细菌鉴定流程
细菌鉴定流程
细菌鉴定流程细菌鉴定细菌形态学鉴定16S rDNA 鉴定生理生化鉴定一、细菌形态学鉴定1.从-80˚Ϲ冰箱中取出菌株放4˚Ϲ复苏，轻柔混匀后用接种环接一环菌液在培养基平板上划线活化，根据菌株来源选择适宜的培养基。
2.放入培养箱倒置培养，实验室一般采用28˚Ϲ培养，特殊菌株依据该菌最适条件（时间、温度）培养24-48h。
3. 纯化：从活化培养基平板上挑取单菌落继续划板培养。
4. 观察记录菌落形态特征：大小（mm）、形状、干湿、透明度、颜色、边缘整齐还是，，，，，，，形状干湿透明度颜色边缘细菌大小（mm）注意事项：①接种划线应在酒精灯旁边操作②培养时应倒置培养，防止污染二、革兰氏染色1.涂片固定将纯化后的菌株进行革兰氏染色，滴一滴生理盐水于载玻片上，无菌条件下用接种环挑取少量菌落均匀涂布水滴中，使其自然干燥，菌面向上，经火焰固定。
注意事项：菌液涂片时不可过于浓厚，干燥、固定。
固定时通过火焰1~2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2.染色一般包括初染、没染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：（1）加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。
（2）加上碘液染色1分钟，水洗。
（3）加上95%酒精，摇动玻片，根据涂片厚度，脱色约20~60秒，水洗，吸去水分。
（4）加上蕃红后，染色1分钟，水洗。
（5）吸干或在空气中晾干后，油镜镜检。
3.结果观察：革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
以均匀分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，都常呈现假阳性。
注意事项：①标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。
若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。
②玻片通过火焰温度不能太高。
③碘液变透明，则不能使用。
④水洗时动作要轻，沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗，以免把菌体冲掉。
三、16S rDNA 鉴定（16S rDNA只能鉴定到属，需进行生理生化、药敏实验等鉴定到种）1. 细菌复苏、活化、纯化同细菌形态学鉴定3. 挑取单菌落至少2-3个接到含有1ml灭菌纯水的1.5ml离心管中混匀。
菌种鉴定标准操作规程
菌种鉴定标准操作规程目的：建立菌种鉴定标准操作规程范围：适用于******鉴定标准操作职责：内容：1整体操作步骤1.1纯化、分离待鉴定菌用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应的培养基上（如TSA），划线分离，以出现微生物单菌落为止。
1.2挑取纯化后的单菌落，进行革兰染色、镜检，以确定待鉴定菌的革兰属性。
1.3如镜检结果为革兰阴性杆菌，则先进行发酵实验。
如发酵实验结果为阴性，则选用API20NE试剂条进行鉴定；如发酵实验结果为阳性，则在经过细胞色素氧化酶实验后选用API20E试剂条进行鉴定。
1.4如镜检结果为革兰阳性球菌，则先进行过氧化氢酶实验。
如实验结果为阴性则选用API Strep试剂条进行鉴定，如实验结果为阳性则选用API Staph试剂条进行鉴定。
1.5假如镜检结果为革兰阳性杆菌并且有内生芽胞，则选用API 50CHB试剂条进行鉴定；否则，根据运动性实验和过氧化氢酶实验结果选用API Coryne或其他试剂条进行鉴定。
1.6选定正确的试剂条以后，根据不同的API试剂条的标准操作规程准备接种物，进行接种、培养等操作并将结果形成数码，用API鉴定软件鉴定或查询待检菌的名称均可。
鉴定结果应记录，必要时，给出相应解释。
2革兰氏染色2.1染色剂的配制2.1.1结晶紫染色液：甲液：结晶紫 1.0g95%的酒精20ml乙液：草酸铵0.8g水80ml将甲液和乙液混合均匀，静置48h使用，置密闭棕色瓶中储存。
2.1.2碘液：碘 1.0g碘化钾 2.0g水300ml配制时先用3～5ml水将碘化钾溶解，再加入碘，用力摇匀，使之全部溶解后，再加水稀释至300ml，摇匀，分装在棕色瓶中储存。
2.1.3稀石碳酸红溶液:碱性品红 1.0g石碳酸 5.0ml95%乙醇10.0ml配制时用乙醇溶解碱性品红，然后加入石碳酸溶液，使用时加水稀释至100ml，摇匀。
