CCK8细胞增殖实验
cck8细胞增殖实验原理
cck8细胞增殖实验原理CCK-8细胞增殖实验原理引言：细胞增殖实验是生物学和医学研究中常用的一种实验方法，用于测定细胞的增殖能力。
CCK-8（Cell Counting Kit-8）是一种常用的细胞增殖检测试剂，通过测量细胞中的还原型CCK-8转化为溶液中的发色体，从而间接反映细胞增殖的能力。
本文将介绍CCK-8细胞增殖实验的原理及其应用。
一、CCK-8细胞增殖实验原理：CCK-8细胞增殖实验原理基于细胞代谢产物对试剂的还原作用。
CCK-8试剂中含有一种能被还原的黄色酶，当细胞活力高时，细胞内的代谢产物会将CCK-8试剂还原为有色产物。
实验原理如下：1. 细胞培养：将待测细胞接种于培养皿中，培养至适当的细胞数和状态。
2. 细胞处理：根据实际需求，对待测细胞进行处理，例如给予药物处理、基因转染等。
3. CCK-8试剂处理：将CCK-8试剂加入培养皿中，与细胞共同孵育一段时间。
4. 反应终止：孵育一段时间后，加入一种酸性溶液终止反应，阻止进一步的细胞代谢反应。
5. 测量吸光度：将培养皿中的溶液转移到微孔板中，使用酶标仪或多功能酶标仪在450 nm波长下测量吸光度。
6. 数据分析：根据吸光度值，计算细胞增殖的相对程度，比较不同处理组的细胞增殖能力。
二、CCK-8细胞增殖实验的应用：CCK-8细胞增殖实验广泛应用于生物医学研究、药物筛选、细胞毒性评价等领域。
以下列举几个常见的应用场景：1. 药物筛选：CCK-8实验可用于评估药物对细胞增殖的影响。
将细胞分为不同处理组，给予不同浓度的药物处理，通过测量吸光度值，评估药物对细胞增殖的抑制或促进作用。
2. 细胞毒性评价：CCK-8实验可用于评估化合物、材料或环境因素对细胞生存能力的影响。
通过测量吸光度值，判断待测物质对细胞的毒性程度。
3. 细胞增殖动力学研究：CCK-8实验可用于研究细胞增殖的动力学过程。
通过连续测量不同时间点的吸光度值，得到细胞增殖曲线，进一步分析细胞增殖速率和生长特性。
cck8检测细胞增殖原理
cck8检测细胞增殖原理
CCK-8（CellCountingKit-8）是一种广泛应用于细胞增殖及细胞毒性实验中的水溶性化合物。
CCK-8试剂盒可以用于评估各种生物、药物和化学物质对细胞增殖的影响。
CCK-8的实现原理是通过测定细胞内还原性代谢活性酶（如脱氢酶）生成的水溶性形式的四氮唑盐的量，从而评估细胞增殖情况。
使用CCK-8检测细胞增殖的方法十分简单。
首先，将待测物（如药物、化学物质等）加入到细胞培养液中，让细胞在特定时间内与其接触。
然后，向培养液中加入适量的CCK-8试剂，并在紫外线或荧光光谱仪中测量吸光度。
CCK-8的加入会使细胞内代谢活性酶发生还原反应，从而产生水溶性四氮唑盐，其吸光度与细胞数量成正比。
因此，吸光度越高，细胞数量也就越多。
CCK-8检测细胞增殖的优点在于其高度灵敏和高通量的特点，能够快速、准确地测定细胞数量，同时减少检测误差和节省实验时间。
因此，CCK-8已经成为了现代细胞生物学和药物研究中不可或缺的实验工具之一。
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水凝胶cck8测试方法
水凝胶cck8测试方法水凝胶CCK-8测试方法引言：水凝胶（hydrogel）是一种具有三维网络结构的高分子材料，具有良好的吸水性和渗透性。
CCK-8（Cell Counting Kit-8）是一种常用的细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒，用于评估细胞的代谢活性和细胞毒性。
本文旨在介绍水凝胶CCK-8测试方法，包括实验步骤、数据分析和结果解读。
一、实验步骤1. 准备工作：a. 预先制备CCK-8试剂：按照说明书中的要求将CCK-8试剂与培养基按比例混合制备出适量的CCK-8工作液。
b. 准备待测水凝胶样品：根据实验需要，制备出一定规格和形状的水凝胶样品。
2. 实验操作：a. 将待测水凝胶样品置于培养皿中，并加入足够的培养基，使水凝胶完全浸泡在培养基中。
b. 在培养皿中加入一定数量的细胞悬液，使细胞均匀分布于水凝胶中。
c. 将培养皿置于恒温培养箱中，以维持适宜的温度和湿度条件。
d. 在培养指定的时间点，取出培养皿，将培养基从水凝胶表面抽取掉。
e. 向每个培养皿中加入适量的CCK-8工作液，并将其继续培养一段时间。
f. 使用分光光度计测量吸光度，记录下各个时间点的吸光度值。
二、数据分析1. 数据处理：a. 将各个时间点的吸光度值进行平均，并计算相对于初始时间点的增加率。
b. 绘制吸光度与时间的曲线图，观察细胞的增殖情况。
2. 结果解读：a. 若吸光度值随时间的增加而逐渐增加，说明细胞在水凝胶中具有较好的增殖能力。
b. 若吸光度值随时间的增加而逐渐降低，说明水凝胶对细胞有一定的毒性或抑制作用。
c. 若吸光度值保持稳定不变，说明细胞在水凝胶中没有明显的增殖或凋亡。
