非发酵菌特征及鉴定思路共72页文档
非发酵菌
杭州艾迪康临床检验中心微生物 赵德扬
非发酵菌
非发酵菌是一群需氧或兼性氧、不发酵糖
类能在普通培养基上生长的革兰阴性杆菌 主要存在于外界环境中,其中大多数是条 件致病菌.其种类繁多,在鉴定上较为复杂, 但可以根据基本生化反应来鉴别.
非发酵菌的鉴别
(一)基本生化反应 1 氧化酶试验 在营养平板或半固体培养
少数可作推测性鉴别特征生化 反应非发酵菌的鉴别
3 气味可初步鉴别 铜绿假单胞菌有生姜味，产
碱属有水果味，腐败希瓦菌、恶臭假单胞、洋 葱伯克霍德菌有腐败样气味. 4 色素 色素的产生有利于细菌的鉴别, 但不同 的细菌可形成相似的色素,在非发酵菌中产生黄 色色素的有非发酵菌杆菌 、洋葱伯克霍、施氏 假单胞菌、少动鞘氨醇杆菌、食神鞘氨醇杆菌 等.产蓝绿色色素的有铜绿假单菌，产生荧光色 素的有恶臭假单胞菌、荧光单胞菌和铜绿单胞 菌,产红棕色或淡紫色的腐败希瓦菌产、紫色色 素的有紫色杆菌.
少数可作推测性鉴别特征生化 反应非发酵菌的鉴别
5 动力和氧化酶
㈠动力和氧化酶阴性:不动杆菌 CDC ED-5 CDC NO-1 ㈡动力阴性和氧化酶阳性的非发酵菌: 莫拉菌属威克斯属、金黄杆菌属、尿道寡 源杆菌、鞘氨醇杆菌属. ㈢动力阳性和氧化酶阴性细菌：非发 酵菌唐菖蒲霍德菌、洋葱伯克德菌、浅黄 色单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌、少动鞘氨醇 单胞菌
基上作氧化酶试验.麦康凯、SS及其他含 有糖的培养基不能作为氧化酶试验,因糖 分解产酸会有影响. 2 葡萄糖O/F 观察待检菌对葡萄糖是否氧 化发酵或产碱，传统的糖发酵不能作为氧 化发酵,因为糖发酵管含有蛋白胨高.
ห้องสมุดไป่ตู้
非发酵菌的鉴别
3 硝酸盐还原/产气
观察待检菌是否还 原硝酸盐或硝酸盐产气. 4 动力试验 可采用半固体穿剌,玻片滴 法或鞭毛染色,观察待检有无动力,以及鞭 毛的位置和数量. 5 触酶试验 在不含血的培养基上作触酶 试验,区别待检菌阳性/阴性.