2.2操作:2.2.1涂片：用接种环挑取液体培养物中菌体在载玻片上涂成薄层，固体培养物则先在载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水，用接种环挑取少量菌体在载玻片上涂成薄层。
细菌鉴定流程
细菌鉴定流程
细菌鉴定流程一般分为以下几个步骤：
1. 样品收集：根据需要鉴定的细菌类型和来源，选择适当的样品收集方式。
样品可以是细菌培养物、体液、食物等。
2. 培养：将样品接种到适当的培养基上进行培养。
根据细菌的生长条件需求，选择适当的培养基，如富含寡营养物的普通培养基、特殊选择性培养基等。
3. 盱衡生长：根据细菌类型和特性，观察细菌的生长状况，如菌落形状、颜色、大小等。
4. 形态学鉴定：使用显微镜观察细菌的形态学特征，包括细菌的形状（球形、杆状、螺旋形等）、大小、菌落或细胞的结构、芽生等。
5. 生化鉴定：进行一系列生化试验以确定细菌的生化特性，如氧需求、发酵产物、酶反应、代谢产物等。
6. 免疫学鉴定：通过免疫学方法，如血清学试验、酶联免疫吸附试验等，检测细菌对特定抗体的反应性，以确定细菌的免疫学特性。
7. 分子生物学鉴定：应用分子生物学技术，如PCR（聚合酶链反应）、序列分析
等，检测细菌的DNA或RNA序列，以确定细菌的基因特征和亲缘关系。
8. 数据分析和鉴定：根据样品收集、培养、观察、试验等结果，综合分析得到的数据，确定细菌的鉴定结果。
可以参考细菌鉴定手册或数据库，进行对照确认。
这些步骤都需要进行严格的实验操作和分析，以确保细菌鉴定的准确性和可靠性。
不同类型的细菌鉴定流程可能会有所不同，具体流程可以根据实际需要进行调整和优化。
标准菌株验证鉴定步骤
1.1 金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌标准菌株：挑取部分干粉溶解于0.9% 无菌氯化钠溶液中，划线接种于营养琼脂平板上，36℃±1℃培养18-24 小时。
并观察菌落形态。
a. 金黄色葡萄球菌：菌落凸起，圆形，不透明；b. 大肠埃希氏菌：菌落稍凸，圆形，湿润，乳白色；c. 铜绿假单胞菌：菌落扁平，圆形，边缘不整齐，光滑湿润，可产生蓝绿或黄绿色素；d. 枯草芽孢杆菌: 表面粗糙不透明，镜检菌体有芽孢。
1.2白色念珠菌：挑取部分干粉溶解于0.9% 无菌氯化钠溶液中，划线接种于改良马丁琼脂培养基平板或PDA 琼脂平板上，30℃-35℃培养24-48 小时。
本菌细胞呈卵圆形，很象酵母菌，比葡萄球菌大5～6 倍，革兰氏染色阳性，但着色不均匀。
黑曲霉：挑取部分干粉溶解于0.9% 无菌氯化钠溶液中，划线接种于改良马丁琼脂斜面培养基上，23℃-28℃培养48-96 小时。
菌丛呈黑褐色，粗糙。
1.2 生孢梭菌：挑取部分干粉溶解于0.9% 无菌氯化钠溶液中，接种于硫乙醇酸盐流体培养基中，30℃～35℃培养18-24 小时；或在厌氧条件下接种于哥伦比亚琼脂上，30℃～35℃厌氧培养18-24 小时。
2、菌种鉴定：2.1金黄色葡萄球菌：革兰氏染色试验：革兰氏阳性菌(紫色)，葡萄状排列，球菌。
兔血浆试验：接种1 个单菌落于1 支兔血浆溶液中，30℃-35℃培养至6 小时，每半小时观察一次。
凝固为阳性。
金黄色葡萄球菌为阳性反应。
2.2大肠埃希氏菌：革兰氏染色试验：革兰氏阴性杆菌，红色。
IMVC 生化试验：2.3铜绿假单胞菌：革兰氏染色试验：革兰氏阴性杆菌，红色A。
氧化酶试验：将氧化酶试纸用蒸馏水浸湿，用细玻璃棒或一次性接种针挑取单个菌落，涂在试纸上。
在60s 内变为蓝色或蓝紫色为阳性，不变色为阴性。
绿脓菌素试验：取斜面培养物接种于PDP 琼脂培养基斜面上，培养24 小时，加三氯甲烷3～5 ml 至培养管中，搅碎培养基并充分振摇。
细菌鉴定流程
细菌鉴定流程：取一环标本四区划线接种平板（如为粪便标本接种SS,MAC平板）培养18-24小时后取一区菌落革兰染色，报告为革兰阳性球菌/革兰阴性球菌/革兰阳性杆菌/革兰阴性杆菌，注意区分细菌和真菌一般情况下不会给你们做革兰阳性杆菌和革兰阴性球菌革兰阳性球菌鉴定流程：先做3%触酶试验：阳性的为葡萄球菌或微球菌，阴性为链球菌或肠球菌葡萄球菌和微球菌的区别：葡萄糖OF试验，葡萄球菌为F型，微球菌为O型所以如果做到一个触酶阳性的革兰阳性球菌都要做下葡萄糖OF试验，DNA酶试验，新生霉素试验，血浆凝固酶试验链球菌和肠球菌的区别：链球菌高盐和胆汁七叶苷试剂均为阴性，而肠球菌都为阳性。