三、注意事项1. 实验中应注意避免水凝胶样品受到外界污染，尽量保持无菌状态。
2. 实验前应对水凝胶样品进行充分的滴水或浸泡，以确保水凝胶能够充分吸收培养基。
3. 实验过程中应注意细胞悬液的均匀分布，避免出现聚集现象。
4. 实验结果的解读应结合实际情况和已有研究结果，尽量避免主观臆断和片面结论。
细胞增殖毒性实验步骤CCK8
细胞增殖—毒性实验步骤1、细胞传代、细胞计数、细胞增殖—毒性实验步骤：实验准备：用75%酒精擦生物安全柜台面2遍，紫外线消毒30分钟（枪、枪头、15ml及50ml离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培养瓶），复温实验所需试剂［细胞培养液（DMEM、1640)、磷酸缓冲盐溶液（PBS）、胰酶（0.25% Trypsin—EDTA）、胎牛血清(FBS）、双抗］,所有的试剂、仪器放入生物安全柜前要用酒精喷洒消毒。
显微镜下看细胞生长状态，有无污染。
1）倒去培养瓶内的培养液；2）加入PBS 2ml洗涤培养瓶内细胞2次；3)加入胰酶500ul/0。
5ml 2~10min（具体时间因细胞而异，可在显微镜下看是否贴壁，必要时轻拍培养瓶促使细胞脱落）;4）加入含10%FBS的培养液1～1.5ml[培养液：胰酶=（2～3）:1］中和胰酶；5）轻轻吹打成单细胞悬液，吹打力度以不起气泡为宜；6)将单细胞悬液吸入10～15ml离心管中,低速离心800rpm 3分钟,倒去上清液；7）加入含10%FBS细胞培养液1~2ml吹打悬浮细胞至单细胞悬液;8）吸取20ul细胞悬液(10ul细胞悬液+10ul台盼兰液:给坏死细胞染色，判断细胞活力）至细胞计数板,进行细胞计数；CCK-8实验：9）在96孔板中，给每孔加100μL(约7000个)的细胞悬液,将培养板放在培养箱预培养24-72小时（37℃，5％CO2），使细胞贴壁；10)向培养板中加入10μL不同浓度（5、10、20、40、80、160ug/ml）的待测药物；11）将培养板在培养箱孵育一段适当的时间24小时(例如：6、12、24或48小时）（药物起作用);注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基)，去掉药物影响。
当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
CCK-8实验步骤
CCK8检测细胞增殖/毒性的原理
Cell Counting Kit-8
●原理：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝
基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。
生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。
因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
●方法
1、制备细胞悬液：细胞计数
2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数（每孔5000细胞），每孔约100ul 细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
3、37℃培养箱中培养：24h-48h
4、加入10ul CCK8,孵育2-4h
5、测定450nm吸光度。
CCK8实验原理与步骤
CCK8实验原理与步骤CCK-8是一种常见的细胞活力检测方法，常用于评估细胞增殖和细胞毒性等生物学活性。
实验原理：CCK-8试剂是一种黄色噻唑-二苯基甲烷盐的溶液，它能够在有活细胞存在时被细胞内的酶还原成橙色水溶性的产物。
这种产物可以通过光度计测量，从而得到细胞的活力信息。
细胞活力高时，细胞内有较多的酶可以将CCK-8还原成产物，产生较高的吸光度；细胞活力低时，细胞内酶的活性降低，无法完全还原CCK-8，产生较低的吸光度。
实验步骤：1.细胞培养：将待测细胞株接种到含有适宜培养基的培养皿或孔板中，并在恒温、湿润、含有5%CO2的培养箱中孵育。
2.实验前处理：根据实验设计的需要，可进行细胞预处理，如给药、感染等。
预处理时间根据需要确定。
K-8试剂准备：将CCK-8试剂按照用户手册的要求溶解成适合实验设计的浓度。
注：部分实验可能需要调整试剂的浓度，应根据实验要求进行调整。
K-8试剂加样：对不同组的培养皿或孔板分别加入适量的CCK-8试剂，使其与培养基均匀混合。
一般情况下，加入的CCK-8试剂量为培养基总量的10%。
5.孵育CCK-8与细胞的反应：将含有CCK-8试剂的培养皿或孔板放回恒温、湿润、含有5%CO2的培养箱中继续孵育。
孵育时间根据实验需要确定，一般为1-4小时。
6. 吸光度测定：使用酶标仪或光度计测定吸光度（OD）值，一般在450nm波长下测定。
同时，记录对照组（如细胞温育组）的OD值作为参照。
