B16细胞的培养

细胞增殖快非常好养，但是要及时换液，否则也很容易死亡、或变形。我养的最

好的时候，天天都在换液，两三天就要消化传代。我用的消化液一般是消化用

含EDTA的胰酶0.25%，个人感觉效果比较好一点。

消化步骤：吸出培养液，加入PBS洗涤（视培养瓶大小加入相应的量，25CM加

入1-2ML）而后加一次胰酶（25CM培养瓶加0.6ML）作用 2-3分钟，轻轻摇晃使

均匀作用在细胞层面上。要一直在显微镜下观察，以防消化过头，等细胞从梭形

变成椭圆形（或是棱角变钝），本来连成片的细胞之间开始有小小的空间，细

胞与细胞好象是一粒粒的，界限清楚，这时是消化的最佳时机。（细胞的活力最

好，又非常容易吹打）加入培养液进行吹打十几次即可。

如果消化到细胞全部飘起来，就消化的稍微有点过了。如果细胞的形态还是老样

子，就消化的有点不足，吹打起来十分费力，有大片的细胞就会贴在壁上，起不

来，而且很不均匀。只好重新加胰酶消化。

还有就是细胞长的比较密时，胰酶可以比平时多加一点，消化时间适当延长。

雅吉货号中文名称英文名称种属组织来源形态学生长方式培养基血清

YJ255 小鼠黑色素瘤细

胞

B16 小鼠黑素瘤

成纤维细胞

样

贴壁RPMI-1640 C S

B16用加10%血清，加双抗的RPMI-1640培养液，0.25%胰酶消化对数生长期B16细胞，传代比约1:5.

倒置相差显微镜下，对数生长期品源B16细胞形态为梭形或不规则形。