链球菌属内区别：本来可以通过溶血来区分一些的，但是由于实验室的平板αβ溶血比较难区分所以如果做到一个触酶阴性的革兰阳性球菌都要做下高盐，胆汁七叶苷，杆菌肽，奥普托欣，CAMP如果做到一个奥普托欣敏感的革兰阳性球菌再加做胆汁溶菌试验和菊糖试验（阳性为变红）可判定为肺炎链球菌革兰阴性杆菌鉴定流程：先做氧化酶试验：氧化酶阴性的革兰阴性杆菌都要做下KIA，MIU，葡磷两支(做MR，VP)，苯丙，枸橼酸盐，硝还，蛋白胨水（做吲哚试验），赖氨酸，鸟氨酸，氨对如果KIA结果为A/A或者K/A的应为肠杆菌科细菌，如上面向个反应还不能区分细菌到种根据教科书307页加做试验。
一般情况下只会给你们做大肠埃希菌，志贺菌属（四种），沙门菌属（甲副，乙副，伤寒），弗劳地枸橼酸杆菌，肺炎克雷伯，产酸克雷伯，产气肠杆菌，阴沟肠杆菌，普通变形杆菌，奇异变形杆菌，沙雷菌属，摩根菌属，普罗威登斯菌属。
如果KIA结果为K/K应怀疑为不动杆菌属或者嗜麦芽窄食单胞菌：这两个菌区分可通过麦芽糖和赖氨酸试验区分，如为氧化酶阳性，要做葡萄糖的OF试验（用非发酵），硝还产气，精氨酸双水解酶，一般情况下只有两种菌给你们做一个是铜绿假单胞菌，一个是粪产碱杆菌，真菌给你们做的一般情况只有白色念珠菌和新生隐球菌，通过墨汁负染，芽管试验，厚膜孢子来区分。
分子生物学鉴定细菌的方法具体操作步骤与注意事项
16S rDNA鉴定细菌的方法细菌16S rDNA鉴定主要分为7个部分：1.提取细菌基因组DNA,2.设计/选择引物进行PCR扩增，电泳检测纯度与大小。
3.琼脂糖凝胶电泳分离4.胶回收目的片段5.目的片段测序。
6.BLAST比对获取相似片段。
7.构建系统进化树试剂：1、培养基：通常选择组分简单且细菌生长良好的培养基（培养基组分过于复杂会影响DNA 的提取效果，也可以在裂解细菌前用TE缓冲液对菌体进行洗涤。
）。
2、1M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)（1L）：121.1g Tris，加浓盐酸约（70ml, 60ml, 42ml），高温高盐灭菌后，室温保存。
冷却到室温后调pH，每升高1℃，pH大约下降0.03个单位。
3、0.5M EDTA（pH8.0）（1L）：186.1g Na2EDTA•2H2O，用NaOH调pH至8.0（约20g）,高温高压灭菌，室温保存。
4、10×TE Buffer(pH7.4，7.6，8.0)（1L）：组分：100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA。
1M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0）取100ml，0.5M EDTA（pH8.0）取20ml。
高温高压灭菌，室温保存。
1×TE Buffer用10×TE Buffer稀释10倍即可。
5、10%SDS（W/V）：称10g，68℃加热溶解，用浓盐酸调pH至7.2。
室温保存。
用之前在65℃溶解。
配置时要戴口罩。
6、5M NaCl：称292.2gNaCl，高温高压灭菌，4℃保存。
7、CTAB/NaCl（10%CTAB，0.7M NaCl）：溶解4.1g NaCl，加10g CTAB（十六烷基三甲基溴化铵），加热搅拌。
用之前在65℃溶解。
8、氯仿/异戊醇：按氯仿：异戊醇=24：1（V/V）的比例加入异戊醇。
9、酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）：按苯酚与氯仿/异戊醇=1：1的比例混合Tris-HCl平衡苯酚与氯仿/异戊醇。
菌株鉴定流程总结
学习总结各位领导好，从5月25号开始，在周老师的实验室已经进行了十多天的培训，让我学到很多。
现将我在实验室学习的情况总结汇报。
一、细菌鉴定流程：1.表观观察鉴定：培养24h的菌落观察，如：菌落形态（圆形、椭圆形等）、大小（直径多少）、表面光滑度（光滑和粗糙）和隆起情况（扁平，隆起，凸起等）、边缘整齐、菌落的透明度、菌落（菌落颜色及是否产生色素等）及培养基的颜色（培养基是否变色）等菌落的描述。
显微观察，观察单个菌的形态（杆状，圆形，椭圆形，螺旋形等），是否有芽孢，荚膜的情况。
染色观察，革兰氏染色、芽孢染色、荚膜染色。
2.分子鉴定：细菌DNA的提取（试剂盒法）⑴将菌种接在适宜的液体培养基中，进行液体发酵，180rpm/min，24h培养。
⑵将摇瓶发酵的菌液加到1.5ml离心管中，10000rpm离心1min，倒掉上清液。
⑶向菌体沉淀中加入200ul缓冲液GA，震荡，至菌体悬浮。
如果是革兰氏阳性菌，则向菌体中加入120ul的Tris盐酸缓冲液，再加入80ul溶菌酶，37℃，30min以上。