7.数据处理与分析：根据实验设计，采用合适的统计学方法，比较各组的细胞活力差异，并将数据结果进行图表展示。
注意事项：K-8试剂对皮肤、眼睛、呼吸道等有刺激性，请注意安全操作；2.实验前需进行细胞的适宜密度的培养，以保证其在实验过程中的稳定生长状态；3.在实验中注意培养条件的一致性，如温度、湿度、CO2浓度等；4.参照组的选择要慎重，需要与实验对象具有相同的培养条件；5.准备稀释CCK-8试剂时，避免过长时间暴露于光线和空气中，以免降低其效力。
CCK8实验原理与步骤
CCK8实验原理与步骤CCK8实验是一种常用的细胞增殖和生存能力检测方法，可以用来评估其中一种物质对细胞生长的影响。
其原理是利用CCK8（Cell Counting Kit-8）荧光染料，通过还原因子将细胞内的NAD+ 还原为NADH，形成有色溶液，并使用分光光度计检测其吸光度，从而判断细胞的增殖和生存能力。
下面将详细介绍CCK8实验的步骤和原理。
实验材料和设备：1.细胞培养基（例如DMEM）K8试剂3.96孔板4.分光光度计5.无菌移液器和组织培养器具6.细胞类型需要的培养器具实验步骤：1.将细胞悬液以适当的浓度移植到96孔板中，使每个孔中有约10,000个细胞。
每个组设置至少3个重复。
2.孔板放入细胞培养箱中，使细胞与培养基充分接触，以37°C、5%CO2条件下培养一定的时间，使细胞附着并生长。
3.在培养一定时间后，取出培养板，将培养基倒出，用PBS洗涤细胞1-2次，使细胞处于无血清的状态。
4.加入含有CCK8试剂的培养基，使其与细胞接触，通常含有CCK8的培养基的体积约为培养基的10%。
5.将孔板放回培养箱中，继续孵育15-30分钟，以确保细胞充分反应。
6. 使用分光光度计检测每个孔的吸光度值（一般在450 nm波长处读取），得到吸光度值（OD值）。
7.通过比较吸光度值，得到不同处理组与对照组之间的生长差异，以评估物质对细胞的生存与增殖能力的影响。
实验原理：CCK8荧光染料是一种由WST-8 （Water-Soluble Tetrazolium Salt-8）还原剂构成的形式。
当CCK8溶液与细胞相互作用时，细胞内的细胞呼吸负责NADH的还原作用，将CCK8还原为可溶性的有色产物，形成橙红色溶液。
还原作用的化学方程式为：NAD++C12H7N4O2S·H2O→NADH+H++C12H8N4O2S在反应后的溶液中，由于产生的橙色产物在450 nm波长处具有明显的吸光度，可通过分光光度计测量。
cck8细胞增殖实验报告
cck8细胞增殖实验报告CCK8细胞增殖实验报告细胞增殖是生命科学研究中的重要课题之一，它关乎着生物体的生长和发育过程。
为了更好地了解细胞增殖的机理和规律，科学家们开展了一系列的实验研究。
本文将重点介绍一种常用的细胞增殖实验方法——CCK8实验，并对其原理、操作步骤及结果分析进行详细阐述。
一、CCK8实验的原理CCK8实验是一种基于细胞代谢活性的颜色反应的实验方法。
其原理基于细胞内的酶促反应，通过将CCK8试剂加入到培养皿中，可以与活细胞中的代谢产物发生反应，形成可溶性的紫色产物。
这种紫色产物的浓度与细胞数量成正比，因此可以通过测量其光密度来评估细胞的增殖情况。
二、CCK8实验的操作步骤1. 细胞培养与处理：首先，我们需要选择一种适合的细胞系进行培养。
将细胞悬浮液均匀地分布在培养皿中，并根据实验需要添加不同的处理条件，如药物处理、基因干预等。
2. CCK8试剂的加入：在培养皿中加入适量的CCK8试剂，并轻轻摇晃培养皿，使试剂均匀地分布在细胞上。
3. 孵育：将培养皿放置在恒温培养箱中，以维持适宜的温度和湿度，孵育一定的时间。
4. 光密度测量：使用酶标仪或分光光度计测量培养皿中产生的紫色产物的光密度值。
5. 数据分析：根据测得的光密度值，可以计算出细胞的增殖率，并进行统计学分析。
三、CCK8实验结果的分析CCK8实验的结果分析主要包括两个方面：对照组与实验组的比较，以及不同时间点的变化趋势。
1. 对照组与实验组的比较：首先，我们需要设立一个对照组，即未经处理的细胞。
通过与对照组进行比较，可以评估实验组的处理对细胞增殖的影响。
如果实验组的光密度值较对照组显著增加或减少，说明该处理条件对细胞增殖有明显的影响。
2. 不同时间点的变化趋势：在CCK8实验中，通常会选择不同的时间点进行测量，以了解细胞增殖的动态变化。
通过绘制时间-光密度曲线，可以观察到细胞增殖的变化趋势。
一般来说，细胞增殖呈现出指数增长的趋势，但也可能存在阶段性的变化。
CCK8细胞增值检测实验简介
CCK8细胞增值检测实验简介全⼼全意就为医⽣服务，⼀⼼⼀意只为造福医⽣CCK-8（Cell Counting Kit-8）细胞活性和增殖检测是医学研究中常⽤的实验技术，其原理是该试剂中含有WST-8，它在电⼦载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸⼆甲酯（1-Methoxy PMS）的作⽤下被细胞中的脱氢酶还原为具有⾼度⽔溶性的黄⾊甲瓒产物（Formazan dye）。
