液相色谱基础知识和方法的开发优秀课件
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《液相色谱分析法》课件
液相色谱分析法
,
汇报人:
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 液 相 色 谱 分 析 法 的
技术原理
05 液 相 色 谱 分 析 法 的 优缺点
02 液 相 色 谱 分 析 法 的 概述
04 液 相 色 谱 分 析 法 的 应用实例
06
液相色谱分析法的 发展趋势和未来展
望
Part One
单击添加章节标题
数据处理:对检测到的信号 进行处理,得到样品的色谱 图和定量结果
结果分析:根据色谱图和定 量结果,对样品进行分析和 鉴定
Part Four
液相色谱分析法的 应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究:研究药物 在储存过程中的稳定性
药物成分分析:分析药物中 的有效成分、杂质等
药物质量控制:控制药物的 质量,确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术:提高分离效率,降 低检测限
生物样品分析:应用于生物医药、食品安 全等领域
质谱联用技术:提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析:应用于环境监测、污染治 理等领域
微流控芯片技术:实现样品的微型化和快 速分析
智能化、自动化技术:提高分析效率,降 低人工操作误差
添加标题
核磁共振检测器:利用核磁共振原理,检测样品中的核磁共振信号,用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备:将样品进行适当 的处理,如稀释、过滤等
样品注入:将样品注入到色 谱柱中
色谱分离:样品在色谱柱 中分离,根据不同组分的 性质和亲和力进行分离
检测器检测:样品经过检 测器时,检测器对样品进 行检测,得到相应的信号பைடு நூலகம்
,
汇报人:
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 液 相 色 谱 分 析 法 的
技术原理
05 液 相 色 谱 分 析 法 的 优缺点
02 液 相 色 谱 分 析 法 的 概述
04 液 相 色 谱 分 析 法 的 应用实例
06
液相色谱分析法的 发展趋势和未来展
望
Part One
单击添加章节标题
数据处理:对检测到的信号 进行处理,得到样品的色谱 图和定量结果
结果分析:根据色谱图和定 量结果,对样品进行分析和 鉴定
Part Four
液相色谱分析法的 应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究:研究药物 在储存过程中的稳定性
药物成分分析:分析药物中 的有效成分、杂质等
药物质量控制:控制药物的 质量,确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术:提高分离效率,降 低检测限
生物样品分析:应用于生物医药、食品安 全等领域
质谱联用技术:提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析:应用于环境监测、污染治 理等领域
微流控芯片技术:实现样品的微型化和快 速分析
智能化、自动化技术:提高分析效率,降 低人工操作误差
添加标题
核磁共振检测器:利用核磁共振原理,检测样品中的核磁共振信号,用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备:将样品进行适当 的处理,如稀释、过滤等
样品注入:将样品注入到色 谱柱中
色谱分离:样品在色谱柱 中分离,根据不同组分的 性质和亲和力进行分离
检测器检测:样品经过检 测器时,检测器对样品进 行检测,得到相应的信号பைடு நூலகம்
《液相色谱技术》课件
通过液相色谱技术,可以检测环境中的有毒有害物质,如农药、酚类等,为环境治理和保护提供科学依据。
生态毒理学研究
液相色谱技术可以用于研究环境污染物对生物体的毒理学效应,有助于了解环境污染对生态系统的危害。
液相色谱技术的未来发展与挑战
高效液相色谱法(HPLC)
HPLC是液相色谱技术中的一种,具有高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点,被广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。随着技术的不断发展,HPLC的分离柱、检测器等关键部件也在不断改进,提高了分离效果和检测灵敏度。
