EDAC(碳二亚胺)

EDAC（碳二亚胺）

异型双功能交联剂

产品描述

EDAC作为一种羟基活化试剂活化胺的酰胺键被广泛利用。此外，它可以与磷酸基团反应。在肽的合成中它也常被用到；交联蛋白到核酸上；免疫连接反应。一般反应的PH为4.0-6.0. 货号：UP52005A，5g UP52005B，25g UP 52005C，100g

名称：EDAC，EDC,碳二亚胺

储存：-20℃（4℃也可以），避光避潮湿。

总体说明

交联剂是利用分子间共价键将其相连接的化学试剂。两个分子的几个原子会将这两个分子分开，形成“分隔臂”？连接反应将每个部分的化学特性和生物学活性相联系。

免疫学技术，蛋白质的研究中都要用到连接反应，而交联剂就成为非常重要的工具。从这点上看，异型双功能交联剂很可能非常有趣，因为它有两种反应活性，使得分子的连接反应用一种特定的方式进行，避免形成二聚体和多聚体。这种反应活性的选择取决于正确连接的设计。

碳二亚胺与羧基形成中间产物，它可以稳定与胺的反应，形成肽键，没有spacer length？

Uptima提供了一个高质量的EDAC，用于生物学和免疫学分析中蛋白和肽间的连接：

获得免疫原载体-半抗原

获得标记的探针

获得低聚连接产物：免疫反应中的多肽，二聚物，或者结构研究中的网状的蛋白，多聚反应，graffting 半抗原等等。

结构研究中，分子内部的，亚基之间的，蛋白和DNA之间的研究。

获得生物学活性连接产物：免疫打靶技术，免疫毒素等等中特异抗体与药物结合。

固定多肽，蛋白，糖到不同的支持剂上：聚苯乙烯盘，珠子，胶，生物传感器等。

免疫检测？

通过网状物稳定分子

可以咨询Uptima其他交联剂信息。

应用

方法一：载体蛋白上连接多肽。（可用于蛋白）

•准备好载体蛋白，10mg/ml 溶于0.1M MES中，PH5。

•准备好多肽或者半抗原，溶于MES缓冲液中。

•贮备好溶于超纯水中10mg/ml EDAC（现用现配）

•加2mg 多肽到2mg载体蛋白中。

•加0.5~1mg EDAC到载体蛋白/半抗原混合（0.05~0.4mg/1mg总蛋白）（0.5mgEDAC~1mg BSA+1mg多肽，0.25mg EDAC~1mg KLH+1mg多肽）

•室温2~3h

•脱盐储存于缓冲液中。

连接产物冻存保存，若免疫反应，没必要过滤去除沉淀。

方法二：载体蛋白上连接多肽（可应用于蛋白，也可用于另外聚苯乙烯支持的羧基基团）

•洗脱1ml 微球承载的羧基（100mg/ml）,10ml 活化缓冲液PH4.5~7.5.

•洗脱完第二次后，重新在10ml活化缓冲液中球化，以确保微球完全悬浮。

•混合物时加100mgEDAC

•室温反应15分钟

•连接缓冲液PH7.2~8.5中洗两遍，同样用5ml悬浮。确保所有颗粒完全悬浮。

•溶解蛋白到5ml连接缓冲液中，结合微球悬浮和蛋白混合。

•10ml终止液中洗，悬浮，轻柔混合30min，在储存缓冲液中洗，悬浮。

•4℃储存，不要冻存。

注：连接大分子的一步连接反应还有疑问，但已经被高效用于小分子如类固醇和半抗原。

科学和技术方面信息

•EDAC在水中可溶，最大溶解度100mg/ml

•下面信息主要针对它作为液体试剂：

•碳二亚胺与羧基反应形成中间产物O-acylisourea.这个反应发生于酸性缓冲液中（PH4.7~5.5），但连接反应可在PH高达7.4环境中完成。

•中间产物在水溶液中经历水解，因此稳定性在以后与胺反应过程中非常必要。传统方法是加N-羟基丁二酰亚胺（UP 04594）。水解副产物是N替代脲，重新生成最迟形式的羧基。•中间产物与胺反应，形成肽键的产物，它同样与hydrazide反应，从而可以用hydrazide激活配体，来标记或移植配体。

•水溶液中会发生副反应，羧基产生N-酰基脲。

•为了减少内部和蛋白间与赖氨酸残基的反应（一个常见的副反应），EDAC介导的连接反应应在一个高蛋白浓度，低PH，有多余亲核试剂的溶液中反应。

•EDAC介导的连接反应有使两分子间没有spacer（逆电流？）的特性，形成的肽键与天然蛋白质和多肽是相似的，使多肽合成成为可能，而另外一些交联剂形成的键经常被识别为外来分子。

•EDAC/NHS活化步骤反应时间在MES缓冲液(#14035B)中缩短了，高PH使其更有活性，但同时也更加易水解。

•连接的比例是通过特定分析或物理方法分析得到的。

•EDAC有生物膜不可透过性，从而可以区分细胞质和腔中位点的反应。EDAC可用于连接荧光素脂肪胺到细胞表面蛋白上。

•用稀释的酸或者水可很简单的去除多余试剂和脲。