⽣成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正⽐。
因此可利⽤这⼀特性直接进⾏细胞增殖和毒性分析。
以下是CCK-8检测的具体步骤：细胞活性检测1. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) 。
将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃，5% CO2的条件下 )。
2. 向每孔加⼊10 ml 的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中⽣成⽓泡，它们会影响 O.D值的读数) 。
3. 将培养板在培养箱内孵育 1-4⼩时。
4. ⽤酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
5. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加⼊ 10 ml0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24⼩时内吸光度不会发⽣变化。
细胞增殖 -毒性检测1. 在96 孔板中配制 100 ml的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养 24⼩时 ( 在37℃， 5% CO2的条件下 )。
2. 向培养板加⼊10 ml不同浓度的待测物质。
3. 将培养板在培养箱孵育⼀段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或48⼩时 )。
4. 向每孔加⼊10 ml CCK-8 溶液 (注意不要在孔中⽣成⽓泡，它们会影响 O.D值的读数) 。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4⼩时。
6. ⽤酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
7. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加⼊ 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1%w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
CCK-8检测方法
二、CCK8检测细胞增殖/毒性的方法实验一：细胞增殖分析1、制备细胞悬液：细胞计数2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
3、37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
4、加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。
或者直接配置含10%CCK8的培养基，以换液的形式加入。
5、培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。
如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。
特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。
6、测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。
实验二：细胞毒性分析1、制备细胞悬液：细胞计数2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
3、37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
4、加入不同浓度的毒性物质5、37℃培养箱中培养：加入毒性物质的培养时间，要看毒性物质的性质和细胞的敏感性，一般要根据细胞周期来决定，起码要一代以上的时间。
6、加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。
7、培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。
如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。
特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。
8、测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。