智能化与自动化:随着机器人技术和自动化控制技术的发展,液相色谱技术的操作将更加智能化和自动化。未来的液相色谱仪将更加便捷、高效,能够实现自动化进样、自动优化分离条件等功能,大大提高分析效率。
感谢观看
THANKS
流动相的准备与更换
根据实验要求,准备好适量的流动相,并定期更换以保证实验结果的准确性。
定期清洗进样器、色谱柱和检测器,保持仪器表面清洁。
日常保养
定期校准
常见故障排除
对仪器进行定期校准,确保检测结果的准确性。
遇到问题时,应先检查电源、管线连接等基本情况,再根据仪器手册排查故障。
03
02
01
液相色谱技术的实验设计
色谱柱
检测色谱柱流出的组分,并将其转化为电信号,便于记录和检测。
检测器
用于采集、处理、分析和存储色谱数据。
数据处理系统
数据处理与分析
采集色谱数据,进行峰识别、定量和合适的流速、检测波长等参数,开始色谱分离。
进样
将样品注入进样器,设定进样量,启动进样程序。
准备工作
检查仪器是否正常,准备好流动相、色谱柱和样品。
样品前处理的挑战:液相色谱技术对于样品的要求较高,需要进行适当的前处理以去除杂质、提高分离效果。目前常用的样品前处理方法包括沉淀、萃取、吸附等,但这些方法操作繁琐、耗时长且效果不稳定。为解决这一问题,新型的样品前处理技术如固相萃取、免疫吸附等正在不断发展,以提高样品处理的效率和效果。
生态毒理学研究
液相色谱技术可以用于研究环境污染物对生物体的毒理学效应,有助于了解环境污染对生态系统的危害。
液相色谱技术的未来发展与挑战
高效液相色谱法(HPLC)
HPLC是液相色谱技术中的一种,具有高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点,被广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。随着技术的不断发展,HPLC的分离柱、检测器等关键部件也在不断改进,提高了分离效果和检测灵敏度。
智能化与自动化:随着机器人技术和自动化控制技术的发展,液相色谱技术的操作将更加智能化和自动化。未来的液相色谱仪将更加便捷、高效,能够实现自动化进样、自动优化分离条件等功能,大大提高分析效率。
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流动相的准备与更换
根据实验要求,准备好适量的流动相,并定期更换以保证实验结果的准确性。
定期清洗进样器、色谱柱和检测器,保持仪器表面清洁。
日常保养
定期校准
常见故障排除
对仪器进行定期校准,确保检测结果的准确性。
遇到问题时,应先检查电源、管线连接等基本情况,再根据仪器手册排查故障。
03
02
01
液相色谱技术的实验设计
色谱柱
检测色谱柱流出的组分,并将其转化为电信号,便于记录和检测。
检测器
用于采集、处理、分析和存储色谱数据。
数据处理系统
数据处理与分析
采集色谱数据,进行峰识别、定量和合适的流速、检测波长等参数,开始色谱分离。
进样
将样品注入进样器,设定进样量,启动进样程序。
准备工作
检查仪器是否正常,准备好流动相、色谱柱和样品。
样品前处理的挑战:液相色谱技术对于样品的要求较高,需要进行适当的前处理以去除杂质、提高分离效果。目前常用的样品前处理方法包括沉淀、萃取、吸附等,但这些方法操作繁琐、耗时长且效果不稳定。为解决这一问题,新型的样品前处理技术如固相萃取、免疫吸附等正在不断发展,以提高样品处理的效率和效果。
《液相色谱法》PPT课件
第七章 液相色谱(liquid chromatography)
§7-1 概述
(1)液相色谱简介
(2)液相色谱的发展
(3)液相色谱的分类
§7-2 液相色谱仪
(1)液相色谱仪
(2)液相色谱仪的流程图
(3)液相色谱仪的工作过程
(4)液相色谱仪的基本组成系统
(5)高压泵
精选课件ppt
1
第七章 液相色谱(liquid chromatography)
吸附色谱 吸附能,氢键 异构体分离、族分离,制备
分配色谱 疏水分配作用 各种有机化合物的分离、分析与制备
凝胶色谱 溶质分子大小 高分子分离,分子量及其分布的测定
离子交换色谱
库仑力
无机离子、有机离子分析
离子排斥色谱 Donnan膜平衡 有机酸、氨基酸、醇、醛分析
离子对色谱 疏水分配作用 离子性物质分析
疏水作用色谱 疏水分配作用 蛋白质分离与纯化
手性色谱
立体效应 手性异构体分离,药物纯化