非发酵菌特征及鉴定思路课件
微生物质谱分析
利用质谱技术对微生物细胞壁进行分 析，获取菌株的分子量信息，进行鉴 定。
03
非发酵菌的鉴定步骤
菌落形态观察
观察菌落大小、形状、边缘、表面和透明度
非发酵菌的菌落形态多样，大小、形状、边缘、表面和透明度等特征有助于初步 鉴别。
观察菌落颜色
非发酵菌的菌落颜色多样，包括白色、黄色、橙色、红色等，不同颜色可能代表 不同的菌种。
确的分类和鉴定。
分类依据
根据基因序列相似性、进化关系 等因素，将非发酵菌分为不同的 分类单元，如属、种、亚种等。
分类标准
根据国际微生物分类学界的共识 和标准，结合形态学、生理生化 特征和分子生物学数据，确定非
发酵菌的分类地位。
系统发育分析
方法
通过构建系统发育树，分析非发酵菌在进化过程 中的位置和亲缘关系。
数据来源
利用多基因序列分析、宏基因组学等方法，获取 非发酵菌的系统发育数据。
树形结构
根据系统发育数据，绘制出非发酵菌的系统发育 树，明确各菌种之间的亲缘关系和进化路径。
05
非发酵菌的致病性与临床意义
非发酵菌的感染途径与症状
感染途径
非发酵菌主要通过呼吸道、皮肤或接 触等途径感染人体。
症状表现
非发酵菌感染的症状多样，常见的有 发热、咳嗽、咳痰、呼吸困难等，严 重时可导致败血症、感染性休克等。
生化试验
通过测定菌株对不同碳源、 氮源的利用以及在特定环 境下的生长情况，了解菌 株的生理生化特性。
血清学试验
利用特异性抗体与抗原的 结合反应，对菌株进行特 异性鉴定。
分子生物学鉴定方法
16S rRNA基因测序
通过对菌株16S rRNA基因的测序，进行系统发育学分析，确定菌 株在分类学上的位置。
非发酵菌群的分类鉴定
• 该菌的生长特性、营养要求、及其它生物 学性状与铜绿假单胞菌极为相似，所不同 的是氧化酶阴性，这是与假单胞菌属相区 别的重要特性；此外，该菌一端具有3根以 上丛鞭毛，运动活泼，可与氧化酶阴性的 不动杆菌属和副百日咳鲍特氏菌相鉴别。
3、鼻疽（类鼻疽）伯克霍尔德菌
• 鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia mallei） 和类鼻疽伯克霍尔德菌（ Burkholderia pseudomallei）是鼻疽与类鼻疽的病原菌， 属假单胞菌属rRNA同源群的第二群；2000 年被NCCLS/CLSI（National Committee
脑膜炎败血黄杆菌在血琼脂平板和营养琼脂平板上的菌落特征（37℃，18—24h）
• 黄杆菌属目前共分为8个种和4个未命名 的生物群。它们分别是：
• 脑膜炎败血黄杆菌、芳香黄杆菌、短小黄 杆菌、水田黄杆菌、嗜醇黄杆菌、嗜糖黄 杆菌、嗜温黄杆菌、薮内黄杆菌及黄杆菌 Ⅱb、Ⅱe、Ⅱh、Ⅱi群。其中脑膜炎败血 黄杆菌、芳香黄杆菌、短小黄杆菌和黄杆 菌Ⅱb群可引起人类疾病。
支气管腐败 鲍特氏菌
+ — + +
+ +
鲍特氏菌属
鞭毛染色
脂、巧克力色血琼脂及兔血琼脂上均不能生长。
副百日咳鲍特氏菌和支气管腐败鲍特氏菌营养 要求不高，在上述培养基上均能生长。
• 3、该菌属细菌不分解糖类。其它生化反应见 下表。
鉴别要点
鞭毛 动力 37℃
18—24℃ 尿素酶 硝酸盐还原 氧化酶
百日咳 鲍特氏菌
— — — — —
+
副百日咳 鲍特氏菌
—
— — + — —
铜绿假单胞菌镜下形态和在血平板上的菌落特征
铜绿假单胞菌在普通琼脂培养基上的菌落特征
api 20 ne 非发酵菌 鉴定条
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第一部分：介绍API 20 NE非发酵菌鉴定条API 20 NE非发酵菌鉴定条是一种用于鉴定非发酵菌的检测工具，它采用了生物化学方法和微生物学方法来确定微生物的种类和特性。