注：•若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
细胞cck8实验步骤
细胞cck8实验步骤
细胞CCK8实验是用于检测细胞增殖能力的一种常用实验方法。
以下是细胞CCK8实验的步骤：
1.细胞培养：首先需要将要检测增殖能力的细胞在无菌条件下接种于培养皿中，并放在恒温培养箱中进行培养，通常温度为37℃，CO2气体含量为5%。
2.药物处理：待细胞生长到适当的密度后，根据实验需求添加不同的药物处理，如药物处理组和对照组。
3.加入CCK-8试剂：将待检测的细胞分为药物处理组和对照组，每组分别加入CCK-8试剂，并静置在恒温培养箱中进行孵育。
4.检测：将培养皿从恒温培养箱中取出，使用酶标仪或者显微镜等设备进行检测，读取各组细胞的吸光度值并记录下来。
5.数据分析：根据各组的吸光度值进行统计分析，比较不同组之间的细胞增殖能力的差异，得出实验结果。
以上是细胞CCK8实验的基本步骤，需要注意的是，实验前需要对实验操作进行详细的计划和准备，并保证实验过程中的无菌条件、药物浓度和试剂使用的准确
性。
CCK8实验原理与步骤
CCK8实验原理与步骤CCK-8实验（Cell Counting Kit-8）是一种常用的细胞增殖和细胞毒性测定实验方法。
CCK-8试剂可以通过还原机制，测量细胞内的活性代谢物质水平，从而评估细胞数量和活力。
以下是CCK-8实验的基本原理和步骤。
实验原理：CCK-8试剂中含有一种缩合的四氢噻唑并噻吩偶吡啉（WST-8）和电子传递剂1-甲基噻唑盐（MTS）。
细胞内的代谢酶可以将WST-8还原成橙红色的形成物形成溶液。
这个形成物可以通过光度计检测，并与细胞数量和代谢活性成正比。
所以，通过测量形成物的光吸收度，可以获得细胞的增殖和毒性信息。
实验步骤：1.细胞培养准备：将待测细胞分散在完全培养基中，并按照常规方法培养至适当的细胞密度。
2.细胞悬液准备：将培养的细胞用PBS缓冲液洗涤一次，然后用PBS 缓冲液重新悬浮至适当的浓度。
3.细胞计数：使用仪器（如细胞计数器）计数细胞的数目。
如果没有细胞计数器，则可以使用显微镜和计数板手工计数。
4.细胞接种：将细胞分散在细胞培养板或96孔板中，使得每个孔的细胞数目相等。
通常可以根据实验需求设定各组的重复孔数。
5.处理组别：根据实验设计，在每个组中添加不同浓度的药物处理。
同时设置一个对照组（只添加培养基），以便比较。
6.增殖处理：将细胞培养在适当的条件下（如37°C，5%CO2）孵育一定时间。
孵育时间取决于具体实验需求和细胞类型。
K-8试剂处理：在孵育结束后，添加CCK-8试剂到每个孔中，使其最终浓度达到指定浓度。
通常浓度为1/10到1/100倍的CCK-8试剂：细胞悬液体积。
在这个步骤中，也可以添加几种不同的浓度以确定最佳浓度应用于未来的实验。
8.孵育：将试验板放回培养箱中，继续孵育一段时间。
孵育时间可以根据实验设计确定，通常为2-4小时。
9. 吸光度测量：在孵育结束后，使用酶标读板机或其他光度计测量每个孔中形成物的吸光度。
根据实验目的，可以选择470nm或450nm波长。
CCK8检测细胞增殖毒性的原理及注意事项资料讲解
CCK8检测细胞增殖/毒性的原理、方法及注意事项一、CCK8检测细胞增殖/毒性的原理Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。
其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。
生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。
因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验CCK8的优点：•使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；•CCK-8法能快速检测；•CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；•CCK-8法的重复性优于MTT 法；•CCK-8法对细胞毒性小；•CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
CCK8的缺点：•与MTT法相比，CCK8和XTT的价格比较贵。
•CCK8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。
与以往的增殖/毒性测定试剂相比较：二、CCK8检测细胞增殖/毒性的方法实验一：细胞增殖分析1、制备细胞悬液：细胞计数2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
3、37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
4、加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。