⑷向离心管中加入20ul蛋白酶K溶液，混匀。
⑸加入220ul缓冲液GB，震荡15s，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
⑹加入220ul无水乙醇，充分震荡混匀15s，可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
⑺将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个离心柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
⑻向吸附柱CB3中加入500ul缓冲液GD，12000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
⑼向吸附柱CB3中加入600ul漂洗液PW，12000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
⑽重复操作步骤⑼。
⑾ 将吸附柱CB3放入收集管中，12000rpm 离心2min ，倒掉废液，将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
细菌鉴定流程
Group 2
THANKS
14生基一班 第二小组
葡 萄 糖
乳 糖
受试菌 大肠杆菌 变形杆菌
变形杆菌 大肠杆菌 受试菌
形态及理化特征
理化特征
氨苄青霉素抗性实验 1、步骤 氨苄青霉素滤纸条→垂直接种→培养→观察、测量滤纸条距菌起始 位置的距离
2、结果 受试菌对青霉素敏感
平板编号 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 受试菌
抑菌长度 （cm）
1 2
结果与分析
藤黄微球菌 Micrococcus luteus
可以水解蛋白质、多肽和脂肪。通常不水解精氨酸。通常不还原硝酸盐。有些菌株能生长在含有 丙酮酸（作为碳源和能源）、谷氨酸、生物素和无机盐的培养基上。另一些菌株需要含某些氨基 酸更复杂的培养基。 专性好氧，最适生长温度约为35℃。大多数菌株可在10℃生长，有些在45℃生长。能在5%NaCl 生长，但不常在10%或15% NaCl中生长。大多数菌株对溶菌酶和新生素敏感。 对植物和动物不致病。通常存在于土壤、灰尘、水、人和其他动物皮肤上。 建议新的模式菌株： CCM 169;ATCC 44698;NCTC 2665.
理化特征
糖发酵实验 1、步骤 葡萄糖发酵半固体培养基（含指示剂 溴甲酚紫）→穿刺接种→37℃培养 24~48h→观察培养基颜色和是否产 生气泡 乳糖发酵半固体培养基（含指示剂溴 甲酚紫）→穿刺接种→37℃培养 24~48h→观察培养基颜色和是否产 生气泡 2、结果 受试菌在培养基中生长，但葡萄糖和 乳糖半固体培养基均为紫色，且未裂 开，说明受试菌进行葡萄糖和乳糖发 酵均不产酸不产气
环境微生物的检测
——受试菌初步鉴定报告
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分离环境
细菌鉴定流程
细菌鉴定流程细菌鉴定细菌形态学鉴定16S rDNA 鉴定生理生化鉴定一、细菌形态学鉴定1.从-80˚Ϲ冰箱中取出菌株放4˚Ϲ复苏，轻柔混匀后用接种环接一环菌液在培养基平板上划线活化，根据菌株来源选择适宜的培养基。
2.放入培养箱倒置培养，实验室一般采用28˚Ϲ培养，特殊菌株依据该菌最适条件（时间、温度）培养24-48h。
3. 纯化：从活化培养基平板上挑取单菌落继续划板培养。
4. 观察记录菌落形态特征：大小（mm）、形状、干湿、透明度、颜色、边缘整齐还是，，，，，，，形状干湿透明度颜色边缘细菌大小（mm）注意事项：①接种划线应在酒精灯旁边操作②培养时应倒置培养，防止污染二、革兰氏染色1.涂片固定将纯化后的菌株进行革兰氏染色，滴一滴生理盐水于载玻片上，无菌条件下用接种环挑取少量菌落均匀涂布水滴中，使其自然干燥，菌面向上，经火焰固定。
注意事项：菌液涂片时不可过于浓厚，干燥、固定。
固定时通过火焰1~2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2.染色一般包括初染、没染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：（1）加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。
（2）加上碘液染色1分钟，水洗。
