末端约2 厘米处用铅笔画×作记号。
• （2）点样：点层析试样 是决定实验 能否取得理想效果的重要操作。将饱 和FeCl3和CuSO4混合液按1∶1的体 积比在表面皿中配成溶液。用毛细管 吸取样品溶液，在离滤纸条一端2 cm 处点一斑点。注意斑点尽可能小。如 果色斑颜色很浅，待溶液挥发后，在 原处重复点样。晾干备用。
课题2 纸层析法分离铁离子和铜离子
想一想:
1.混合物分离或提纯的方法主要有哪些?
过滤.重结晶.升华.蒸馏.萃取.分液.盐析.洗气. 色谱分离法(如层析). 膜分离法(如渗析).离子 交换分离法……
2.天然蛋白质水解得到不同的氨基酸,这 些氨基酸结构相近,性质相似,如何分离它 们呢?
看一看:看谁爬得快
• 当滤纸接触到溶剂时，毛细 现象使溶液上升。
• 滤纸上的小圆点是4种不同的 氨基酸的混合物。
• 看看接下来会发生什么事 情…
1
• 可以看出1号氨基酸上升的最高，
2
在滤纸上跑得最快。
3
4
• 而4号氨基酸与滤纸的结合最紧， 因此跑的速度比其他的氨基酸 慢。
氨基酸的分离鉴定纸层析法ppt课件
（4）层析：用针、线将滤纸缝成筒状，纸的两侧
边缘不能接触且要保持平行，参见图3-3。向培养 皿中加入扩展剂，使其液面高度达到1cm左右， 将点好样的滤纸筒直立于培养皿中（点样的一端 在下，扩展剂的液面在A线下约1cm），罩上大 烧杯，仍用塑料薄膜密封。当扩展剂上升到A线 时开始计时，每隔一定时间测定一下扩展剂上升 的高度，填入表3-1中。当上升到15～18cm， 取出滤纸，剪断连线，立即用铅笔描出溶剂前沿 线，迅速用电吹风热风吹干。
（2）规划：带上手套，取宽约 14cm、高约22cm的层析滤 纸一张。在纸的下端距边缘 2cm处轻轻用铅笔划一条平 行于底边的直线A，在直线 上做4个记号，记号之间间隔 2cm，这就是原点的位置。 另在距左边缘1cm处画一条 平行于左边缘的直线B，在B 线上以A、B两线的交点为原 点标明刻度（以厘米为单 位），参见左图。
（3）点样：用微量注射器分别取10mL左右的氨基酸样 品（每取一个样之前都要用蒸馏水洗涤微量注射器，以 免交叉污染），点在这四个位置上。挤一滴点一次，同 一位置上需点2～3次，2～3mL/次，每点完一点，立 刻用电吹风热风吹干后再点，以保证每点在纸上扩散的 直径最大不超过3mm。每人须点4个样，其中3个是已 知样，1个是待测样品。
（8）将微量注射器内外用蒸馏水清洗干净，倒掉用 过的展层液和平衡液，将培养皿洗净，整理好桌面上 的仪器和试剂，并注意清洁自己的操作台，请老师验 收，实验报告当场交给老师。
计算
Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距
离
记录与计算汇总
扩展剂前沿上升速度
X（min） 0 5 10 15 20 30 40 60 90 … 18
一、实验目的
掌握氨基酸纸层析的方法和原理，学会分析待 测样品的氨基酸成分。
绿叶中色素的提取和分离(纸层析法).ppt
谢谢阅读
3
实验步骤：
3.画滤液细线
2019-11-27
滤液细线的要求：
细、直、齐（使色素处于同 一起跑线）；
重复2—3次（防止色素太少 分离现象不明显）。
谢谢阅读
4
实验步骤：
4.分离绿叶中的色素
培养皿
注意:
滤液细线
层析液
滤液细线不能触到层析液（防止色素溶解在层析液中）
烧杯要盖上培养皿、试管要塞上棉塞（层析液易挥发且有毒）
颜色
度
能
胡萝卜素 橙黄色 最少 叶黄素 黄色 较少
最大 较大
最快 蓝紫光 较快
叶绿素ａ 蓝绿色 最多 叶绿素ｂ 黄绿色 较多
较小 最小
较慢 蓝紫光 最慢 红光
与光合作用有关的色素存在于哪呢？
2019-11-27
谢谢阅读
7
四种色素对光的吸收 叶绿体中的色素提取液
叶绿素a、b主要吸__蓝__紫__光__、__红__光___
胡萝卜素和叶黄素主要吸收_蓝__紫__光_____
2019-11-27
谢谢阅读
8
叶绿体中色素提取和分离实验中几个关键问题
• 取叶要新鲜 ， 滤液中含有较多的色素；
• 研磨要迅速充分，防止无水乙醇挥发，同时可以得到色素浓度较大的
滤液；
• 画滤液细线要重复２－３次，以便色素带清晰；
• 滤液细线要细、直、齐，防止色素带重叠；
2019-11-27
谢谢阅读
5
实验步骤：
5、观察与记录实验结果
胡萝卜素 捕 类胡萝 （橙黄色）