或者直接配置含10%CCK8的培养基，以换液的形式加入。
5、培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。
CCK8检测细胞增殖毒性的原理、方法及注意事项.pptx
• 使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂； • CCK-8 法 能 快 速 检 测 ； • CCK-8 法 的 检 测 灵 敏 度 很 高 ，甚 至 可 以 测 定 较 低 细 胞 密 度 ； • CCK-8 法 的 重 复 性 优 于 MTT 法 ； • CCK-8 法 对 细 胞 毒 性 小 ； • CCK-8 细 胞 活 性 检 测 试 剂 中 为 1 瓶 溶 液 ， 毋 需 预 制 ，即 开 即 用 。 CCK8 的缺点： • 与 MTT 法 相 比 ， CCK8 和 XTT 的 价 格 比 较 贵 。 • CCK8 试 剂 的 颜 色 为 淡 红 色 ，与 含 酚 红 的 培 养 基 颜 色 接 近 ，不 注
注：
• 若 暂 时 不 测 定 OD 值 ，可 以 向 每 孔 中 加 入 10 μL 0.1M 的 HCL 溶 液 或者 1% w/v SDS 溶 液 ，并遮盖培养板避光保存在室温条件 下。 24 小时内测定，吸光度不会发生变化。
• 如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK8 之前更换新 鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新 的培养基）， 去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可 以 不 更 换 培 养 基 ，直 接 扣 除 培 养 基 中 加 入 药 物 后 的 空 白 吸 收 即 可 。
三、CCK8 检测细胞增殖/毒性的注意事项
• 当使用标准 96 孔 板时 ，贴壁 细胞 的最 小接 种量 至少 为 1,000 个 / 孔 (100 μl 培 养 基 )。检 测 白 细 胞 时 的 灵 敏 度 相 对 较 低 ，因 此 推 荐 接种量不低于 2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。
完整版)CCK8实验原理与步骤
完整版)CCK8实验原理与步骤CCK8实验是一种常用的细胞增殖和毒性分析方法。
具体步骤如下：1.在96孔板中加入100μl的细胞悬液，并在培养箱中预培养24小时（37℃，5% CO2）。
2.向每个孔中加入10μl不同浓度的待测物质。
3.将培养板在培养箱中孵育一段适当的时间（例如6、12、24或48小时）。
4.向每个孔中加入10μl的CCK8溶液，注意不要在孔中生成气泡，因为它们会影响OD值的读数。
5.将培养板在培养箱中孵育1-4小时。
6.使用酶标仪在450nm处测定吸光度。
7.如果暂时不测定OD值，可以向每个孔中加入10μl的0.1M HCL溶液或1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
24小时内测定，吸光度不会发生变化。
注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可以在加入CCK8之前更换新鲜培养基，去除药物影响。
如果药物影响比较小，可以直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
细胞活力计算公式为：细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（加药）-A（空白）]×100.其中，A（加药）为具有细胞、CCK8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度，A（空白）为具有培养基和CCK8溶液而没有细胞的孔的吸光度，A（加药）为具有细胞、CCK8溶液和药物溶液的孔的吸光度。
CCK-8试剂中含有WST-8，它在电子载体(1-MethoxyPMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒染料，生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。
因此，可以用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
在细胞增殖试验中，需要在96孔板中加入100μl的细胞悬液，并在培养箱中预培养24小时（37℃，5% CO2）。
然后，在每个孔中加入10μl的CCK-8试剂。
最后，使用酶标仪在450nm处测定吸光度。
以上是CCK8实验的步骤和使用方法，希望对大家有所帮助。
1、确定种板数的方法是查阅文献，参考说明书，并稀释一系列浓度种板。