（3）加上95%酒精，摇动玻片，根据涂片厚度，脱色约20~60秒，水洗，吸去水分。
（4）加上蕃红后，染色1分钟，水洗。
（5）吸干或在空气中晾干后，油镜镜检。
3.结果观察：革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
以均匀分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，都常呈现假阳性。
注意事项：①标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。
若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。
②玻片通过火焰温度不能太高。
③碘液变透明，则不能使用。
④水洗时动作要轻，沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗，以免把菌体冲掉。
三、16S rDNA 鉴定（16S rDNA只能鉴定到属，需进行生理生化、药敏实验等鉴定到种）1. 细菌复苏、活化、纯化同细菌形态学鉴定3. 挑取单菌落至少2-3个接到含有1ml灭菌纯水的1.5ml离心管中混匀。
细菌诊断的流程
细菌诊断的流程1.临床医生收集患者的临床资料和症状表现。
The clinician collects clinical data and symptoms fromthe patient.2.进行体检和相关医学检查。
A physical examination and relevant medical tests are carried out.3.根据临床表现和检查结果判断是否存在细菌感染。
Based on the clinical presentation and test results, determine if there is a bacterial infection.4.收集患者的生物标本，如血液、尿液、脑脊液等。
Collect the patient's biological specimens, such as blood, urine, cerebrospinal fluid, etc.5.进行细菌培养，将标本放入含有营养物质的培养基中进行培养。
Culture the bacteria by placing the specimens innutrient-rich media.6.观察培养基中是否有细菌生长。
Observe the culture for bacterial growth.7.对生长的细菌进行染色，以便进一步鉴定。
Stain the growing bacteria for further identification.8.根据染色结果和形态特征初步鉴定细菌种类。
Preliminary identification of bacterial species based on staining results and morphological characteristics.9.进行生化试验，检测细菌对不同营养物质和药物的反应。
Conduct biochemical tests to test the bacteria's reactions to different nutrients and drugs.10.根据生化试验结果进一步确认细菌种类。
细菌分离培养与鉴定程序
细菌分离培养与鉴定程序一、背景记录1、猪的临床症状2、不同猪的发病阶段（早、中、晚、解剖前宰杀还是解剖前已死亡）3、解剖病变（保存好照片）二、分离用培养基1、常用培养基：鲜血琼脂培养基、巧克力培养基2、非常用培养基：麦康凯培养基、沙门氏菌选择性培养基三、病料的选取和保存1、首选来自刚宰杀后的活畜禽或死后2-4小时内的畜禽2、得到病料后应该立即进行细菌分离，分离细菌前最长保存时间（在4℃冰箱内）最好不要超过3-4小时。
分离细菌前应将病料保存在4℃冰箱不得放入-20℃冰箱。
分离细菌后如需要根据细菌生长鉴定情况来决定病料用途（需再次接种、需再次触片、需接种动物等等）可先将病料暂存4℃冰箱，但不得超过2天。
一般情况下分离细菌后应及时将需长期保存的少量病料分装到塑料瓶中进行记录保存，多余的病料进行无害化处理。
四、分离路线1、选择分离细菌的目标脏器：根据疑似疾病和病理变化确定，一般选病变比较严重的脏器做为分离细菌的目标脏器，并选择脏器的病健交界处做为细菌分离的最终部位。
一头猪应该选择多个脏器或部位分离细菌。