这种鉴定条广泛应用于临床医学、食品工业和环境监测等领域，可以帮助科研人员和临床医生对非发酵菌进行快速而准确的鉴定和分类。
第二部分：深入探讨API 20 NE非发酵菌鉴定条的原理和方法API 20 NE非发酵菌鉴定条的原理基于微生物菌落的代谢反应，通过监测微生物对不同营养物质的利用情况来推断其种属和分类。
该鉴定条包含20个小管，每个小管内都含有不同的营养物质，当微生物菌落接种到这些小管中后，根据颜色变化和气体产生等特征，就可以判断微生物的代谢特性和种属分类。
第三部分：API 20 NE非发酵菌鉴定条在临床医学和食品工业中的应用在临床医学中，API 20 NE非发酵菌鉴定条被广泛应用于临床微生物学检测，可以帮助医生快速鉴定非发酵菌，从而选择合适的治疗方案。
在食品工业中，该鉴定条也被用于食品卫生和质量监测，可以帮助食品生产企业及时发现并控制微生物的污染。
第四部分：API 20 NE非发酵菌鉴定条的发展趋势和展望随着微生物学和生物技术的发展，API 20 NE非发酵菌鉴定条也在不断更新和改进。
未来，随着新的技术和方法的引入，该鉴定条将更加高效、准确地鉴定非发酵菌，为临床医学和食品工业提供更好的支持和帮助。
个人观点和理解：作为一种重要的微生物学检测工具，API 20 NE非发酵菌鉴定条在医学和工业领域发挥着重要作用。
它不仅可以帮助医生进行微生物感染的诊断和治疗，还可以帮助食品企业保障食品质量和安全。
我对这种鉴定条的发展前景充满信心，相信它会在未来发挥更加重要的作用。
非发酵菌PPT课件
在生物抗病毒、抗炎等活性的代谢产物， 用于新药研发。
疫苗生产
非发酵菌产生的某些代谢产物具有免疫原性，可以作为疫苗用于 预防疾病。
基因工程
非发酵菌可以作为基因工程的宿主细胞，用于外源基因的表达和 产物的生产。
05
非发酵菌的遗传改良与基 因工程
基因克隆与表达
生物能源
非发酵菌可以用于生产生物燃料，如乙醇、丁醇等，具有高效、 环保的优点。
生物材料
非发酵菌可以用于生产生物可降解塑料、生物纤维等，替代传统的 石化产品。
生物农药
非发酵菌可以用于生产生物农药，具有安全、环保、高效的优点。
非发酵菌在环境治理和生物医学中的新挑战
环境治理
非发酵菌在环境污染治理方面具有重要作用，可以用于降解有机污染物、重金属离子等。
营养需求
特殊营养需求
培养基配制
非发酵菌通常需要特殊的营养物质， 如维生素、氨基酸等，以满足其生长 和代谢需求。
为了满足非发酵菌的营养需求，需要 精心配制培养基，确保提供适当的营 养成分。
不同种类营养需求差异
不同种类的非发酵菌对营养的需求存 在差异，有些需要更多的有机氮源， 而有些则需要更多的无机盐。
生物医学
非发酵菌在生物医学领域具有广阔的应用前景，如用于治疗感染性疾病、癌症等，但同时也面临着安全性、有效 性等方面的挑战。
THANKS
感谢观看
代谢途径
糖酵解途径
非发酵菌主要通过糖酵解途径进行能量代谢，将葡萄糖转化为丙 酮酸并产生能量。
丙酮酸的去向
丙酮酸可以进一步转化为其他有机化合物，如脂肪酸、氨基酸等。
不同种类代谢途径差异
不同种类的非发酵菌具有不同的代谢途径，有些能够利用其他有机 化合物作为碳源。
实验：非发酵菌的鉴定
－
－ ＋
0
0 100
不动杆菌属主要菌种间的鉴别
醋酸钙 葡萄糖氧化 木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 + － ＋ ＋ 鲍曼 + ＋ ＋ ＋ 溶血 琼氏 约翰逊 洛菲 － － ＋ －/＋ － － ＋ － +/－ － +/－ － － ＋ ＋ ＋
鸟氨酸脱羧酶
枸椽酸盐利用 明胶液化 生长温度: 37℃ 41℃ 42℃
实验：非发酵菌的鉴定
实验目的
1.掌握常见非发酵菌的形态、染色特性、生 化反应及鉴定依据； 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 别方法。