CCK-8法
CCK-8法一．实验原理CCK8全称cell counting kit—8试剂,可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。
该试剂中含有WST-8［化学名：2—（2—甲氧基-4—硝基苯基）—3—(4-硝基苯基)—5—（2,4-二磺酸苯）—2H—四唑单钠盐]，它在电子载体1—甲氧基—5—甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原成具有高度水溶性的黄色甲瓒产物.生成的甲瓒物的数量，颜色的深浅和活细胞的数量成正比，与细胞毒性成反比。
使用酶标仪在450nm波长处测定OD值，间接反映活细胞的数量。
二．实验步骤1）制作标准曲线1.在96孔板中接种细胞悬液(100ul /孔）.按500，1000，2000，4000，6000，8000的比例做一个细胞浓度梯度，每组3—6个复孔.将培养板放在培养箱预培养（在37 ℃，5％ CO2的条件下)，直到细胞贴壁完全(一般24小时）。
2。
向每孔加入10ul 的CCK- 8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响O。
D值的读数）。
3。
之后将培养板每个细胞浓度分别测定不同孵育时间的吸光度.一般为0h，0.5h,1h,2h,3h，4h在培养箱内孵育1—4小时。
4。
用酶标仪测定在450 nm处的吸光度，绘制标准曲线.2）细胞活性检测（或者用于预测cck—8最佳孵育时间）1。
在96孔板中接种细胞悬液（100ul /孔）。
将培养板放在培养箱预培养（在37 ℃,5% CO2的条件下)，直到细胞贴壁完全(一般24小时）。
2.向每孔加入10ul 的CCK- 8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O。
D 值的读数）。
3.培养板孵育，孵育时间根据标准曲线而定。
4。
用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
（一般选择孵育时间与OD值线性关系比较明显的为最佳孵育时间)3）细胞增殖—毒性检测1。
在96孔板中接种细胞悬液(100ul /孔）。
将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃，5％ CO2的条件下），直到细胞贴壁完全(一般24小时)。
(完整版)CCK8细胞增殖实验
CCK8细胞增殖实验
1.首先保证细胞消化下来后吹打成单细胞悬液，然后计数准确，接受每个孔前都将细胞悬液充分混匀。
接种完成后，整个96孔板按十字形来回充分晃动，保证细胞接种后在每个孔中都平均分布，否则测定OD值时重复孔会出现大幅度波动，影响结果。
2. 消化细胞前先用PBS或者生理盐水清洗细胞1-2遍，再加入胰酶，晃动培养瓶/皿使胰酶充分覆盖细胞，然后去除全部的胰酶，将细胞放入培养箱孵育3-5min。
待细胞边缘收缩至单个细胞后加入培养液吹打即可，很好吹打成单细胞悬液的。
3. 我试着回答下你的问题，CCK-8读值我想是独立于你条件培养之外的，意思就是你按照你的实验设计完成压力培养，比如你要培养48小时，那么你就等48小时结束后再加入CCK-8，那么CCK-8培养就不需要在压力条件下了，普通条件下就可以，贴壁细胞是要1－4小时，在这个时间段内你选择你认为最好的时间点测量，CCK-8公司技术专员建议CCK-8加入后培养液变黄，颜色变的最深的时间测量！
我的做法是：加入CCK-8后1－4个小时内每隔半小时测下OD值，对比下不同时间的颜色，数值，大概估计下最佳时间点，再做的时候应该就方便了！。
CCK8检测细胞增殖毒性的原理、方法及注意事项
CCK８检测细胞增殖/毒性得原理、方法及注意事项一、CＣK8检测细胞增殖/毒性得原理Cｅｌl Ｃouｎting Kiｔ—8(简称CCK－8)试剂可用于简便而准确得细胞增殖与毒性分析。
其基本原理为:该试剂中含有ＷSＴ—8【化学名:2—(２—甲氧基—４-硝基苯基)－3-(4-硝基苯基)-5—(2,4—二磺酸苯)－２H—四唑单钠盐】,它在电子载体1－甲氧基-5－甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(１—Ｍethｏxy PＭＳ)得作用下被细胞中得脱氢酶还原为具有高度水溶性得黄色甲瓒产物(Foｒmazａn dye)。
生成得甲瓒物得数量与活细胞得数量成正比。
因此可利用这一特性直接进行细胞增殖与毒性分析、用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验ﻫCCK8得优点:•使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素与有机溶剂;•ＣCＫ-8法能快速检测;•CＣK—8法得检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度;•ＣＣK－8法得重复性优于ＭTT法;•CCK－8法对细胞毒性小;•CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。