并对不同部位细菌在整个疾病中的作用有一定的评价，如：心血中的细菌多为全身感染分布的病原；关节、肠道、创口、及肺脏则可能只是局部分布的细菌。
）2、分离细菌一般采用鲜血琼脂培养基划线培养、怀疑存在只能在巧克力培养基上且需要一定二氧化碳才能生长的细菌（如：副猪嗜血杆菌、传染性胸膜肺炎放线杆菌等）感染时、应同时采用巧克力培养基划线、放到烛缸进行培养。
划线时应该在做到无菌操作的前提下尽量取较大的一块组织或较多量的分泌物、先在培养基表面涂布一小片区域，然后弃去病料再用接种环从涂布区域开始进行划线。
这样一方面可保证分离到病料中的细菌，另一方面也能保证长出单个菌落为进一步鉴定提供方便，同时也为评价病料中细菌含量及不同细菌数量比例的评价提供依据。
如果病料来自病程较长或死亡动物且细菌种类复杂、难以确定病原菌的情况下、可考虑分离细菌的同时取病料接种小鼠、再从小鼠分离细菌，二者互为参考。
简述细菌种属的分类鉴定流程
简述细菌种属的分类鉴定流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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进行细菌种属分类鉴定首先要进行样本采集。
细菌感染的实验室检验流程
实验室技术人员
报告生成
根据检验结果生成报告，并通知医生和患者
实验室管理员
结果解读与确认
医生解读报告，确认诊断并制定治疗方案
医生
细菌感染的实验室检验流程
流程步骤
具体任务和目标
负责人员
Hale Waihona Puke 样本采集采集感染部位的样本，如血液、尿液、痰液等
医护人员
样本处理
对采集到的样本进行初步处理，提取目标细菌
实验室技术人员
培养
将样本接种在适当的培养基上，培养细菌至足够数量
实验室技术人员
鉴定
对培养出的细菌进行形态、生理和生化鉴定
实验室技术人员
药敏试验
细菌的初步鉴定
细菌的初步鉴定一、启动条件：1、目地样：同一取样原因，取表现性状相同的任意1—2包进行细菌初步鉴定。
如表现性状不同的，需分别进行鉴定；不同取样原因，需分别取样进行鉴定。
2、随机样：相同时段出现坏包，取表现性状相同的任意1—2包进行细菌初步鉴定；不同时段出现坏包，需分别进行鉴定。
3、坏包产品的包装无明显破损。
4、由微生物污染引起的坏包：酶类及化学反应用不同的查验方式。
二、样品处理准备1、酸包：检测时发现产品感官及PH值有明显变化时，需快速将酸包产品的内容物移入无菌容器内（移入时需用75%的酒精棉对操作员手及开包产品的移出口进行擦试灭菌），并需快速检测。
如不能检测，需冷藏保存2小时内进行检测。
2、胀包：使用75%酒精棉对样品外表面擦试消毒后放于超净台内待检。
检测时，以无菌操作在无横纵封处剪一半圆或三角取样。
三、检测（划线，接种培养）：低酸产品：检测细菌、芽孢、耐热芽孢，必要时检测霉菌、酵母菌。
高酸产品：检测细菌、霉菌、酵母菌。
1、细菌：采用无菌手续取1ml样品接种于培养皿中，使用普通营养琼脂于36±1℃/48小时条件下培养；另采用无菌操作使用接种环于营养琼脂上作划线培养（37℃/48h）2、芽孢、耐热芽孢：以无菌操作取10ml样品于两个小试管中，分别在80℃和100℃的水浴中加热10min。
冷却后使用营养琼脂培养基的无菌操作，分别作芽孢（36±1℃/72h）和耐热芽子包（55±1℃/72h）的接种与划线培养。
80℃10min—杀灭全部未形成孢子的细菌细胞，孢子可存活。
100℃10min--杀灭部分细菌孢子，耐热孢子可存活。
3、霉菌、酵母菌：采用接种环以无菌手续于专用培养基上作划线培养，另采用1ml吸管以无菌操作，接种1ml样品于专用培养基中培养。
（条件25—28℃/5天）四、记录样品：名称、批号、取样原因、时间、样品感官、PH值、酸度、气体形成、包装密封性、凝块、分离等。
细菌鉴定流程概述(PPT44页)
关键试验
• 触酶 • OF（氧化发酵）试验 • 血浆凝固酶：玻片法，试管法
链球菌科细菌
• α溶血：肺炎链球菌 • β溶血：化脓性链球菌
B群链球菌 C、G群链球菌 • γ溶血：肠球菌
肺炎链球菌
• 菌落形态 • Optochin试验：注意耐药菌株 • 胆汁溶菌试验
β溶血链球菌鉴定
β溶血链球菌
• 化脓性链球菌 • B群链球菌
• 4h快速试管凝固酶试验阳性 注意：1.试管法应该至少每小时判读一次直至4h.试管法的最后读取应在4h 后. 2.中间葡萄球菌和猪葡萄球菌可在12-24h 试管凝固酶试验为阳性. 3.凝固酶试验仅推荐用无菌乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝兔血浆.