器材和试剂
1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 和窄食单胞菌属细菌； 2.鉴定试验：双糖管，葡萄糖OF管，枸椽 酸盐琼脂，尿素，鸟氨酸、精氨酸、赖氨 酸，明胶、七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木 糖，乳糖，蔗糖。
方法：
1.形态观察； 2.菌落观察； 3.生化反应。
常见非发酵菌的鉴定依据
1.铜绿假单胞菌：
＋ ＋ ＋ － ＋/－ 97 97 98 0 85
单端鞭毛（三根以下） 动 力 氧化分解（O-F培养基） 葡萄糖 乳糖、蔗糖 木 糖
氧化酶
赖氨酸脱羧酶 精氨酸双水解酶
＋
－ ＋
100
0 99
鸟氨酸脱羧酶
＋
＋ － ＋ － －
＋
＋ － ＋ ＋ ＋
－
＋ ＋ ＋ － －
－
－ ＋ ＋ －
－
－ － － －
－
－ － ＋ － －
＋/－ ＋
嗜麦芽窄食单胞菌
氧化酶 动力 明胶 42ﾟC 七叶苷 赖氨酸 – + + +/+ +
非发酵菌-2010
辅助培养
嗜麦芽窄食单胞菌
鉴定： 氧化酶 动力 明胶 42ﾟC 七叶苷 赖氨酸 麦芽糖
– + + +/+ + O
耐药性
对亚胺培南天然耐药，主要是产金属酶； 经验用药首选磺胺类，但目前磺胺类抗生 素的耐药率已经开始上升。 K-B法可选用的药物有SXT、LEV和MNO。
洋葱伯克霍尔德菌
一般不引起人致病，但易从纤维囊肿病人 中分离，在一些免疫力低下的患者中也可 能分离到。 生物学特性：氧化酶>90%阳性，赖氨酸阳 性，多鞭毛。
＋
＋
97
98
－ ＋/－ ＋ － ＋ － － ＋
0 85 100 0 99 0 0 100
（2）抗原检测：血清学分型、噬菌体分型 （3）核酸检测：质粒指纹图分析、脉冲场凝 胶电泳分析（PFGE pulsed field gel electrophoresis）、基因芯片、PCR技术、 16SrDNA分型鉴定技术
致病机制
粘附素：粘附 结构成分 荚膜多糖：抗呑噬
内毒素：LPS
毒力因子 毒素 外毒素：A 阻止真核细胞蛋白质合成 S 干扰吞噬杀菌作用 绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧 化物和 过氧化氢产生有毒基团 酶类 弹性蛋白酶:丝氨酸蛋白酶（Las-A） 降解 弹性锌金属蛋白酶（Las-B）蛋白 磷脂酶C: 分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞
3生化反应：OX弱阳性或阴性，H2O2阳性， 能水解明胶，不发酵糖。 4抗原结构：有O抗原和H抗原，O抗原有特 异性。 5.抵抗力：抵抗力强，在水中可存活数月。 对化学消毒剂敏感。
致病性
可引起肺炎型（重症类型）、流感样型 （轻症类型）和肺外感染三种类型； 肺炎型死亡率高 感染后对该菌有一定的抵抗力。
非法酵菌鉴定
生长缓慢 48h 可见菌落 深黄到橘黄色素 七液苷阳性 区别于其他产碱假单胞菌
rRNA V
寡养单胞菌属或窄食单胞菌属
嗜麦芽寡氧单胞菌
寡养单胞菌属生物学特性
嗜麦芽寡养单胞菌名称变化 1961年嗜麦芽假单胞菌 1983年嗜麦芽黄单胞菌 1993年嗜麦芽寡养（窄食）单胞菌
新一版伯杰手册 醋酸钙不动杆菌
不动杆菌的分类主要生物学特性
只有7个基因种有菌名：
基因种1——醋酸钙 基因种2—— 鲍曼 基因种4——溶血 基因种5—— 琼氏 基因种7—— 约翰逊 基因种8—— 洛菲不动杆菌
其余基因种未命名
不动杆菌的分类主要生物学特性
生物学特性
G-球杆菌 常成对排列 不易脱色 常染成假阳性 拉丝试验容易成假阴性
非发酵菌的分类 第一组 有动力 极鞭毛
rRNA I群 假单胞菌属
假单胞菌科
