CCK8法检测细胞增殖预实验

SRT-1720, EX527 —定要应用在白血病细胞株起作用的浓度方可比较对

293T细胞和白血病细胞株的不同影响，请重复实验。

实验日期：2015/08/22-2015/08/27

实验项目：CCK8法检测细胞增殖

实验地点：广西医科大学药基楼14楼生物靶向中心

实验人员：高宗燕、宁海萍、李登峰

实验目的：检测SRT-1720/EX527刺激293T细胞后对细胞增殖的影响

主要试剂：SRT-1720,EX527,CCK8试剂盒

主要仪器：酶标仪

实验步骤：

一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞至96孔板。

2、设置4个细胞浓度梯度：0, 2000，4000，8000,每组4个复孔。

3、接种后培养24小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养4小时后测定OD值，制作出一条以细胞数量为

横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。）

图一、标准曲线

二、细胞增殖检测

1、在96孔板中配置100卩泊勺细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（在37C, 5% CO2的条件下）。

2、向培养板加入10 ^L SRT-1720（终浓度3um）, EX527 （终浓度100um）。

3、将培养板在培养箱孵育约24h

4、每孔加入10卩L CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

5、将培养板在培养箱内孵育2小时。

6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

图二、3um SRT1720刺激293T细胞后的细胞增殖曲线。该曲线呈S形，符合细胞正常生长情况。

图三、100um EX527刺激293T细胞后的细胞增殖曲线。该曲线前部分呈S形，符合细胞正常生长情况，但

在进入对数期之后曲线有下滑，之后进入平台期。

分析：

SRT1720为SIRT1特异性活化剂，在前期实验中对白血病细胞株的生长表现出抑制作用，此次实验中SRT1720对正常细胞（293T）的生长无明显抑制作用。暗示SIRT1的活化对正常细胞的生长可能无明显影

响。

小剂量EX527为SIRT1特异性抑制剂，在前期实验中大剂量EX527对白血病细胞株的生长表现出抑制作用，而小剂量EX527无此效应，此次实验中大剂量EX527对正常细胞（293T）的生长可能有轻度抑制作用。但不能以一次实验结果做出肯定的结论，该实验还需重复。