获 光 能
卜素
(占1/4)
叶黄素
（黄色）
的
叶绿素a
《纸层析实验》课件
《纸层析实验》ppt课 件
contents
目录
• 纸层析实验简介 • 实验材料与设备 • 实验步骤与方法 • 实验结果分析 • 实验结论与展望
纸层析实验简介
01
纸层析实验的定义
01
纸层析实验是一种基于滤纸作为 固定相的色谱分离技术，用于分 离和鉴定混合物中的组分。
02
该技术利用不同组分在固定相和 流动相之间的分配系数差异进行 分离。
可用于分离和鉴定天然产物、合 成化合物、环境污染物等混合物
中的组分。
该技术具有操作简便、分离效果 好、成本低等优点，因此在科研
和工业生产中得到广泛应用。
实验材料与设备
02
实验材料
01
02
03
04
滤纸
标记笔
溶剂
待分离的物质
实验设备
烧杯
天平 烘箱
玻璃棒 纸层析仪
实验试剂
01
02
03
展开剂
用于溶解和分离待测物质 。
实验结果分析方法
对比分析
将实验组和对照组的结果进行对 比，分析差异及原因。
数据处理
运用统计学方法对实验数据进行处 理，如求平均值、标准差等，以便 更好地评估实验结果的可靠性。
图表分析
通过观察图表的变化趋势，分析实 验结果与预期的符合程度。
实验误差分析
操作误差
分析实验过程中可能出现的操作误差 ，如样品点的不均匀、纸层析过程中 温度控制不当等。
实验的未来发展与展望
随着科学技术的发展，纸层析实验有 望在多个领域得到更广泛的应用。
此外，随着分析化学和材料科学的发 展，新型的吸附剂和展开剂有望被开 发出来，进一步优化纸层析实验的效 果和应用范围。
contents
目录
• 纸层析实验简介 • 实验材料与设备 • 实验步骤与方法 • 实验结果分析 • 实验结论与展望
纸层析实验简介
01
纸层析实验的定义
01
纸层析实验是一种基于滤纸作为 固定相的色谱分离技术，用于分 离和鉴定混合物中的组分。
02
该技术利用不同组分在固定相和 流动相之间的分配系数差异进行 分离。
可用于分离和鉴定天然产物、合 成化合物、环境污染物等混合物
中的组分。
该技术具有操作简便、分离效果 好、成本低等优点，因此在科研
和工业生产中得到广泛应用。
实验材料与设备
02
实验材料
01
02
03
04
滤纸
标记笔
溶剂
待分离的物质
实验设备
烧杯
天平 烘箱
玻璃棒 纸层析仪
实验试剂
01
02
03
展开剂
用于溶解和分离待测物质 。
实验结果分析方法
对比分析
将实验组和对照组的结果进行对 比，分析差异及原因。
数据处理
运用统计学方法对实验数据进行处 理，如求平均值、标准差等，以便 更好地评估实验结果的可靠性。
图表分析
通过观察图表的变化趋势，分析实 验结果与预期的符合程度。
实验误差分析
操作误差
分析实验过程中可能出现的操作误差 ，如样品点的不均匀、纸层析过程中 温度控制不当等。
实验的未来发展与展望
随着科学技术的发展，纸层析实验有 望在多个领域得到更广泛的应用。
此外，随着分析化学和材料科学的发 展，新型的吸附剂和展开剂有望被开 发出来，进一步优化纸层析实验的效 果和应用范围。
【正式版】纸层析法分离鉴定氨基酸PPT
由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。 点样：用毛细管依次将Lys(赖) 、 Gly(甘) 、 Pro(脯)、Val (缬)、 Leu (亮)和混合样品分别点在这6个位置上，点样点干后再点一次。 待溶剂上升15～20 cm时，取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，电吹风吹干。 纸层析法分离鉴定氨基酸 所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值。 由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。 注意事项：手不能直接接触滤纸； (3) 显色剂：％ (m/V)水合茚三酮正丁醇溶液 。 在一定条件下（如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变），某种物质的Rf 值是常数，因此可作为定性依据。 在层析缸中装入展层剂，其高度约～2cm。 所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值。 纸层析法分离鉴定氨基酸