亲和色谱 生化特异亲和力 蛋白、酶、抗体分离,生物和医药分析
两种最常用的色谱法
(一)吸附色谱法(adsorption chromatography) 以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色
谱法。使用最多的吸附色谱固定相是硅胶,流 动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。 在吸附色谱中,不同的组分因和固定相吸附力 的不同而被分离。
(6)梯度洗脱装置 (7)进样器 (8)色谱柱 (9)色谱填料 (10)检测器 (11)数据处理系统与自动控制单元
§7-3 新型液相色谱仪简介
(1) waters的UPLC (2)岛津高效率HPLC-2010A/2010C型 (3)岛津LC-VP系列应用系统离子色谱仪
§7-1 概述
(1)液相色谱简介
(2)液相色谱的发展
(3)液相色谱的分类
§7-2 液相色谱仪
(1)液相色谱仪
(2)液相色谱仪的流程图
(3)液相色谱仪的工作过程
(4)液相色谱仪的基本组成系统
(5)高压泵
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1
第七章 液相色谱(liquid chromatography)
吸附色谱 吸附能,氢键 异构体分离、族分离,制备
分配色谱 疏水分配作用 各种有机化合物的分离、分析与制备
凝胶色谱 溶质分子大小 高分子分离,分子量及其分布的测定
离子交换色谱
库仑力
无机离子、有机离子分析
离子排斥色谱 Donnan膜平衡 有机酸、氨基酸、醇、醛分析
离子对色谱 疏水分配作用 离子性物质分析
疏水作用色谱 疏水分配作用 蛋白质分离与纯化
手性色谱
立体效应 手性异构体分离,药物纯化
亲和色谱 生化特异亲和力 蛋白、酶、抗体分离,生物和医药分析
两种最常用的色谱法
(一)吸附色谱法(adsorption chromatography) 以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色
谱法。使用最多的吸附色谱固定相是硅胶,流 动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。 在吸附色谱中,不同的组分因和固定相吸附力 的不同而被分离。
(6)梯度洗脱装置 (7)进样器 (8)色谱柱 (9)色谱填料 (10)检测器 (11)数据处理系统与自动控制单元
§7-3 新型液相色谱仪简介
(1) waters的UPLC (2)岛津高效率HPLC-2010A/2010C型 (3)岛津LC-VP系列应用系统离子色谱仪
液相色谱基础理论.ppt
鬼峰 - Ghost Peak
并非由试样所产生的峰;亦称假峰
17
基础理论:术语介绍
基线-Baseline
在正常操作条件下,仅由流动相所产生的响应信号的曲线
基线飘移 - Baseline Drift
基线随时间定向的缓慢变化
基线噪声;N - Baseline Noise
由各种因素所引起的基线波动
16
基础理论:术语介绍
峰面积 - Peak Area
峰与峰底之间的面积,又称响应值
标准偏差;σ - Standard Error
0.607倍峰高处所对应峰宽的一半
拖尾峰 - Tailing Peak
后沿较前沿平缓的不对称峰
前伸峰 - Leading Peak
前沿较后沿平缓的不对称峰
调整保留体积,V’R - Adjust retention volume
戴安中国HPLC用户培训 2011年
戴安中国有限公司
液相色谱基础知识部分
液相色谱简介 液相色谱理论基础
2
高效液相色谱简介
3
色谱的发明人
俄国科学家:M. S. Tswett 正式命名“色谱”的文献
4
经典液相色谱
石油醚 淋洗剂
叶绿素
碳酸钙 颗粒
Review Stop
叶绿素 中的有 色物质
峰底 - Peak Base
峰的起点与终点之间连接的直线
峰高 - Peak Height
峰最大值到峰底的距离
峰宽 - Peak Width
在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离
半(高)峰宽 - Peak Width at Half Height
并非由试样所产生的峰;亦称假峰
17
基础理论:术语介绍
基线-Baseline
在正常操作条件下,仅由流动相所产生的响应信号的曲线
基线飘移 - Baseline Drift
基线随时间定向的缓慢变化
基线噪声;N - Baseline Noise
由各种因素所引起的基线波动