rRNA II群 rRNA III群 rRNA IV群 rRNA V群
伯克菌属
丛毛单胞菌属 短波单胞菌属 寡养（窄食）单胞菌属
假单孢菌科根据rRNA-DNA同源性 研究分为5组
• rRNA-I: • 假单孢菌属
铜绿 荧光 恶臭 门多萨 产碱 斯氏
产碱杆菌属生物学特性
产碱杆菌属 粪产碱杆菌 木糖氧化产碱杆菌 木糖氧化亚种 脱硝亚种 皮氏产碱杆菌（1986年描 述）
产碱杆菌属生物学特性
粪产碱杆菌 临床标本中最常见
菌落细小 边缘不规则 在碳水化合物培养基上 强烈碱性反应 还原亚硝酸盐 不还原硝酸盐
非发酵菌的分类 第三组
黄杆菌科
无动力 氧化酶阳性
非发酵菌及检验
3、检先增菌，再转 种血平板和麦康凯平板分离；脓汁、分泌物、 尿可直接种于上述培养基分离培养。
（3）鉴定：根据菌落特征、色素、 生姜气味、菌体形态、氧化酶试验等 作出鉴定。对无色素的菌株应与其他 假单胞菌鉴别。
铜绿假单胞菌的检验程序：
血液 体液
脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液 粪便
分离培养 血、麦康凯
增 菌 营养肉汤
直接涂片染色
分离培养 SS、麦康凯
初步鉴定 菌落特征，色 素 菌体形态、氧化酶
最后鉴定
生化反应
分型：血清学
噬菌体
铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别
试 验 铜绿假 单胞菌 ＋ 荧光假 单胞菌 ＋ 恶臭假 单胞菌 ＋ 斯氏假 单胞菌 ＋ 嗜麦芽 假单胞 ＿ 鼻疽假 单胞菌 ＋/＿ 类鼻疽 假单胞 ＋
挑选可疑菌落
最后鉴定 生化反应
初步鉴定 KIA：底层、斜面不变 硝酸盐还原、氧化酶、 动力
不动杆菌属主要菌种生化反应特征
醋酸钙不 动杆菌 鲍曼不 动杆菌 溶血不 动杆菌 琼氏不 动杆菌 约翰逊 不动杆菌 洛菲不 动杆菌
葡萄糖氧化
木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶
＋
＿ ＋ ＋
＋
＋ ＋ ＋
+/_
+/_ ＿ ＋
琼氏不动杆菌
约翰逊不动杆菌
一、生物学性状
形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列， 不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。 培养特性 专性需养，营养要求不高。
最适温度35℃ ，鲍曼不动杆菌42℃可生长。 血平板上 圆形凸起、2~3 mm ，光滑、边 缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶 血不动杆菌可形成 β -溶血环）； 不产生色素。 麦康凯平板 形成粉红色菌落。
非发酵菌的鉴定
非发酵菌的鉴定定义：非发酵菌（nonfermenters）指一群需氧或兼性厌氧、不发酵糖类，能在普通培养基上生长的革兰阴性杆菌。
主要存在外界环境中，种类繁多，多为条件致病菌或医院内感染菌。
关于临床标本中NFB的意义，在混合培养物中见到时，必须考虑到患者的情况和标本来源。
一般来说，以纯培养方式分离自正常无菌部位的NFB，一定要鉴定到种并进行抗生素敏感性试验。
目前CLSI中，K-B法除了假单胞菌属、不动杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌有抗生素敏感性实验的判断标准外，其他非发酵菌没有K-B法的标准。
一、鉴定原则：1．血、无菌部位（脑脊液、胸水等），特殊病人，少见菌可用API-20NE或VIKET TWO-GN 卡鉴定。
2．其它部位如呼吸道标本、临床常见的非发酵，根据菌落形态、生化反应、抗生素耐药谱等综合分析手工法鉴定即可。