* 商用乳胶凝胶试剂 腐生葡萄球菌在某些情况下可表现为阳性,但其玻片凝固酶及试管凝固酶试验 通常为阴性. 因此,商用凝集试验阳性结果不能用来鉴别尿中的非溶血葡萄球菌
• 血平板上常表现为边缘光滑的窄的"溶血环" • 革兰阳性球菌成对或成链,触酶阴性; • 快速马尿酸盐水解试验阳性或快速CAMP因子
斑点试验阳性均可准确鉴定无乳链球菌 • 商用凝集试验鉴定该菌准确性接近100%
肠球菌
• 触酶试验阴性 • 七叶苷试验阳性 • 6.5%NaCl肉汤生长（高盐+）
肠球菌鉴定-CLSI
血平板上菌落大于1mm,BAP上非溶血且触 酶阴性 革兰染色形态为阳性球菌或球杆菌成对或成 链 PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性可鉴定为肠 球菌属. 增加亮氨酸氨肽酶(LAP)试验可更好地鉴定 α溶血肠球菌
革兰阳性细菌鉴定卡GP-VITEK-2
注意事项：
• 细菌的要求：新鲜；纯培养菌落 鉴定一定要有全局的观念
脑膜炎奈瑟氏菌在血平板上形成有光泽、浅灰色菌落，为革兰阴性双球菌，氧化酶和γ-谷氨酰氨肽酶阳性 局限性,极少数气单胞菌属分离菌株可与铜绿假单胞菌形态相似(缺乏典型气味),可通过斑点吲哚试验区分(气单胞菌属阳性,铜绿假单胞 菌阴性). 氧化酶阳性,菌落有典型的气味(康科德葡萄或玉米饼)和形态特征(金属或珍珠般光泽,粗糙,产色,有时极其黏稠). 革兰阳性球菌,成双或成链排列,触酶阴性,PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性可确认为化脓链球菌
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革兰阳性细菌鉴定卡GP -VITEK-2
• 局限性:VITEK-2 GP卡不能直接用于临床标本或含有
混合菌的样本，对过程的改变或修改都可能影响结果。 新的说明或罕见菌株不包含在GP数据库中，
当所选菌株可获得时可加入数据库，但对没有记录的种类 进行检测时可能导致不被识别或错误鉴定
• 质控：每月以及更换批号时用相应的质控菌株（依说 明书，可选铅黄肠球菌ATCC700327或金葡ATCC29213 等）在仪器的质控通道下进行操作。
肠杆菌科细菌
• 沙门菌属： KIA（克氏双糖铁）-/+，M
（动力）+，H2S（硫化氢）+（但甲型副 伤寒H2S-）
• 志贺菌属：KIA（克氏双糖铁）-/+，M
（动力）-
• 耶尔森菌属：鼠疫耶尔森菌—烈性传染病鼠
疫的病原菌；小肠结肠炎耶尔森菌— 37℃,动力；但25℃，动力＋ ；假结核耶尔森菌—人兽共患 性疾病
弧菌属与气单胞菌，邻单胞菌鉴别
革兰阴性细菌鉴定卡GN-VITEK-2
注意事项： • 细菌的要求：新鲜；纯培养菌落 • 无菌盐水：0.45%-0.50%NaCL,pH 4.5-7.0 • 浊度：0.50-0.63 • 悬浮接种物接种于卡前，不能超过30min • 可能性百分率：可接受>85% • 附加信息：补充实验
矛盾实验
革兰阴性细菌鉴定卡GN -VITEK-2
• 局限性:VITEK-2 GN卡不能直接用于临床标本或含有
混合菌的样本，对过程的改变或修改都可能影响结果。 新的说明或罕见菌株不包含在GN数据库中，
细菌鉴定流程
葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
• 血平板上生长的由白色至黄色,奶酪样,不透 明,革兰阳性球菌.