16
基础理论:术语介绍
峰面积 - Peak Area
峰与峰底之间的面积,又称响应值
标准偏差;σ - Standard Error
0.607倍峰高处所对应峰宽的一半
拖尾峰 - Tailing Peak
后沿较前沿平缓的不对称峰
前伸峰 - Leading Peak
前沿较后沿平缓的不对称峰
调整保留体积,V’R - Adjust retention volume
戴安中国HPLC用户培训 2011年
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液相色谱基础知识部分
液相色谱简介 液相色谱理论基础
2
高效液相色谱简介
3
色谱的发明人
俄国科学家:M. S. Tswett 正式命名“色谱”的文献
4
经典液相色谱
石油醚 淋洗剂
叶绿素
碳酸钙 颗粒
Review Stop
叶绿素 中的有 色物质
峰底 - Peak Base
峰的起点与终点之间连接的直线
峰高 - Peak Height
峰最大值到峰底的距离
峰宽 - Peak Width
在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离
半(高)峰宽 - Peak Width at Half Height
《液相色谱法》课件
DATE
ANALYSIS
SUMMAR Y
REPORT
CATALOG
DATE
ANALYSIS
SUMMAR Y
05
液相色谱法的优化与注 意事项
实验条件的优化
1 2
流动相的选择
根据分析物的性质选择合适的流动相,如有机溶 剂、缓冲液等,以达到最佳分离效果。
流速的优化
流速对色谱分离效果有重要影响,需根据实际情 况调整流速,以达到最佳分离效果。
3
柱温的优化
柱温会影响物质的吸附和扩散速度,适当提高柱 温可以加快分析速度,但过高的温度可能导致柱 效降低。
液相色谱柱的维护与保养
使用前清洗
新柱子使用前需进行彻底清洗,以去除残留物和 污染物。
使用中维护
使用过程中应定期清洗和再生色谱柱,以保持其 性能和寿命。
储存条件
色谱柱应存放在干燥、避光的地方,避免直接阳 光照射和高温。
反相色谱法
总结词
反相色谱法是利用非极性固定相和极性流动相之间的相互作用来分离物质的分离 模式。
详细描述
反相色谱法中,固定相通常是烷基键合硅胶,流动相则是极性的溶剂,如水、甲 醇等。在分离过程中,非极性或弱极性的组分更容易被固定相吸附,因此会先被 洗脱出来。
离子交换色谱法
总结词
离子交换色谱法是利用离子交换剂与溶液中的离子之间的相互作用来分离物质的分离模 式。
动相。
流动相的流速和组成对分离效果 也有影响,需根据实际情况调整
。
固定相
固定相是色谱柱中的填料,用于吸附样品中的组分。
常见的固定相有硅胶、氧化铝、活性炭等,根据不同分离需求选择合适的固定相。
固定相的粒径和性质对分离效果有影响,粒径越小,性质越均匀,分离效果越好。
《液相色谱方法开发》课件
化学分析
液相色谱法可用于分析有机化合物、金属离子、手性化合物等,具有 高分离度和高灵敏度的优点。
生物医药
液相色谱法在生物医药领域中应用广泛,如蛋白质、多肽、核酸等生 物大分子的分离和纯化,以及药物成分的分析和质量控制。
环境监测
液相色谱法可用于环境样品中有机污染物的检测和分析,如水体、土 壤、大气等中的有害物质。
便携式检测器
开发适用于现场快速检测的便携式检测器,满足实时监测需求。
THANKS
感谢观看
REPORTING
02
它是一种高效、高分辨率的分离 技术,广泛应用于化学、生物、 医药等领域。
液相色谱法的原理
液相色谱法的原理基于物质在固定相和流动相之间的分配平 衡,不同组分在固定相和流动相之间的分配系数不同,因此 会按照一定顺序流出色谱柱。
通过检测器检测各组分的浓度或质量,可以得到各组分的分 离效果和含量。
液相色谱法的应用领域
食品检测
液相色谱法可用于食品中添加剂、农药残留、重金属等有害物质的检 测和分析,保障食品安全。
PART 02
液相色谱方法开发流程
REPORTING
确定分析目标
明确分析目的
确定液相色谱分析的目标,例如分离 、纯化、检测或鉴定某物质。
了解样品特性
了解待分析样品的性质、组成和结构 ,以便选择合适的色谱条件和固定相 。
选择色谱柱和流动相
选择固定相
根据样品性质和分离需求选择合适的固定相,如硅胶、聚合物等。
确定流动相
选择合适的流动相,如有机溶剂、缓冲液等,以实现有效的样品分离。
优化色谱条件
调整流动相比例
通过调整流动相中各组分的比例,优化样品在固定相上的保留行为。
液相色谱法可用于分析有机化合物、金属离子、手性化合物等,具有 高分离度和高灵敏度的优点。