二、非发酵性菌基本分类：假单胞菌属Pseudomonas spp.（20多个临床上重要菌种中，铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌等最常见。
）不动杆菌属Acinetoacter spp.（最常分离的种鲍曼不动杆菌、鲁氏不动杆菌、溶血不动杆菌等）窄食单胞菌Stenotrophomonas spp.（嗜麦芽窄食单胞菌、非洲嗜麦芽窄食单胞菌）伯克霍尔德菌Burkholderia spp.（洋葱伯克霍尔德菌、唐菖蒲伯克霍尔德菌、类鼻疽伯克霍尔德菌等）鞘氨醇单胞菌属Sphingomonas spp.（少动鞘氨醇杆菌）无色杆菌属Achromobacter spp.（木糖氧化无色杆菌）希瓦氏菌属Shewanella spp. （腐败希瓦氏菌海藻希瓦氏菌）产硷菌属Alcaligenes spp.黄杆菌属Flavoacterium spp.莫拉菌属Moraxella spp.罗尔斯通菌属 Ralstonia spp.食酸菌属Acidovorax spp.丛毛单胞菌属Comamonas spp.甲基杆菌属Methylobacterium spp.等还有一些未定名的菌群三、辨认非发酵菌的基本要点1. 分离培养基上的菌落有以下情况初步考虑非发酵菌的存在a.培养基上生长较差或中国蓝上不生长的阴性菌。
实验：非发酵菌的鉴定
＋/－ ＋
嗜麦芽窄食单胞菌
氧化酶 动力 明胶 42ﾟC 42ﾟ 七叶苷 赖氨酸 – + + +/+/+ +
方法： 方法：
1.形态观察； 1.形态观察； 2.菌落观察； 2.菌落观察； 3.生化反应。 3.生化反应。
常见非发酵菌的鉴定依据 1.铜绿假单胞菌： 1.铜绿假单胞菌：
单端鞭毛（三根以下） 单端鞭毛（三根以下） 动 力 氧化分解（O-F培养基） 培养基） 氧化分解（ 葡萄糖 乳糖、蔗糖 乳糖、 木 糖 氧化酶 赖氨酸脱羧酶 精氨酸双水解酶 鸟氨酸脱羧酶 H2S产生 在42℃ 生长 42℃ ＋ － ＋/－ ＋ － ＋ － － ＋ 98 0 85 100 0 99 0 0 100 ＋ ＋ 97 97
不动杆菌属主要菌种间的鉴别
醋酸钙 葡萄糖氧化 木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 鸟氨酸脱羧酶 枸椽酸盐利用 明胶液化 生长温度: 37℃ 生长温度: 37℃ 41℃ 41℃ 42℃ 42℃ + － ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ － － 鲍曼 + ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 溶血 琼氏 约翰逊 洛菲 － － ＋ －/＋ － － － － － － － ＋ － － － － ＋ － － +/－ － +/－ +/－ － +/－ － ＋ － ＋ ＋ ＋ － － ＋ ＋ － － ＋ ＋ －
实酵菌的形态、染色特性、生 1.掌握常见非发酵菌的形态、染色特性、生 化反应及鉴定依据； 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 别方法。
器材和试剂
1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 和窄食单胞菌属细菌； 2.鉴定试验：葡萄糖OF管，枸椽酸盐琼脂， 2.鉴定试验：葡萄糖OF管，枸椽酸盐琼脂， 尿素，鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸，明胶、 七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木糖，乳糖， 七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木糖，乳糖， 蔗糖。