细胞增殖实验

增殖

1、1000个细胞/孔（96孔），一般5个左右重复，大约能做一周

2、孔板周围需用PBS封闭以防蒸发

3、MTS或CCK-8 均是100UL+10UL,可以混好后每孔加100ul,2-4小时后测OD值

4、从第三天开始换液，以后隔天换一次

克隆形成

1、96孔每孔10个细胞（6-10个重复），24孔每孔50个细胞（容易有边缘效应，3-4个重复）

2、孔板周围用PBS封闭

3、约10天左右染色

4、3-4天需换一次液

1. 接种一定数目的细胞于24孔培养板（如50细胞/孔）或6孔培养板（如100细胞/孔）中，每种细胞3个重复孔。

2. 37度孵箱培养，3-4天更换一次培养基。

3. 根据不同的细胞生长状况，10-14天时对克隆形成染色。

4. 弃去培养基，PBS洗1次。

5. 甲醇室温固定10分钟。

6. 弃去甲醇，水洗，超净台中吹干。

7. 加入吉姆萨染色10-30分钟。

8. 弃去吉姆萨，水洗，风干。

9. 根据不同细胞生长情况，一般以50个细胞以上的群体为一个克隆，统计克隆数，与接种的细胞数比较计算出克隆形成比例。

成球

1、96孔10个每孔，6-10个重复，需10天以上

2、孔板周围用PBS封闭

3、3-4天换一次液

4、EGF 20ng/ml ,HGF10ng/ml ,BFGF 20ng/ml ,B27 50x ,LG 100x ,双抗，F12培养基，非贴的96孔板