ﻫＣCＫ8得缺点:•与MＴT法相比,CCK8与XTT得价格比较贵。
•CCK8试剂得颜色为淡红色,与含酚红得培养基颜色接近,不注意得话容易产生漏加或多加。
ﻫ与以往得增殖/毒性测定试剂相比较:ﻫ检测方法MTT法XＴT法WST－1法CCＫ8法甲臢产物得水溶性差(需加有机溶剂溶好好好解)产品性状粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用现配现用即开即用即开即用检测灵敏度高很高很高高检测时间较长较短较短最短检测波长560-６0０nm ４2０-48０nm４20-4８0nｍ4３0—490ｎm细胞毒性高,细胞形态完全消失很低,细胞形态不变很低,细胞形态不变很低,细胞形态不变试剂稳定性一般较差一般很好批量样品检测可以非常适合非常适合非常适合便捷程度一般便捷便捷非常便捷ﻫ二、CCK８检测细胞增殖/毒性得方法ﻫ实验一:细胞增殖分析1、制备细胞悬液:细胞计数2、接种到９6孔板中:根据合适得铺板细胞数,每孔约100ul细胞悬液,同样得样本可做3个重复。
CCK8法检测细胞增殖预实验
SRT-1720, EX527一定要应用在白血病细胞株起作用的浓度方可比较对293T细胞和白血病细胞株的不同影响，请重复实验。
实验日期：2015/08/22-2015/08/27实验项目：CCK8法检测细胞增殖实验地点：广西医科大学药基楼14楼生物靶向中心实验人员：高宗燕、宁海萍、李登峰实验目的：检测SRT-1720/EX527刺激293T细胞后对细胞增殖的影响主要试剂：SRT-1720,EX527,CCK8试剂盒主要仪器：酶标仪实验步骤：一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞至96孔板。
2、设置4个细胞浓度梯度：0，2000，4000，8000，每组4个复孔。
3、接种后培养24小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养4小时后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。
根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。
）图一、标准曲线二、细胞增殖检测1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃，5% CO2的条件下）。
2、向培养板加入10μL SRT-1720（终浓度3um）,EX527（终浓度100um）。
3、将培养板在培养箱孵育约24h4、每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
5、将培养板在培养箱内孵育2小时。
6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
图二、3um SRT1720刺激293T细胞后的细胞增殖曲线。
该曲线呈S形，符合细胞正常生长情况。
图三、100um EX527刺激293T细胞后的细胞增殖曲线。
该曲线前部分呈S形，符合细胞正常生长情况，但在进入对数期之后曲线有下滑，之后进入平台期。
分析：SRT1720为SIRT1特异性活化剂，在前期实验中对白血病细胞株的生长表现出抑制作用，此次实验中SRT1720对正常细胞（293T）的生长无明显抑制作用。
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CCK8细胞增殖实验
1.首先保证细胞消化下来后吹打成单细胞悬液，然后计数准确，接受每个孔前都将细胞悬液充分混匀。
接种完成后，整个96孔板按十字形来回充分晃动，保证细胞接种后在每个孔中都平均分布，否则测定OD值时重复孔会出现大幅度波动，影响结果。
2. 消化细胞前先用PBS或者生理盐水清洗细胞1-2遍，再加入胰酶，晃动培养瓶/皿使胰酶充分覆盖细胞，然后去除全部的胰酶，将细胞放入培养箱孵育3-5min。
待细胞边缘收缩至单个细胞后加入培养液吹打即可，很好吹打成单细胞悬液的。
3. 我试着回答下你的问题，CCK-8读值我想是独立于你条件培养之外的，意思就是你按照你的实验设计完成压力培养，比如你要培养48小时，那么你就等48小时结束后再加入CCK-8，那么CCK-8培养就不需要在压力条件下了，普通条件下就可以，贴壁细胞是要1－4小时，在这个时间段内你选择你认为最好的时间点测量，CCK-8公司技术专员建议CCK-8加入后培养液变黄，颜色变的最深的时间测量！
我的做法是：加入CCK-8后1－4个小时内每隔半小时测下OD值，对比下不同时间的颜色，数值，大概估计下最佳时间点，再做的时候应该就方便了！。