生物医药
液相色谱法在生物医药领域中应用广泛,如蛋白质、多肽、核酸等生 物大分子的分离和纯化,以及药物成分的分析和质量控制。
环境监测
液相色谱法可用于环境样品中有机污染物的检测和分析,如水体、土 壤、大气等中的有害物质。
便携式检测器
开发适用于现场快速检测的便携式检测器,满足实时监测需求。
THANKS
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REPORTING
02
它是一种高效、高分辨率的分离 技术,广泛应用于化学、生物、 医药等领域。
液相色谱法的原理
液相色谱法的原理基于物质在固定相和流动相之间的分配平 衡,不同组分在固定相和流动相之间的分配系数不同,因此 会按照一定顺序流出色谱柱。
通过检测器检测各组分的浓度或质量,可以得到各组分的分 离效果和含量。
液相色谱法的应用领域
食品检测
液相色谱法可用于食品中添加剂、农药残留、重金属等有害物质的检 测和分析,保障食品安全。
PART 02
液相色谱方法开发流程
REPORTING
确定分析目标
明确分析目的
确定液相色谱分析的目标,例如分离 、纯化、检测或鉴定某物质。
了解样品特性
了解待分析样品的性质、组成和结构 ,以便选择合适的色谱条件和固定相 。
选择色谱柱和流动相
选择固定相
根据样品性质和分离需求选择合适的固定相,如硅胶、聚合物等。
确定流动相
选择合适的流动相,如有机溶剂、缓冲液等,以实现有效的样品分离。
优化色谱条件
调整流动相比例
通过调整流动相中各组分的比例,优化样品在固定相上的保留行为。
液相色谱的方法开发
液相色谱的分类和应用领域
正相色谱和反相色谱
根据固定相与流动相的极性差异进行分类, 广泛应用于药物分析、环境监测等领域。
离子交换色谱
利用固定相上的固定离子与流动相中的离子 进行交换,用于分离带电化合物。
手性色谱
利用固定相上的手性选择性分离手性化合物, 广泛应用于药物研发等领域。
其他应用领域
包括食品分析、生物分析、环境监测等多个 领域。
液相色谱的方法开发
液相色谱是一种用于分离和分析化合物的重要技术。本演示文稿将介绍液相 色谱的原理、分类和应用领域,并深入讨论该方法的开发步骤、挑战和解决 方案,以及方法验证和验证参数。
什么是液相色谱
液相色谱是一种基于液相的分离技术,利用不同化学性质的化合物在流动相 和固定相之间的相互作用力差异来进行分离。
5
数据处理和解释
使用适当的数据处理方法,对得到的色谱图进行分析和解释。
液相色谱方法开发的挑战和解决方案
分离性能和选择性的优化
针对复杂样品,优化分离条件以实现高效的 分离和良好的选择性。
方法可重复性和可扩展性
确保方法的重复性和可靠性,使其适用于不 同样品和不同实验环境。
分析时间和分析准确度的平衡
在保证分析准确度的前提下,通过优化分析 条件降低分析时间。
液相色谱方法开发的步骤
1
样品准备
准备样品,包括前处理和提取等步骤,以使其适合进行液相色谱分析。
2
色谱柱选择
根据待分离化合物的性质选择合适的色谱柱,如C18柱、离子交换柱等。
3
流动相选择和优化
选择合适的流动相,调整流动相的组成、pH值和流速等参数,优化分离效果。
4
柱温和压力控制
优化柱温和压力,平衡分析时间和分离效果。
《液相色谱实验基础》PPT课件
精选课件ppt
38
Typical Column Packing Supports
Chemically Modified Silica Gel
Pores
Si
Si
Si
OH
OH
OH
O Si
O
OH
Si
Si
Si
Si
O
O
O
O
Silica Gel Surface
CH3
Si - O - Si - (CH2)17CH3
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Time (min)
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25
溶剂传输系统
往复活塞泵(单向阀)
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Gold Seal Sapphire
Insert Ruby Ball
Spring Insert
26
泵头 - 单元/四元泵
Pump head screws Lock Screw
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27
Agilent 1100系列四元泵-G1354A; 真空脱气机为标准配置!