• 触酶阳性 • 凝固酶试验阳性 • 或商用乳胶凝胶试剂阳性
金葡鉴定注意事项
• 玻片凝固酶 注意：施葡萄球菌和路邓葡萄球菌也可为阳性，但凝集反应呈片状或块状。 可通过PYR（吡咯烷酮酶）试验与金黄色葡萄球菌鉴别。 施葡萄球菌和路邓葡萄球菌为PYR（吡咯烷酮酶）强阳性,立即产生红紫色,而 金黄色葡萄球菌为阴性或弱阳性,
• 血平板上常表现为边缘光滑的窄的"溶血环" • 革兰阳性球菌成对或成链,触酶阴性; • 快速马尿酸盐水解试验阳性或快速CAMP因子
斑点试验阳性均可准确鉴定无乳链球菌 • 商用凝集试验鉴定该菌准确性接• 七叶苷试验阳性 • 6.5%NaCl肉汤生长（高盐+）
肠球菌鉴定-CLSI
关键试验
• 触酶 • OF（氧化发酵）试验 • 血浆凝固酶：玻片法，试管法
链球菌科细菌
• α溶血：肺炎链球菌 • β溶血：化脓性链球菌
B群链球菌 C、G群链球菌 • γ溶血：肠球菌
肺炎链球菌
• 菌落形态 • Optochin试验：注意耐药菌株 • 胆汁溶菌试验
β溶血链球菌鉴定
β溶血链球菌
• 化脓性链球菌 • B群链球菌
血平板上菌落大于1mm,BAP上非溶血且触 酶阴性 革兰染色形态为阳性球菌或球杆菌成对或成 链 PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性可鉴定为肠 球菌属. 增加亮氨酸氨肽酶(LAP)试验可更好地鉴定 α溶血肠球菌
革兰阳性细菌鉴定卡GP-VITEK-2
注意事项： • 细菌的要求：新鲜；纯培养菌落 • 无菌盐水：0.45%-0.50%NaCL,pH 4.5-7.0 • 浊度：0.50-0.63 • 悬浮接种物接种于卡前，不能超过30min • 可能性百分率：可接受>85% • 附加信息：补充实验
• 4h快速试管凝固酶试验阳性 注意：1.试管法应该至少每小时判读一次直至4h.试管法的最后读取应在4h 后. 2.中间葡萄球菌和猪葡萄球菌可在12-24h 试管凝固酶试验为阳性. 3.凝固酶试验仅推荐用无菌乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝兔血浆.
* 商用乳胶凝胶试剂 腐生葡萄球菌在某些情况下可表现为阳性,但其玻片凝固酶及试管凝固酶试验 通常为阴性. 因此,商用凝集试验阳性结果不能用来鉴别尿中的非溶血葡萄球菌
大肠埃希菌-CLSI
• 革兰阴性杆菌,不迁徙生长 • 斑点吲哚试验阳性,氧化酶阴性, 有以上特征并且血平板上
形成溶血菌落,即可报告为大肠埃希菌. • 或吲哚阳性,血平板菌落不溶血且麦康凯或伊红美兰(EMB)
平板上的菌落乳糖分解阳性,快速吡咯烷酮芳基酰胺酶 (PYR) 试验阴性可确认为大肠埃希菌。 • 或BAP菌落不溶血,乳糖分解阴性,4-甲基伞型酮β-D-葡糖 苷酸酶(MUG) 试验阳性也可确证为大肠埃希菌
• 黏液型菌株革兰染色时在革兰阴性杆菌的周围常常可见橙 色区域.
• 局限性,极少数气单胞菌属分离菌株可与铜绿假单胞菌形 态相似(缺乏典型气味),可通过斑点吲哚试验区分(气单胞 菌属阳性,铜绿假单胞菌阴性).
• 分离于囊性纤维化患者的菌株应仔细鉴别,因为形态不典 型的铜绿假单胞菌很常见,而且某些洋葱伯克霍尔德分离 菌株与铜绿假单胞菌形态相似.
革兰阴性杆菌
肠杆菌科细菌主要生化反应
• 发酵葡萄糖（产酸或产酸产气） ： KIA（克
氏双糖铁试验）或三糖铁试验
• H2O2 （触酶）+ • OX （氧化酶）-
肠杆菌科细菌
• 大肠埃希菌：动力“+”；但某些菌株动力“—” • 克雷伯菌属：动力-，脲酶＋ • 肠杆菌属，泛菌属，哈夫尼菌属： • 枸橼酸杆菌属：生化反应不定 • 沙雷菌属： • 变形杆菌属，普罗威登菌属，摩根菌属：
杆菌肽试验
CAMP试验
化脓链球菌-CLSI
• BAP上孵育24H 后出现ß溶血,菌落直径 >=0.5mm,干燥,凸起或有边缘清晰的溶血 环.
• 革兰阳性球菌,成双或成链排列,触酶阴性 ,PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性可确认为 化脓链球菌
• 用血清凝集方法鉴定的准确性接近100%
无乳链球菌-CLSI
变形杆菌-CLSI
• 菌落一定是有迁徙生长现象. • 奇异变形杆菌吲哚-,普通变形杆菌+ • 彭氏变形杆菌与奇异变形杆菌的鉴别
菌种
麦芽糖 鸟氨酸脱羧酶
彭氏变形杆菌 阳性 阴性
奇异变形杆菌 阴性 阳性
非发酵菌
铜绿假单胞菌-CLSI
• 革兰阴性杆菌.氧化酶阳性,菌落有典型的气味(康科德葡萄 或玉米饼)和形态特征(金属或珍珠般光泽,粗糙,产色,有时 极其黏稠).