纸层析法分离鉴定氨基酸
将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处， 该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂 沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基 酸在两相中不断分配。由于分配系数（Kd） 不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。 物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用 比移值（Rf）来表示。 所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸 停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与 原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值。如图
笔描出溶剂前沿界线，电吹风吹干。 在所一谓定 Rf条，件是下指（在如纸温层度析、中展，层从剂原的点组至成氨、基层酸析停纸留质点量（等又不称变为）层，析某点种）物中质心的距Rf离值（是X常）数与，原因点此至可溶作剂为前定沿性的依距据离。（Y）的比值。
实验四 纸层析ppt课件
Байду номын сангаас
在用纸层析法分离氨基酸时，由于各种 氨基酸在此二相中的分配系数不同，各有 一定的迁移率。丙氨酸属于非极性中性氨 基酸，易溶于有机溶剂，而谷氨酸属于极 性酸性氨基酸，易溶于水，因此在纸层析 体系中谷氨酸和丙氨酸相比而言，丙氨酸 更易溶于流动相，因此迁移距离远。
本实验用圆盘滤纸进行水平型层析，
层析结束后利用氨基酸与茚三酮共加热，
本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为 底物，加肝匀浆保温后，用纸层析 法检查谷氨酸的出现以证明转氨基 作用。
纸层析属于分配层析。以滤纸为支持物， 滤纸纤维与水亲合力强，吸收20~22 %的 水。而且其中6~7 %的水是以氢键形式与纤 维素的羟基结合，在一般情况下很难脱去， 而滤纸纤维与有机溶剂的亲和力甚弱。所 以纸层析是以滤纸纤维结合水作为固定相， 以有机溶剂作为流动相。
实验六 纸层析鉴定 转氨基作用
层析是利用不同物质，不同的理化性
质如吸附力、分子形状、大小、极性、分 配系数的不同而建立起来的技术。所有层 析系统都有两相组成。既固定相和流动相。 固定相既固体物质或是固定于固体物质上 的成分。流动相既可以流动的物质 如：水 或溶液等。混合物要经过此两相与其作用， 最后分离。
4、显色：将上诉滤纸平放在培养皿中，用 喷雾器喷上0.5%茚三酮溶液用热风吹，此 时可见紫色的同心圆斑出现，比较色斑的 位置和色泽的深浅，分析实验结果。
5、【计算】 分别计算各图谱的Rf值。
生成蓝紫色化合物的茚三酮法显色，观察
色斑，判定结果。
3、层析：取直径10cm圆形滤纸一张，用 圆规半径1cm同心圆，通过圆心作相互垂直 的线， 然后半径每次增加0.5cm画同心圆 至滤纸边缘。
在滤纸圆心处打一孔（如铅笔芯大小）另 取同类滤纸约1cm，下一半剪成须状，卷成 圆筒，如灯芯，插入小孔，（勿使突出滤 纸面）。将层析液放入干燥表面皿中，并 将表面皿置于直径10cm培养皿正中，将滤 纸平放在培养皿中，灯芯浸入溶剂中，将 另一个培养皿反盖上，可见溶剂沿芯上升 到滤纸，再向四周扩展，约25分钟后晕染 的边缘距滤纸边缘约1cm时即可取出，用铅 笔标记层析液前沿，用吹风机吹干。
在用纸层析法分离氨基酸时，由于各种 氨基酸在此二相中的分配系数不同，各有 一定的迁移率。丙氨酸属于非极性中性氨 基酸，易溶于有机溶剂，而谷氨酸属于极 性酸性氨基酸，易溶于水，因此在纸层析 体系中谷氨酸和丙氨酸相比而言，丙氨酸 更易溶于流动相，因此迁移距离远。
本实验用圆盘滤纸进行水平型层析，
层析结束后利用氨基酸与茚三酮共加热，