• 高压输液泵及梯度洗脱装置 •进样装置 •色谱柱 •检测器 •色谱数据处理装置
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18
堆积配置
优化流路减小死体积 流路自上而下
溶剂柜 脱气机
泵
自动进样器 柱温箱
检测器
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手持控制器
19
连线
每个部分有独立的电源 1100各部件均由CAN线连接 检测器与化学工作站之间用 LAN线连接 (或用HP-IB连接) 脱气机与泵之间用遥控线连接 ( 错误信号输出) BCD板用于外设和读取样品瓶数 量
相关主题
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随着流动相的连续推移,这种微小的差异被不 断扩大,直至柱内出现明显不同的迁移距离,使最 终达到组分完全分离。
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
检测器
AB C
DE
G
F
泵输液 进样
分离柱
检测器
记录
HPLC的仪器配置
数据ห้องสมุดไป่ตู้理系统
溶剂
色谱泵 自动进样器 色谱柱及柱温箱 检测器
液相色谱图相关术语
充情况无关。从本质上来说,α的大小表示两组分在两相间
的平衡分配热力学性质的差异,即分子间相互作用力的差异。
分离参数
分离度(resolution,R)—相邻两峰的保留时间之差 与平均峰宽的比值。也叫分辨率,表示相邻两峰的分离程 度。
色谱图(chromatogram)—样品流经色谱柱和检测器,所得到的信号-时 间曲线,又称色谱流出曲线(elution profile)。 基线(base line)—经流动相冲洗,柱与流动相达到平衡后,检测器测 出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。 噪音(noise)—基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检 测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。 漂移(drift)—基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温 度、流动相及流量的不稳定所引起,柱内的污染物或固定相不断被洗脱下 来也会产生漂移。 峰底—基线上峰的起点至终点的距离。 峰高(peak height,h)—峰的最高点至峰底的距离。 u峰面积(peak area,A)—峰与峰底所包围的面积。
N5.5
4W tR h2
2
1
6tR2 W
N为常量时,W随tR成正比例变化。在一张多组分色谱图上,如果各 组分含量相当,则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽,峰高则逐渐降低。
N与柱长成正比,柱越长,N越大。用N表示柱效时应注明柱长,如果 未注明,则表示柱长为1米时的理论塔板数。(一般HPLC柱的N在1000以 上。)
相平衡参数
容量因子(capacity factor,k)—化合物在两相间达 到分配平衡时,在固定相与流动相中的量之比。因此容量因 子也称质量分配系数。
k
tR t0 t0
或k
溶质在固定相中的量 溶质在流动相中的量
性质-与柱子的大小及流速无关,只与溶质在固定相和
流动相的分配性、柱温以及相空间比(即固定相和流动相之
液相色谱基础知识和方法 的开发
主要内容
1. 液相色谱基础知识 2. 液相色谱方法开发过程 3. 液相色谱方法开发实例
一 液相色谱基础知识
▪ 液相色谱法:利用组分在两相间分配系数不
同而进行分离的技术
▪ 移动相:携带样品流过整个系统的流体 ▪ 固定相:静止不动的一相-色谱柱
色谱分离的机理
色谱是一种分离技术 色谱分离是一个物理过程
峰宽(peak width,W)—峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点 间的距离。
半峰宽(peak width at half-height,Wh/2)—峰高一半处的峰宽。 标准偏差(standard deviation,σ)—正态分布曲线x=±1时(拐点)
的峰宽之半。正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明 组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小,分散程度小、极点浓度 高、峰形瘦、柱效高;反之,σ大,峰形胖、柱效低。
♦保留时间(retention time,tR)—从进样开始到某个组分在柱后出现浓 度极大值的时间。
♦保留体积(retention volume,VR)—从进样开始到某组分在柱后出现浓 度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR=F×tR。
♦调整保留时间(adjusted retention time,t'R)—扣除死时间后的保留 时间。在实验条件(温度、固定相等)一定时,t'R只决定于组分的性质, 因此,t'R(或tR)可用于定性。t'R=tR-t0
流动相(Mobile Phas) 固定相(Stationary Phase) 样品(溶解于流动相中的溶质)
液相色谱分离机理
高效液相色谱是一种以液体作流动相和固体微 粒作固定相,待测组分在柱内的两相之间进行高速 分配和高效分离的柱液体色谱方法。
样品溶液中的各组分,因其物理化学性质的微 小差异,当其随流动相进入色谱柱后,便在柱的两 相之间产生不同的相互作用力,从而导致柱上迁移 速率的微小差异。
液相色谱图相关术语
色谱峰(peak)—组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。流出 曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线(高斯 Gauss曲线)。不对称色谱峰有两种:前延峰(leading peak)和拖尾峰 (tailing peak)。
拖尾因子(tailing factor,T) —是用以衡量色谱峰的对称性,也称 为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。 《中国药典》规定T应为0.95~1.05。T<0.95为前延峰,T>1.05为拖 尾峰。
体积比)有关。
范围 0.4<k<20~30
相平衡参数
选择性因子(selectivity factor,α)—相邻两组分的 分配系数或容量因子之比。
a t,R2
t a t,R2 k,2 t,R1 k,1
, R1
k,2 k,1
要使两组分得到分离,必须使α≠1。α与化合物在固定
相和流动相中的分配性质、柱温有关,与柱尺寸、流速、填
液相色谱图相关参数
♦定性参数(保留值) ♦柱效参数 ♦相平衡参数
—容量因子k —选择性因子a ♦分离参数
定性参数(保留值)
♦死时间(dead time,t0)—不保留组分的保留时间。即流动相(溶剂)通 过色谱柱的时间。
♦死体积(dead volume,V0)—由进样器进样口到检测器流动池未被固定相 所占据的空间。V0=F×t0(F为流速)
♦调整保留体积(adjusted retention volume,V'R)—扣除死体积后的保 留体积。V'R=VR-V0或V'R=F×t'R
柱效参数
理论塔板数(theoretical plate number,N)—用于定量表示色谱 柱的分离效率(简称柱效)。
N取决于固定相的种类、性质(粒度、粒径分布等)、填充状况、柱 长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。如果峰形对称并 符合正态分布,N可近似表示为:
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
检测器
AB C
DE
G
F
泵输液 进样
分离柱
检测器
记录
HPLC的仪器配置
数据ห้องสมุดไป่ตู้理系统
溶剂
色谱泵 自动进样器 色谱柱及柱温箱 检测器
液相色谱图相关术语
充情况无关。从本质上来说,α的大小表示两组分在两相间
的平衡分配热力学性质的差异,即分子间相互作用力的差异。
分离参数
分离度(resolution,R)—相邻两峰的保留时间之差 与平均峰宽的比值。也叫分辨率,表示相邻两峰的分离程 度。
色谱图(chromatogram)—样品流经色谱柱和检测器,所得到的信号-时 间曲线,又称色谱流出曲线(elution profile)。 基线(base line)—经流动相冲洗,柱与流动相达到平衡后,检测器测 出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。 噪音(noise)—基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检 测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。 漂移(drift)—基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温 度、流动相及流量的不稳定所引起,柱内的污染物或固定相不断被洗脱下 来也会产生漂移。 峰底—基线上峰的起点至终点的距离。 峰高(peak height,h)—峰的最高点至峰底的距离。 u峰面积(peak area,A)—峰与峰底所包围的面积。
N5.5
4W tR h2
2
1
6tR2 W
N为常量时,W随tR成正比例变化。在一张多组分色谱图上,如果各 组分含量相当,则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽,峰高则逐渐降低。