本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为 底物，加肝匀浆保温后，用纸层析 法检查谷氨酸的出现以证明转氨基 作用。
纸层析属于分配层析。以滤纸为支持物， 滤纸纤维与水亲合力强，吸收20~22 %的 水。而且其中6~7 %的水是以氢键形式与纤 维素的羟基结合，在一般情况下很难脱去， 而滤纸纤维与有机溶剂的亲和力甚弱。所 以纸层析是以滤纸纤维结合水作为固定相， 以有机溶剂作为流动相。
实验六 纸层析鉴定 转氨基作用
层析是利用不同物质，不同的理化性
质如吸附力、分子形状、大小、极性、分 配系数的不同而建立起来的技术。所有层 析系统都有两相组成。既固定相和流动相。 固定相既固体物质或是固定于固体物质上 的成分。流动相既可以流动的物质 如：水 或溶液等。混合物要经过此两相与其作用， 最后分离。
4、显色：将上诉滤纸平放在培养皿中，用 喷雾器喷上0.5%茚三酮溶液用热风吹，此 时可见紫色的同心圆斑出现，比较色斑的 位置和色泽的深浅，分析实验结果。
5、【计算】 分别计算各图谱的Rf值。
生成蓝紫色化合物的茚三酮法显色，观察
色斑，判定结果。
3、层析：取直径10cm圆形滤纸一张，用 圆规半径1cm同心圆，通过圆心作相互垂直 的线， 然后半径每次增加0.5cm画同心圆 至滤纸边缘。
在滤纸圆心处打一孔（如铅笔芯大小）另 取同类滤纸约1cm，下一半剪成须状，卷成 圆筒，如灯芯，插入小孔，（勿使突出滤 纸面）。将层析液放入干燥表面皿中，并 将表面皿置于直径10cm培养皿正中，将滤 纸平放在培养皿中，灯芯浸入溶剂中，将 另一个培养皿反盖上，可见溶剂沿芯上升 到滤纸，再向四周扩展，约25分钟后晕染 的边缘距滤纸边缘约1cm时即可取出，用铅 笔标记层析液前沿，用吹风机吹干。
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色谱法体系中的两相作相对运 动时，通常其中一个相是固定不 动的，称为固定相；另一相是移 动的，称为流动相;滤纸或其它 载体作为惰性支撑物
按吸附剂及其使用形式可分为柱色谱、纸色谱
和薄层色谱。
1、Cu2＋和Fe3＋在水中及在丙酮中溶解性不同 2、毛细作用 3、 Cu2＋和Fe3＋遇氨水发生的反应及现象
配展开剂
用丙酮9mL,6mol/L盐酸1mL配成展开剂。
层析操作 显色反应
展开剂不可沾到试管壁，点样后的滤纸条不可接触试 管内壁，滤纸条下端浸入展开剂中1cm,注意不要让试 样点触及展开剂。
注意观察滤纸条上色带的变化，滤纸条取下后用氨 气熏，观察颜色变化；氨熏应在通风橱中进行Leabharlann 用纸层析法分离铁离子和铜离子
实验方案设计
操作步骤：
操作要点：
装置制作
点层析试样
滤纸剪成约1cm宽，10cm长(保证下端能浸入展开剂中 1cm)的滤纸条，一端固定在橡胶塞上，在距滤纸条一 端2cm处用铅笔画一小圆点。
配试样后，用毛细管蘸取试样在“原点”处点直径0.30.5cm的斑点，晾干后再点。重复3-5次。也在滤纸下方 距离底边2cm处画出混合液细线代替点样。
层析法的优点：
仪器简单，操作容易 微量物质的分离和鉴别 化学性质相近的混和物的分离
根据国家质检总局奶制品中三聚氰胺快速检测 应急要求，安捷伦推出《原料乳中三聚氰胺快 速检测液相色谱法》，采用本公司的液相色谱 仪和色谱柱，成功地进行三聚氰胺快速检测分 析。
信息源自： /2008/10/161347155578.shtml
No Image
三聚氰胺分析仪(色谱法)
主要成份：叶黄素,维生素A,维生素C,维生素B1,葡萄酸锌, 大豆油
叶黄素---眼睛强效抗氧化剂，眼睛的基 础营养素，保护提高视力，改善视觉功 能
如何从天然植物中提取出叶黄素呢？
分离过程示意图
混合物
各组分同时进入 各组分开始分离 各组分基本分离 各组分完全分离
一、色谱分析法：
1、简介：基于混合物各组分在体系中两相的物理、化学性 能差异（如吸附、溶解、分配差异等）而进行分离和分析的 方法。国际公认俄国M.C.茨维特为色谱法的创始人。
实验原理： 固定相： 水 流动相： 丙酮 滤纸的作用： 惰性支持物
六、实验注意事项
（1）不要倾斜层析瓶，不要让层析液沾到容器内 壁上； （2）滤纸插入层析瓶中要挺直； （3）不能使点好的混合物碰到层析液（已经装好 丙酮和盐酸混合溶液），否则会溶解到层析液中 而导致实验失败。 （4）点层析试样时，直径0.3-0.5cm的斑点