N与柱长成正比,柱越长,N越大。用N表示柱效时应注明柱长,如果 未注明,则表示柱长为1米时的理论塔板数。(一般HPLC柱的N在1000以 上。)
相平衡参数
容量因子(capacity factor,k)—化合物在两相间达 到分配平衡时,在固定相与流动相中的量之比。因此容量因 子也称质量分配系数。
k
tR t0 t0
或k
溶质在固定相中的量 溶质在流动相中的量
性质-与柱子的大小及流速无关,只与溶质在固定相和
流动相的分配性、柱温以及相空间比(即固定相和流动相之
液相色谱基础知识和方法 的开发
主要内容
1. 液相色谱基础知识 2. 液相色谱方法开发过程 3. 液相色谱方法开发实例
一 液相色谱基础知识
▪ 液相色谱法:利用组分在两相间分配系数不
同而进行分离的技术
▪ 移动相:携带样品流过整个系统的流体 ▪ 固定相:静止不动的一相-色谱柱
色谱分离的机理
色谱是一种分离技术 色谱分离是一个物理过程
峰宽(peak width,W)—峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点 间的距离。
半峰宽(peak width at half-height,Wh/2)—峰高一半处的峰宽。 标准偏差(standard deviation,σ)—正态分布曲线x=±1时(拐点)
的峰宽之半。正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明 组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小,分散程度小、极点浓度 高、峰形瘦、柱效高;反之,σ大,峰形胖、柱效低。
♦保留时间(retention time,tR)—从进样开始到某个组分在柱后出现浓 度极大值的时间。
♦保留体积(retention volume,VR)—从进样开始到某组分在柱后出现浓 度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR=F×tR。
♦调整保留时间(adjusted retention time,t'R)—扣除死时间后的保留 时间。在实验条件(温度、固定相等)一定时,t'R只决定于组分的性质, 因此,t'R(或tR)可用于定性。t'R=tR-t0
流动相(Mobile Phas) 固定相(Stationary Phase) 样品(溶解于流动相中的溶质)
液相色谱分离机理
高效液相色谱是一种以液体作流动相和固体微 粒作固定相,待测组分在柱内的两相之间进行高速 分配和高效分离的柱液体色谱方法。
样品溶液中的各组分,因其物理化学性质的微 小差异,当其随流动相进入色谱柱后,便在柱的两 相之间产生不同的相互作用力,从而导致柱上迁移 速率的微小差异。
液相色谱图相关术语
色谱峰(peak)—组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。流出 曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线(高斯 Gauss曲线)。不对称色谱峰有两种:前延峰(leading peak)和拖尾峰 (tailing peak)。
拖尾因子(tailing factor,T) —是用以衡量色谱峰的对称性,也称 为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。 《中国药典》规定T应为0.95~1.05。T<0.95为前延峰,T>1.05为拖 尾峰。
体积比)有关。
范围 0.4<k<20~30
相平衡参数
选择性因子(selectivity factor,α)—相邻两组分的 分配系数或容量因子之比。
a t,R2
t a t,R2 k,2 t,R1 k,1
, R1
k,2 k,1
要使两组分得到分离,必须使α≠1。α与化合物在固定
相和流动相中的分配性质、柱温有关,与柱尺寸、流速、填
液相色谱图相关参数
♦定性参数(保留值) ♦柱效参数 ♦相平衡参数
—容量因子k —选择性因子a ♦分离参数
定性参数(保留值)
♦死时间(dead time,t0)—不保留组分的保留时间。即流动相(溶剂)通 过色谱柱的时间。
♦死体积(dead volume,V0)—由进样器进样口到检测器流动池未被固定相 所占据的空间。V0=F×t0(F为流速)
♦调整保留体积(adjusted retention volume,V'R)—扣除死体积后的保 留体积。V'R=VR-V0或V'R=F×t'R
柱效参数
理论塔板数(theoretical plate number,N)—用于定量表示色谱 柱的分离效率(简称柱效)。
N取决于固定相的种类、性质(粒度、粒径分布等)、填充状况、柱 长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。如果峰形对称并 符合正态分布,N可近似表示为: